Name: 세칼 결찰 및 천자 및 비강 내 감염 이중 모델 패혈증 유발 면역 억제 설계 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 30 s
Description: 배우세요 면역억제 상태에서 2차 감염을 연구하기 위한 쥐의 맹장 결찰 및 천자와 비강 내 감염 이중 모델을 설정하는 방법을. 이 프로토콜은 패혈증 유발 면역억제에서 감염 결과를 측정하는 기술을 설명합니다.

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이 작품은 국립 보건 원 R01 AI138203-01, AI109317-04, AI101973-01, AI097532-01A1에서 M.W. 노스 다코타 핵심 시설의 대학은 NIH 보조금에 의해 지원되었다 (INBRE P20GM103442 및 코브레 P20GM113123). 이 작품은 또한 중국 국립 자연 과학 재단의 주요 프로그램에 의해 지원되었다 (81530063) Jianxin 장. 기금 모금자는 연구 설계, 데이터 수집 및 분석, 출판 결정 또는 원고 준비에 아무런 역할을 하지 않았습니다. 우리는 비디오를 만들기위한 마빈 라이어 (농촌 건강 센터, 노스 다코타 대학)에게 감사드립니다.

여기에 설명된 모든 방법은 국립 연구소 의 실험실 동물 관리 및 사용에 대한 보건 가이드에 따라 수행되었으며 노스 다코타 대학기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 받았습니다.
1. 세칼 결찰 및 펑크
참고: 여성 C57BL/6 마우스(체중, 18-22 g, 나이, 6-8주)는 무작위로 6개의 그룹으로 나뉩니다: 대조군(Ctrl), 감염군(S. 아우레우스를위한 SA), 2개의 샴 그룹, 2개의 CLP 그룹. Ctrl 동물은 수술과 이차 감염 부상없이 남아 있습니다. SA 동물은 수술없이 S. 아우레우스 폐 감염을 받게됩니다. 샴 작동 동물은 장의 박람회와 동일한 개복 절제술을 받습니다 (소골이 결찰되거나 구멍을 뚫지 않은 경우 제외). 그룹당 8마리의 마우스가 생존 분석을 위해 사용되며, 3~5마리의 마우스가 다양한 시점에서 염증 을 평가하는 데 사용됩니다.
<ol><li>수술 전에 20 분 동안 오토 클레이브하여 모든 수술 기구와 재료를 소독하십시오. 수술 중 멸균 상태를 설정하려면 적절한 멸균 수술 커튼으로 수술 분야 전체를 덮고 머리 덮개, 수술 용 마스크, 보호 안경, 수술 용 가운 및 멸균 장갑을 착용하십시오.</li>
	<li>케타민 (80 mg/kg), 자일라진 (10 mg/kg) 혼합물을 복강 내 투여한 0.1 mL/마우스를 사용하여 마우스를 계량하고 마취시다. U자 형 의 자세를 형성하는 왼손의 엄지 손가락과 검지 손가락으로, 원활하고 부드럽게 뒤에서 마우스의 목에 접근 한 다음 마우스 머리가 매우 억제되도록 귀 바로 뒤에 목을 잡습니다. 핑키(pinky)를 사용하여 마우스의 오른쪽 등다리를 잡고 가운데손가락과 링 핑거(왼손의 모든 손가락)를 사용하여 몸을 잡습니다.</li>
	<li>말단의 굴곡이 없을 때까지 발가락 핀치로 마취의 강도를 확인하십시오.</li>
	<li>전기 면도기로 복부의 하부 사분면을 면도하고 요오드로 부위를 소독하십시오.</li>
	<li>마우스를 작업자로부터 멀리 향하게 하는 소핀 위치에 마우스를 놓습니다. 멸균 필드를 유지하기 위해 계획된 수술 절개 위에 구멍이있는 멸균 수건으로 마우스를 드레이프하십시오.</li>
	<li>왼쪽 하복부에 메스로 세로 피부 절개 (약 0.5 cm 길이)를 만듭니다. 작은 가위를 사용하여 절개를 연장하십시오 (1-2cm). 주의: 복강이 침투하지 않도록 주의하십시오.</li>
	<li>복강으로 접근하고 인접한 내장을 가진 소막의 노출을 허용하기 위하여 근육 절개를 합니다.</li>
	<li>복부의 왼쪽에있는 소장을 분리 (대부분의 경우, 이것은 무딘 해부학 적 집게를 사용하여 수행됩니다) 멸균 드레이프에 제거, 복막 구멍에 소장과 대장을 떠나. 주의: 반막혈관을 손상시키지 마십시오.</li>
	<li>말단 25% 위치에 있는 장합을 리게이트하여 상대적으로 낮은 사망률을 가진 장기간 감염을 만듭니다. 주의: 일레오세칼 밸브를 분리하지 않도록 하십시오.</li>
	<li>최소 혈관 영역에서 결찰과 끝 사이의 중간에 단일 관통 관통 펑크 (두 구멍)에 의해 21 G 1 1/2 바늘로 장혈을 천공. 주의: 혈관에 구멍을 뚫지 않도록 하십시오.</li>
	<li>바늘을 제거합니다. 침투 구멍에서 소량의 대변을 부드럽게 돌출하여 전체 두께 의 천공을 보장합니다. 주의: 시술 중에 장 연속성을 방해하지 않도록 주의하십시오.</li>
	<li>양모를 복강으로 교체하십시오.</li>
	<li>4-0 나일론 수술 봉합사로 두 층으로 복부를 닫습니다. 간단한 달리기 봉합사를 적용하여 복부 근육을 닫고 간단한 중단 봉합사를 적용하여 피부를 닫습니다. 요오드로 피부를 청소하십시오.</li>
	<li>3mL의 미리 따뜻해진(37°C) 0.9% 멸균 정상 식염수(NS) 용액을 피하로 후면에 주입하여 세 번째 공간 손실을 대체하고 이를 따뜻한 패드에 놓아 회수합니다.</li>
	<li>12 시간 빛 / 어두운 주기와 음식과 물에 무료로 액세스 온도 제어 실 (22 ° C)에서 케이지에 마우스를 반환합니다. 적어도 2 시간 동안 매 0.5 시간마다 마우스를 모니터링한 다음 적어도 2 d에 대해 6 시간마다, 3 일 동안 매 12 시간마다, 또는 생존 분석을 위해 moribund 때 안락사시. 참고 : 수술 전 및 수술 후 진통 (buprenorphine, 50 μg / kg마다 12 시간)은 수술 후 48시간까지 수술 전 24 시간 동안 권장됩니다 9,10.</li>
