Name: Un In vitro Orgue Culture Modèle de la murine disque intervertébral (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Découvrez une méthode de culture d'organes entiers de disques intervertébraux murins préservant leur matrice extracellulaire native. Cette technique permet d'observer les réponses inflammatoires et facilite la recherche sur la dégénérescence discale.

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Ce travail a été soutenu par le (AR057235 P30 NIH) Centre de recherche musculo-squelettique Washington University, Centre d&#39;imagerie moléculaire (NIH P50 CA094056), mécanobiologie subvention de formation (NIH 5T32EB018266), NIH R21AR069804 et NIH K01AR069116. Les auteurs tiennent à remercier Patrick Wong pour sa contribution à la collecte des données.

Toutes les expériences animales ont été réalisées conformément à l&#39;Université de Washington à St. Louis Comité des études animales. 1. Animaux <ol><li> Obtenir deux souches de souris: vieux BALB / c (n = 6, BALB-M, BALB / cAnNTac) et 10 semaines vieux animaux rapporteurs kappa-B-luciférase facteur nucléaire (NF-κβ-luc) à 10 semaines élevé dans une fond BALB / c (n = 6, BALB / c-Tg (Rel-luc) 31Xen). </li><li> Avant la dissection, euthanasie les animaux avec une surdose de CO 2 à un débit de 2,5 à 3 L / min pendant 5 min suivie d&#39;un supplément de 2 min de temps de séjour. </li><li> Désinfecter la région à l&#39;extérieur de l&#39;animal par le baignant dans un bain d&#39;éthanol à 70% pendant 2 min avant la dissection. </li></ol> 2. Dissection <ol><li> Faire une coupe verticale longitudinale sur la surface dorsale de la souris à l&#39;aide de ciseaux de dissection petites afin d&#39;exposer la cavité du corps. </li><li> Faites deux coupes longitudinales verticales de chaque côté de la colonne vertébrale de l&#39;animal à partir dela première vertèbre lombaire (L1) pour les vertèbres caudales (C8). </li><li> L&#39;utilisation d&#39;un scalpel, une pince fine, et des ciseaux de dissection fines, retirez délicatement la colonne vertébrale de L1-C8 de la cavité du corps de l&#39;animal. </li><li> Retirez délicatement les tissus mous qui entourent l&#39;excès de la colonne vertébrale, tout en veillant à ne pas gratter ou blesser l&#39;IVD sur la face ventrale. </li><li> En outre disséquer la colonne vertébrale dans les unités fonctionnelles de la colonne vertébrale des vertèbres-disque vertèbres (FSU) à L1 / L2, L3 / L4, L5 / L6, C3 / C4, C5 / C6, et les disques C7 / C8. </li><li> Rincer le FSU dans une solution saline équilibrée de Hank additionné de 1% de pénicilline-streptomycine pendant 2 min. </li><li> Attribuer au hasard les FSU en trois groupes: non cultivé et non traité FSU (frais), mais en culture non traitée FSU (témoin), et cultivées et traitées stab FSU (Stab). </li><li> Aligner congeler les échantillons frais FSU avec de l&#39;azote liquide immédiatement après la dissection et stocker dans un congélateur à -20 ° C. </li></ol> 3. Conditions d&#39;organes Culture<ol><li> Préparer 500 ml de milieu de culture stérile de 1: 1 modifiée du milieu de Eagle de Dulbecco: mélange nutritif F12 (DMEM: F12) complété avec 20% de sérum de fœtus bovin (FBS) et 1% de pénicilline-streptomycine. </li><li> En utilisant 10 ml de pipettes sérologiques, la pipette 2 ml de milieu de culture dans chaque puits d&#39;une plaque de culture 24 puits. </li><li> À la suite de dissection et de rinçage, placer chaque FSU dans un puits individuel rempli dans le support de plaque à 24 puits. </li><li> Incuber les échantillons