Name: 後根神経節軸軸索-オリゴデンドロサイト共培養におけるヒトグリオーマ細胞移動のリアルタイムモニタリング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-13T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: 学ぶヒトグリオーマ細胞のリアルタイム移動モニタリング法。後根神経節軸索-オリゴデンドロサイト共培養系を用いて、細胞・分子メカニズムの解明と創薬スクリーニングへの応用を実現します。

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この研究は、ブラウン大学脳神経外科の内部資金によって支援されました。

<ol><li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li>
<li>Stupp, R., Weber, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+radio-+and+chemotherapy+in+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Onkologie%22%5BJournal%5D)">The role of radio- and chemotherapy in glioblastoma.</a> Onkologie. 28 (6-7), 315-317 (2005).</li>
<li>Wick, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathway+inhibition%3A+emerging+molecular+targets+for+treating+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">Pathway inhibition: emerging molecular targets for treating glioblastoma.</a> Neuro-Oncology. 13 (6), 566-579 (2011).</li>
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<li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+stem+cells+derived+from+glioblastomas+cultured+in+bFGF+and+EGF+more+closely+mirror+the+phenotype+and+genotype+of+primary+tumors+than+do+serum-cultured+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor stem cells derived from glioblastomas cultured in bFGF and EGF more closely mirror the phenotype and genotype of primary tumors than do serum-cultured cell lines.</a> Cancer Cell. 9 (5), 391-403 (2006).</li>
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<li>Morshead, C. M., van der Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disguising+adult+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Disguising adult neural stem cells.</a> Current Opinion in Neurobiology. 14 (1), 125-131 (2004).</li>
<li>Sanai, N., Alvarez-Buylla, A., Berger, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cells+and+the+origin+of+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Neural stem cells and the origin of gliomas.</a> New England Journal of Medicine. 353 (8), 811-822 (2005).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+restricted+cell+population+propagates+glioblastoma+growth+after+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A restricted cell population propagates glioblastoma growth after chemotherapy.</a> Nature. 488 (7412), 522-526 (2012).</li>
<li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioma+stem+cells+promote+radioresistance+by+preferential+activation+of+the+DNA+damage+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Glioma stem cells promote radioresistance by preferential activation of the DNA damage response.</a> Nature. 444 (7120), 756-760 (2006).</li>
<li>Beier, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD133%28%2B%29+and+CD133%28-%29+glioblastoma-derived+cancer+stem+cells+show+differential+growth+characteristics+and+molecular+profiles%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">CD133(+) and CD133(-) glioblastoma-derived cancer stem cells show differential growth characteristics and molecular profiles.</a> Cancer Research. 67 (9), 4010-4015 (2007).</li>
<li>Armento, A., Ehlers, J., Schotterl, S., Naumann, U. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aArmento%2C+A+%22Glioblastoma%22">Glioblastoma</a>. De Vleeschouwer, S. , (2017).</li>
<li>Chedotal, A., Kerjan, G., Moreau-Fauvarque, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain+within+the+tumor%3A+new+roles+for+axon+guidance+molecules+in+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+and+Differentiation%22%5BJournal%5D)">The brain within the tumor: new roles for axon guidance molecules in cancers.</a> Cell Death and Differentiation. 12 (8), 1044-1056 (2005).</li>
<li>Rao, S. S., Lannutti, J. J., Viapiano, M. S., Sarkar, A., Winter, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+3D+biomimetic+models+to+understand+the+behavior+of+glioblastoma+multiforme+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+B+Reviews%22%5BJournal%5D)">Toward 3D biomimetic models to understand the behavior of glioblastoma multiforme cells.</a> Tissue Engineering Part B Reviews. 20 (4), 314-327 (2014).</li>
<li>Windebank, A. J., Wood, P., Bunge, R. P., Dyck, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelination+determines+the+caliber+of+dorsal+root+ganglion+neurons+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Myelination determines the caliber of dorsal root ganglion neurons in culture.</a> Journal of Neuroscience. 5 (6), 1563-1569 (1985).</li>
<li>Wood, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+of+functional+Schwann+cells+and+neurons+from+normal+peripheral+nerve+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Separation of functional Schwann cells and neurons from normal peripheral nerve tissue.</a> Brain Research. 115 (3), 361-375 (1976).</li>
<li>Rambukkana, A., Zanazzi, G., Tapinos, N., Salzer, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contact-dependent+demyelination+by+Mycobacterium+leprae+in+the+absence+of+immune+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Contact-dependent demyelination by Mycobacterium leprae in the absence of immune cells.</a> Science. 296 (5569), 927-931 (2002).</li>