</ol>2. S. 아우레우스를 가진 이차 폐 감염
참고: Ctrl 및 SA 기들을 제외하고, 3일 후 CLP 후 샴 및 CLP 그룹에서 생존한 마우스는 각각 30 μL의 세균 현탁액 또는 NS로 경질 투여되어야 한다. SA 그룹에서 살아남은 마우스는 세균 현탁액으로 내적으로 주입되어야 합니다.
<ol><li>케타민 (45mg / kg)과 자일라진 (10 mg / kg)의 100 μL 용액을 복강 내 주입하여 마우스를 마취시키고 마우스가 천천히 호흡 할 때까지 기다립니다. 느린 주입을 위해 바늘과 복벽 사이의 천공 각도는 30 ° 미만입니다.</li>
	<li>마이크로 파이펫의 도움으로, 천천히 그리고 intranasally 흡입에 흡인될 S. 아우레우스의 1 x 107 콜로니 형성 단위 (CFU)의 30 μL로 주입합니다. 마우스를 똑바로 세워서 마우스를 잡고 매번 두 콧구멍에 2-3 μL의 세균 현탁액을 천천히 떨어뜨립니다. 마우스가 거품을 형성하고 떨어뜨리지 않고 흡입할 수 있도록 방출 속도를 조정합니다.</li>
	<li>마우스를 위아래로 올리고 머리를 위아래로 올리고 꼬리를 아래로 올려 박테리아가 기관에 들어갈 수 있도록 돕습니다. 마우스를 빠르고 강하게 위로 움직이면서 마우스를 부드럽고 천천히 아래로 이동하여 중력을 높입니다. 모든 박테리아가 흡입 될 때까지 약 15 배 의 증원을 반복하며, 각 마우스당 10-15 분이 소요됩니다.</li>
	<li>마우스를 등에 올려 놓고 각진 침구 (약 35°)에 머리를 올려 놓고 호흡이 정상으로 돌아올 때까지 마우스를 보고 마취 및 절차에서 완전히 회복됩니다.</li>
	<li>12시간 의 빛/어두운 주기와 음식과 물에 무제한으로 접근할 수 있는 온도 제어 실(22°C)의 케이지에 마우스를 다시 놓습니다.</li>
	<li>첫날과 수술 후 4일 동안 12시간마다 마우스 상태를 확인합니다. 생존 분석을 위해 moribund 또는 염증의 평가를 위한 감염 후에 24 시간 때 그(것)들을 안락사하십시오.</li>
</ol>3. 분석된 매개변수
<ol><li>마우스 생존<ol>
<li>마우스를 7일 동안 모니터링합니다. 카플란-마이어 방법11을사용하여 생존 곡선을 생성할 때 안락사한다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>세균 수<ol>
<li>SA 주사 후 24시간, 마우스로부터 혈액, 기관지 정맥 세척액(BALF), 및 상막 세척액(PLF)을 수확한다. 이어서, 희석제의 100 μL을 영양한 한천 판에 넣고 37°C에서 24시간 동안 배양하여 세균 콜로니 카운트11,12,13을결정한다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cytokines 참고: 생쥐의 혈청 및 BALF에서 IL-1β, IL-6 및 TNFα의 염증성 사이토카인 농도는 제조사의 지침에 따라 ELISA 키트를 사용하여 평가되어야 합니다.<ol>
<li>96웰 ELISA 플레이트를 100 μL/well의 다른 포획 항체 작업 용액으로 코팅하여 중복 및 샘플에서 표준을 실행합니다. 접시를 밀봉하고 4 °C에서 하룻밤 둡니다.</li>
		<li>255 μL/웰 워시 버퍼(1x PBS, 0.05% 트웬-20)로 플레이트를 세 번 세척합니다.</li>
		<li>비특이적 결합을 차단하려면 200 μL/잘 희석제를 추가합니다. 접시를 밀봉하고 실온 (RT)에서 1 시간 동안 배양하십시오.</li>
		<li>표준 솔루션 준비: 1000 pg/mL의 8개의 2배 직렬 희석.</li>
		<li>100 μL/웰의 표준 또는 샘플을 적절한 웰에 추가하고 빈 우물에 희석제 100 μL/well을 추가합니다. 접시를 밀봉하고 4 °C에서 2 시간 또는 하룻밤 동안 RT에서 배양하십시오.</li>
		<li>255 μL /well 세척 버퍼로 플레이트를 5x 씻으소서.</li>
		<li>적절한 웰에 100 μL/well의 다양한 검출 항체 작업 용액을 추가합니다. 접시를 밀봉하고 RT에서 1 시간 동안 배양하십시오.</li>
		<li>255 μL /well 세척 버퍼로 플레이트를 5x 씻으소서.</li>
		<li>희석된 HRP 용액 100 μL/웰을 모든 웰에 추가합니다. 접시를 밀봉하고 RT에서 30 분 동안 배양하십시오.</li>
		<li>255 μL /well 세척 버퍼로 플레이트를 5x 씻으소서.</li>
		<li>100 μL/잘 희석된 TMB 용액을 추가합니다. 15 분 동안 RT에서 빛에서 멀리 접시를 배양.</li>
		<li>50 μL/웰 스톱 솔루션(1M H3PO 4)을 추가합니다. 플레이트 리더로 450 nm에서 흡광도를 판독합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>유세포분석<ol>
<li>BALF에서 총 셀 수를 가져옵니다. ACK 용해 완충제를 사용하여 적혈구를 용해시키고 PBS를 사용하여 2x를 세척하십시오.</li>
