Name: 바이오 콘쥬 게이션과의 Radiosynthesis 89 ZR-DFO 표지 항체 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: 배우세요 zirconium-89 DFO 표지 항체의 방사성 합성 및 생체 내 분포 평가 방법을. 이 기술은 암 진단 및 치료 모니터링을 위한 표적 PET 영상에 활용됩니다.

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저자는 도움이 대화를 교수 토마스 라이너, Jacob 박사 호튼 박사 서지 Lyaschenko 감사합니다.

설명 생체 내 동물 실험의 모든 승인 된 프로토콜과 기념 슬로안 케터링 암 센터의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 윤리적 지침에 따라 따라 수행 하였다. J591에 DFO-NCS 1. 활용 <ol><li> 1.7 ml의 마이크로 원심 분리 튜브에서, 1X 인산 완충 생리 식염수 (PH 7.4), 0.5 M HEPES 완충액 (pH 7.4) 중 어느 하나를 1ml의 J591 2-5 ㎎ / ㎖의 용액을 제조 하였다. </li><li> 5 내지 10㎜ (3.8-7.6 ㎎ / ㎖)의 농도로 DMSO에 건조 DFO-NCS 녹인다. 초음파 처리 또는 소용돌이 완전히 용해를 용이하게하기 위해 충분히 용액. </li><li> 작은 분량 씩 0.1 M 나 2의 (&lt;10 μL) CO 3를 추가하여 8.8-9.0로 J591 용액의 pH를 조정합니다. </li><li> 항체 용액은 pH에서 올바른되면 관능 킬레이트 3-4 배 몰 과량 대응 DFO-NCS 용액의 볼륨. <ol><li> 시험을위한PLE, 2 ㎎ / ㎖ J591 항체 액 1 ㎖ (13.3 nmol의 J591)에 10 mM의 (7.6 ㎎ / ㎖) DFO-NCS 용액 (40.4 nmol의 DFO-NCS)의 4 ~ 5 μl를 추가합니다. 최종 수성 반응 혼합물에서 DMSO의 양은 2 % V / V를 초과하지 않아야한다. </li></ol></li><li> 350 rpm에서 교반 가열 블록에 37 ° C에서 30 분 동안 반응물을 인큐베이션. </li><li> 37 ° C에서 1 시간 후, 용리액으로서 0.5 M HEPES 완충액 (pH 7.4)을 사용하여 50,000 분자량 컷 - 오프로 미리 충전 일회용 탈염 크기 배제 컬럼을 사용하여 생성 된 면역 접합체를 정제. 이 단계는 완료 J591-DFO 구조의 2 ml의 솔루션을 얻을 것입니다. </li><li> 비스 - UV 분광 광도계에 구축 J591-DFO의 농도를 측정한다. </li><li> 구조물의 높은 농도가 요구되는 경우, 50,000 분자량 컷 - 오프로 원심 필터 유닛을 이용 J591-DFO 용액을 농축시킨다. </li><li> 어둠 속에서 -20 ° C에서 완성 된 J591-DFO의 면역 접합체의 솔루션을 저장합니다. </ol> 89 ZR 2. 방사성 표지 J591-DFO 주의 : 프로토콜의이 단계는 취급 및 방사능의 조작을 포함한다. 다음 단계를 수행하거나 자신의 집 기관의 방사선 안전 부서와상의해야합니다 방사능 연구자와 다른 작업을 수행하기 전에. 가능한 모든 단계는 이온화 방사선에 대한 노출을 최소화하기 위해주의해야한다. 참고 : 적절한 방사 화학 노트 유지의 관심에서, 샘플에서 방사능의 양을 투여 교정기를 사용하여 측정하고 이전에 기록되어야한다 아래의 프로토콜의 단계 2.2-2.13 후. 이 방사 화학적 수율 및 특정 활동의 정확한 결정에 도움이 될 것입니다. <ol><li> 0.5 M HEPES 버퍼, 산도 7.5의 200 μL에 J591-DFO의 0.5 ~ 2.0 mg의 용액을 준비합니다. </li><li> 의 볼륨을 피펫 &lt;2 ml의 플라스틱 스크류 캡 microcentrifuge 관에 1.0-6.0 mCi의 (37-222 MBq의)에 해당하는 (일반적으로 1.0 M 옥살산 공급) SUP&gt; 89 ZR 4+ 원액. 1.0 M 옥살산을 사용하여 총 300 μL이 용액의 양을 조정한다. </li><li> 1.0 M 나 2 CO 3를 사용하여 6.8-7.5로 89 ZR 4+ 용액의 pH를 조정합니다. 