dans un incubateur stérile qui maintient à 37 ° C, 5% CO 2, 20% de O 2 et&gt; 90% d&#39; humidité. </li><li> Après une période de culture initiale de 24 h, les échantillons blesser mécaniquement groupe Stab par ponction à l&#39;aiguille de l&#39;anneau fibreux en utilisant une aiguille de calibre 27 stérile comme représenté sur la figure 1A. </li><li> Changer les médias toutes les 48 h en préparant une nouvelle plaque de culture 24 puits rempli médias, et des échantillons de transfert de l&#39;ancienne plaque à la nouvelle aide de pinces stériles. Aspirer les anciens médias et dispose de la vieille plaque de culture dans un bac à déchets biologiques dangereux. </li><li> Le dernier jour de culture, incuber les échantillons dans un milieu contenant 0,75 mg / ml de chlorure de nitro bleu de tétrazolium pendant 24 h. </li><li> Ensuite, geler tous les FSU à l&#39; azote liquide et stocker dans un congélateur à -20 ° C jusqu&#39;au moment de l&#39; essai mécanique ou histologie (figure 1B). </li></ol> 4. Mesures longitudinales NF-kB <ol><li> Image de la FSU des animaux NF-κβ-luciférase à 1, 5, 13, et 19 jours pour évaluer l&#39;expression NF-kB. </li><li> Ajouter 10 pi de 1 mg / ml de solution de luciférine à chaque puits et incuber dans un incubateur stérile à 37 ° C pendant 10 min. </li><li> L&#39;image des échantillons de bioluminescence à l&#39;aide du système de formation d&#39;image avec un temps d&#39;exposition de 1 minute et de réglage du bac 2. </li><li> En même temps, utiliser la machine pour prendre une photo et la superposition avec l&#39;image de bioluminescence pour déterminer la localisation anatomique de la luminescence dans le IVD. </li></ol><pclass = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. évaluation mécanique <ol><li> Déterminer le comportement mécanique des DIV en utilisant la compression dynamique contrôlée déplacement-9. </li><li> En utilisant un microscope de dissection, scalpel et des pinces, retirer les corps vertébraux osseux du FSU de chaque échantillon, tout en maintenant les plaques d&#39;extrémité cartilagineuses intact et fixé au IVD. </li><li> Attacher les DIV isolées à 1 cm x 1 cm x 0,2 cm plaque d&#39;aluminium avec de la colle cyanoacrylate. </li><li> Mesurer la hauteur du disque et la largeur en prenant une moyenne de trois mesures sur l&#39;axe longitudinal de chaque disque à l&#39;aide d&#39;un micromètre à laser. Calculer le rapport de la hauteur du disque en divisant la hauteur moyenne du disque par la largeur maximale du disque. </li><li> Utilisez la hauteur du disque mesuré pour calculer les valeurs de contrainte d&#39;entrée utilisées dans les essais mécaniques. Notez que la hauteur du disque moyen était d&#39;environ 690 um ± 39 um. </li><li> Placer les échantillons dans un bain de solution saline tamponnée au phosphate sous la Compressisur la machine et précharger le disque à 0,02 N. </li><li> Cycliquement comprimer le disque en utilisant une forme d&#39;onde sinusoïdale à 1 Hz pendant 20 cycles au niveau de déformation de 1% et 5% du niveau de contrainte pour chacun des essais 3 et enregistrer les valeurs de charge et de déplacement de l&#39;IVD. Attendez 10 min de temps de repos entre les essais pour le disque pour se détendre et éviter les blessures. </li><li> Calculer la raideur moyenne de la phase de chargement du dernier cycle, et le calcul de la tangente de perte à partir de l&#39;angle de phase entre les données de charge et de déplacement. </li></ol> 6. protéoglycanes et du collagène Quantification <ol><li> Suite à des