		<li>앞서 설명한 바와 같이 유세포측정에 의한단일세포 현탁액을 분석한다(11). 표면 염색을 위해, APC 항 마우스 CD11b 및 반대로 마우스 Gr-1 (Ly-6G/Ly-6C) 항체를 가진 얼룩 호중구 (CD11b +GR-1+). 분석을 위해 최소 3 x 104 라이브 비 파편 셀을 수집합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Singer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Third+International+Consensus+Definitions+for+Sepsis+and+Septic+Shock+%28Sepsis-3%29%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3).</a> JAMA. 315 (8), 801-810 (2016).</li>
<li>Delano, M. J., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immune+system%27s+role+in+sepsis+progression%2C+resolution%2C+and+long-term+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The immune system's role in sepsis progression, resolution, and long-term outcome.</a> Immunological Reviews. 274 (1), 330-353 (2016).</li>
<li>Mayr, F. B., Yende, S., Angus, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+severe+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of severe sepsis.</a> Virulence. 5 (1), 4-11 (2014).</li>
<li>Fleischmann, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+Global+Incidence+and+Mortality+of+Hospital-treated+Sepsis.+Current+Estimates+and+Limitations%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Assessment of Global Incidence and Mortality of Hospital-treated Sepsis. Current Estimates and Limitations.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193 (3), 259-272 (2016).</li>
<li>Reinhart, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognizing+Sepsis+as+a+Global+Health+Priority+-+A+WHO+Resolution%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Recognizing Sepsis as a Global Health Priority - A WHO Resolution.</a> The New England Journal of Medicine. 377 (5), 414-417 (2017).</li>
<li>Boomer, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppression+in+patients+who+die+of+sepsis+and+multiple+organ+failure%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Immunosuppression in patients who die of sepsis and multiple organ failure.</a> JAMA. 306 (23), 2594-2605 (2011).</li>
<li>Hotchkiss, R. S., Monneret, G., Payen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sepsis-induced+immunosuppression%3A+from+cellular+dysfunctions+to+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Sepsis-induced immunosuppression: from cellular dysfunctions to immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (12), 862-874 (2013).</li>
<li>Dejager, L., Pinheiro, I., Dejonckheere, E., Libert, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cecal+ligation+and+puncture%3A+the+gold+standard+model+for+polymicrobial+sepsis%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Cecal ligation and puncture: the gold standard model for polymicrobial sepsis?</a> Trends in Microbiology. 19 (4), 198-208 (2011).</li>