원하는 산도를 달성하기 위해베이스의 분량을 작은 (&lt;10 μL)를 추가 이후 89 ZR 4+ 솔루션 CO 3 1.0 M 나 2의 250 μl를 추가하여 시작합니다. </li><li> 2.1 단계에서 제조 된 J591-DFO 용액의 pH 조정 89 ZR 4+ 솔루션의 원하는 금액을 추가합니다. </li><li> 이 6.8-7.5의 목적하는 범위 내에 있도록 방사성 표지 된 반응 혼합물의 pH를 확인한다. </li><li> 350 rpm에서 교반 가열 블록에 실온에서 60 분 동안의 방사선 반응을 품어. </li><li> 인큐베이션 60 분 후, 측정 RAD무선-TLC를 이용하여 반응 수율을 iolabeling. <ol><li> 이를 위해, 실리카를 함침 TLC 스트립 방사성 표지 반응 혼합물을 1 μCi를 스팟. 50 mM의 DTPA (PH 5.5)의 전개 용매를 사용하여 TLC를 실행, 나누어지는 건조 할 수 있도록 허용하고, 무선 TLC 스캐너를 사용하여 TLC 스트립을 분석 할 수 있습니다. 89 ZR을 4+ 원점에 나타납니다 J591-DFO 구조에 결합 (R &lt;ZR 89 무료 4+ 양이온 DTPA에 의해 킬레이트 화되고 용매 앞 (R F를 용출 반면 0.1),&gt; 0.9) F. </li><li> , radiochromatogram 통합 곡선 아래의 총 면적으로 0.0-0.1 f를 R에서 곡선 아래의 영역을 분할하고, 100을 곱해서 반응하여 표지 수율을 계산한다. </li></ol></li><li> 방사성 표지 수율이 충분 (전형적으로&gt; mCi의 2 / MG의 이론적 비활성) 인 경우의 50 mM DTPA, pH가 5.5의 5 μL 반응물을 켄칭. </li><li> 그 결과 면역 접합체의 USI를 정화NG 5 ㎎ / ㎖ 겐티 론산 5 ㎎ / ㎖ 겐티 산 또는 0.25 M 아세트산 나트륨 (PH 5.5)을 0.9 % 멸균 식염수 중의 용리액을 사용하여 50,000 분자량 컷 - 오프와 함께 미리 포장 된 일회용 크기 배제 탈염 칼럼 . 이 단계는 완료 89 ZR-DFO-J591의 radioimmunoconjugate의 2 ml의 솔루션을 얻을 것입니다. </li><li> 단계 2.7에 기재된 바와 같이 정제 한 후, 무선 - TLC를 이용하여 89-DFO ZR-J591의 방사 화학적 순도를 확인한다. </li><li> 처음에 정제 (89) ZR-DFO-J591 radioimmunoconjugate 절연 된 방사능의 양에 의해 항체 용액에 첨가 활동량을 나누어 전체적인 반응하여 표지 수율을 계산한다. </li><li> 방사성 표지 반응에서 DFO-J591의 초기 질량 (89)에 의해 정제 ZR-DFO-J591의 radioimmunoconjugate 절연 활동량 나누어 최종 특이 적 활성을 계산한다. </li><li> 높은 농도의 원하는 경우, 번째 주력전자 89 50,000 분자량 컷 - 오프와 원심 필터 유닛을 사용하여 ZR-DFO-J591 솔루션입니다. 주 : 최종 정제 공정에서 사용 겐티 산 인해 방사선 분해에 항체의 열화를 최소화하기 위해 사용되는 무선 - 보호제 46 동안 4 ℃에서 최대 48 시간 동안 89 ZR-DFO-J591의 radioimmunoconjugate의 저장. 가능하며, 사용하지 않는 것이 좋습니다. radioimmunoconjugate이 저장 될 것이라면, 하이포 클로 라이트 - 매개 방사선 분해의 위험을 최소화하기 위해 저장 버퍼로서 5 ㎎ / ㎖ 겐티 산 0.25 M 아세트산 나트륨 (PH 5.5)를 사용한다. (47) </li></ol> 89 ZR-DFO-J591과 생체 PET 영상 3. 주의 : 프로토콜 섹션 2에서와 같이, 프로토콜의이 단계는 취급 및 방사능의 조작을 포함한다. 다음 단계를 수행하기 전에 연구자들은 자신의 집 기관의 방사선 안전 부서와상의해야합니다. 모든 possib제작 단계는 이온화 방사선에 대한 노출을 최소화하기 위해주의해야한다. <ol><li> 수컷 무 흉선 누드 마우스 피하 5 × 106 된 LNCaP 전립선 암세포 이식 및 이들 (3~4주 접종 후) 3 이종 100-150mm로 증가 할 수있다. 44 </li><li> 0.9 % 멸균 식염수, 1.0 mCi의 / ml의 농도로 89 ZR-DFO-J591 radioimmunoconjugate의 희석. </li><li> 89 ZR-DFO-J591 용액 (200 μCi를 7.4 MBq의) 200 ㎕를 주입한다. 이종 이식 베어링 마우스의 측면 꼬리 정맥에 48 </li><li> 촬상 원하는 시점에서 (예를 들어, 12, 24, 48, 72, 96, 또는 120 열연 후 분사), 2 % 이소 플루 란 마취 마우스 : 산소 가스 혼합물. </li><li> 작은 동물 PET 스캐너의 침대에 마우스를 놓고 1 % isoflurane을 사용하여 스캔하는 동안 마취를 유지 : 산소 가스 혼합물을. 스캐너 침대에 동물을 배치하기 전에, 토​​우 - 핀치 방법 및 출원을 이용하여 마취를 검증마취 동안 건조를 방지하기 위해 마우스의 눈 Y 안연고. 49 </li><li> 350-700 keV의 에너지의 창 6 나노초의 일치 타이밍 윈도우를 사용하여 4000 만 일치 이벤트 최소 정적 스캔을 통해 마우스 PET 데이터를 획득. 50 </li><li> 이미지의 인수를 완료 한 후, 무인 마우스를 벗어나지 않아이 의식을 회복 할 때까지 다른 마우스와 케이지로 변경하지 마십시오. </li></ol>