<li>Tapinos, N., Ohnishi, M., Rambukkana, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ErbB2+receptor+tyrosine+kinase+signaling+mediates+early+demyelination+induced+by+leprosy+bacilli%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">ErbB2 receptor tyrosine kinase signaling mediates early demyelination induced by leprosy bacilli.</a> Nature Medicine. 12 (8), 961-966 (2006).</li>
<li>Chan, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NGF+controls+axonal+receptivity+to+myelination+by+Schwann+cells+or+oligodendrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">NGF controls axonal receptivity to myelination by Schwann cells or oligodendrocytes.</a> Neuron. 43 (2), 183-191 (2004).</li>
<li>Dugas, J. C., Tai, Y. C., Speed, T. P., Ngai, J., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomic+analysis+of+oligodendrocyte+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Functional genomic analysis of oligodendrocyte differentiation.</a> Journal of Neuroscience. 26 (43), 10967-10983 (2006).</li>
<li>Ruffini, F., Arbour, N., Blain, M., Olivier, A., Antel, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinctive+properties+of+human+adult+brain-derived+myelin+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Distinctive properties of human adult brain-derived myelin progenitor cells.</a> American Journal of Pathology. 165 (6), 2167-2175 (2004).</li>
<li>Zepecki, J. P., Snyder, K. M., Moreno, M. M., Fajardo, E., Fiser, A., Ness, J., Sarkar, A., Toms, S. A., Tapinos, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+human+glioma+cell+migration%2C+tumor+growth%2C+and+stemness+gene+expression+using+a+Lck+targeted+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Regulation of human glioma cell migration, tumor growth, and stemness gene expression using a Lck targeted inhibitor.</a> Oncogene. 38, 1734-1750 (2018).</li>
<li>Chen, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Boyden+chamber+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Bioliogy%22%5BJournal%5D)">Boyden chamber assay.</a> Methods in Molecular Bioliogy. 294, 15-22 (2005).</li>
<li>Merz, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+slice+cultures+of+human+glioblastoma+reveal+different+susceptibilities+to+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">Organotypic slice cultures of human glioblastoma reveal different susceptibilities to treatments.</a> Neuro-Oncology. 15 (6), 670-681 (2013).</li>
<li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).</li>
<li>Aubert, M., Badoual, M., Christov, C., Grammaticos, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+glioma+cell+migration+on+collagen+and+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+Interface%22%5BJournal%5D)">A model for glioma cell migration on collagen and astrocytes.</a> Journal of the Royal Society Interface. 5 (18), 75-83 (2008).</li>
<li>Jia, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+three-dimensional+collagen+scaffolds+on+the+expression+profiles+and+biological+functions+of+glioma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Effects of three-dimensional collagen scaffolds on the expression profiles and biological functions of glioma cells.</a> International Journal of Oncology. 52 (6), 1787-1800 (2018).</li>
<li>Kaphle, P., Li, Y., Yao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanical+and+pharmacological+regulation+of+glioblastoma+cell+migration+in+3D+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">The mechanical and pharmacological regulation of glioblastoma cell migration in 3D matrices.</a> Journal of Cellular Physiology. 234 (4), 3948-3960 (2019).</li>
<li>Gritsenko, P., Leenders, W., Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recapitulating+in+vivo-like+plasticity+of+glioma+cell+invasion+along+blood+vessels+and+in+astrocyte-rich+stroma%5BTitle%5D)+AND+%22Histochemistry+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Recapitulating in vivo-like plasticity of glioma cell invasion along blood vessels and in astrocyte-rich stroma.</a> Histochemistry and Cell Biology. 148 (4), 395-406 (2017).</li>
<li>Gritsenko, P. G., Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+adhesion+systems+mediate+glioma+cell+invasion+in+complex+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Adaptive adhesion systems mediate glioma cell invasion in complex environments.</a> Journal of Cell Science. 131 (15), (2018).</li>
<li>Kaur, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cadherin-11%2C+a+marker+of+the+mesenchymal+phenotype%2C+regulates+glioblastoma+cell+migration+and+survival+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cadherin-11, a marker of the mesenchymal phenotype, regulates glioblastoma cell migration and survival in vivo.</a> Molecular Cancer Research. 10 (3), 293-304 (2012).</li>
<li>Rao, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mimicking+white+matter+tract+topography+using+core-shell+electrospun+nanofibers+to+examine+migration+of+malignant+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Mimicking white matter tract topography using core-shell electrospun nanofibers to examine migration of malignant brain tumors.</a> Biomaterials. 34 (21), 5181-5190 (2013).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+hydrogel+is+suitable+for+targeted+investigation+of+amoeboid+migration+of+glioma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional hydrogel is suitable for targeted investigation of amoeboid migration of glioma cells.</a> Molecular Medicine Reports. 17 (1), 250-256 (2018).</li>
</ol>