essais mécaniques, mesurer le poids humide du disque en plaçant le IVD isolé dans un tube de centrifugeuse de pré-taré et en mesurant le poids en utilisant une balance analytique. </li><li> Digérer les DIV isolés dans 250 ul d&#39;une solution de digestion de papaïne (0,1 M d&#39;acétate de sodium, 0,01 M d&#39;EDTA, 0,005 M HCl cysteine, pH 6,4) pendant une nuit à 65 ° C en utilisant un chauffe-bloc. </li><li> Centrifuger les échantillons pendant 10 minà 2000 xg et recueillir le liquide surnageant. </li><li> Mesurer la teneur en protéoglycanes du IVD en utilisant le dosage au bleu de diméthylméthylène (DMMB) avec les normes de sulfate de chondroïtine. </li><li> Préparer la solution de DMMB (21 mg DMMB, 5 ml d&#39; éthanol absolu, 2 g de formiate de sodium dans 1 L ddH 2 O). </li><li> Pipeter 30 uL de standards et d&#39;échantillons en trois exemplaires dans une plaque à 96 puits, avec 250 ul de solution de DMMB dans chaque puits. </li><li> Lire l&#39;absorbance de la plaque à 525 nm à l&#39;aide d&#39;un spectrophotomètre. </li><li> Mesurer la teneur en collagène en utilisant un kit de dosage hydroxyproline selon les instructions du fabricant. </li></ol> 7. Histologie <ol><li> Fixer un sous-ensemble d&#39;échantillons dans 4% de paraformaldehyde pendant 24 h, de-calcifier à 5% d&#39;acide formique pendant 48 h, déshydrater avec de l&#39;éthanol, et incorporer dans de la paraffine. </li><li> En utilisant un microtome, les échantillons section sagittale à 10 um d&#39;épaisseur et d&#39;appliquer les sections de lames de verre. Colorer les sections à l&#39;aide safranine-O / Fast Green et DAPI. </li><li> L&#39;utilisation d&#39;un microscope optique, glisse image au grossissement 10X. </li></ol> 8. Contraste amélioré microtomographie positons (microtomographie) <ol><li> Balayer un sous - ensemble d&#39;échantillons aux 0, 2, 5, et des points de temps de 7 jours à l&#39; aide de contraste pour l&#39; amélioration Ioversol longitudinal 10, et le contraste d&#39;amélioration de l&#39; acide phosphomolybdique (PMA) borne au point de temps de 7 jours. </li><li> 4 h avant le temps de balayage microCT, ajouter 300 uL de 350 mg / ml de solution d&#39;iode Ioversol aux milieux de culture pour une concentration finale d&#39;environ 50 mg / ml solution Ioversol contenant de l&#39;iode et incuber dans un incubateur stérile à 37 ° C pendant 4 h. </li><li> Après l&#39;incubation, l&#39;échantillon envelopper dans une gaze stérile et on place dans un tube de microcentrifugation de 1 mL. </li><li> Placer les échantillons dans le système de microCT et numériser à 45 keVp, 177 uA, 10,5 um taille de voxel, et 300 ms intégration. </li><li> Exporter des données de la microtomographie sous forme de fichiers DICOM et visualiser à l&#39;aide du logiciel ( <em&gt; par exemple, OsiriX). </li><li> Au point de temps de 7 jours, fixer des échantillons en utilisant une solution de paraformaldéhyde 4% pendant 24 h, suivi de 5% solution de PMA pendant 3 jours et numériser en utilisant les mêmes paramètres que ceux utilisés à l&#39;étape 8.4. </li></ol> 9. Trois dimensions Modélisation par éléments finis <ol><li> Segmenter les fichiers DICOM des IVD en utilisant le logiciel avec seuillage manuel (par exemple, OsiriX). </li><li> Convertir les volumes NP et AF du IVD en mailles d&#39;éléments finis voxeliques utilisant Meshlab. </li><li> Combiner les microstructures du NP et AF pour former un IVD complet et appliquer des conditions aux limites déterminées expérimentalement dans le logiciel des éléments finis. </li></ol>

