Name: 에서 애벌레 활동의 측정 초파리 활동 모니터 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: 배우세요 TriKinetics Drosophila Activity Monitor를 활용한 Drosophila 애벌레 활동 측정 방법입니다. 적외선 빔으로 최대 16마리 개별 동물의 움직임을 감지하여 활동률과 위치를 자동 분석합니다.

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이 연구는 NIH P20GM103643 to I. Meng의 지원을 받았습니다.

애벌레 1. 준비 <ol><li> , 운동 또는 위치를 기본 설정으로 원하는 유충을 분석 표준 플라이 음식 (11)를 사용하여 10를 분석하기 위해 원하는 시대에 표준 조건 하에서 유충 성장합니다. </li><li> 실크 스크린 수준의 나일론 깔때기를 통해 메쉬 스트레칭으로 메쉬 필터를 확인합니다. 고무 밴드와 깔때기 목에 메쉬를 고정합니다. 비커에 깔때기를 놓습니다. </li><li> 분석을 위해 애벌레를 수집하려면, 주걱 가득 배양 병에서 구하고 유충을 포함하는 식품의 특종과 붓 10 메쉬에서 직접 개별 애벌레를 수집, 메쉬 필터를 통해 RT의 수돗물로 세척한다. </li></ol> 분석 튜브 2. 준비 <ol><li> 분석 튜브를 연결하기 위해 준비하려면 신중하게 4 % 한천 겔을 끓여 1.5 cm의 깊이에 페트리 접시에 붓는다. 동물 봉입 할 때 튜브의 양측에 대해 플러그를 제공 할 것이다. 4 % 용액 (P)에서 유충을 방지하기에 충분히 조밀플러그를 enetrating. </li><li> 튜브 깨끗하고 유충의 삽입 분명 이전에 있는지 확인합니다. 그렇지 않은 경우, 기록되는 움직임을 차단 할 수있다. </li><li> 유충 이동 충분한 수분을 보장하기 위하여 온수를 소량 함유하는 스퀴즈 병을 준비한다. 조심스럽게 싱크쪽으로 출구 방향을, 병 전환 및 픽업 관에서 물을 추방 부드럽게 쥐어 짜기. </li><li> 분석 튜브에 병 콘센트를 삽입합니다. 축합 박층 튜브의 벽에 나타날 때까지 시험 튜브에 수증기를 전달하는 스퀴즈 병. 비디오 1은 수분 적당량 관으로 이동 유충을 나타낸다. </li><li> 튜브를 밀봉 유충, 페트리 접시에서 1.5 cm 두께의 한천 겔을 제거하고 한천 플러그는 튜브 내로 삽입 될 수 있도록 한천 아래의 공기 흐름을 허용하기 위해 메시의 표면 위에 놓는다. 일 단부에 두 겔 플러그를 삽입하는 회 겔로 분석 튜브의 한쪽 끝을 누른다. </li><li> paintb으로서두 약 1.5 인치 깊이 튜브로 한 유충을 배치하고 한천 겔에 유충 가까운 단부를 눌러 튜브를 밀봉. 생성 된 압력은 대향 단부로부터 한천 겔의 제 2 플러그를 강제 튜브 내에 동물을 밀봉한다. </li><li> 장소 MB5 멀티 빔 초파리 활동 모니터 (DAM) 장치의 튜브 및 동물이 센서의 범위를 넘어 이동할 수 있도록 튜브 &#39;의 위치를 조정합니다. </li><li> 튜브 운송 중 장치의 적외선 판독 프레임 밖으로 밀어하지 않는 분석을 보장하기 위해, 각각의 튜브에 접촉 기록 장치 주위에 퍼티의 고리를 고정하여 장소에 튜브를 개최합니다. </li></ol> 3. 측정 활동 <ol><li> 인큐베이터에서 녹음 활동으로 인해 그림자, 형광등 또는 실험실에서 온도 변화로 발생할 수있는 부정확 한 측정을 방지합니다. 시스템의 제안 배치는 그림 5를 참조하십시오. </li><li> 20 ° C (그림 1 참조)에 인큐베이터를 설정합니다. 녹화 중에 인해 백열등 광원의 간섭에 허위 기록을 방지 형광 인큐베이터 조명을 끄고 인큐베이터에서 녹음하는 동안 별도의 LED 광원을 사용합니다. 비정상적으로 센서를 트리거하지 않는 조명 조건을 보장하기 위해 모든 동물없이 시험을 수행합니다. 