Name: Dissection של Oenocytes מן למבוגרים תסיסנית melanogaster /em (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-18T17:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 1 s
Description: למד טכניקת ניתוח לבידוד אנוציטים מזבובי פירות בוגרים Drosophila melanogaster. שיטה זו מאפשרת ניתוח מולקולרי וגנטי מפורט של תאים המייצרים תרכובות הידרוקרבון להגנה מיובוש ותקשורת כימית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

ברצוננו להודות Amsale זוזו על סיועה הצילומים של מאמר זה וידאו. עבודה זו מומנה על ידי CIHR, NSERC ומענקים CRC כדי JDL.

חלק 1. הכנת פילה של הבטן תסיסנית מבוגר. ההליך המתואר להלן מיידית מכין את הבטן להסרת הבאות של oenocytes (ראה Part2 של פרוטוקול). ההליך אותו יכול לשמש גם להכנת ברקמות אחרות המצורפת המשטח הפנימי של לציפורן, כולל כלי הגבי (כלומר לב) ואת השומן בגוף. שים לב כי במאמר וידאו הטכניקה לנתיחה oenocyte מודגם על לטוס מבוגר (קנטון-S) wild-type זכר, שישה ימים של גיל. טכניקות זהים ניתן להשתמש כדי להסיר את oenocytes מפני זבובים ממין נקבה. הכנת פילה הבטן לוקח כ 5 דקות לבצע. לפני תחילת חשוב להיות מוכן כמה סיכות לנתיחה קנס (ראה להלן חלק 2) ו מחט דיסקציה (ראו חלק 2). סיכות לנתיחה זמין מסחרית ומחטים לעיתים גדול מדי עבור פרוטוקול זה, אז נקטנו כדי בודה שלנו במעבדה. כדי ליצור את המחט לנתיחה, תיל טונגסטן (0.005 ") הוא מושחל הראשונה דרך הפיר של מחט המזרק (27G, אלומיניום רכזת). תיל נושא באמצעות קצה המחט של המזרק, כך עולה מן הרכזת. מסלסלים את חוט בולטות מהרכזת;. זה מונע את החוט מלהיות שלף את המחט של המזרק הבא, לחתוך את החוט בקצה השני של כאלה crimp כי כמה מילימטרים (~ 3-4 מ"מ) של תיל בולטים קצה המחט של המזרק עובר. קצה טונגסטן נחשפים דרך להבה יהיה לחדד את החוט עד לנקודה טובה מאוד. פלסטיק חד פעמיות 5 מ"ל פיפטה כאשר תקוע לרכזת המחט של המזרק משמש ידית נוחה כלי זה לנתיחה. סיכות לנתיחה בסדר מתקבלות דומה הדרך. לאחר השלב השחזה, לתפוס את קצה קצהו של חוט חזק עם מלקחיים כדי למנוע ממנה לזוז ולעשות חתך כ 3mm מהקצה לשחרר את הנצרה לנתיחה קטן. השתמש טיפול כדי למנוע סיכה מלהיות השליך מידיו של מלקחיים. פילה כדי להכין את הבטן מבוגר תסיסנית: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את לטוס הצלחת דיסקציה (Sylgard; Dow-Corning) על ידי הצבת סיכה לנתיחה בסדר למרות החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את רגליים וכנפיים של זבוב. בעוד הסרת להגדיר האחורי ביותר של הרגליים, ליצור פתח לציפורן בנקודה קדמית רק למקום החזה פוגש את הבטן. פתח זה משמש מאוחר יותר נקודת גישה עבור ביצוע חתך על פני השטח הגחוני של הבטן (ראה שלב 5) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את הבטן של הזבוב במקום על ידי הצבת סיכה לנתיחה השנייה ועד במגזר באברי המין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכסים את לעוף עם שילדס צונן סאנג M3 חרקים בינוני (Sigma). הסר את כל האוויר שנלכד על ידי ציור אותו עם פיפטה פסטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלקחיים שימוש לפתוח את הבטן על ידי ביצוע חתך לאורך קו האמצע הגחון מפתיחת ב לציפורן נוצר על ידי הסרת הרגליים למגזר באברי המין. הסר את האומץ ואת בלוטות המין מן הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סבר העור המת tracheae המחבר את הבטן אל החזה. הרקמה היחידה שנותרה המחבר את הבטן אל החזה צריך להיות הלב. זה מספק את לציפורן בטן עם יציבות מסוימת, ומונעת ממנו סיבוב או פיתול במהלך לשלב הבא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פין שטוח הקדמי פינות ביותר לציפורן הבטן. הסר את בית החזה. משיכת לציפורן מתוח, פין שטוח בפינות האחורי של לציפורן. סיכה במגזר המין ייתכן שיהיה צורך מיקומו לעשות לציפורן שכב. </li></ol> חלק 2. Oenocyte לנתיחה הכנת פילה הבטן חושף את פני השטח הפנימי של לציפורן הבטן וברקמות המצורף כולל הלב, שומן הגוף, tracheae, קיר שרירי הגוף, האפידרמיס, ואת oenocytes. הלב נמצא לאורך קו האמצע הגבי. גוף שומן (רקמת אטום) מכסה את רוב השטח cuticular פנימי. Tracheae (מבנים צינורי לבן) להאריך מן הפתחים spiracle לרוחב, ולעשות סניפים נרחבת אשר לחדור רקמות אלה. שוכבת מתחת רקמות אלו, oenocytes פיגמנטציה (בצבע ענבר תאים) מקרינים מן קו האמצע לקצה הלטרלי של לציפורן