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</ol>

Les auteurs de ce manuscrit déclarent qu&#39;ils n&#39;ont pas d&#39;intérêts financiers concurrents.

Ce protocole décrit une culture d&#39;organes de l&#39;ex-URSS de souris en mettant l&#39;accent sur le suivi des changements biologiques dans le diagnostic in vitro. Le maintien de succès de ces cultures nécessite une étude minutieuse des techniques stériles. En particulier, la dissection étapes et 2/1 à 2/6 la culture étapes 03.01 à 03.06 ont besoin de soins spéciaux pour assurer des conditions de stérilité soient maintenues, et ces étapes doit être effectuée de préférence dans une sal...

La lombalgie (LBP) est le principal facteur d&#39;invalidité globale et la perte de productivité en milieu de travail, et les Américains dépensent à eux seuls plus de 50 milliards de dollars sur le traitement de la lombalgie 1. Bien que répandue, l&#39;étiologie de la lombalgie reste complexe et multifactorielle. Cependant, la dégénérescence des disques intervertébraux (IVD) est parmi les facteurs de risque les plus importants pour LBP 2. L&#39;IVD est composé de trois microstructures: l&#39;anneau fibreux extérieur (AF), le noyau pulpeux intérieur (NP), et deux plaques d&#39; extrémité cartilagineux qui prennent en sandwich l&#39;ensemble de la structure proximale et distale 3. Avec l&#39; âge et la dégénérescence, les composants IVD changent de structure, de composition et mécaniquement 4. Ces changements incluent la perte de protéoglycanes et de l&#39; hydratation de la NP, une diminution de la hauteur du disque, et détériorée compétence mécanique 5. Ces modifications sontsouvent accompagnée de cytokines qui favorisent une réponse inflammatoire, ainsi que neutrophile et intrusion ganglionnaires racine dorsale dans l&#39;espace articulaire aboutissant à une cascade d&#39;événements qui conduisent à des symptômes de lombalgie 6. L&#39;étude des mécanismes de la dégénérescence IVD est difficile chez les humains, car il est souvent impossible d&#39;isoler la cause de la dégénérescence avant l&#39;apparition de la lombalgie. Ainsi, une approche réductionniste de la simplification du système expérimental jusqu&#39;à l&#39;organe IVD permet peaufinage mécaniste des variables de cause à effet et d&#39; examiner leurs effets en aval 5. Le système est réduit à la seule population de cellules native et entourant la matrice extracellulaire, permettant ainsi l&#39;interprétation directe des effets des stimuli externes sur la dégénérescence IVD. De plus, le coût plus faible et l&#39; évolutivité des modèles murins, ainsi que le grand nombre d&#39;animaux génétiquement modifiés 7, permettent til rapide dépistage ciblé des mécanismes dégénératifs IVD et des thérapies potentielles. Ici, nous décrivons un système murin de culture d&#39;organe dans lequel IVD stabilité cellulaire et tissulaire est maintenue pendant 21 jours, avec une attention particulière accordée aux IVDS de motifs homéostatique, mécaniques, structurelles et inflammatoires. En utilisant cette méthode, nous surveillons les changements fonctionnels de IVDS dans un modèle de lésion induite par poignarder 8 à comprendre les mécanismes de la dégénérescence du disque. De plus, nous décrivons plusieurs applications de cette méthode de culture d&#39;organes pour mener d&#39;autres études, y compris l&#39;imagerie par microtomographie contraste amélioré et trois dimensions de modélisation à haute résolution de l&#39;IVD.