저자가 공개하는 게 없다.

건설, 방사성 표지, 및 이미징의 ZR-89-DFO labled radioimmunoconjugates이 다소 간단한 절차가 일반적이지만,이 프로세스의 각 단계에서 마음에 몇 가지 주요 고려 사항을 유지하는 것이 중요하다. 예를 들어, 아마도 절차 공액 단계 동안 우려 원인은 공액 반응 동안 항체의 집합이다. 이 문제는 대개 DFO-NCS 스톡 용액의 첨가 후 접합 반응의 불량한 혼합하는 제품이다.이 경우, DFO-NCS의 비균질 분포가 로컬 반응이 과도하게 높은 수준을 유발할 수있다 (22) 결과적으로 집계 될 수 있습니다 항체. 이 문제는 비교적 용이하게 그리고 온도에서 반응 혼합물을 철저히 DFO-NCS의 첨가 후, 반응 혼합물을 혼합 (&lt;5 μL) 작은 분량 씩 DFO-NCS 스톡 용액을 첨가하고, 교반에 의해 회피 될 수있다전자 제어 통. 또한, DFO 단클론 구조체의 접합 및 정제 한 결과, 정확하게 각각의 단클론 항체에 접합 DFO의 수를 결정하는 것이 중요하다. 항체 ...

