Name: 신생아 쥐의 심근 경색, 심장 재생의 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: 배우세요 신생아 쥐에서 심근 경색을 유도하는 외과적 방법을 통해 심장 재생 메커니즘을 연구하세요. 좌전하행 관동맥(LAD)을 시각화하여 결찰하는 이 기법은 심장 기능 평가와 재생 과정 분석에 필수적인 모델을 제공합니다.

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이 연구는 캐나다 보건 연구소(CIHR)에서 Q.F.(보조금 #MOP-119600)에 대한 운영 보조금의 지원을 받았습니다.

C57BL / 6, CD-1 IG-S 쥐의 번식 쌍은 찰스 강에서 구입 하였다. 본 연구에 사용 된 동물은 동물 관리에있는 캐나다 협의회의 지침에 따라 처리하고, 연구 프로토콜 웨스턴 대학, 런던, 캐나다에서 동물 사용 분과위원회에 의해 승인되었다. 1. 동물 관리 <ol><li> 출산이 완료되고 새끼가 처음 모유 공급 몇 시간 동안 자신의 어머니가되었습니다 후, CD-1 수양 어머니와 함께 다른 케이지에 배치합니다. CD-1의 어머니는 강한 육성 본능을 가진 조용한 표현형을 표시하고 부상당한 새끼 (15)를 잠식하는 낮은 경향이있다. </li></ol> 2. 수술 <ol><li> 밀폐 된 이소 플루 란 챔버에 강아지를 배치하여 마취를 유도 (약 100 % V / V의 이소 플루 란의 500 μL는 3cm 1,300 실을 발산 할 수). 이동 (약 30 초) 중단 될 때까지 실에서 마우스를 유지합니다. </li><li> 미주리 제거이소 플루 란 챔버에서 사용하고 젖은 얼음에 마우스를 배치하여 저체온 마취를 유도한다. 동상을 방지하기 위해, 멸균 수술 장갑 내부에 얼음을 배치 장갑 내에서 마우스를 싸서 얼음 장갑을 포함 또는 멸균 젖은 거즈에 마우스를 포장하고 얼음에 놓습니다. 주 : 마우스는 얼음과 접촉 큰 표면적 상에있을 때 더 빠른 냉각과 같은 녹은 얼음으로 저체온 유도 시간을 단축 할 수있다. </li><li> 발가락과 꼬리 핀치에 운동 응답의 부족으로 마취를 확인합니다. 참고 : 자극 운동 중단은 15 ° C, 8 ° C 사이의 체온에서 발생한다. (이 온도 약 1 분 시간을 냉각). 전체 무호흡증과 심장 무 수축은 LAD 결찰 필요하지 않습니다. </li><li> 운영 현미경을 갖춘 외과 영역에 얼음 침대를 이동합니다. 마우스 강아지가 전체 수술하는 동안 얼음에 남아 있는지 확인합니다. 참고 : 외과 영역, 거즈 및 수술 도구를 소독해야한다. 터 유지 보수절차 전반에 걸쳐 무균 필드 및에 하나의 사용, 무균 수술 장갑을 착용하십시오. 그들의 눈 (17) 폐쇄와 마우스가 태어나으로 안과 연고가 필요하지 않습니다. </li><li> 오른쪽 측면 욕창 위치에 마우스 강아지를 놓습니다. 부드럽게 에탄올 면봉 다음에 포비돈 - 요오드 용액으로 닦아 가슴을 소독. </li><li> 왼쪽 앞다리 아래 xyphoid과 왼쪽 겨드랑이 사이에 몇 밀리미터 피부를 절단하여 중간 액와 선을 따라 왼쪽 가슴에 피부 절개를 수행합니다. 또한 기본 가슴 근육 층을 잘라 가위를 사용합니다. </li><li> 집게로 갈비와 늑간 근육을 분리하여 4 번째 늑간 공간에서 좌측 개흉술을 수행합니다. 주 : 신생아 갈비뼈가 매우 연약하고 쉽게 나눌 수 있습니다. 늑간 근육을 따라 집게를 열고 (가 아닌 갈비뼈를 파악)하여, 부드럽게 별도의 갈비뼈를 방지합니다. </li><li> 왼쪽의 AUR에서 신흥 왼쪽 전방 관상 동맥 (LAD)를 내림차순를 시각화폐 정맥 뒤에 icle과 큰 심장 혈관 이상으로 내림차순. 참고 :이 초기 신생아 창에서 흉선은 종종 가시화되고 심장베이스의 일부를 커버 할 수있다. 젊은이는 흉부 절개 각도에 따라, 흉선의 위치 옆에 부상을 알 수있다. </li><li> 왼쪽 귓바퀴 (그림 1C) 아래의 중간 뇌실을 통해 동맥 아래 11-0 나일론 봉합사 (0.007 mm 직경의 바늘)을 전달하여 LAD을 결찰. 허혈 봉합 부위 (도 1G) 아래의 심근 희게으로 확인된다. </li><li> 8-0 나일론 봉합사 (0.15 mm 직경의 바늘)를 사용하여 흉부 절개를 닫습니다. 갈비뼈를 닫 두 봉합을 사용합니다. 체강 통과 할 때 폐 천공하지 않는 바늘을 확인하기 전에 두 리브 결찰 봉합사를 놓는다. </li><li> 리브을 닫은 후, 얼음 침대에서 마우스를 제거합니다. 외과 영역 내에서 마우스를 유지하고에 무균 수술에 직접 배치37 ° C에서 따뜻한 가열 패드를 통해 아 온난화를 시작합니다. </li><li> 일단 가열 살균 영역, 8-0 나일론 봉합사 (0.15 mm 직경의 바늘)를 사용하여 근육 및 피부 층을 닫는다. 근육층에 대해 하나의 봉합사를 사용하여 피부를 절개 두 봉합사를 사용한다. 주 : 근육과 피부 층 저체온증 노광 시간을 단축하는 가열 패드를 폐쇄 할 수있다. 마우스 온도는 한 번 가열 패드에 배치 상승하기 시작하지만, 근육과 피부 폐쇄시 마취 유지를위한 충분한 충분히 낮은 남아있다. </li></ol> 3. 수술 복구 <ol><li> 자발적인 운동의 반환 될 때까지 따뜻한 가열 패드 빠른 온난화를 계속합니다. 이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오. 부드럽게 에탄올 면봉으로 부상 사이트를 닦아 포비돈 - 요오드 및 혈액을 제거합니다. </li><li> 마취에서 충분히 회복 한 후 위탁에서 침구를 얼룩, 무균 수술 영역에서 제거어머니의 케이지, 및 반환 강아지는 어머니를 육성합니다. 