<table><tbody><tr><td>Plaque à 96 puits</td><td>Midwest Scientific</td><td>TP92096</td><td>Utilisée pour les tests biochimiques</td></tr><tr><td>Plaque à 24 puits</td><td>Midwest Scientific</td><td>TP92024</td><td>Utilisée pour la culture d’organes</td></tr><tr><td>Pipettes de 25 mL</td><td>Midwest Scientific</td><td>TP94024</td><td>Utilisée pour la culture d’organes</td></tr><tr><td>Pipettes de 10 mL</td><td>Midwest Scientific</td><td>TP94010</td><td>Utilisée pour la culture d’organes</td></tr><tr><td>Pipettes</td> <td>de 5 mLMidwest Scientific</td><td>TP94005</td><td>Utilisé pour la culture d’organes</td></tr><tr><td>Filtres à bouchon de bouteille de 500 ml, 22 & micro ; m</td><td>Midwest Scientific</td><td>TP99505</td><td>Utilisé pour les médias filtrants</td></tr><tr><td>10 & micro ; Pointes de pipette L</td><td>Midwest Scientific</td><td>NP89140098</td><td>Utilisé pour les tests biochimiques</td></tr><tr><td>200 & micro ; pointes de pipette L</td><td>Midwest Scientific</td><td>NP89140900</td><td>Utilisé pour les tests biochimiques</td></tr><tr><td>1 000 & micro ; Pointes de pipette L</td><td>Midwest Scientific</td><td>NP89140920</td><td>Utilisé pour les dosages biochimiques</td></tr><tr><td>DMEM/F-12</td><td>Invitrogen</td><td>11330032</td><td>Utilisé pour les milieux de culture</td></tr><tr><td>Optiray 350</td><td>Guebert</td><td>19133341</td><td>Utilisé pour le microCT avec contraste amélioré</td></tr><tr><td>Sérum de veau fœtal</td><td>Sigma</td><td>F2442</td><td>Utilisé pour les milieux de culture</td></tr><tr><td>Pénicilline Streptomycine&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>P4333</td><td>Utilisé pour les milieux de culture</td></tr><tr><td>Chlorure de bleu de tétrazolium</td><td>Sigma</td><td>T4375</td><td>Utilisé pour les essais biochimiques</td></tr><tr><td>D-Luciferin</td><td>Sigma</td><td>L6152</td><td>Utilisé pour l’imagerie par bioluminescence</td></tr><tr><td>Sulfate de chondroïtine</td><td>Sigma</td><td>C9819</td><td>Utilisé pour les essais biochimiques</td></tr> Solution <tr><td>d’acide phosphomolybdique à 10 %</td><td>Sigma</td><td>HT152</td><td>Utilisé pour le contraste microCT amélioré</td></tr><tr><td>Safranin O</td><td>Sigma</td><td>S8884</td><td>dilué à une concentration de 0,1 % (dans l’eau)</td></tr><tr><td>Fast Green FCF</td><td>Sigma</td><td>F7258.001</td><td> % de concentration</td></tr><tr><td>Papaïne à partir de latex de papaye</td><td>Sigma&nbsp ;</td><td>P3125</td><td>Utilisé pour les dosages biochimiques</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td>Coloration aux acides nucléiques</td></tr><tr><td>Colle cyanoacrylate</td><td>Loctite</td><td>234790</td><td>Adhésif&nbsp ;</td></tr><tr><td>Tubes de microcentrifugation de 1,5 mL</td><td>Fischer Scientific</td><td>S348903</td><td>Utilisé pour les dosages biochimiques</td></tr><tr><td>Big Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BioDent</td><td>ActiveLife</td><td></td><td>Pour les essais mécaniques</td></tr><tr><td>Spectrophotomètre</td><td>Cytation 5</td><td>Biotek</td><td></td></tr><tr><td>AxioCam503</td><td>Microscope</td><td></td> Carl Zeiss AG <td></td></tr><tr><td>VivaCT40</td><td>Scanco</td><td></td><td>MicroCT</td></tr><tr><td>Balance analytique</td><td>Denver Instrument Company</td><td>A-200DS</td><td>Balance analytique</td></tr><tr><td>Incubateur HERAcell 150i</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>Organ Culture</td></tr><tr><td>Dissection Scope</td><td>VistaVision</td><td></td><td>Utilisé lors de la dissection</td></tr><tr><td>Micromètre laser</td><td>Keyence</td><td>LK-081</td><td>Mesure de la hauteur</td></tr> <tr>du disque<td>Microcentrifugeuse 5810 R</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>Utilisé pour les analyses biochimiques</td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica&nbsp ;</td><td>RM2255</td><td>Utilisé pour</td></tr> <tr><td>histologieSoftware</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prism 7</td><td>GraphPad</td><td></td><td>Pour les statistiques</td></tr><tr><td>MATLAB R2014a</td><td>Mathworks</td><td></td><td>Pour la modélisation</td></tr><tr><td>Osiri-LXIV</td><td>Pixmeo</td><td></td><td>Open Source</td></tr><tr><td>MeshLab v1.3.3</td><td>Visual Computing Lab - ISTI - CNR</td><td></td><td>Open Source</td></tr><tr><td>PreView/FEBio 2.3</td><td>Utah MRL & Columbia MBL</td><td></td><td>Open Source</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Windows</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dissection Tools</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cohan-Vannas Spring Scissors&nbsp ;</td><td>Outils de science fine&nbsp ; &nbsp ;</td><td>15000-02</td><td>Ou n’importe quelle belle paire de ciseaux à ressort</td></tr><tr><td>Ciseaux fins - Sharp&nbsp ; (petit)</td><td>Outils de science fine&nbsp ; &nbsp ;</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux fins - Tranchants (plus grand)</td><td>Outils de science fine&nbsp ; &nbsp ;</td><td>14060-11</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Pince</td><td>pour outils scientifiques fins&nbsp ; &nbsp ;</td><td>11252-40</td><td>Au moins 2 ; peut également utiliser #3&nbsp ;</td></tr><tr><td>Pince Graefe extra fine, dentelée</td><td>Fine Science Tools&nbsp ; &nbsp ;</td><td>11150-10</td><td>Au moins 2</td></tr><tr><td>pinces Micro-Adson, dentelées</td><td>World Precision Instruments</td><td>503719-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinces Micro-Adson, dents</td><td>World Precision Instruments</td><td>501244</td><td></td></tr><tr><td>Manche de scalpel - #3</td><td>Fine Science Tools&nbsp ; &nbsp ;</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Manche de scalpel - #4</td><td>Fine Science Tools&nbsp ; &nbsp ;</td><td>10004-13</td><td></td></tr><tr><td>Lames de scalpel - #23</td><td>Outils de science fine&nbsp ; &nbsp ;</td><td>10023-00</td><td></td></tr><tr><td>Épingles à insectes, taille 000</td><td>Outils de science fine</td><td>26000-25</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille 27 g</td><td>BD PrecisionGlide</td><td>Aiguilles BD305109</td><td></td></tr></tbody></table>