著者たちは何も開示する必要はない。

hGCの移行研究は、ボイデンチャンバーシステムまたはスクラッチアッセイを使用して行うことができる。しかしながら、これらの実験は、腫瘍細胞と他の周囲組織との相互作用に関する情報を与えることができないが、本系は、骨髄化および非骨髄性繊維とのGC相互作用を再現することができる。さらに、腫瘍形成および終点移動を研究するために、げっ歯類脳の組織学的スライス培養物またはげっ歯類の脳または側面へのグリオーマ細胞の生体内移植は、以前に23、24、25を利用している。グリオーマ細胞の三次元モデリングに関する最近の取り組みは、コラーゲン層26、27、28、アストロサイトベースの足場29、30、<sup class="x...

神経膠芽腫は、人間の脳の最も積極的で致死的な腫瘍の一つです。現在の治療基準は、腫瘍の外科的切除に続いて、放射線1プラステモゾロミド2の付随およびアジュバント投与を含む。この多治療的アプローチであっても、腫瘍の再発は避けられない3.これは、完全な切除を行う可能性が低い脳4内に複数の指状の突起を作成する脳の毛腫に侵入する腫瘍細胞の広範な移動性によるものである。
近年、神経膠芽腫の攻撃性は、部分的には、腫瘍塊5、6内の癌幹細胞の集団の存在に起因していることが明らかになり、高い回遊性電位を示す7、8、化学療法および放射線9、10および二次腫瘍11を形成する能力を示す。GSCは、ヌードマウス5に異種移植された場合に元のポリクローナル腫瘍を再現することができる。
神経膠芽腫の遺伝的背景に関する豊富な知識にもかかわらず、グリオーマ細胞(GC)移行に関する研究は、現在、効率的なインビトロまたはインビボ移行モデルの欠如によって妨げられます。特に、細胞および環境因子によって調節される神経膠腫細胞軸索相互作用はグリオーマ浸潤の中核的な構成要素であるが、我々の知る限りでは、これらの相互作用をモデル化する能力を有する実験システムは現在存在しない12、13、14である。この欠乏に対処するために、精製されたDRG軸索オリゴデンドロサイトと共培養した一次hGCのex vivo培養システムを開発し、分化した腫瘍マーカーの発現の上昇、ならびに筋リチン化および非骨髄性繊維とのhGCの広範な移行および相互作用をもたらす。このex vivoプラットフォームは、その区画化されたレイアウトのために、hGC移行パターンに対する新規治療の効果をテストするのに適しています。