이 테스트 이후에는 기록 된 이동 데이터가 없어야합니다. </li><li> 애벌레 분석의 시작하기 전에 5 분 동안 20 ° C 배양기 설정에 적응하도록 허용합니다. </li><li> 원하는 기록 간격 (예를 들면, 1 분)에 댐 시스템을 설정하려면 DAM 시스템 레코딩 소프트웨어는 컴퓨터 (12)를 호스팅하고 PSIU 인터페이스에 기록 챔버를 연결하기 전에 DAM 시스템 파일을 엽니 다 다운로드되어 있는지 확인합니다. </li><li> 다음 데이터가 저장 될 때의 원하는 녹화 주파수 선택 환경 설정을 설정하려면 서로 다른 시간 프레임을 선택하려면 위 또는 독서 간격 옵션 아래를 클릭하는 데이터저장됩니다. 예를 들어, 1 시간에 1 초 시간 간격에서 독서를 선택. </li><li> , 기록 데이터에 대한 다양한 매개 변수를 선택 환경 설정을 선택하고 출력 데이터 타입에 따라 해당 상자를 선택하려면 (수, 이동, 위치 및 거, 표 1 참조). 각 매개 변수는 튜브 내에서 애벌레 활동의 고유 한 분석을 제공합니다. </li><li> 녹음을 시작 CAB6 전화 케이블을 사용하여 전원 공급 장치 인터페이스 장치 (PSIU)에 모니터를 연결합니다. 전원 콘센트에 PSIU를 연결합니다. 녹색 등이 해당 연결을 나타냅니다. </li><li> 데이터 기록을위한 매킨토시 또는 Windows PC에 범용 직렬 버스 (USB) 케이블을 통해 PSIU를 연결합니다. 자동 데이터 기록을 시작하기 위해 컴퓨터에 댐 SystemMB1v6x 프로그램을 엽니 다. </li><li> 바람직한 수집 시간이 완료되면 종료를 선택한 다음 DAM 활성 ​​화면에서 지금 종료; 데이터가 자동으로 DAM 시스템 데이터 아래에 저장됩니다. 이 데이터 파일을 가지고 (예를 들어 1, 모니터)와 드래그<html> 별도의 폴더에. 그들은 나중에 처리 될 수 있도록이 DAM 소프트웨어의 원시 데이터를 저장할 것이다. </li></ol> 처리를위한 데이터 준비 (4) (DAM 파일 검사) <ol><li> 이해할 수있는 형식으로 원시 데이터를 처리하려면 댐 파일 검사 응용 프로그램을 열고 선택 입력 데이터 폴더를 선택합니다. 그런 다음 데이터 폴더와 원하는 파일을 선택하고 검색 옵션을 선택합니다. 마지막으로 원하는 독서 기간에 빈 길이를 선택합니다. 이는 작업자에 의해 설정된 파라미터에 원시 데이터를 구성되고 프로그램은 특정 범위 내에서 수집 된 데이터를보고 할 것이다. </li><li> (모니터 카운트, 이동, 거) 원하는 동작 설정을 분석하기 위해 출력 데이터 유형을 선택합니다. 여분의 판독 메뉴에서, 빈에 선택 합 (이 빈 길이가 선택한 시스템 판독 간격보다 큰 경우). </li><li> 적절하게 파일 이름을 지정하고 저장합니다. 파일은 단계 3.9에서 폴더와 같은 위치에 저장한다. </li></ol>분석을위한 _title &quot;&gt; 5. 데이터 액세스 <ol><li> 이전에 저장 한 파일 (단계 4.3)를 열고, 평균 이동, 처리 스프레드 시트 프로그램에서 테이블을 생성하려면 4 단계에서 생성 된 원시 데이터를 수집, 텍스트 가져 오기 마법사 창이 나타나면, 선택 마무리 열기 위해 스프레드 쉬트 형식의 데이터 파일. 주 : 분석 데이터 타입에 따라, 스프레드 시트는 다르게 판독 될 것이다. 각각의 독서 관이 지정 편지를 받게됩니다 동안 일반적으로, 연구의 시간이 숫자로 기록됩니다 모니터 이동 또는 수를 측정합니다. 스프레드 시트에 데이터를 볼 때, 열은 검정 튜브 1-16 각각에 대해 KZ 슬랏을 나타낸다. 행은 수집 된 데이터 지점을 나타낸다. </li><li> 이동은 1 분 간격으로 20 분 동안 수집 된 경우, 예를 들어, 이동 / 분 및 다른 측정의 평균 수를 계산하는 평균 20 행. </li></ol>