인해 현저한 감도, 친화력 및 선택성으로, 항체는 긴 암 세포에 방사선 동위 원소의 전달을 위해 유망 벡터를 고려되었다. 그러나, 양전자 방출 단층 촬영 (PET) 영상에의 응용들은 표지 용 적당한 양전자 방출 동위 원소의 부족에 의해 방해되어왔다. radioimmunoconjugates의 설계에서 가장 중요한 고려 사항 중 1-3 하나의 물리적 붕괴 매칭되는 하프 항체의 생체 내 약물 동태에 방사성 동위 원소의 생활. 보다 구체적으로, 항체는 종종 비교적 긴 멀티 일 생물학적 반감기를 가지므로 비교 물리적 반감기의 방사성 동위 원소로 표지되어야한다. PET 영상 응용 프로그램의 경우, 항체는 전통적으로 (64) 구리 (t 1/2 = 12.7 시간), (86) Y (t 1/2 = 14.7 시간), 또는 (124) I (t 1/2 = 4.18 D). (4) 방사성 동위 원소 표지왔다, 5 단, 각이러한 방사성 동위 원소 임상 영상에 대한 적합성을 방해 상당한 한계를 가지고있다. 86 Y 64 구리로 표지 radioimmunoconjugates 전임상 연구에서 유망한 입증하는 동안, 동위 원소는 인간의 이미지에 대한 효과가 너무 짧은 물리적 반감기를 가지고있다. (124) 나는 반면에,에 대한 거의 이상적인 물리적 반감기 항체 촬상 있지만 고가이고 상대적으로 낮은 해상도 이미지를 임상 적으로 이어질 차선 감쇠 특성을 갖는다. 또한, I-124 표지 radioimmunoconjugates는 생체 내 종양 대 배경 활성 비율을 낮출 수를 탈 할로겐 처리의 대상이 될 수있다. -6,7- 이 드라이브는 64 잘라 내기, (86) Y를 대체 할 수있는 양전자 방출 방사성 동위 원소를 발견하고, radioimmunoconjugates 124 전 89 ZR 표지 항체에 대한 연구의 급등을 자극했다. 8-12에게 T를89 ZR의 출현에 대한 그 이유는 간단하다 : 방사성 진단 PET의 radioimmunoconjugates에 사용하기 위해 가까운 이상적인 화학적 및 물리적 특성을 가지고 13 89 ZR은 89 Y (P, N)을 사용하여 사이클로트론에 89 ZR의 반응을 통해 생성된다. 시판되는 100 % 천연 풍부한 89 Y 타겟. 14,15 방사성은, 23 %의 양전자 수율을 갖는다 78.4 시간의 반감기로 붕괴 및 395.5 keV의 (도 1)의 비교적 낮은 에너지로 양전자를 방출한다. 그것은 89 13,16,17 ZR 또한 높은 에너지를 방출하는 것이 중요하고, 909 keV의 γ 선 99 % 효율. 방출이 방출 광자 511 keV의 에너지 적으로 방해하지 않는 반면, 전송, 처리, 선량에 대해서 고려를 필요 여분 않는다. 이 경고에도 불구하고, 이러한 부패의 특성은 궁극적으로 89 ZR이 더 유리한 시간을 가지고뿐만 아니라 의미구리 86 Y 64 이상 항체 이미징을위한 ALF 생활뿐만 아니라 더 높은 687, 975 케빈의 에너지뿐만 아니라의 100 ~ 150 keV의 내부 에너지와 광자의 번호와 양전자를 방출하는 124 I보다 높은 해상도의 이미지를 생성 할 수 있습니다 511 keV의 양전자 생성 된 광자. (13) 또한, 89 ZR은 방사성 옥소 대응보다 더 효과적으로 또한 종양, 처리 할 안전 생산 저렴하고 residualizes이다. 89의 Zr (18, 19) 하나의 잠재적 인 제한이없는 것입니다 isotopologue 치료, 예를 들면, Y (86) (PET) 90 대 Y (치료). 이것은 그들의 대응 치료 용 선량 정찰병으로 사용할 수있는 화학적으로 동일 대리 조영제의 구성을 배제한다. 그것은 말했다 조사는 89 ZR 표지 항체는 90 Y- 177 루 표지 면역 접합체에 대한 이미징 대리로 잠재력을 가지고 수행하는 것이 좋습니다.(20, 21) 화학적 인 관점에서, 그룹 IV 금속으로서, 89 ZR은 수용액 중의 양이온 +4로서 존재한다. ZR 4+ 이온은 높은, 비교적 큰 (유효 이온 반경 = 0.84 Å) 충전되고, &quot;하드&quot;양이온로 분류 될 수있다. 이와 같이, 여덟 하드 음이온 산소 도너 리간드 담까지 선호를 나타낸다. 쉽게 ZR-89 radioimmunoconjugates 표지에 사용되는 가장 일반적인 킬레이트가 desferrioxamine이다 (DFO), 세 그룹 히드 담지 시데로 포어 유래 비 환식 킬레이트. 