<table><tbody><tr><td>100 mm 懸濁液培養ディッシュ</td><td>コーニング</td><td>430591</td><td></td></tr><tr><td>2.5S NGF</td><td>ENVIGO</td><td>B.5025</td><td></td></tr><tr><td>60 mm 懸濁液培養ディッシュ</td><td>コーニング</td><td>430589</td><td></td></tr><tr><td>ACK 溶解バッファー</td><td>サーモフィッシャー</td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>水酸化アンモニウム溶液</td><td>フィッシャー サイエンティフィ</td>ック <td>A669-500</td><td>濃縮</td></tr><tr><td>アニマルフリー組換えヒトEGF</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr>アニ<tr><td>マルフリー組換えヒトFGF-基本(154 a.a.)</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-18B</td><td></td></tr><tr><td>抗 A2B5 MicroBeads、ヒト、マウス、ラット</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-392</td><td></td></tr><tr><td>抗生物質 - 抗真菌剤 (100X)</td><td>サーモフィッシャー</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>AutoMACS リンス液 (PBS、pH 7.2)</td><td>ミルテニー バイオテック</td><td>130-091-222</td><td></td></tr><tr><td>B27 サプリメント</td><td>サーモフィッシャー</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>B27サプリメント、マイナスビタミンA</td><td>サーモフィッシャー</td><td>12587001</td><td></td></tr><tr><td>細菌プレート</td><td>BDファルコン</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>ビオチン</td><td>Sigma</td><td>B4639</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>Campenotチャンバー</td><td>タイラーリサーチ</td><td>CAMP-10</td><td></td></tr><tr><td>細胞培養皿</td><td>コーニング</td><td></td><td>430165 35mm×10mm</td></tr><tr><td>セルストレーナー</td><td>BD Falcon</td><td>352350</td><td>70 uM、ナイロン</td></tr><tr><td>セルストレーナー</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td>30 uM、ナイロン</td></tr><tr><td>コラゲナーゼ/ディスパーゼ</td><td>ロシュ</td><td>11097113001</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex ラットコラーゲン I</td><td>トレビゲン</td><td>3440-100-01</td><td></td></tr><tr><td>D-グルコース</td><td></td><td>Sigma G5146</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>サーモフィッシャー</td><td>10313021</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma</td><td>D7291</td><td></td></tr><tr><td>ダウ コーニング 高真空グリース</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>14-635-5D</td><td></td></tr><tr><td>デュモン #5 鉗子</td><td>Roboz</td><td>RS-5045</td><td></td></tr><tr><td>E16 時限妊娠 スプレイグ ドーリー ラット</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EBSS</td><td>シグ</td>マ <td>E7510</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>シグマ</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30070.02</td><td></td></tr><tr><td>FUDR</td><td>Sigma</td><td>F0503</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Supplement</td><td>Thermo Fisher</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Ham's F-12 Nutrient Mix</td><td>Thermo Fisher</td><td>11765054</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Thermo Fisher</td><td>14175095</td><td></td></tr><tr><td>Hemostable</td><td>Forceps Roboz</td><td>RS-7035</td><td></td></tr><tr><td>Heparin Sodium Salt, 0.2%in PBS</td><td>幹細胞技術</td><td>07980</td><td></td></tr>皮<tr><td>下注射針、18G</td><td>BD</td><td>511097</td><td></td></tr><tr><td>インスリン-トランスフェリン-セレン G</td><td>サーモフィッシャー</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>L-システイン</td><td>シグマ</td><td>C7477</td><td></td></tr><tr><td>L-グルタミン</td><td>サーモフィッシャー</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>ライボビッツのL-15ミディアム</td><td>サーモフィッシャー</td><td>11415064</td><td></td></tr><tr><td>MACS BSA ストック ソリューション</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-376</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>サーモフィッシャー</td><td>1190081</td><td></td></tr><tr><td>Mg2SO4</td><td>Sigma</td><td>M2643</td><td></td></tr><tr><td>MiniMACS セパレーター</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>MS カラムとチューブ</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-301</td><td></td></tr><tr><td>NAC</td><td>Sigma</td><td>A8199</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>ニューロバサルミディアム</td><td>サーモフィッシャー</td><td>21103049</td><td></td></tr><tr><td>ニューロバサル-A ミディアム</td><td>サーモフィッシャー</td><td>10888022</td><td></td></tr><tr><td>普通の鉗子</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>P2 Sprague Dawley ラット 子犬</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Papain</td><td>Worthington</td><td>LS003126</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>サーモフィッシャー</td><td>15140148</td><td></td></tr><tr><td>ピンレーキ</td><td>Tyler Research</td><td>CAMP-PR</td><td></td></tr><tr><td>プロゲステロン</td><td>Sigma</td><td>P8783</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Accutase 細胞解離試薬</td><td>サーモフィッシャー</td><td></td><td></td>A1110501</tr><tr><td>シリングリースアプリケーター</td><td>タイラーリサーチ</td><td>CAMP-GLSS</td><td></td></tr><tr><td>トランスフェリン</td><td>シグマ</td><td>T2036</td><td></td></tr>ウ<tr><td>リジン</td><td>シグマ</td><td>U3003</td><td></td></tr></tbody></table>