<ol><li>Tracey, W. D. Jr, Wilson, R. I., Laurent, G., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((painless%2C+a+Drosophila.gene+essential+for+nociception%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">painless, a Drosophila.gene essential for nociception.</a> Cell. 113, 261-273 (2003).</li>
<li>Ainsley, J. A., Kim, M. J., Wegman, L. J., Pettus, J. M., Johnson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+mechanisms+controlling+the+timing+of+larval+developmental+and+behavioral+transitions+require+the+Drosophila.DEG%2FENaC+subunit%5BTitle%5D)+AND+%22Pickpocket1.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Sensory mechanisms controlling the timing of larval developmental and behavioral transitions require the Drosophila.DEG/ENaC subunit.</a> Pickpocket1. Dev. Biol. 322 (1), 46-55 (2008).</li>
<li>Pandey, U. B., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+disease+models+in+Drosophila.+melanogaster.and+the+role+of+the+fly+in+therapeutic+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Human disease models in Drosophila. melanogaster.and the role of the fly in therapeutic drug discovery.</a> Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).</li>
<li>Cattaert, D., Birman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+the+central+generator+of+locomotor+rhythm+by+noncompetitive+NMDA+receptor+antagonists+in+Drosophila.larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Blockade of the central generator of locomotor rhythm by noncompetitive NMDA receptor antagonists in Drosophila.larvae.</a> J. Neurobiol. 48 (1), 58-73 (2001).</li>
<li>Caldwell, J. C., Miller, M. M., Wing, S., Soll, D. R., Eberl, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+analysis+of+larval+locomotion+in+Drosophila.+hordotonal+organ+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Dynamic analysis of larval locomotion in Drosophila. hordotonal organ mutants.</a> PNAS. 100 (26), 16053-16058 (2003).</li>
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<li>Godoy-Herrera, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+and+genetics+of+digging+behavior+in+Drosophila.+arvae%5BTitle%5D)+AND+%22Heredity%22%5BJournal%5D)">The development and genetics of digging behavior in Drosophila. arvae.</a> Heredity. 56, 33-41 (1986).</li>
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<li>Woods, J. K., Kowalski, S., Rogina, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+the+spontaneous+locomotor+activity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Determination of the spontaneous locomotor activity in Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (86), e51449(2014).</li>
<li>Troncoso, B., Godoy-Herrera, R., Waldo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+larval+movement+patterns+in+Drosophila%29%5BTitle%5D)+AND+%22Heredity%22%5BJournal%5D)">The development of larval movement patterns in Drosophila).</a> Heredity. 58 (1), 321-329 (1987).</li>
<li>Helfrich, C., Engelmann, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+rhythm+of+the+locomotor+activity+in+Drosophila.+melanogaster.and+its+mutants+%E2%80%98sine+oculis%E2%80%99+and+%E2%80%98small+optic+lobes%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Entomology%22%5BJournal%5D)">Circadian rhythm of the locomotor activity in Drosophila. melanogaster.and its mutants ‘sine oculis’ and ‘small optic lobes.</a> Physiological Entomology. 8 (3), 257-272 (1983).</li>
<li>Johnson, A. W., Carder, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+ociceptors+mediate+larval+aversion+to+dry+surface+environments+utilizing+both+the+painless+TRP+channel+and+the+DEG%2FENaC+subunit%2C+PPK1%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Drosophila, ociceptors mediate larval aversion to dry surface environments utilizing both the painless TRP channel and the DEG/ENaC subunit, PPK1.</a> PLoS ONE. 7 (3), (2012).</li>
</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