<li>Rittirsch, D., Huber-Lang, M. S., Flierl, M. A., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunodesign+of+experimental+sepsis+by+cecal+ligation+and+puncture%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Immunodesign of experimental sepsis by cecal ligation and puncture.</a> Nature Protocols. 4 (1), 31-36 (2009).</li>
<li>Hugunin, K. M. S., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+tramadol+and+buprenorphine+on+select+immunologic+factors+in+a+cecal+ligation+and+puncture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model.</a> Shock. 34 (3), 250-260 (2010).</li>
<li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Annexin+A2+Modulates+ROS+and+Impacts+Inflammatory+Response+via+IL-17+Signaling+in+Polymicrobial+Sepsis+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Annexin A2 Modulates ROS and Impacts Inflammatory Response via IL-17 Signaling in Polymicrobial Sepsis Mice.</a> PLoS Pathogens. 12 (7), 23(2016).</li>
<li>Pu, Q. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atg7+Deficiency+Intensifies+Inflammasome+Activation+and+Pyroptosis+in+Pseudomonas+Sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Atg7 Deficiency Intensifies Inflammasome Activation and Pyroptosis in Pseudomonas Sepsis.</a> Journal of Immunology. 198 (8), 3205-3213 (2017).</li>
<li>Zanotti-Cavazzoni, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+resuscitation+influences+cardiovascular+performance+and+mortality+in+a+murine+model+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis.</a> Intensive Care Medicine. 35 (4), 748-754 (2009).</li>
<li>Chin, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+macromolecular+approach+to+eradicate+multidrug+resistant+bacterial+infections+while+mitigating+drug+resistance+onset%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">A macromolecular approach to eradicate multidrug resistant bacterial infections while mitigating drug resistance onset.</a> Nature Communications. 9 (1), 917(2018).</li>
<li>Nascimento, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-33+contributes+to+sepsis-induced+long-term+immunosuppression+by+expanding+the+regulatory+T+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">IL-33 contributes to sepsis-induced long-term immunosuppression by expanding the regulatory T cell population.</a> Nature Communications. 8, 14919(2017).</li>
<li>Deng, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+investigation+on+the+turning+point+of+over-inflammation+to+immunosuppression+in+CLP+mice+model+and+their+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Systematic investigation on the turning point of over-inflammation to immunosuppression in CLP mice model and their characteristics.</a> International Immunopharmacology. 42, 49-58 (2017).</li>
</ol>