리간드 안정적 생물학적 관련성의 pH 레벨에서 RT로 신속하고 깨끗하게 ZR 4+ 양이온을 조정하고, 생성 ZR-DFO 착체는 식염수, 혈청에서 여러 날에 걸쳐 안정적으로 유지하고, 전혈. 22 전산 연구가 강하게 시사 DFO는 금속 중심에 배위 세 neut되는 ZR 4+ hexacoordinate 복합체를 형성하도록RAL과 리간드의 세 음이온 산소 기증자뿐만 아니라 두 개의 외생 물 리간드 (그림 2). (23, 24) 89 ZR-DFO의 접합 발판을 사용 radioimmunoconjugates의 생체 내 행동은 일반적으로 우수한있다. 그러나 어떤 경우에는, 이미징 및 급성 생체 분포 연구는 89 ZR - 표지 된 항체를 주입 한 쥐의 뼈 높은 활동 수준, ZR 4+ 양이온은이어서 생체 내에서 킬레이트로부터 방출되고, 89 osteophilic가 mineralizes 제안 데이터를 밝혀냈다 뼈. 여덟 산소 도너가 문헌에 나타난 25 최근, 신규 ZR 89 4+ 킬레이트 제의 개발에 대한 조사의 수는 특히, 현재, 그럼에도 24,26,27. DFO 리간드는 가장 널리 사용되는 킬 레이터 89 넓은 여백에 의해 radioimmunoconjugates을 ZR은 표지. 다른 다양한바이오 콘쥬 게이션 전략 bioorthogonal 클릭 화학, 항체의 시스테인 구축 티올 반응 DFO의 반응, 에스테르 베어링 DFO는 항체에 라이신 구축 활성화의 반응을 포함하여, 항체 DFO를 연결하는 데 사용되어왔다. 4,28- 30 쉽게 가장 일반적인 방법은, 그러나, 22 견고이 시판 관능 킬레이트. DFO, DFO-NCS의 이소 티오 시아 네이트 - 함유 유도체의 사용을 (도 2)이었다 안정적의 리신으로 안정한 공유 결합 티오 우레아 결합을 형성했다 항체 (그림 3). 지난 몇 년 동안, 89 ZR-DFO - 표지 radioimmunoconjugates 다양한는 문헌에보고되어있다. 전임상 연구는 CD105-대상으로 T로 세툭시 맙, 베바 시주 맙과 트라 스투 주맙 난해한 항체로 더 잘 알려진 이르기까지 항체를 특징으로, 특히 풍부한되었습니다RC105 및 5A10을 FPSA를가 타겟팅. 30-36 최근 89 ZR-DFO 표지 된 항체를 사용하여 초기 단계의 임상 시험 소수 문헌에 등장했다. 89 ZR-DFO-cmAb의 U36, 89 ZR-DFO-ibritumomab의 tiuxetan, 89 ZR-DFO - 트라 스투 주맙. 21,32,37 또한, 89와 다른 임상 시험의 범위를 사용 특히, 네덜란드 그룹이 발행 한 시험 ZR 표지 radioimmunoconjugates 전립선 암 이미징 PSMA 타겟팅 89 ZR-DFO-J591과 유방암 이미징 HER2-대상으로 89 ZR-DFO - 트라 스투 주맙을 사용하여 기념 슬로안 케터링 암 센터에서 여기에 조사를 포함하여, 현재 진행되고있다. 23, 방사성 표지 된 항체는 가장 일반적인 ZR (89) 표지 된 방사성 의약품을 유지하면서 또 30, 방사성도 점점 펩티드, 단백질, 및 나노 물질을 포함하는 다른 벡터들과 함께 사용되어왔다. 38-43 </sup&gt; 이 89 ZR-DFO 라벨링 방법의 모듈화는 엄청난 자산입니다. 바이오 마커 타겟팅 항체의 레퍼토리는 끊임없이 확장하고, 이러한 구조를 사용하여 생체 PET 영상에서 공연에 대한 관심은 빨리 성장하고있다. 결과적으로, 우리는 더 표준화 된 방법 및 프로토콜이 개발 분야 이익을 얻을 수 있다고 믿고있다. DFO-NCS의 활용 89 지르코늄의 방사선 물질에 대한 우수한 기록 실험 프로토콜이 이미 Vosjan에 의해 출판 된, 등. (22) 우리는이 작품에서 제공하는 시각적 데모 더 이러한 기술에 새로운 연구자에게 도움이 될 수 있다고 생각합니다. 손 프로토콜, 전립선 특이 막 항원 표적 항체 J591은 예시 모델 시스템으로 사용한다 (1) 항체에 DFO - 이소 티오 시아 네이트 관능 킬레이트 바이오 콘쥬 게이션, 89 (2) radiosynthesis 정제 ZR-DFO-단클론 항체 radioimmunoconjugate,및 (3)에서 암의 뮤린 모델에서 ZR-89-DFO 단클론 radioimmunoconjugate 생체 내 PET 영상화. 23,44,45