초파리 유충의 활동은 유전자형 8, 13 세 및 주위 온도 2를 포함한 다양한 요인에 의해 영향을 받는다. 매우 상세한 분석 할 수있는 강력한 비디오 그래픽 방법은 운동 (5)을 연구하는 사람들에 의해 개발되었지만, 세부 사항의 수준은 활동의 기본 매개 변수를 결정하고자하는 사람들을 위해 불필요 할 수있다. 여기에 기재된 방법은, 많은 실험실에서 사용할 디바이스 작동하기 쉬운 고용 고도로 재현 가능한 결과를 생성하고, 심지어 그 기본 연구 초점 운동 아니다에게 관리이다. 예시적인 결과는 상기 분석이 서로 다른 온도 (도 1)과 상이한 유전자형 (도 2) 실시 유충의 운동성에 상당한 변화를 검출하는데 사용될 수 있음을 입증한다. 35 ° C, 자신을 - 유충은 5 ° C 범위의 온도에서 측정했을 때활동은 20 ° C와 25 ° C <strong...

초파리를 유전 도구로 사용함으로써 생물학적 시스템에 대한 과학적 지식이 바뀌었습니다. 초파리 유충은 통각(유해성)1, 발달(development)2 등 다양한 연구에서 사용되어 왔으며 인간 질병 유전자 연구3 의 모델로 사용되어왔다. 초파리 활동은 온도2, 약물 노출4 및 다양한 유전자형을 포함한 다양한 조건에서 다양한 행동을 포함합니다. 그러나 유충이 모델 유기체로 많이 사용되었음에도 불구하고 유충 활동을 분석하기 위한 간단하고 표준화된 방법은 사용할 수 없었습니다. 현재 많은 유충 운동 연구는 정교한 비디오 분석 소프트웨어를 사용합니다5. 이러한 자동화된 도구의 복잡성은 강력하지만 아직 이동을 연구할 준비가 되어 있지 않은 실험실에서 연구에 정보 활동 매개변수 분석을 포함하지 못하게 할 수 있습니다. 그리드 크롤링 분석과 같은 다른 현재 자동화되지 않은 방법에서는 인간 관찰자에 의해 움직임이 점수화되며, 이는 주관성의 가능성을 도입하고 한 번에6-7 마리의 동물로 처리량을 제한합니다. 유사한 연구에서는 유충이 특정 선형 거리8를 이동하는 데 걸리는 시간을 측정한 5차선 크롤링 분석을 사용했다. 이러한 자동화되지 않은 분석에서는 변위가 측정되지만 이는 시작점과 끝점 사이의 비선형 이동을 고려하지 않습니다. 아래에서 논의된 바와 같이, 여기에 설명된 방법은 실제 유충 이동을 더 많이 설명하고, 객관적이고, 작동하기 쉬우며, 강력한 처리량을 제공합니다.
정확성, 효율성 또는 비용의 저하 없이 유충 활동 행동을 쉽게 연구하기 위해 이 방법은 성체 활동을 연구하는 데 자주 사용되는 장치인 TriKinetics DAM(Drosophila Activity Monitor)을 사용합니다. 하나의 장치를 사용하여 성충과 유충 활동을 모두 연구하는 것은 비용 효율적이며 이 두 가지 생활 단계에서 동물의 움직임을 직접 비교할 수 있습니다. 제조업체의 최고 수준의 해상도를 특징으로 하는 이 시스템은 분석 튜브당 17개의 적외선 감지 빔을 사용하여 16개의 개별 튜브 내에서 센서 빔이 파손될 때 유충 활동을 기록합니다. 그런 다음 시스템은 기록된 정보를 컴퓨터에 자동으로 저장하여 기본 그래프 소프트웨어로 조작할 수 있도록 합니다. 얻어진 데이터는 개별 유충에 의해 파괴된 빔(비율로 변환될 수 있음), 유충이 검출기 빔 내에 머무를 때의 움직임 및 기록 기간 동안 분석 챔버 내 동물의 위치(위치 선호도를 계산할 수 있음)를 나타냅니다. 이 시스템은 효율적이고 작동이 비교적 간단하며 초파리 유충을 연구하는 모든 실험실의 범위 내에서 재현성이 높은 기본 활동 분석을 제공합니다.
이 분석의 힘을 입증하기 위해 이전에 저활성(iav1)9으로 기술된 돌연변이와 광범위하게 분석된 대조군(W1118)의 비교를 통해 다양한 주변 온도로 인한 활성의 차이를 확인하는 데 사용되는 데이터를 보여줍니다.