un<em&gt; in vitro</em&gt; orgue culture modèle de la murine disque intervertébral

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

La dégénérescence du disque intervertébral (IVD) est un facteur important de la lombalgie. L&#39;IVD est un joint fibrocartilagineux qui sert à transmettre et à amortir les charges de la colonne vertébrale. Le IVD se compose d&#39;un noyau riche en protéoglycanes-pulposus (NP) et un anneau fibreux riche en collagène (AF) prise en sandwich par cartilagineux plaques d&#39;extrémité. Ensemble avec les vertèbres adjacentes, la structure des vertèbres-IVD forme une unité de colonne vertébrale fonctionnelle (FSU). Ces microstructures contiennent des types de cellules uniques ainsi que des matrices extracellulaires uniques. culture d&#39;organe plénier de l&#39;ex-URSS conserve la matrice extracellulaire native, phénotypes de différenciation cellulaire, et les interactions à matrice cellulaire. Ainsi, les techniques de culture d&#39;organes sont particulièrement utiles pour étudier les mécanismes biologiques complexes du IVD. Nous décrivons ici une approche à haut débit pour la culture de l&#39;ensemble de la souris FSU lombaire qui offre une plate-forme idéale pour l&#39;étude des mécanismes et des thérapies pour la maladie du IVD. De plus, nous décrivons slusieurs applications qui utilisent ce procédé de culture d&#39;organe de procéder à d&#39;autres études, y compris l&#39;imagerie par microCT contraste amélioré et en trois dimensions à haute résolution modélisation par éléments finis de la IVD.

Les figures 2-3 montrent des résultats représentatifs de la distribution des protéoglycanes, l&#39; expression du NF-kB, la raideur, la viscosité, la hauteur du disque, et le poids humide pour le diagnostic in vitro de souris en culture. Si cultivées correctement, les paramètres IVD du groupe de contrôle ne doivent pas être significativement différent du groupe frais. Si la culture est infecté ou compromis, le groupe de contrôle sera différent du groupe frais, en particulier dans l&#39;expression NF-kB ...

culture d&#39;organe total du disque intervertébral (DIV) conserve la matrice extracellulaire native, les phénotypes cellulaires, et les interactions entre la matrice cellulaire. Nous décrivons ici un système de culture à l&#39;aide IVD IVD lombaire de la souris et caudale dans leurs unités fonctionnelles de la colonne vertébrale et plusieurs applications utilisant ce système.

Un<em&gt; In vitro</em&gt; Orgue Culture Modèle de la murine disque intervertébral

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

L'objectif général de cette méthode de culture organique in vitro est de maintenir l'homéostasie et d'observer la réponse inflammatoire des disques intervertébraux dans leur anatomie native. Cette méthode peut aider à répondre à des questions essentielles concernant la dégénérescence des disques intervertébraux et les douleurs dorsales basses, et pourrait contribuer à la découverte de nouveaux médicaments et thérapies. Le principal avantage de cette méthode est qu'elle peut être réalisée rapidement tout en préservant l'anatomie du disque et des autres tissus.En général, les personnes novices dans cette méthode éprouveront des difficultés, car il est difficile de maintenir l’asepsie, toute contamination pouvant compromettre les résultats expérimentaux. En raison de la petite taille des disques intervertébraux de souris, la démonstration visuelle des étapes de dissection et de culture d’organes est essentielle. Avant de commencer ce protocole, se procurer deux souches de souris âgées de dix semaines, des BALB/c et des animaux transgéniques exprimant le gène de la luciférase sous le contrôle du promoteur du facteur nucléaire kappa B, élevés sur fond génétique BALB/c.Pour commencer, pl

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Ce protocole illustre une technique de récolte pour les bovins coccygienne disques intervertébraux pour la culture d'organes...