저자는 이해 관계의 재정적 충돌이 없습니다.

패혈증 연구를 위한 금 본위제 모델로서 CLP는 개복술로 인한 조직 외상, 장골 결찰로 인한 괴사, 전좌로 복막염을 유발하는 미생물 누출의 결과로 인한 감염 등 세 가지 모욕을 조합한 것입니다. 혈액으로 박테리아의8. 따라서 CLP는 다른 많은 모델보다 인간 패혈증의 복잡성을 더 잘 모방합니다. 그러나, 현재 CLP 모델의 주요 제한은 ICU 3,4,5에서환자에서 볼 수 있는 패혈증의 더 장기간 단계를 반영할 수 없다는 것입니다. 그러므로, 임상적으로 관련있는 이중 모형 (더블 히트 모형)는 패혈증의 연기한 사망을 반영하고 폐 이차 감염의 근본적인 기계장치를 조사하기 위하여 제안되었습니다. 이 프로토콜에서, 패혈증은 CLP 후 3일 후 CLP에서 ClP와 S. 아우레우스 폐 감염을 결합시킴으로써 유도되었다...

패혈증은 호스트 프로 염증 및 항 염증 과정의 복잡한 상호 작용을 시작하고 과염증 반응 및후속 면역 기능 장애 1,2를특징으로합니다. 패혈증은 글로벌 건강 우선 순위를 나타내고 중환자실 (ICO)3에서 사망자의 높은 숫자를 일으키는 원인이 됩니다. 패혈증의 부각은 ICU 관리에 있는 어드밴스에도 불구하고 30%만큼 높은 사망률과함께, 매년 세계전반 3천만 건을 초과하는 것으로 추정됩니다 4,5. 2017년 세계보건기구(WHO)는 이 치명적인 질병의 예방, 진단 및관리를 개선하기 위한 결의안을 채택했다 5. 그러나, 최근 연구는 죽음이 가혹한 정화조 환자에 있는 1 차적인 감염에서 유래하지 않으며 오히려 면역 억제에 기인한 이차 nosocomial 감염 (특히 폐염)에서 유래하지 않는다는 것을 설명했습니다6,7 . 그러므로, 정화조 환자가 이차 감염을 개발하는 이유의 기계장치를 이해하고 더 효과적인 처리를 발견하는 것은 긴급하게 요구됩니다. 본 명세서에서, 이중 모델은, 또한 이중 히트 모델로 알려져 있으며, 연장된 패혈증환자에서 발생하는 면역억제 현상을 연구하는 것으로 설명된다.
다미생물 패혈증에 대한 연구에서 금 표준 실험 모델로서, 세칼 결찰 및 천공 (CLP)은 항양 결찰 및 천공을 특징으로하는 수술로, 다미생물 후막염 및 패혈증8,9에 기여합니다. . 병리생리학적 과정과 사이토카인 프로파일은 운동학 및 크기와 함께 임상 패혈증과 유사합니다. 결찰의 위치, 천자에 사용되는 바늘 크기 및 세칼 천자의 수는 CLP 다음 사망률에 영향을 미치는 주요 요인입니다.
nosocomial 폐렴은 패혈증을 가진 중요하게 아픈 환자 중 사망의 주요 원인입니다. 가혹한 패혈증을 일으키는 원인이 되는 유기체의 주요 모형은 황색포도상구균 (20.5%), 슈도모나스 종 (19.9%), 장균학 (주로 대장균,16.0%), 및 균류 (19%)를 포함합니다. 한편, 최근 연구는 그람 음성 생물의 증가 발생률을 제안했다, 이는 지금 거의그람 음성 감염으로 일반적이다 3.
이 프로토콜에 기술된 방법은 면역 억제 상태를 나타내는 치명적인 다발성 복막염을 유도하는 "첫 번째 히트"로 수행되는 CLP를 포함합니다. 절차는 또한 임상적으로 관련있는 연구 플랫폼을 제공하기 위하여 "두 번째 명중"으로 S. 아우레우스의 연속적인 비강 점술을 관련시킵니다.