<table><tbody><tr><td>초파리 활동 모니터, 멀티빔, 16개의 튜브, 와이어 포함</td><td>TriKinetics Inc.&nbsp;</td>활동 모니터용 <td>MB5</td><td></td></tr><tr><td>전원 공급 장치 인터페이스&nbsp;</td><td>트라이키네틱스&nbsp;</td><td>PSIU24</td><td></td></tr><tr><td>활동 모니터용 유리 80 x 5mm 튜브 (100)</td><td>TriKinetics Inc.&nbsp;</td>Macintonsh OSX (Intel) 용 <td>PGT 5x80</td><td></td></tr><tr><td>DAMsystemMB1v6x 데이터 수집 소프트웨어</td> <td><a href="http://www.trikinetics.com/">www.trikinetics.com< / ></td><td></td> <td>무료 다운로드</td></tr><tr><td>Macintosh 용 DAMFileScan 108x 소프트웨어</td> <td><a href "http://www.trikinetics.com/">www.trikinetics.com< / a></td><td></td> <td>무료 다운로드</td></tr><tr><td>USB 소프트웨어 (PSIUdrivers.zip).</td><td><a href="http://www.trikinetics.com/">www.trikinetics.com</a></td><td></td><td>free download</td></tr><tr><td>DAMSystem Notes 308</td><td><a href="http://www.trikinetics.com/">www.trikinetics.com</a></td><td></td><td>무료 다운로드</td></tr><tr><td>Zeiss Stemi 2000C- 스테레오 현미경</td><td>스펙트럼 서비스</td><td>SP-STEMI2000C-BS</td><td></td></tr><tr><td>이산화탄소</td><td>메인 옥시</td><td></td><td>마취</td></tr><tr><td>플라이 패드</td><td>Genesee</td><td>59-114</td><td>마취된 파리를 분류하기 위한 표면</td></tr><tr><td>작은 페인트 브러시&nbsp;</td><td>윈저 & Newton</td><td>#2 ROUND</td><td>또는 이와 유사한, 마취된 파리 분류에 사용</td></tr><tr><td>실크 스크린 인쇄 메쉬(160)</td><td>msj-gallery.com</td> 이 프로토콜에 사용된 <td>SM160W63-3YD</td><td>기공 크기는 ~ 0.1mm</td></tr><tr><td>Tegosept</td><td>Genesee</td><td>20-258</td><td>방부제</td></tr><tr><td>에탄올(190proof)</td><td>Pharmco</td><td>111000190</td><td>Tegosept</td></tr><tr><td>6oz 정사각형 바닥 병(PP)</td><td>을</td> 용해하는 데 사용됨<td>32-130</td><td></td></tr> <tr><td>플라스틱 플라이 병용 "Flugs"</td><td>Genesee</td><td>49-100</td><td></td></tr><tr><td>초파리 바이알, 와이드(PS)</td><td>Genesee</td><td>32-117</td><td></td></tr><tr><td>와이드 플라스틱 바이알용 플러그</td><td>Genesee</td><td>49-101</td><td></td></tr><tr><td>노란색 배아 옥수수 가루</td><td>금메달</td><td></td><td></td></tr><tr><td>초파리 한천</td><td>LabScientific</td><td>FLY 8020</td><td></td></tr><tr><td>베이커스 이스트 - 레드 스타</td><td>킹 아서 플라워</td><td>1270</td><td></td></tr><tr><td>알갱이 설탕 - 엑스트라 파인</td><td>도미노</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