באזור האחורי של כל פלח. Oenocytes השקר ישירות מתחת האזורים שזוף של כל tergite (צלחות cuticular הגבי) והוא יכול להיות קשה לזהות ללא ידיעה מוקדמת של מיקומם. אוכלוסייה נוספת של oenocytes ממוקם ventrally המשויך sternites (צלחות cuticular הגחון); למרות שזה אפשרי לבודד תאים אלה, זה פרוטוקול וידאו רק להדגים את דיסקציה של oenocytes הגבי. בכל מגזר בטן, עלה הבולטים של רקמת השומן בגוף השקרים הקדמי של oenocytes; עלה פחות ברורים יותר של שומן גוף השקרים האחורי של oenocytes. העלה הבולטים של רקמת השומן בגוף לעיתים קרובות מכסה את oenocyteים של המגזר שקדמו לו. הספינה הגב ואת השומן בגוף יש להסיר תחילה כדי לחשוף את oenocytes. חשוב לציין כי הפיגמנטציה של ענבר oenocytes, שממנו נגזר שמם (oeno - מ oînos היווני, "יין") 1, מבדיל בבירור בין תאים אלה הרקמות הסובבות, את עוצמת פיגמנטציה עולה עם הגיל של הזבוב. יתר על כן, basal lamina ensheathes oenocytes 2,3, מתן תמיכה צבירי תאים ומונעים את התאים מלהפוך ניתק במהלך הניתוח. Basal lamina גם מסייע להסרת רקמות דבק בקור, כגון רקמת השומן בגוף, על ידי יצירת נקודת התורפה שבו אלה הידבקויות יכולה להיות מופרת בקלות. ההליך המפורטים להלן מספק הוראות מפורטות להסרת oenocytes מן integument הבטן. Oenocytes ניתן להסיר בקלות מכל המגזרים בטן 2-5 (זכר) ו 2-6 (נקבה). Oenocytes מן המגזרים הבטן הראשונה והאחרונה (קטעים 1, 6 או 7 אצל זכרים אצל נקבות) הם שיבשו לעתים קרובות על ידי סיכות לנתיחה מחזיק בפינות לציפורן, ולכן נמנעים. הסרת oenocytes לוקח כ -10 דקות לביצוע. כדי לבודד את oenocytes מבוגר: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סבר הגזעים קנה הנשימה הנובעות spiracles באמצעות מחט לנתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הגוף הלב שומן על ידי ניתוק הקשרים על פני השטח הפנימי של לציפורן עם מחט לנתיחה. לשם כך, מקם את חוד המחט לנתיחה בין שומן הגוף ואת oenocytes, ולגרור אותו מהקצה לרוחב של לציפורן, דרך קו האמצע, נע מתחת הלב, ממשיך בצד הנגדי. מתקדמת מ האחורי אל הקדמי, להסיר את רקמת השומן בגוף ואת הלב מן לציפורן של כל פלח רצופים. אם מבוצע בקפידה oenocytes נשארים מחוברים לציפורן, והגוף לב שומן ניתן להסיר את כולו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קיר גוף רצועת השרירים oenocytes אל פני השטח הפנימי של לציפורן. באמצעות מחט לנתיחה לנתק קיר האורך שרירי הגוף של כל פלח. כדי לעשות זאת, גרור את המחט לנתיחה בצד האחורי של גדיל oenocyte, מרימים בעדינות אותם מפני השטח של לציפורן. סרט דמוי חוטים oenocyte צריך לבוא ממנו לציפורן, ניתן להניח בצד בעוד oenocytes שנותרו יוסרו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסר לאחר מן לציפורן, שוכב על הצלחת לנתיחה ייתכן שיהיה צורך לנקות את כל דבק רקמות השומן בגוף מ oenocytes. זה נעשה פשוט על ידי הצבת מחט לנתיחה בין רקמת השומן בגוף ואת oenocytes, וניתוק הקשר על ידי דוחפים את המחט למטה על הצלחת הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף את גדילי oenocyte פשוט על ידי תוקעת אותם בסופו של המחט לנתיחה. תקוע לאחר לסוף המחט לנתיחה oenocytes יכול להיות משך לאט על פני השטח של המדיום לתרבות. Oenocytes גזור יכול להיות ממוקם ישירות לתוך חוצץ התא תמוגה מתאים או RNA או מיצוי חלבון. שים לב oenocytes (קטעים בטן 2-5) מ זבוב זכר יחיד בדרך כלל מניבה 15-20ng של רנ"א מוחלט. </li></ol> איור מקרא: <img src="/files/ftp_upload/2242/2242fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. הביטוי של הגנים desaturase, desat1 ו desatF, ב oenocytes זכר ונקבה של ד melanogaster. הגברה הפוך שעתוק-PCR של desat1 ו desatF מ cDNA נגזר oenocytes זכר ונקבה בוגרים. הגן desat1 מתבטא הן oenocytes זכר ונקבה; ביטוי desatF הוא דימורפית מינית, בא לידי ביטוי באופן בלעדי oenocytes הנשי. מקבילים להבדלים ביטוי גנים, desat1 נדרש לייצור תרכובות פחמימנים המשותפים לשני זכרים ונקבות 9, desatF עוסקת בייצור של נשים ספציפיות תרכובות פחמימנים 10,11. DesatF הוכח לידי ביטוי במיוחד ב oenocytes הנשי על ידי ב 12 הכלאה באתרה. שים לב כי בממוצע 15-20ng של רנ"א הכל מתקבל oenocytes גזור מן לטוס אדם. RNA היה מבודד באמצעות RNeasy ערכת מיקרו (Qiagen); cDNA הופק באמצעות cDND qScript סינתזה הערכה (Quanta BioSciences)