<table><tbody><tr><td>21 G 1 &frac12; 바늘</td><td>BD</td><td>BD305167</td><td></td></tr><tr><td>ACK 용해 버퍼</td><td>Gibco</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>안티-마우스 CD11b 항체</td><td>Biolegend</td><td>101201</td><td></td></tr><tr><td>안티-마우스 Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) 항체</td><td>Biolegend</td><td>108401</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 마우스&nbsp;</td><td>할란 (인디애나 폴리스)</td> <td>C57BL/6NHsd</td><td></td></tr><tr><td>데스크 라이트</td><td>일반 공급</td><td>일반 공급</td><td></td></tr><tr><td>소독 물티슈</td><td>클로 록스</td><td>B07NV5JMCS</td><td></td></tr><tr><td>전기 면도기</td><td>일반 공급</td><td>일반 공급</td><td></td></tr><tr><td>ELISA 키트 (마우스 IL-1 &beta;, IL-6 및 TNF &alpha;)</td><td>Invitrogen</td><td>88-7013, 88-7064 및 88-7324</td><td></td></tr><tr><td>요오드</td><td>Dynarex</td><td>B003U463PY</td><td>PVP 요오드 물티슈</td></tr><tr><td>케타민</td><td>FORT DODGE</td><td>NDC 0856-2013-01</td><td>아민 염산염 주입</td></tr><tr><td>실험실 규모</td><td>일반 공급</td><td>일반 공급</td><td></td></tr><tr><td>LB 한천, Miller</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1425-500</td><td>분자 유전학, 분말</td></tr><tr><td>마이크로피펫</td><td>ErgoOne</td><td>7100-1100</td><td></td></tr><tr><td>일반 식염수</td><td>일반 공급</td><td></td><td></td></tr><tr><td>폴리안감이 있는 수건</td><td>CardinalHealth, 컨버터</td><td>3520</td><td>수술용 드레이프, 멸균, 일회용</td></tr><tr><td>실크 봉합사, 4-0</td><td>DAVIS & GECK</td><td>1123-31</td><td></td></tr><tr><td>작은 동물 바늘 홀더</td><td>일반 공급</td><td>일반 공급 일반 공급</td><td></td></tr><tr><td>작은 동물 수술 가위</td><td>일반</td><td>공급 일반 공급</td><td></td></tr><tr><td>작은 동물 수술 겸자</td><td>일반 공급</td><td>일반 공급</td><td></td></tr> <tr><td>황색포도상구균</td><td>ATCC</td><td>13301</td><td></td></tr><tr><td>웜 패드</td><td>일반 공급</td><td>일반 공급</td><td></td></tr><tr><td>자일라진</td><td>알파 Aesar</td><td>7361-61-7</td><td></td></tr></tbody></table>

세칼 결찰 및 천자 및 비강 내 감염 이중 모델 패혈증 유발 면역 억제 설계

Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

패혈증, 심각하고 복잡한 생명을 위협하는 감염, 여러 장기에 프로 와 항 염증 반응 사이의 불균형을 특징으로한다. 치료의 발달로, 대부분의 환자는 과염증상을 살아남지만 면역 억제 단계로 진행되어 이차 감염의 출현을 증가시킵니다. 따라서 패혈증 중 면역억제 단계에서 이차 병원 획득 감염의 근본적인 발병기전에 대한 이해가 크게 중요하다. 여기에서 보고된 것은 마우스에 있는 이중 명중 감염을 만들어서 감염성 결과를 시험하는 모형입니다. 표준 외과 적 절차는 세칼 결찰과 천자 (CLP)에 의한 다발성 복막염을 유도하는 데 사용되며, 황색포도상구균의 비강 내 감염에 이어 면역 억제에서 발생하는 폐렴을 시뮬레이션하는 것이 빈번하게 보입니다. 정화조 환자에서. 이 이중 모형은 nosocomial 폐염에서 이차 감염에 연장된 패혈증 및 감수성을 가진 환자에서 일어나는 면역 억제 상태를 반영할 수 있습니다. 그러므로, 이 모형은 패혈증 유도한 이차 세균성 폐염의 병리생리학을 조사하기 위하여 간단한 실험적인 접근을 제공합니다, 패혈증과 그것의 합병증을 위한 새로운 처리를 발견하기 위하여 이용될 수 있는.