에서 애벌레 활동의 측정<em&gt; 초파리</em&gt; 활동 모니터

Measurement of Larval Activity in the Drosophila Activity Monitor

Drosophila 유충은 많은 행동 연구에 사용되지만 유충 활동의 기본 매개 변수를 측정하기위한 간단한 장치는 사용할 수 없습니다. 이 프로토콜은 성체 활동을 측정하는 데 자주 사용되는 기기인 TriKinetics 초파리 활동 모니터(MB5 Multi-Beam Activity Monitor)를 유충 활동을 연구하기 위해 용도를 변경합니다. 이 기기는 튜브당 17개의 적외선 검출 빔을 사용하여 16개의 개별 8cm 유리 분석 튜브에서 동물의 움직임을 모니터링할 수 있습니다. 로깅 소프트웨어는 데이터를 컴퓨터에 자동으로 저장하여 이동 횟수, 센서가 트리거된 시간, 튜브 내 동물의 위치와 같은 매개변수를 기록합니다. 그런 다음 데이터를 분석하여 전체 운동 및/또는 위치 선호도 및 기타 측정값을 나타낼 수 있습니다. 모든 데이터에 쉽게 액세스할 수 있으며 기본 그래프 작성 및 데이터 조작 소프트웨어와 호환됩니다. 이 프로토콜은 장치 사용 방법, 소프트웨어 작동 방법 및 유충 활동 분석을 처음부터 끝까지 실행하는 방법에 대해 설명합니다.

도 1은 상이한 온도에서 일곱 유생 운동의 차이를 검출하기 위해 모니터링 장치를 사용하여, 1118 w 제어 셋째 령 유충의 온도 반응 연구로부터의 결과를 나타낸다. 유충을 세척 및 전술 한 바와 같이 DAM 동작 장치에 배치하고, 원하는 온도로 설정 배양기에 넣었다. 녹화가 시작되기 전에 장치가 다음 5 분 동안 환경에 적응시켰다. 각 애벌레 개별적 20 분에 걸쳐 운동 분당 움직임의 평균 개수에 대한 분석은 각 동물에 대해 계산 된 32 동물의 각 세트에 대해 평균 하였다. 데이터 분석 및 스프레드 시트 프로그램을 이용하여 그래프 화 하였다. 온도가 20 ° C에서 이러한 추세에 휴식 및 25 ° C를 제외하고, 5도 단위로 5-35 ° C의에서 대응 증가로 유충이 크게 증가 활성을 나타내었다. 차이를 기 있는지 확인하려면LD는 제어 이전에 성욕 감퇴, 비활성 유충 (IAV 1)로 설명 ...