<ol><li>Wielowiejski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ueber+das+blutgewebe+der+insekten%5BTitle%5D)+AND+%22Zeit.+Wiss.+Zool%22%5BJournal%5D)">Ueber das blutgewebe der insekten.</a> Zeit. Wiss. Zool. 43, 512-536 Forthcoming.</li>
<li>Krupp, J. J., Kent, C., Billeter, J. C., Azanchi, R., So, A. K., Schonfeld, J. A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+experience+modifies+pheromone+expression+and+mating+behavior+in+male+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster.</a> Curr. Biol. 18, 1373-1383 (2008).</li>
<li>Locke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+membranes%2C+Golgi+complexes%2C+and+vacuolar+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Surface membranes, Golgi complexes, and vacuolar systems.</a> Annu. Rev. Entomol. 48, 1-27 (2003).</li>
<li>Billeter, J. C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specialized+cells+tag+sexual+and+species+identity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster.</a> Nature. 461, 987-991 (2009).</li>
<li>Gould, A. P., Elstob, P. R., Brodu, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insect+oenocytes%3A+a+model+system+for+studying+cell-fate+specification+by+Hox+genes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anat%22%5BJournal%5D)">Insect oenocytes: a model system for studying cell-fate specification by Hox genes.</a> J. Anat. 199, 25-33 (2001).</li>
<li>Lawrence, P. A., Johnston, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lineage+of+the+Drosophila+abdomen%3A+the+epidermis%2C+oenocytes+and+ventral+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Embryol.+Exp.+Morphol%22%5BJournal%5D)">Cell lineage of the Drosophila abdomen: the epidermis, oenocytes and ventral muscles.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 72, 197-208 (1982).</li>
<li>Johnson, M. B., Butterworth, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maturation+and+aging+of+adult+fat+body+and+oenocytes+in+Drosophila+as+revealed+by+light+microscopic+morphometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Morphol%22%5BJournal%5D)">Maturation and aging of adult fat body and oenocytes in Drosophila as revealed by light microscopic morphometry.</a> J. Morphol. 184, 51-59 (1985).</li>
<li>Gutierrez, E., Wiggins, D., Fielding, B., Gould, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specialized+hepatocyte-like+cells+regulate+Drosophila+lipid+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Specialized hepatocyte-like cells regulate Drosophila lipid metabolism.</a> Nature. 445, 275-280 (2007).</li>
<li>Marcillac, F., Bousquet, F., Alabouvette, J., Savarit, F., Ferveur, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mutation+with+major+effects+on+Drosophila+melanogaster+sex+pheromones%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">A mutation with major effects on Drosophila melanogaster sex pheromones.</a> Genetics. 171, 1617-1628 (2005).</li>
<li>Chertemps, T., Duportets, L., Labeur, C., Ueyama, M., Wicker-Thomas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+female-specific+desaturase+gene+responsible+for+diene+hydrocarbon+biosynthesis+and+courtship+behaviour+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">A female-specific desaturase gene responsible for diene hydrocarbon biosynthesis and courtship behaviour in Drosophila melanogaster.</a> Insect Mol. Biol. 15, 465-473 (2006).</li>
<li>Legendre, A., Miao, X. X., Da Lage, J. L., Wicker-Thomas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+a+desaturase+involved+in+female+pheromonal+cuticular+hydrocarbon+biosynthesis+and+courtship+behavior+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Insect.+Biochem.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Evolution of a desaturase involved in female pheromonal cuticular hydrocarbon biosynthesis and courtship behavior in Drosophila.</a> Insect. Biochem. Mol. Biol. 38, 244-255 (2008).</li>
<li>Shirangi, T. R., Dufour, H. D., Williams, T. M., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+evolution+of+sex+pheromone-producing+enzyme+expression+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Rapid evolution of sex pheromone-producing enzyme expression in Drosophila.</a> PLoS Biol. 7, e1000168-e1000168 (2009).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