이것은 어머니의 거부 또는 잠식을 방지하는 데 도움이됩니다. 참고 : 완전히 회복 될 때까지 다른 동물과 케이지에 새끼를 반환하지 마십시오. 전체 쓰레기를 사용하고, 한배 새끼가 수양 어머니와 함께 유지되지 않은 경우, 쓰레기의 중간에 복구 새끼를 배치합니다. 하나 이상의 수술을 수행하는 경우, 완전한 자신의 수양 어머니로 쥐를 반환하기 전에 개별 쓰레기에 필요한 모든 수술. </li><li> 강아지의 수용을 보장하기 위해 3 시간 - 2 15 분 - 강아지를 향해 매 10을 수양 어머니의 행동을 관찰한다. 어머니가 부상당한 강아지를 향해 공격을 표시하는 경우, 강아지를 제거하고 이소 플루 란 과다 복용으로 안락사 (&gt; 5 %, 호흡 중단까지), 잘린 하였다. 참고 : 중앙 통증 반사가 완전히 초기 15 세에서 개발하지 않는 한 수술 전후 통증의 약물 치료는 필요하지 않습니다. </li></ol> 4. 측정 심근의 경색 크기 4 -6 시간 후 MI <ol><li> 6 시간 - 새끼 4의 기간 동안 CD-1 수양 어머니의 보호에 복구 할 수 있습니다. 어머니와 함께 케이지에서 강아지를 제거하고 큰 가위로 잘린 다음에 이소 플루 란 과다 복용하여 안락사. </li><li> 해부 현미경으로 마음을 절제, 조심하지 심근를 추출 할 수 있습니다. <ol><li> 흉부의 상단에 xyphoid 과정에서 피부를 잘라. 흉곽 아래 열기 복벽. 하부 흉곽을 잡고 겨드랑이에 다이어프램에서 왼쪽 중간 액와 선을 따라 길이 방향으로 갈비뼈와 근육을 잘라. </li><li> 가로 평면에서 가위를 잡고 오른쪽 왼쪽에서주의 깊게 다이어프램을 잘라. 정점에 대한 손상을 방지하기 위해 심장의 수준 이하로 가위를 배치해야합니다. </li><li> 흉곽을 잡고 오른쪽 중간 액와 선을 따라 오른쪽 갈비뼈의 측면과 근육을 잘라. 가위로 심장에 대한 모든 혈관 연결을 제거합니다. 잡고 흉강의 심장을 제거베이스. </li></ol></li><li> 제 수술 탄소 강철 면도날을 사용하여 세 가지로 마음. 봉합사 및 심장 정점 사이의 중간 점에서 마음의 짧은 축을 따라 첫 번째 컷을 확인합니다. 봉합사 (그림 3A)의 수준에서 두 번째 컷을 확인합니다. 참고 :이 0.0018 g 무게 약 0.75 mm 두께의 정점 부분을 잎; 0.0065 g의 무게는 약 1mm 두께의 중앙베이스 부; 그리고 마음의 기초. </li><li> 15 분 - 10 실온에서 1 % 2,3,5- 트리 페닐 클로라이드 (TTC)의 마음 섹션을 배치합니다. 조심스럽게 오버 얼룩을 방지하기 위해 표본을보세요. </li><li> 밤새 4 ° C에서 4 % 파라 포름 알데히드와 스테인드 심장 조각, 대비를 증가 해결하려면. %의 경색 지역, 사진 심장 부분을 계산 및 이미징 소프트웨어에 경색 면적을 측정합니다. 경색 영역을 백색 (18)으로 경계가되는 동안 생존 심근 레드 얼룩. </li></ol> 5. 측정심 초음파 후 MI에 의한 심장 기능 <ol><li> 48 시간 - 새끼가 (24)의 기간 동안 CD-1 수양 어머니의 보호에 복구 할 수 있습니다. 이소 플루 란 밀폐 챔버 (5 % 이소 플루 란)에서 강아지를 배치하여 마취를 유도한다. 이동 (약 30 초) 중단 될 때까지 실에서 마우스를 유지합니다. </li><li> (마취 유지 보수) 1 % 이소 플루 란 - 0.5을 제공하는 콘에서 코와 가열 독 (온도 37 °에 C)에 앙와위에서 강아지를 고정합니다. 왼쪽 가슴 부위에 미리 예열 에코 젤을 배치합니다. </li><li> 좌심실 (LV)의 흉골 긴 축보기를 얻습니다. 확인 이미지는 LV의 봉합사의 수준 이하로 얻어진다. 위치를 획득 한 후, 초음파 프로브 (40 MHz의) 90 °가 흉골 짧은 축보기를 얻기 위해, 기록 M 모드 심 초음파 이미지를 켭니다. </li><li> 끝 확장기를 측정하고 짧은 축 M 모드 이미지에서 수축기 좌심실 내경을 종료. 구혈률과 fractio을 계산최종 단축. </li></ol> 6. 측정 심근의 경색 크기 24 시간 후 MI <ol><li> 새끼는 24 시간의 기간 동안 CD-1 수양 어머니의 보호에 복구 할 수 있습니다. 어머니와 함께 케이지에서 강아지를 제거하고 큰 가위로 잘린 다음에 이소 플루 란 과다 복용하여 안락사. </li><li> 단계 4.2에서와 같이 흉강을 엽니 다. 심장을 절개하기 전에 신중하게 잘 집게로 다이어프램 위의 흉부 대동맥을 파악. 흉부 벽에 평면 관상면에서 미세 가위를 잡고 두개골 방향으로 가위를 움직이는 후방 흉부 벽 떨어져 흉부 대동맥을 잘라. </li><li> 이 심장에 도달 할 때까지 흉부 벽과 다른 연결에서 무료로 대동맥을 잘라. 우수한 대정 맥을 잡고 몸에 다른 모든 혈관 연결을 절단하여 마음을 절제. </li><li> 식염수에서 (첨부 대동맥과) 마음을 씻어. 조심스럽게 30 게이지 바늘과 흉부​​ 대동맥을 cannulate와 넥타이오르타는 8-0 나일론 봉합사 스레드와 캐 뉼러합니다. </li><li> 1 ㎖ / 분의 속도로 30 게이지 바늘을 통해 대동맥을 통해 생리 식염수 1 ㎖로 심장을 관류. / 분 1 ML의 속도로 2 % 에반스 블루 용액 150 μL와 마음을 관류. 세 조각으로 부, 정맥에서 그것을 마음을 제거하고 4 절에 설명 된대로 TTC으로 얼룩. </li><li> 경색 크기, 사진의 심장 부분을 계산 및 이미징 소프트웨어에 경색 면적을 측정합니다. 생존 심근 위험 얼룩의 면적이 적색, 청색 얼룩 및 경색 부분은 백색의 경계가된다. </li></ol>