<table><tbody><tr><td>p-SCN-Bn-DFO</td><td>Macrocyclics</td><td>B-705</td><td>-80 &deg에서 저장; C</td></tr><tr><td>[89Zr]Zr-oxalate</td><td>Perkin-Elmer</td><td></td>를 포함한 다양함 <td>주의: 방사성 물질</td></tr><tr><td>PD-10 탈염 컬럼</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0851-01&nbsp;</td><td>실온에서 보관</td></tr><tr><td>Amicon Ultra-4 원심 필터 유닛</td><td>EMD Millipore</td><td>UFC805024</td><td>실리</td></tr><tr><td>카겔 함침 RadioTLC 종이</td><td>Agilent Technologies</td><td>SGI0001</td><td>0.5cm 너비의 스트립으로 자릅니다.</td></tr></tbody></table>

바이오 콘쥬 게이션과의 radiosynthesis<sup&gt; 89</sup&gt; zr-dfo 표지 항체

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

항체의 탁월한 친화력, 특이도, 선택은 그들에게 종양을 대상으로 PET 방사성 의약품에 대한 매우 매력적인 벡터를 확인합니다. 으로 인해 여러 날 생물학적 반감기, 항체는 비교적 긴 물리적 붕괴 반감기 양전자 방출 방사성 핵종으로 표시해야합니다. 전통적으로, 양전자 방출 동위 원소 (124)는 I (t 1/2 = 4.18 D), (86) Y (t 1/2 = 14.7 시간), 64 구리 (t 1/2 = 12.7 시간)은 대한 항체를 라벨 사용되어왔다 PET 영상. 그러나 최근 필드는 항체 기반 PET 이미징 에이전트에 양전자 방출 방사성 89 ZR의 사용이 크게 증가를 목격 하였다. 그것이 물리적 반을 가지고 89 ZR은 면역 접합체와 PET 이미징에 대한 거의 이상적인 방사성 동위 원소 인 항체의 생체 내 약물 동태와 호환되며 상대적으로 낮은 에너지를 방출 - 생활 (t 1/2 = 78.4 시간)고해상도 이미지를 생성 RGY의 양전자. 또한, 항체는 노골적 시데로 포어 파생 킬레이트 desferrioxamine (DFO)를 사용하여 89 ZR으로 표시 할 수 있습니다. 이 프로토콜에서, 전립선 특이 막 항원 표적 항체 J591은 예시 모델 시스템으로 사용한다 (1) 항체, (2) radiosynthesis 및 89 Zr-의 정제 - 이소 티오 시아 네이트 DFO 관능 킬레이트 바이오 콘쥬 게이션 암의 뮤린 모델 ZR-89-DFO 단클론 radioimmunoconjugate와-DFO 단클론 radioimmunoconjugate, 및 (3) 생체 내 PET 영상화.

이 프로토콜 항체 DFO-NCS의 공액의 첫 번째 단계는 일반적으로 매우 견고하고 신뢰할 수있다. 일반적으로, 정제, 킬레이트 변성 면역 접합체는&gt; 90 %의 수율로 얻을 수 있고, 초기의 접합 반응에서 DFO-NCS의 3 몰 당량을 사용하여 차수의 표지 약 1.0-1.5의 킬레이트 DFO의 수율 것이다 / 단클론 항체. 프로 시저의 89 ZR의 방사선 및 정제 단계는 마찬가지로 간단합니다. 위의 프로토콜에 설명 된 농도&gt; 80 %의 방사선 수율&gt; 2.0 mCi의 / mg을 따라서 특정 활동에 실온에서 60 분 후 일반적이다. 원유의 방사선 혼합물의 무선 TLC 크로마토 그램 가능성이 용매 전면 (그림 4A)에서 용출 일부 DTPA 바인딩 89 ZR을 4+ 발표 할 예정이다. 그러나 radioc DTPA를 반응물을 급냉 (89) ZR-DFO 단클론은 크기 배제 크로마토 그래피를 통해 정제 한 후 건설정제...

수일 방사성 반감기와 유리한 붕괴 특성으로 인해 양전자 방출 방사성 금속 89Zr은 PET 이미징을 위한 항체 기반 방사성 의약품에 사용하기에 매우 적합합니다. 이 프로토콜에서는 89Zr 표지 항체의 생체접합, 방사성 합성 및 전임상 적용에 대해 설명합니다.

바이오 콘쥬 게이션과의 Radiosynthesis<sup&gt; 89</sup&gt; ZR-DFO 표지 항체

The exceptional affinity, specificity, and selectivity of antibodies make them extraordinarily attractive vectors for tumor-targeted PET ...