이 보고서는 TriKinetics Drosophila Activity Monitor를 사용하여 초파리 유충 활동을 측정하는 방법을 설명합니다. 이 장치는 적외선 빔을 사용하여 최대 16 마리의 개별 동물의 움직임을 감지합니다. 데이터를 분석하여 분석 챔버 내 동물의 비율 및 위치를 포함한 모션 매개변수를 나타낼 수 있습니다.

Drosophila larvae are used in many behavioral studies, yet a simple device for measuring basic parameters of larval activity has not been available. This ...

본 실험 절차의 전반적인 목표는 복잡한 비디오 분석 소프트웨어를 사용하지 않고 유충의 활동성을 분석하는 것입니다. 이를 위해 먼저 선택된 유충을 메쉬 필터로 옮겨 부유물을 제거합니다. 그다음 개별 유충을 분석 튜브로 옮기고 오거 플러그(auger plug)로 고정한 뒤, 이를 초파리 활동 모니터(drosophila activity monitor) 또는 DAM 장치에 삽입합니다.3~5분간의 적응 시간을 거친 후, 분석을 위해 DAM 시스템에서 기록을 측정합니다. 결과적으로 DAM으로 측정된 유충의 움직임은 특정 유전형에 대한 다양한 활동 파라미터를 분석하는 데 사용될 수 있습니다. 이 기술이 기존 방법보다 유리한 점 중 하나는 자동화되어 있으며 객관적이라는 것입니다.일상적인 활동량 측정을 위해 충분히 간단한 이 방법은, 많은 연구실에서 이미 보유하고 있는 장비를 유충용으로 쉽게 개조하여 사용할 수 있습니다. 본 절차의 시연은 저희 연구실의 학부생인 Aiden McFarlin이 맡았습니다. 이 프로토콜에서는 M five multi-beam drosophila activity monitor 장치 또는 DAM을 사용합니다.댐을 설치하려면, 먼저 CAB 6 전화 케이블을 사용하여 모니터를 전원 공급 인터페이스 장치(PSIU)에 연결하십시오. 그다음 PSIU를 전원 콘센트에 연결하십시오.적절하게 연결되면 녹색 표시등이 켜집니다. 세 번째로, 데이터 기록을 위해 PSIU를 USB 케이블로 컴퓨터에 연결하십시오. 이제 컴퓨터에 DAM system MB one V six X 프로그램을 설치하고 실행하십시오.소프트웨어를 실행하면 소프트웨어 제어창에서 자동으로 데이터 기록이 시작됩니다. 댐(dam)에 대해 원하는 기록 간격을 설정하십시오. 기본 설정(preferences)을 선택한 다음, 읽기 간격(reading interval) 옵션의 위 또는 아래를 클릭하여 데이터가 저장될 서로 다른 시간 범위를 선택하십시오.설정 및 출력 데이터 유형 항목에서 설정할 수 있는 다양한 다른 매개변수들이 있습니다. 각 매개변수는 튜브 내 유충 활동에 대한 고유한 분석 결과를 제공합니다. 데이터 수집 전에 모든 매개변수를 선택할 것을 권장합니다.본 분석에서 어떤 파라미터를 측정할지 불확실한 경우, 분석 대상인 각 유전자형에 대해 먹이 탐색 유충이 담긴 바이알을 준비하십시오. 표준 환경과 초파리 배지를 사용하여 분석 튜브를 준비합니다. 페트리 접시에

measurement-of-larval-activity-in-the-drosophila-activity-monitor

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

우리의 유충에서 심장 기능을 모니터링하는 여러 가지 방법을...

애벌레의 모니터링 심장​​ 기능 Drosophila melanogaster 생리 연구

우리는 매일 운전하는 활동 리듬을 녹음 절차를...

Circadian 리듬을 연구 및 매개 변수 잠을 전위의 활동 시금 Drosophila</em

면역 반응과 행동 사이의 링크를 이해하기 위해, 우리는에서 전위의 행동을 측정하는 방법을...