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여기에 보여 수술 LAD 결찰 신생아 쥐에서 MI를 생산하는 신뢰할 수있는 방법이다. 이 모델은 포유류의 심장 재생을 연구하는있는 재현 모델과 연구자를 제공합니다. 관상 혈관의 시각화는 정확한 봉합 배치를 보장하고, 따라서 재현성을 보장하는이 방법의 핵심 구성 요소입니다. 성인 쥐 poikilothermic 기능을 갖고 있지 않지만, 체온 신생아 마우스 대사율 밀접 주위 온도와 관련된다. 또한, 신생아 쥐의 작은 크기는 표면 냉각에 의한 저체온 유도에 이상적이다. 수술 마우스 체온의 타이밍은이 절차를 복제 정확성에 매우 중요하며, 따라서주의 깊게 모니터링되어야한다. 결찰은 가능한 한 빨리 무기력에 도달 한 후 수술 성공을 확인, 심근 후 결찰의 창백 시각화 할 수있는 기회를 제공합니다. 무있다MI 유도을 확인하는 데 사용할 수 있습니다 ltiple 방법. 다음은 TTC 염색, 심장 초음파 검사 및 조직 학적 분석을 포함한다. TTC 염색, 재현성 및 신뢰성, 쉽게 높은 처리량...