본 실험 절차의 전체적인 목적은 zirconium 89 DFO 표지 방사성 면역접합체를 합성하고 생체 내(in vivo) 성능을 평가하는 것입니다. 이는 먼저 킬레이트제인 deferoxamine을 항체에 부착함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 항체 DFO 접합체를 zirconium 89로 방사성 표지하는 것입니다.다음으로, 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여 방사성 면역 접합체를 정제합니다. 마지막 단계는 암 마우스 모델에서 소동물 양전자 방출 단층 촬영 또는 PET 영상을 촬영하는 것입니다. 최종적으로, PET 영상을 통해 zirconium 89 표지 방사성 면역 접합체의 체내 분포 영상을 획득합니다.일반적으로 이 방법을 처음 접하는 분들은 zirconium 89 oxalate 용액의 pH 조절이 다소 까다로울 수 있어 어려움을 겪을 수 있습니다. 저는 저희 실험실의 기술자인 Dalia Abdi와 함께 이 절차를 시연하겠습니다. 먼저, 1.7 mL 마이크로 원심분리 튜브에 0.5 M HEPs 완충액 1 mL를 넣고 J 5 91을 2~5 mg/mL 농도로 준비하십시오. D-F-O-N-C-S를 건조한 DMSO에 5~10 mM 농도로 녹인 후, 완전히 용해되도록 용액을 충분히 초음파 처리하고 볼텍싱하십시오.다음으로, 0.1 M 탄산나트륨을 소량씩 첨가하여 J 5 9 1 용액의 pH를 8.8에서 9 사이로 조절합니다. 항체 용액이 적정 pH에 도달하면, 이작용성 킬레이트제가 3~4배 몰 과량에 해당하는 부피의 D-F-O-N-C-S 용액을 첨가합니다. 그런 다음 교반 가열 블록에서 37 °C로 30분 동안 반응물을 배양합니다.37 °C에서 1시간 후 분당 350회전으로 회전시킨 다음, 50,000 molecular weight cutoff의 사전 충전된 일회용 크기 배제 탈염 컬럼과 0.5 M Hess 버퍼를 사용하여 남은 면역접합체를 정제합니다. 정제 후 EENT를 수행합니다. UV-vis 분광광도계를 사용하여 J 5 91 DFO 컨스트럭트의 농도를 측정합니다. 완성된 J 5 91 DFO 면역접합체 용액을 -20 °C의 암소에 보관합니다.이 단계에서 200 µL의 0.5 M HEPES 완충액에 0.5~2 mg의 J 5 91 DFO 용액을 준비합니다. 여기에 1~6 mCi에 해당하는 지르코늄 89(zirconium 89) 표준 용액을 2 mL 플라스틱 스크류 캡 마이크로 원심분리 튜브에 넣습니다. 1 M 옥살산(ox

the-bioconjugation-and-radiosynthesis-of-89zr-dfo-labeled-antibodies

Research

연구

JoVE Journal

Chemistry

화학

이 비디오는 종양 치료를 위해 면역접합체와 방사선 리간드를 투여하는 사전 표적 방사선 면역 요법 또는 PRIT의 기술을 설명합니다. 이 방사성 면역 요법은 건강한 조직에 대한 방사선량을 줄이고 항체 기반 벡터와 호환되지 않는 반감기가 매우 낮은 방사성 핵종을 사용합니다.

사전 표적 방사선 면역 요법: 종양에 치료용 방사성 핵종을 표적 전달하는 방법

이 비디오는 마우스 모델에서 종양의 생체 내 이미징을 위한 방사성 면역접합체와 관련된 기술을 보여줍니다. 방사성 면역접합체를 주입하면 접합체의 항체는 암세포의 특정 막 항원에 결합합니다. 접합체의 방사성 추적자는 주변 전자와 상호 작용하여 에너지를 생성하는 양전자를 방출하며, 이는 양전자 방출 단층 촬영(PET) 스캐너에 의해 감지되어 종양의 이미지를 생성합니다.

방사선 표지된 항체를 사용하여 쥐 모델에서 종양을 감지하는 In Vivo PET 이미징 기술

생물직교 역전자 수요 Diels-Alder cycloaddition은 암에 대한 효과적이고 모듈화된 사전 표적 PET 이미징 전략을 수립하기 위해 활용되었습니다. 이 프로토콜에서 이 방법론의 단계는 대장암 표적 항체 huA33 및 64Cu 표지 방사성 리간드를 사용하는 모델 시스템의 맥락에서 설명됩니다.

