May 14th, 2008
עמידות הצמח אל אוכלי צמחים חרקים לעיסה ניתן לבדוק בכמה דרכים. כאן, אנו מדגימים כיצד הגדרת בחירה ניסוי אין ברירה עם thaliana הצמח ארבידופסיס מודל לזהות התנגדות המינים הדברה פיאריס ראפא.
זחלים של פשטידת פרפר הכרוב הלבן הקטן הם מזיק במסגרות חקלאיות. מין זחל זה ניזון מצמחים ממשפחת הכרוביים, הכוללים יבולים רבים כמו כרוב, ברוקולי וכרוב ניצנים, ורבים אחרים. מעניין שצמחים יכולים לפתח עמידות לכוח עשב, כמו למשל bedo tappe, ובסרטון זה נבחן את העמידות של מין הצמח המודל ארנב מול אנה לרקמה זו, חרק ג'ין בשתי שיטות.
היי, אני מרטין נאבוס, פוסט-דוקטורנט במעבדתו של ג'ורג' ג'נדר במכון בו תומפסון למחקר מתוכנן. היום אני רוצה להראות לכם איך להגדיר בחירה ואיך לא ברירה. התנסו ב-Arab Opsis Ana כתוכנית מודל, לחקור עמידות נגד מאכילי מזיקים.
גידול הזחלים מתבצע על צמחי כרוב בחממה. לפחות שני כלובים דרושים לגידול פטרוס. מגרדים אחד לזחלים, והשני מכיל את הפרפרים הבוגרים, כדי להדגים את מעורבותם של הורמונים צמחיים וכימיקלים צמחיים רעילים.
כהתנגדות למבחן החרקים הזה, ברצוני להדגים שני ניסויים. הראשון יכלול את קביעת תפקידה של חומצה יסמונית. הורמון צמחי המצוין לעתים קרובות בעמידות בפני חרקים.
בניסוי ללא ברירה, ניתן להשוות את גידול הזחל על צמחים מסוג בר וצמחים מוטנטיים שנפגעו בייצור של חומצת מון בלבד. ההשערה תהיה שהזחלים עולים יותר במשקל על הצמח המוטנטי. אז בואו נתחיל עם הניסוי הראשון.
אז אנחנו הולכים לעשות ניסוי ללא ברירה עם הצמחים, Revit opsis elliana כדי למדוד את העלייה במשקל של זחלי הראפה הטהורים ביותר. אז מה שעלינו לעשות תחילה הוא לסגור בזהירות את הצמחים הללו. באחת הכוסות הללו חתכנו את החלק התחתון של הפלסטיק הזו.
אז כדי לסגור, אני משתמש בקצה האחורי של מברשת הצבע העדינה הזו. אז בלי לפגוע בעלים, אנחנו הולכים לסגור את הצמחים האלה. אז אין לנו כאן ניסוי ברירה בין אופס הארנב, הסוג הפראי, והצמח המוטנטי.
המוטאנט הוא מוטנט פגוע בחומצה יסמונית, וכנראה רגיש יותר להאכלה. זהו ניסוי ללא ברירה מכיוון שזחל אחד יכול לבחור רק מתוך גנוטיפ אחד של צמחים. אז נוסיף זחל אחד לכל.
חשוב להתחיל עם זחלים שזה עתה בקעו. אז אלה נקראים זחלים L. אז הנה אחד שזה עתה בקע.
בסדר, אז אני הולך למקם בזהירות את הזחלים האלה על רצועת הבדיקה. אז השלב הבא הוא לסגור את הצמחים האלה עם הזחל האחד שלהם, ואני משתמש ברשת עדינה וברצועה אולאית כדי לסגור אותם כדי שלא יזחלו החוצה. אז אנחנו מחכים כמה ימים, בדרך כלל שבעה ימים לפני שאנחנו מודדים את העלייה במשקל הזחל.
אז אחרי שבעה ימים של האכלה, אנחנו מוציאים את הזחלים ושוקלים אותם על המשקל הזה ומשתמשים במלקחיים הגמישים ומרימים בזהירות את הזחלים והולכים לרשום את משקלם. אז הבחור הזה שוקל כמעט 250 מיליגרם. אני הולך להשוות את המשקל של הזחל הזה שהיה על הצמח המוטנטי למשקל הזחל שהיה על הצמח מסוג הבאר.
כפי שאתה יכול לראות מיד, נותרה הרבה יותר רקמת צמחים מהצמח מסוג הבאר. אז אנחנו מניחים שהזחלים עלו פחות במשקל. הזחלים בצמח מסוג הבר שוקלים רק כמאה מיליגרם.