심근 경색 (MI)는 전 세계적으로 사망의 주요 원인이며, 심부전 케이스 (1)의 약 1/3을 담당 남아있다. 경피적 중재 및 혈전 용해제의 사용의 지속적인 최적화의 출현은 MI, 심근 사망과 심근 수축성 손실 다음 재관류 증가되었지만, 그럼에도 불구하고 일어난다. 또한 후보자하지 않거나이 개입에서 혜택을 볼 수 없습니다 &quot;노 옵션&quot;환자의 다수가 남아있다. 이 환자들은 경색 치료의 메커니즘으로 형성과 해로운 심실 리모델링 흉터로 이어지는 사용하지 허혈가 계속 발생. 이러한 과정은 결국 예후가 안지오텐신 전환 효소 (ACE) 억제제 및 베타 차단제와 최적의 약물에도 불구하고 여전히 좋지 관리되는 심부전을 초래한다. 불행하게도, 심각하게 손상 좌심실 기능을 가진 환자의 1 년 사망률은 여전히​​ 남아있다26 %이 높은. 심장 이식은 심부전 환자의 최종 치료 옵션입니다. 그러나, 심장 이식에 대한 제한 기증자 풀이 대부분의 환자에 대한 실행 가능한 옵션하지 않습니다. 따라서, 심근 손상을 복구하는 신규 치료제의 발견은 심장 질환의 문제를 해결하는 가장 중요한 남아있다. 심장 손상의 신뢰할 수있는 동물 모델 따라서이 과정의 중요한 구성 요소로 필요합니다. 전통적인 교리는 성인 심근 세포가 분할 또는 손상된 심근 3를 대체하는 탈 분화 능력이 후 유사 분열, 말기 차별화 된 세포 것을 지시했다. 따라서, 성인 포유류의 심장은 완전히 부상에서 회복하지 수, 손실 심근는 섬유 조직으로 대체 될 것이다. 따라서, 연구가 경색 팽창을 최소화하고 흉터 형성을 감소시키기 위해 주로 치료제에 집중하고있다. 보다 최근에는 다소 패러다임 변화가 발생한심장 치유와 많은 연구 노력을 둘러싸는 생각에 심장 재생 4의 가능성에 초점을 리디렉션되었습니다. 최근까지, 심장 중생의 생체 내 연구는 이러한 urodele 양서류 및 경골 어류 5-7에서와 비 척추 동물 모델에 제한되었다. 그러나, 신생 마우스의 심장 재생을위한 능력의 발견은 포유류 심장 수술 재생 두 모델의 개발을 주도하고있다 : 정점 심장 관상 동맥 폐쇄의 절제 심근 경색 8,9 유도. 2011 년, 마우스 정점 절제 모델은 전체 심장 재생이 출생 후 하루 1 (P1)에서 가능하다 보여주기 위해 사용되었다. 그러나, 이러한 용량은 빠르게 초기 신생아 기 이후 감소. 포유 동물의 심장이 곧 전구 세포 수의 감소로 P7에서 출생 후 자사의 회생 가능성을 상실하고, 이핵 될 심근 잃을그들의 증식 능력, 영구적는 세포주기 10, 11을 종료합니다. 신생아 및 성인 포유류의 심장 사이의 근본적인 차이를 이해하는 것은 심장 재생에 대한 새로운 통찰력으로 이어질 수 있습니다. 정점 절제술이 실제로 수축 조직의 재 성장에 대한 통찰력을 제공하지만,이 모델은 치료제의 개발뿐만 아니라 적합하지 않습니다 따라서 일반적인 인간의 심장 부상을 시뮬레이션하지 않습니다. 관상 동맥 폐쇄 모델은, 그러나, 더 직접적으로 인간의 사용을위한 치료 발전에 적용 할 수있다 메커니즘에 더 유용한 통찰력을 제공 할 수있다, 따라서 MI 병리의 병태 생리 학적 측면을 시뮬레이션합니다. 사지 동맥 결찰 많은 동물 모델에서 12-14 유용한 실험적 기술로서 사용되어왔다. 성인 관상 동맥 결찰 모델에서, 동물을 마취 respirati 유지하면서 흉강의 개방을 허용하도록되어 삽관에. 심장은 관상 혈관의 시각화를 허용하고 정확한 봉합 배치를 허용, 정기적으로 이길하고 있습니다. 또한 관류가 계속 심장 분홍색을 유지하고 결찰 후 허혈성 심근 성공적인 관상 동맥 결찰을 나타내는, 창백한 나타납니다. 관상 동맥이 가시화되지 않고 외과 봉합사 (15)를 배치하는 위치를 추정해야하므로 신생아 쥐에 대해 기재된 프로토콜은 그러나, 덜 신뢰할 수있다. 관상 혈관의 일반적인 해부학 방향에있어서 동일한 개별 동물 가변성이며 LAD의 분기 (16)이 존재하더라도. &quot;블라인드 것&quot;때 따라서, 동맥 쉽게 놓칠 수 있습니다. 심장 초음파 등과 같은 다른 기술이어서, MI의 성공적인 도입을 확인하고, 모든 수술 유사한 경​​색 크기 될 수 있도록 요구된다. 개선은 LAD의 위치가 맛 음료 할 수있는 최근에 출판 된 방법 (15), 여기에 있습니다 설명졌으 따라서 LAD가 재현 MI를 유도하기 위해 결찰 할 수있다. 이 기술은 폐 붕괴가 발생하지 않는 신생아 마우스의 저체온 상태에서 개흉술과 같은 기관 내 삽관 또는 기계 환기를 필요로하지 않습니다. 그러나, 전술 한 방법에서, 심한 저체온증 완전한 무호흡 및 심장 리듬 (15)의 중단 두 지점으로 유도한다. 이 방법의 중요한 한계는 관상 동맥 관류 더이상 것이없고 심장도 LAD 결찰 전 담색 나타난다. 여기에 기술 된 방법에서는 관상 동맥의 시각화는 수술 후 신생아 마우스의 전체 복구 깊은 체온과 심장 박동 정지, 이전에 무기력의 지점에서 가능하다. 이 방법은 100 % 재현성의 중요한 이점을 제공한다.