後根神経節軸軸索-オリゴデンドロサイト共培養におけるヒトグリオーマ細胞移動のリアルタイムモニタリング

Real-Time Monitoring of Human Glioma Cell Migration on Dorsal Root Ganglion Axon-Oligodendrocyte Co-Cultures

神経膠芽腫は、広範な細胞不均一性およびhGCの移行特性による最も積極的なヒト癌の1つである。グリオーマ細胞遊走の基礎となる分子機構をより深く理解するためには、腫瘍微小環境内のhGCと軸索との相互作用を研究する能力が不可欠である。この細胞相互作用をモデル化するために、hGCと後根神経節(DRG)軸索オリゴデンドロサイト共培養からなる混合培養システムを開発しました。DRG培養は、効率的に隔離することができ、この性質の移行研究に最適な長く広範な突起を形成することができるので選択されました。精製されたラットオリゴデンドロサイトを精製ラットDRG軸索に添加し、骨髄ネートに誘導した。コンパクトミエリンの形成を確認した後、hGCを最終的に共培養に加え、DRG軸索およびオリゴデンドロサイトとの相互作用をタイムラプス顕微鏡を用いてリアルタイムでモニタリングした。これらの条件下で、hGCはGFAPおよびKi67を発現する腫瘍様凝集体構造を形成し、骨髄化軸索および非骨髄性軸索トラックの両方に沿って移動し、擬似ポジアの形成を通じてこれらの軸索と相互作用する。当社のex vivo共培養システムは、hGC移行の新しい細胞および分子メカニズムを同定するために使用することができ、潜在的にインビトロ薬効性試験に使用することができます。

軸索とのhGCの相互作用を調べるために、前述の15、16、17、18に従って精製されたDRG軸索を生成した。これらの精製されたDRG軸索は、軸索ネットワーク内に統合されたGFAP+/Ki67+腫瘍様構造を形成したhGCで播種され、個々のhGCはアキソン間または軸索間で移行した(図2)。hGCが骨髄化軸索とどのように相互作用するかを決定するために、精製されたラットオリゴデンドロサイトを用いてDRG軸索培養物を播種し、前述の19、20、21に従って骨髄化を誘導した。骨髄化DRG-オリゴデンドロサイト共培養物にhGCを添加すると、hGCが骨髄化軸索と関連して移動し、最近の...