실험 설계 및 절차에 따라, C57BL/6 마우스를 CLP를 실시하였고, 3일 후에, 그들은박테리아를 무성하게 투여하였다(도 1). 도2에 나타낸 바와 같이, 마우스는 후배염의 유도 후 ~12시간에서 죽기 시작했다. CLP+SA 군에서 2마리의 마우스와 CLP+NS 군의 3마리의 마우스가 비강 내 S. 아우레우스 주입 전에 사망했다. 감염되지 않은 비 또는 가짜 작동 마우스에서 사망률이 검출되지 않았다. 따라서, 마우스가 폐렴 전에 CLP를 가졌을 때, 사망률은 훨씬 높았다 (p &lt; 0.05). 비강 내 박테리아 도전 후 (1 x 107 CFU), 8 개의 마우스 중 3 개는 SA 및 Sham + SA 그룹에서 생존했으며 8 명의 마우스 중 4 명이 CLP + NS 그룹에서 생존했습니다. 그러나, 모든...

이 프로토콜은 면역 억제 상태에서 이차 병원 획득 감염의 근본적인 전염성 결과를 측정하는 기술을 설명합니다. 면역 억제 패혈증의 임상적으로 관련 모델을 만들 수 있습니다.

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple ...

수술을 위해 마우스를 준비합니다. 면도기로 복부의 하부 사분면을 면도하고 요오드로 지역을 소독하십시오. 마우스를 뒤쪽의 깨끗한 작업 표면에 놓고 머리가 연산자에서 멀리 가리키는 것으로 나타났습니다.왼쪽 하복부에서 반 센티미터 길이의 세로 피부 절개를 합니다. 복막 구멍을 뚫지 않도록 주의하십시오. 작은 가위를 사용하여 절개를 약 1~2센티미터 확장합니다.복막 구멍에 접근하기 위해 근육 절개를 합니다. 대부분의 경우, cecum은 복부의 왼쪽에 있습니다. cecum을 분리합니다.무딘 해부학 적 집게를 사용하여 절개를 통해 cecum을 부드럽게 조심스럽게 노출시합니다. 4단계는 결찰입니다. cecum에 결찰의 위치는 패혈증의 심각도 수준을 결정합니다.약 75%의 세이컴을 계면 심한 패혈증을 유발합니다. cecum의 50%를 리칭하는 것은 중간 수준의 패혈증을 유도합니다. 반면 25% 이하의 세쿰은 경미한 패혈증을 초래할 것입니다.지정된 위치에서 cecum을 리게이트합니다. 일레오세칼 밸브를 리게이트하지 않도록 하십시오. 5단계는 cecum을 펑크하는 것입니다.바늘을 사용하여, 결찰과 cecum의 끝 사이의 중간 방법을 통해 단일 관통으로 cecum을 천공. 혈관에 구멍을 뚫지 않도록 하십시오. 완전한 펑크가 있는지 확인하기 위해 두 바늘 구멍에서 작은 배설물 방울을 제거하십시오.조심스럽게 복강으로 cecum을 교체. 간단한 달리기 봉합사를 적용하여 복부 근육을 닫고 피부를 닫습니다. 요오드로 피부를 청소하십시오.미리 데워진 식염수 용액으로 마우스를 주입하여 소생시합니다. 음식과 물에 무제한 액세스 할 수 있도록 다시 케이지에 마우스를 배치합니다. 세칼 결찰 및 천자 또는 CLP 절차에서 대략 3 일 후에, 우리는 패혈증에서 수시로 생기는 폐염을 자극하기 위하여 비강 내 감염으로 마우스를 두 번째 명중으로 주체합니다.마우스의 목에 뒤에서 매끄럽고 부드럽게 접근합니다. 왼손의 엄지손가락과 검지 손가락은 U자형 위치를 형성한다. 마우스 머리가 완전히 절제되도록 목은 귀 바로 뒤에 누를 수 있습니다.비강 내 감염을 소개합니다. 100 마이크로리터 파이펫을 사용하여 포도상 구균 균주를 인트라나슬로 주입합니다. 마우스를 똑바로 세게 유지하여 세균용 용액의 2~3마이크로리터를 마우스의 콧구멍에 천천히 떨어뜨립니다.마우스를 위아래로 위아래로 올리고 꼬리를 아래로 올려 세균용 용액이 기관으로 진입할 수 있도록 돕습니다. 마우스를

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

인간 패혈증 연구에 유용한 도구로 cecal 내고 주사의 마우스 모델입니다.