<table><tbody><tr><td>8-0 나일론 봉합</td>사 <td>미세 수술 기구</td><td>8-0 나일론</td><td></td></tr><tr><td>11-0 나일론 봉합</td>사 <td>Shanghai Pudong Medical Products Co Ltd</td><td>H1101</td><td></td></tr><tr><td>미세 가위</td><td>정밀 과학 도구</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>소형 집게</td><td>미세 과학 도구</td><td>11063-07</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 바늘 홀더</td><td>미세 과학 도구</td><td>12060-02</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Opmi 6s/S3 현미경</td><td>Zeiss</td><td>300002</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter</td><td>CA2L9100</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane 챔버</td><td>Feng 실험실</td><td></td><td></td></tr><tr><td>비드 살균기</td><td>정밀 과학 도구</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-트리페닐테트라올륨 클로라이드(TTC)</td><td>시그마</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>실체현미경 SteREO 발견. V8</td><td>Zeiss</td><td>435400</td><td></td></tr><tr><td>AxioVision 8.0</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Axiocam Icc5</td><td>Zeiss</td><td>426554</td><td></td></tr><tr><td>열 패드</td><td>태양 광선&nbsp;</td><td>731A0-CN</td><td></td></tr><tr><td>멸균 장갑</td><td>VWR</td><td>414004-430</td><td></td></tr><tr><td>거즈 스폰지</td><td>Ducare</td><td>90212</td><td></td></tr><tr><td>얼음</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>초음파 이미징 시스템, Vevo2100</td><td>Visual Sonics</td><td>VEVO2100</td><td></td></tr><tr><td>초음파 변환기, 40MHz</td><td>Visual Sonics</td><td>MS400</td><td></td></tr></tbody></table>