Préparation d&#39;Intact disques intervertébraux Queue bovine pour la culture d&#39;organe

Cette vidéo montre une technique de culture de disques intervertébraux bovins dans des bioréacteurs afin de développer un modèle de culture d’organes tridimensionnel. Des milieux spécifiques privés de nutriments et des conditions de pression dégénérative sont appliqués aux disques, imitant le microenvironnement pro-inflammatoire et dégénératif observé au cours de la maladie des disques intervertébraux à un stade précoce. La hauteur des disques est mesurée après le traitement afin d’analyser les...

Génération d’un modèle de culture d’organe pro-inflammatoire pour simuler une discopathie intervertébrale précoce

Cette vidéo démontre le développement d’un modèle de culture d’organes pro-inflammatoire et dégénérative pour la maladie du disque intervertébral (DIV) à un stade précoce à l’aide du TNF-α. Il décrit la procédure d’injection de TNF-α dans le disque intervertébral et explique les mécanismes par lesquels le TNF-α induit une inflammation et une dégradation de l’IVD.

Génération d’un modèle de culture d’organe pour simuler une discopathie intervertébrale à un stade précoce

La dégénérescence des disques intervertébraux contribue grandement à la douleur dorsale et à la principale cause d'invalidité dans le monde entier. De nombreux modèles animaux de dégénérescence du disque intervertébral existent. Nous démontrons un modèle ovine de dégénérescence du disque intervertébral, en utilisant un foret, ce qui permet une lésion uniforme du disque et un niveau reproductible de dégénérescence du disque.

Modèle de dégénérescence du disque intervertébral lombaire ovine utilisant une blessure au talage rétropéritonéal latéral

Nous avons développé un modèle lombaire de souris de dégénérescence intervertébrale de disque par résection des processus spinous de L3-L5 avec les ligaments supra- et inter-spinous et le détachement des muscles paraspinous.

Un modèle de souris de l’instabilité lombaire de colonne vertébrale

Ce protocole présente un modèle expérimental original de culture proinflammatory et dégénérative d’organe bovin pour simuler la dégénération intervertébrale de disque de tôt-étape.

Un modèle pro-inflammatoire et dégénératif de culture d’organe pour simuler la maladie de disque intervertébral de tôt-étape.

Nous présentons une méthode pour étudier l’organisation spatiale des chondrocytes dans l’anulus fibrose du disque intervertébral en utilisant une méthode de sectionnement optique.

Sectionnement optique et visualisation du disque intervertébral du développement embryonnaire à la dégénérescence

Culture de cellules normales dans leurs trois dimensions contexte représente une méthode alternative pour étudier les événements précoces nécessaires pour la transformation cellulaire et la tumorigenèse. Cette méthode est utilisée pour cultiver des cellules ovariennes normales et l'oviducte pour étudier les événements précoces de la formation de cancer de l'ovaire.

Les hydrogels d&#39;alginate de culture d&#39;organe en trois dimensions des ovaires et des trompes

Cet article et la vidéo qui l'accompagne présenter notre protocole pour générer génie tissulaire intestin chez la souris, en utilisant un organoïde unités-sur-échafaudage approche.

Génie tissulaire de l&#39;intestin dans un modèle murin

Ce protocole est conçu pour démontrer Procédé d'exposition de cultures cellulaires à des produits chimiques toxiques inhalés. Exposition des différenciée interface air-liquide (ALI) des cultures de cellules épithéliales des voies aériennes fournit un modèle unique de l'exposition des voies respiratoires à des gaz toxiques tels que le chlore. Dans ce manuscrit, nous décrivons effet de l'exposition au chlore sur les cultures à l'interface air-liquide de cellules épithéliales et de la culture...

Cellulaire in vitro modèle de culture pour le contrôle des produits chimiques toxiques inhalés

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