면역 반응과 수면에서의 양적 측정<em&gt; Drosophila</em

이 비디오는 운동 활동을 추적하는 데 사용되는 초파리 활동 모니터(DAM) 시스템에 대해 설명합니다. 연구원들은 DAM에서 수집한 활동 데이터를 사용하여 초파리의 일주기 리듬을 연구합니다. 주요 프로토콜 클립은 장치에 파리를 로드하고 일주기 실험을 위한 활동 데이터를 기록하는 방법을 보여줍니다.

초파리 Activity Monitor (DAM): 파리의 운동 활동을 측정하는 방법

초파리 melanogaster의는 자발적인 운동 활성 등의 행동에 영향을 미치는 유전 적 또는 환경 적 조작을 공부에 유용하다. 여기에서 우리는 적외선 빔과 자발적인 운동 활성을 정량화하는 데이터 분석 소프트웨어와 함께 모니터를 활용하는 프로토콜을 설명합니다.

의 자발적인 운동 활성의 결정<em&gt; 초파리</em

비행 circadian 운전 리듬에서 본 주요 임시 기능을 계량 하는 방법을 제시 합니다. 정량화 피팅 멀티 파라메트릭 모델 파형으로 비행 활동 함으로써 이루어집니다. 모델 매개 변수 형태와 아침의 크기와 일상 활동의 저녁 봉우리를 설명합니다.

비행 Circadian 활동 척도를 계산 방법

회전 운동 정량화 시스템 (REQS) 초파리 melanogaster 동물에 의해 수행 활동의 금액을 동시에 측정 하는 동안 회전 운동을 유도할 수 있다. 여기, 선물이 회전 운동 치료는 REQS.를 사용 하 여 발생 하는 동물의 활동 수준을 측정 하는 방법을 자세히 설명 하 여 포인트...

초파리 melanogaster 회전 운동 정량화 시스템 (REQS)를 사용 하 여 운동 수준 측정

현재 프로토콜은 속도, 거리 등의 매개변수를 계산하기 위해 고화질 비디오 녹화를 기반으로 각 프레임의 픽셀을 분할하는 플러그인과 호환되는 오픈 소스 소프트웨어 피지를 사용하여 손으로 만든 경기장에서 파리의 움직임을 추적 및 분석하여 초파리 의 운동 활동을 평가합니다.

초파리에서 운동 활동을 분석하는 간단한 기술

이 보고서는 인큐베이터 챔버 내의 공기 전도 열 스트레스 요인에 대한 응답으로 DAM2(Drosophila Activity Monitor)를 사용하여 성체 Drosophila melanogaster 녹다운 시간을 측정하는 방법을 설명합니다. DAM2는 적외선 빔을 가로지르는 개별 파리의 움직임을 기록하여 활동을 측정합니다. 데이터 분석은 저자가 만든 새로운 실행 파일에 의해 촉진됩니다.

Drosophila Activity Monitor 시스템을 사용한 열 내성 분석: 데이터 분석을 위한 실행 가능한 응용 프로그램 가이드

이 프로토콜은 Drosophila melanogaster에서 스트레스로 인한 행동 변화를 평가하는 틀을 제공합니다. 상호 보완적인 분석법을 결합하면 개별 파리의 활동, 탐구, 의사결정 능력을 정량화할 수 있습니다. 이 접근법은 유연하며 스트레스 생물학, 대사, 신경행동 기능을 조사하는 다양한 연구에 적용할 수 있습니다.

초파리 멜라노가스터에서 스트레스 유발 우울과 유사 상태의 다중 행동 표현형 분석

배우세요 TriKinetics Drosophila Activity Monitor를 활용한 Drosophila 애벌레 활동 측정 방법입니다. 적외선 빔으로 최대 16마리 개별 동물의 움직임을 감지하여 활동률과 위치를 자동 분석합니다.

에서 애벌레 활동의 측정

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