신생아 쥐의 심근 경색, 심장 재생의 모델

Myocardial Infarction in Neonatal Mice, A Model of Cardiac Regeneration

관상 동맥 결찰에 의해 유도 된 심근 경색 심장 수선과 재생의 기전을 연구하고 치료제에 대한 새로운 타겟을 정의하는 수단으로 여러 동물 모델에서 이용되고있다. 수십 년 동안, 전체 심장 재생의 모델은 양서류와 물고기에 존재하지만, 포유 동물 상대는 사용할 수 없습니다. 마우스는 재생 기능을 가지고있는 동안 윈도우 생후 최근 발견은 심장 재생의 포유 동물 모델의 확립하게되었다. 신생아 마우스에서 포유류의 심장 재생의 수술 모델이 여기에 표시됩니다. 간단히, 출생 후 하루 1 (P1) 마우스는 이소 플루 란으로 마취 및 저체온증을 유도하는 얼음 패드에 배치됩니다. 흉부가 개방되어, 관상 동맥 (LAD)를 좌전 하행이 가시화되면, 봉합은 좌심실의 심근 허혈을 가하기 위해 LAD 주위에 배치된다. 수술은 10 ~ 15 분 소요됩니다. 관상 동맥된다 시각화정확한 봉합 배치 및 재현성이 매우 중요. 심근 경색 및 심장 기능 부전은 각각 트리 페닐 테트라 졸륨 클로라이드 (TTC) 염색 및 심장 초음파에 의해 확인된다. 전체 재생 이십일일 후 심근 경색은 조직 학적으로 확인됩니다. 이 프로토콜은 심근 경색 후 포유류 심장 재생 메커니즘을 규명하는 도구로 이용 될 수있다.