ここでは、ヒトグリオーマ細胞(hGC)移行をリアルタイムで研究するためのex-vivo混合単層培養システムを提示する。このモデルは、区画化されたチャンバー内のhGCと骨髄化した軸索と非骨髄化軸の間の相互作用を観察する能力を提供する。

Glioblastoma is one of the most aggressive human cancers due to extensive cellular heterogeneity and the migration properties of hGCs. In order to better ...

このex vivo共培養システムは、ヒトグリオーマ細胞遊走の新しい細胞および分子機構を同定するために使用することができ、インビトロ薬有効性試験に使用される可能性がある。この技術の主な利点は、ヒト神経膠芽腫細胞と軸索の相互作用をリアルタイムで研究する能力である。この手順をデモンストレーションするのは、私の研究室の大学院生であるジョン・ゼペリです。コンパートメントされた培養皿を組み立てるには、無菌蒸留水中の1ミリリットル当たり500マイクログラムにコラーゲンストック溶液を希釈し、十分に混ぜます。滅菌移管ピペットで、希釈したコラーゲン溶液の2ミリリットルで35ミリメートル培養皿を充填します。その後、皿を少し傾け、後ろにコラーゲンの薄いフィルムを残して溶液を取り除きます。次の35ミリメートル皿に溶液を分配します。このプロセスを繰り返し、必要に応じてすべての料理がコーティングされるまでコラーゲン溶液を追加します。コラーゲンを重合するために、ラミナルフローフードで、水酸化アンモニウムアンモニウムを3ミリリットルで濡れたガーゼパッドで、トレイを15分間覆う。ガーゼパッドを取り外し、35ミリメートルの皿を乾燥させます。次に、金属ファイルを使用して18ゲージ針のポイントを取り除き、鈍い先端を作ります。70%エタノールに針を浸して滅菌します。コンパートメントされたチャンバーの底部にシリコーングリースを塗布します。グリスがきれいに配置され、すべてのコーナーで重なっていることを確認します。この技術は非常に困難な場合があるので、優れた成長を確実にするために、コンパートメントされたチャンバーを設定する前に、適切な量のグリースを適用する練習に余分な時間を要することをお勧めします。ゆっくり働くことも非常に重要です。あなたが何かがうまくいかない場合にエキストラを持っているので、あなたが必要と思うよりも多くの部屋を設定します。35ミリメートル皿から蓋を取り出し、皿を反転させ、部屋の上に傷を置きます。皿の底を軽くタップして鉗子を付きます。グリースチャンバーを皿に塗布する際は、強くたたすぎないでください。それ以外の場合、軸索は隣接するチャンバーの下に成長することはできません。静血鉗子を使用して、皿をひっくり返します。鉗子を解放する。中央コンパートメントの基部にグリースのマウンドを置きます。各チャンバーに補い付けられた神経基底核培地を充填します。必要に応じて、シリコーングリースで漏れやシール漏れを確認します。すべての文化料理を組み立て続け、摂氏37度と二酸化炭素5%で一晩保管してください。コンパートメントされた部屋は異なった薬理学的試薬の使用および同じ版の2つの井戸間の結果を比較し、対比する機能を可能にする。GBM神経球を含む調製された培養物をシードするには、まず各遠位コンパートメントチャンバに10

real-time-monitoring-human-glioma-cell-migration-on-dorsal-root

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がん研究

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小児びまん性正中線神経膠腫の生3D細胞免疫細胞化学アッセイ

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背根神経節培養の In Vitro モデルの確立:がん-神経クロストーク研究のための補完的アプローチ

学ぶヒトグリオーマ細胞のリアルタイム移動モニタリング法。後根神経節軸索-オリゴデンドロサイト共培養系を用いて、細胞・分子メカニズムの解明と創薬スクリーニングへの応用を実現します。

後根神経節軸軸索-オリゴデンドロサイト共培養におけるヒトグリオーマ細胞移動のリアルタイムモニタリング

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