Pretargeted PET 영상에 대한 Bioorthogonal 역 전자 수요 딜스 - 알더 고리 모으고

I 125 - 표지 지드의 합성 및 무도 클릭 반응을 이용 dibenzocyclooctyne (DBCO) - 기 - 컨쥬 게이트 13 나노 크기의 금 나노 입자의 방사성 표지에 대한 세부 절차를 설명한다.

를 사용하여 금 나노 입자의 효율적인 방사성 표지를위한 최적화 된 프로토콜<sup&gt; (125)</sup&gt; I-표시 아 지드 보철 그룹

여기에서는 사전 표적화 및 생체 직교 화학을 위한 트라이덴테이트 99mTc(I) 킬레이트-테트라진 유도체의 방사성 표지 및 생체 내 테스트를 위한 프로토콜에 대해 설명합니다.

준비 및 평가<sup&gt; 99m</sup&gt; Bioorthogonal 화학을 사용하여 사전이 타겟팅에 대한 세자리 킬레이트를 Tc를 표지

바이러스 성 파생 된 펩 티 드 항 체 어원이 같은 말 (ACs)에 결합 된 증가 된 종양 세포 축적과 분자 페이로드를 제공의 가능성으로 인해 기세를 얻고입니다. 펩 티 드 활용, AC 및 페이로드 세포내 축적, 및 종양을 대상으로 평가 하는 일반적인 방법을 활용 하 고,이 프로토콜 연구원 주요 초기 개발 단계에서 도움이 됩니다.

세포 축적을 증가 하 고 종양을 대상으로 개선에 대 한 바이러스 성 파생 된 펩 티 드 항 체 어원이 같은 말의 초기 평가 수정

이 프로토콜 합성 및 트랜스-cyclooctene (TCO)의 특성에 설명 합니다-항 체와 177루 표시 tetrazine (Tz) radioligand pretargeted radioimmunotherapy (PRIT)에 대 한 수정. 또한, 그것은 자세히 biodistribution vivo에서 및 colorectal 암의 murine 모델에 경도 치료 연구에 대 한 이러한 두 가지 구조를 사용 하 여를 설명합니다.

Pretargeted Radioimmunotherapy 역 전자 수요 Diels 오리 나무 반응에 따라

이 프로토콜에서 포드는 phenyoxadiazolyl 메 틸 sulfone 기반 시 약 쓰이므로, 특히 항 체의 thiols 화물의 사이트 선택 첨부 파일에 대 한 종합을 설명 합니다. 또한, 합성 및 포드 베어링 bifunctional chelator 및 모델 항 체에의 활용의 설명 합니다.

합성 및 Bioconjugation의 Thiol 반응 시 약 사이트에 선택적으로의 창조에 대 한 수정 Immunoconjugates

여기에서, 고정화된 항원에 대한 방사성 표지된 항체의 결합 친화도(KD)를 결정하는 방법이 기재되어 있다. KD 는 다양한 농도에서 그의 항원에 대한 방사성 표지된 항체의 전체적, 특이적, 및 비특이적 결합을 측정함으로써 포화 결합 실험으로부터 결정될 수 있는 평형 해리 상수이다.

고정화된항원에 대한 방사성 표지된 항체의 결합 친화도 (KD) 결정

여기에 제시된 것은 바로 사용할 수 있는 방사성 표지 합성 [89 Zr]Zr-p-isothiocyanatobenzyl-desferrioxamine([89Zr]Zr-DBN)을 사용하여 양전자 방출 단층 촬영(PET) 방사성 동위원소, 89Zr(t1/2 78.4 h)로 세포를 방사성 표지하는 프로토콜입니다. [89Zr]Zr-DBN을 사용한 방사성 표지 세포는 투여 후 최대 7일 동안 PET를 사용하여 체내에서 투여된 방사성 표지 세포의 비침습적 추적 및 이미징을 가능하게 합니다.

세포 이동의 양전자 방출 단층 촬영 이미징: 세포 방사선 표지 방법

이 작업은 섬유아세포 활성화 단백질의 PET 이미징을 위한 iPHASE MultiSyn 합성기에서 최대 1.7GBq의 [68Ga]Ga-FAPI-46을 자동으로 생산하는 방법을 설명합니다.

일상적인 임상용 [68Ga]Ga-FAPI-46의 자동 방사선 합성

배우세요 zirconium-89 DFO 표지 항체의 방사성 합성 및 생체 내 분포 평가 방법을. 이 기술은 암 진단 및 치료 모니터링을 위한 표적 PET 영상에 활용됩니다.

바이오 콘쥬 게이션과의 Radiosynthesis

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