P1에서의 심근 경색 절차는 10에서 완료 할 수 있습니다 - 15 분 7.8 % (5 (64)의 밖으로 새끼)의 사망률이 있습니다. 수술 후, 마우스는 향후 5 내에서 저체온 마취에서 회복 - 20 분 (복구 시간은 체온 외과 의사의 마취 및 속도 동안 도달에 따라 다름). (비 - 재생성 심근과 비교) P7 새끼를 사용하는 경우, 냉각의 장기간이 무기력에 도달 할 필요가있다. P7 새끼는 훨씬 더 큰이며, 26.9 % (14 52 중 새끼)의 훨씬 더 높은 사망률의 결과로 심장 부상과 저체온증 모두 복구 많은 어려움이있다. 이전의 연구 결과는 19 일 (8 ° C ~ 15 ° C 사이)에 가까운 10 ° C에서 저체온...

이 프로토콜은 출생 후 1일차 마우스의 좌심실에서 심근경색의 외과적 유도에 의한 재현성이 높은 심장 재생 모델을 설명합니다. 이 방법은 저체온 마취 유도와 좌측 전방 하행 관상 동맥 결찰을 포함합니다.

Myocardial infarction induced by coronary artery ligation has been used in many animal models as a tool to study the mechanisms of cardiac repair and ...

이 수술 절차의 전반적인 목표는 신생아 마우스에서 심근 경색을 재현 가능하게 유도하는 것입니다. 이 방법은 신생아의 재생을 지원하는 메커니즘이 무엇인지, 심근경색 후 성인 심장 재생이 어떻게 촉진될 수 있는지와 같은 심장 재생의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 좌측 전방 하행 관상동맥(LAD)을 시각화하여 신생아 마우스 심장에서 재현성이 높은 LAD 결찰을 보장할 수 있다는 것입니다.LAD 결찰술 후 심장 기능의 변화는 심장 초음파로 평가할 수 있습니다. 절차를 시작하기 전에 마취된 강아지를 작동 현미경 아래 얼음 위에 오른쪽 측면 욕창 위치에 놓고 발가락과 꼬리 꼬집기에 대한 반응 부족으로 적절한 진정 수준을 확인합니다. 그런 다음 포비돈 요오드로 가슴을 부드럽게 소독한 다음 에탄올 면봉으로 소독합니다.그런 다음 한 쌍의 집게를 사용하여 xiphoid와 왼쪽 겨드랑이 사이의 피부를 조심스럽게 들어 올리고 왼쪽 앞다리 아래 몇 mm를 절개합니다.가위를 사용하여 밑에 있는 가슴 근육층을 잘라낸 다음 네 번째 늑간 공간의 근육과 갈비뼈를 따라 한 쌍의 집게를 열어 부드러운 흉곽 절제술을 수행합니다. 왼쪽 귀에서 나와 폐정맥 뒤의 왼쪽 귓바퀴에서 나와 대심장 정맥 너머로 내려가는 왼쪽 전방 하행 관상 동맥을 시각화합니다.관상동맥의 위치는 기술의 재현성에 매우 중요합니다. 동맥의 시각화를 보장하기 위해 시술 중에 마우스 체온을 섭씨 8도에서 15도 사이로 유지하십시오. 그런 다음 007mL 직경의 바늘을 사용하여 왼쪽 귓바퀴 아래의 중심실을 통해 동맥 아래의 11-0 나일론 봉합사를 통과시키고 동맥을 결찰합니다.허혈은 봉합사 부위 아래의 심근이 희어지는 것으로 확인됩니다. 다음으로 직경 0.15 mL의 바늘을 사용하여 8-0 2 개의 바늘을 놓습니다. 나일론 리브 봉합사는 두 봉합사가 폐와 같은 내부 장기에 손상이 없도록 배치되도록 묶지 않습니다. 그런 다음 갈비뼈 봉합사를 묶어 흉부 절개 부위를 봉합하고 섭씨 37도의 발열 패드 위에 멸균 수술 수건으로 마우스를 옮깁니다.근육과 피부를 더 8-0으로 닫는다 나일론 봉합사. 그런 다음 에탄올 면봉을 사용하여 포비돈 요오드와 혈액을 부드럽게 제거합니다. 동물이 마취에서 완전히 회복되면 위탁 어머니의 우리에서 침구로 닦아 모성 거부 및 식인 가능성을 줄이고 강아지를 위탁 어머니에게 돌려줍니다.위탁 어미가 강아지를 향한 행동을 10-1

myocardial-infarction-in-neonatal-mice-a-model-of-cardiac-regeneration

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 연구에서는 정점 절제술의 단계별 비디오 프로토콜이 입증되었습니다. 정점 절제술은 포유류 심장 재생 연구에서 최근 주목받고 있는 수술 방식입니다. 이 연구는 심장 재생의 기저에 있는 메커니즘에 대한 연구에서 정점 절제술의 표준 방법론으로 적용을 촉진할 수 있습니다.