Cecal 내고의 찔린 절차

패혈증은 미생물 감염으로 인한 전신 염증 반응 증후군을 참조하고, cecal 내고 주사 (CLP)을 되나 수술 기법에 의한 시뮬레이션이 될 수 있습니다. 여기 치료 대리인을위한 약초를 구분할 CLP 유발 동물 모델을 사용하는 방법을 설명합니다.

소설 허벌 요법을 평가하는 패혈증의 동물 모델의 사용

실험 패혈증은 맹장 결찰과 천자 (CLP) 방법을 사용하여 마우스에서 유발 될 수있다. CLP - 유도 패혈증의 컨텍스트에서 생체에 autophagy를 평가하는 현재의 프로토콜이 여기에 제시된다 : (GFP) - LC3 마우스를 사용 autophagy에 측정을위한 프로토콜, 및 전자 현미경에 의해 autophagosome 형성을 측정하기위한 프로토콜.

맹장 결찰 및 마우스에서 autophagy에 공부를 모델로 패혈증 관통 유도

이 프로토콜 설정 하 고 평가 하는 신생아 패 혈 증 7-하루-오래 된 쥐에 필요한 단계를 제공 합니다.

신생아 Polymicrobial 패 혈 증에 대 한 제어 마우스 모델

생체 발광 대장균 O1:K1:H7을 가진 신생아 마우스의 감염은 중요한 폐 염증 및 폐 병리를 가진 패혈증 감염을 초래합니다. 여기서는 전신 세균성 부담, 염증 성 프로파일링 및 폐 조직 병리학의 열거와 병행하여 세로 내 인트라비셔널 이미징을 사용하여 신생아 패혈증을 모델링하고 추가로 연구하는 절차를 설명합니다.

그람 음성 세균 패혈증의 신생아 화상 진찰 모형

여기에서, 우리는 독특하게 디자인된 온난화/억제 장치를 사용하여 설치류 꼬리 정맥 주사를 위한 효과적이고 효율적인 방법을 제시합니다. 혈관 확장 및 억제 과정의 개시를 간소화함으로써,이 프로토콜은 최소한의 고통을 가진 동물의 큰 그룹의 정확하고 적시에 정맥 주사를 허용합니다.

뮤린 곰팡이 패혈증 모델에서 효율적인 꼬리 정맥 주사를위한 현대 온난화 / 억제 장치

이 프로토콜은 패혈증의 마우스 모델에서 맹장 결찰 및 천자 (CLP)의 수술 세부 사항을 제시합니다. CLP는 패혈증의 동물 모델을 만들기 위해 가장 널리 사용되는 기술 중 하나입니다. 따라서 신뢰할 수 있는 연구 결과를 얻으려면 표준화된 CLP 프로토콜이 필요합니다.

패혈증의 맹장 결찰 및 천자 유도 마우스 모델에서 신뢰할 수 있는 바이오마커의 평가

이 논문은 바이러스 감염 동안 폐렴구균이 무증상 집락 상태에서 질병을 유발하는 병원체로 전환하기 위한 새로운 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 질병 진행의 여러 단계 동안 다양한 숙주에서 다미생물 및 숙주-병원체 상호작용을 연구하는 데 쉽게 적용할 수 있습니다.

바이러스 동시 감염 시 콜로니자에서 병원체로 Streptococcus pneumoniae 의 전환을 위한 마우스 모델은 연령 악화 질병을 요약합니다.

여기서는 Klebsiella pneumoniae 를 비강 주입하여 마우스 패혈증 면역억제 모델을 구축하는 프로토콜을 제시하고, 다양한 지표를 통해 모델을 검증하였습니다.

비강 주입을 통한 마우스 패혈증 유도 면역억제 모델 구축

바이러스 수용체 분자를 이용한 최근에 개발된 새로운 입자 응집 (PA) 분석은 poliovirus (PV)의 신속하고 쉬운 식별을 허용했다. 이 문서에서는, 우리는 PV 식별을 위해 PA 분석을위한 절차를 표시합니다.

Poliovirus 식별을위한 입자 응집 방법

배우세요 면역억제 상태에서 2차 감염을 연구하기 위한 쥐의 맹장 결찰 및 천자와 비강 내 감염 이중 모델을 설정하는 방법을. 이 프로토콜은 패혈증 유발 면역억제에서 감염 결과를 측정하는 기술을 설명합니다.

세칼 결찰 및 천자 및 비강 내 감염 이중 모델 패혈증 유발 면역 억제 설계

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