אז יש הבדל עצום גם בכמות הרקמה שנאכלה וגם בעלייה במשקל של הזחלים. אז זהו לניסוי ללא ברירה. בואו נעבור לניסוי הבחירה, נכון?
מזיקים מומחים מזהים ונמשכים על ידי רמזים מארחים שהם רעילים לכוח אורבי כללי. במקרה של pi, גלוקוזינולטים מהירים משמשים כאות ליין במיקום יתר. כאן אשתמש באופסיס של ארנב מסוג בר ומוטנטי שנפגע בייצור גלוקוזינולאט.
כדי להדגים ניסוי בחירה, לפני שתתחילו בניסוי הזה, צריך להיות מסוגלים להבחין בין פרפרים זכרים ונקבות. הנה דוגמה, לפרפרים מהירים יש שתי נקודות על כל כנף בעוד שלזכרים יש רק אחת, לפעמים זכרים יכולים להיחשב בטעות לנקבה אם יש להם סימן שני, לעתים קרובות קלוש. אז בואו נקים את ניסוי הבחירה.
במקרה זה, יש לנו גם סוג בר וגם צמח מוטנטי. הצמח המוטנטי נפגע בייצור גלוקוזינולטים. שוב, גלוקונאטים רעילים לדיווחים מוקדמים כלליים, אבל מומחים כמו הפרה הזו שאנו עובדים איתה אטרקטיביים להדמיה של לוקאס.
אז אלה הם חמשת שלבי הזחל של קוף הפין, זוהרים עם השלב הקטן ביותר של הזחל הראשון, עולים במשקל עד הזחל החמישי שהם ימצאו. לאחר מכן הוא הופך לגולם והטרנספורמציה המלאה מתרחשת והזחלים הללו יביאו לפרפרים בוגרים. לניסוי הבחירה הזה, אנחנו משתמשים בכלוב הזה שהכנסתי גם לגאות וגם לצמח המוטנטי, ועכשיו אני הולך להוסיף לו פרפר נקבה אחת.
כדי להעריך את האסאי, אני בדרך כלל תופס נקבות פוריות. אז כדי לוודא שהן פוריות, אני תופס נקבות שהן ביצי לאה פעילות, אני מניח את היד שלי בזהירות סביבן ומעביר אותה לכלוב הבדיקה. אז אנחנו משאירים את הפרפר למשך 24 שעות ואז סופרים את מספר הביצים שהוטלו על כל אחד מהגנוטיפים האלה.
אז כמה טיפים שימושיים כשאתה עושה ניסויים מסוג זה הוא, קודם כל, כשאתה בוחר פרפר נקבה, אל תשתמש בו לניסויים הבאים כי עלולה להיות השפעה של למידה. שנית, אפשר להשוות רק צמחים שיש להם פנוטיפים דומים של צמיחה. אז אם יש לך צמחים שאין להם פנוטיפ גידול דומה, אתה יכול לקחת עלים בגודל דומה ולהרכיב אותם על גבי בקבוק LMI.
אז לאחר מכן, לאחר שחלפו 24 שעות, נוכל להוציא את הצמחים קודם. הצמח מסוג הקיר, כפי שאתם יכולים לראות, יש לו הרבה ביצים שם, והצמח המוטנטי, המוטנטי שחסר גלוקוזינולטים. אז זה חסר עמדת יתר או גירוי אסאי.
כפי שאתם יכולים לראות, אין כמעט ביצים או מעט מאוד, לפחות על המוטאנט. אמנם יש הרבה ביצים על צמח הברז הפראי. אז זה עתה הראיתי לכם כיצד לערוך ניסויים כדי לקבוע עמידות נגד חרקים.
הניסוי הראשון לא היה ברירה. ניסויים שבהם השווינו עלייה במשקל הזחלים על צמחים מוטנטיים לעומת צמחים מסוג טוב. הניסוי השני, ניסוי בחירה.
השווינו acla על ידי נקבת פרפר גם על צמח מוטנטי לעומת צמח מסוג קיר. תודה רבה. זהו.
אני מקווה שזה שימושי לניסויים שלך.
מאמר זה מדגים כיצד להגדיר ניסויים עם בחירה וללא בחירה באמצעות צמח המודל Arabidopsis thaliana כדי להעריך את ההתנגדות למין המזיק Pieris rapae. המחקר מדגיש את תפקידם של הורמוני צמחים וכימיקלים רעילים באינטראקציות צמח-חרק.