치근단 절제술 마우스 모델은 초기 포유류의 심장 재생을 연구하는

이 연구에서 우리는 재생 연구에 사용되는 소설, 신생아, 쥐의 심장 발판을위한 방법론을 제공합니다.

신생아 심장 공사장 공중 발판 : 회생 연구 소설 행렬

이 문서는 마우스에서 심근 극저온 손상 후 심장 리모델링을 연구하는 모델을 보여줍니다.

마우스에서 심근 경색을 연구하는 극저온 손상 모델

상해 다음 심근 세포 증식은 비 근세포 세포 집단에서 세포 외 단서의 교향곡을 요구하는 동적 프로세스입니다. 계보 추적, 수동 선명도 및 3차원 전체 마운트 공초점 현미경 기술을 활용하여 다양한 세포 유형이 심장 수리 및 재생에 미치는 영향을 분석할 수 있습니다.

클리어 심장 3 차원 이미징을 통해 표적 세포 집단의 심장 손상 반응을 캡처

이 프로토콜은 심부전 모델링하는 경질 마우스의 에피카듐에 3D 생체 인쇄 패치를 이식하는 것을 목표로합니다. 그것은 마취에 관한 세부 사항을 포함, 수술 가슴 개폐, 왼쪽 전방 내림차순 (LAD) 관상 동맥의 영구 결찰 및 심장의 경각진 영역에 생체 인쇄 패치의 적용.

심근 경색의 뮤린 모델에서 3D 생체 인쇄 패치의 이식

우리는 신생아 심장 대식세포 분리 및 이식을 위한 프로토콜을 성인 마우스 심혼으로, 심장 수리를 승진시키는 유망한 방법이 될 수 있었습니다.

신생아 마우스 심장 대식세포를 성인 마우스로 이식

적절한 마취 하에 쥐의 심장은 늑간 공간을 통해 외부화되었고, 대부분의 실험실에서 쉽게 구할 수 있는 재료를 사용하여 좌측 전방 하행 동맥(LAD)을 결찰하여 심근경색을 성공적으로 유도했습니다.

생쥐의 심근경색 유도를 위한 수정된 간단한 방법

여기서는 미세 조작을 통해 좌측 전방 하행 관상동맥의 정밀 결찰에 의해 마우스에서 심근경색 또는 심근 허혈 재관류 손상을 유도할 수 있는 간단하고 재현 가능한 방법을 설명합니다.

마우스의 심근경색 및 심근 허혈-재관류 손상 유도

본 프로토콜은 생체외 신생아 뮤린 심장의 대동맥 캐뉼레이션 및 역행 관류를 기술한다.  해부 현미경과 무딘 작은 게이지 바늘을 사용하는 두 사람 전략은 신뢰할 수있는 통조림을 허용합니다. 종방향 수축 장력의 정량화는 좌심실의 정점에 연결된 힘 변환기를 사용하여 달성된다.

Langendorff 준비에서 신생아 뮤린 하트의 사용을위한 수정 된 기술

급성 심근 경색 (AMI)의 쥐 모델은 심장 pathophysiological 및 생리 기능에 MI의 결과를 연구하는 데 유용합니다.

고양이에서 급성 심근 경색

배우세요 신생아 쥐에서 심근 경색을 유도하는 외과적 방법을 통해 심장 재생 메커니즘을 연구하세요. 좌전하행 관동맥(LAD)을 시각화하여 결찰하는 이 기법은 심장 기능 평가와 재생 과정 분석에 필수적인 모델을 제공합니다.

신생아 쥐의 심근 경색, 심장 재생의 모델

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