במאמר זה אנו מציגים וידאו פרוטוקול לנתיחה מפורט להכנת oenocytes מן הבוגרים ד melanogaster באופן מתאים לניתוח מולקולרית. מבוססי טקסט חשבון מקוצר של השיטה לנתיחה תוארה במקומות אחרים 2, והכנת oenocyte וכתוצאה מכך הודגמה להיות מתאים החילוץ של שניהם RNA וחלבון 2. באמצעות הכנה זו ניתן גם ניתן לפתח שיטות culturing של oenocytes explanted. פרוטוקול לתרבות explant oenocyte תסייע חקירות שנועדו לקבוע את יכולת חילוף החומרים אוטונומי של תאים אלה מפרישים לסנתז את ה...

<table><tbody><tr><td>Sylgard</td><td>Dow Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חוט טונגסטן</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27-11</td><td>0.005&amp;#8221;/20&amp;rsquo;</td></tr><tr><td>פינצטה</td><td>Dumont</td><td>11252-30</td><td>#5</td></tr><tr><td>מצע חרקים Shields and Sang M3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3652</td><td></td></tr><tr><td>ערכה לבידוד RNA מסוג RNeasy Micro</td><td>Qiagen</td><td>74004</td><td></td></tr><tr><td>ערכה לסנתזה של cDNA מסוג qScript</td><td>Quanta Biosciences</td><td>95047-100</td><td></td></tr><tr><td>מחט היפודרמית Monoject</td><td>Harvard Apparatus</td><td>722289</td><td>20G1 עם תושבת אלומיניום</td></tr></tbody></table>

dissection של oenocytes מן למבוגרים תסיסנית melanogaster</em

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

בתוך<em&gt; תסיסנית melanogaster</em&gt;, כמו חרקים אחרים, שכבת שעווה על המשטח החיצוני של לציפורן, המורכב בעיקר תרכובות פחמימנים, מספק הגנה מפני יובש אתגרים סביבתיים אחרים. כמה תרכובות פחמימנים אלה cuticular (CHC) מתפקדים גם אותות semiochemical, וככזה לתווך תקשורת המושכת בין בני אותו מין, או במקרים מסוימים בין מינים שונים, להשפיע על התנהגות. תאים מיוחדים המכונים oenocytes נחשבים האתר הראשי לסינתזה CHC. עם זאת, יחסית מעט מאוד ידוע על מעורבות של oenocytes בוויסות של biosynthetic, תחבורה מסלולים בתצהיר לתרום פלט CHC. בהתחשב תפקיד משמעותי כי CHCs לשחק במספר היבטים של הביולוגיה חרקים, כולל תקשורת כימית, עמידות התייבשות, חסינות, חשוב להשיג הבנה טובה יותר של התקנה מולקולרית הגנטי של ייצור CHC בתוך תאים מיוחדים אלה. Oenocytes הבוגרת<em&gt; ד melanogaster</em&gt; נמצאים בתוך integument הבטן, והם ערוכים metamerically בסרט כמו אשכולות מקרין על פני השטח cuticular הפנימי של כל פלח הבטן. במאמר זה אנו וידאו להפגין טכניקה לנתיחה להשתמש להכנת oenocytes מן הבוגרים<em&gt; ד melanogaster</em&gt;. במיוחד, אנו מספקים הפגנה מפורט צעד אחר צעד (1) איך להכין פילה מבוגר<em&gt; תסיסנית</em&gt; הבטן, (2) כיצד לזהות את oenocytes ו להבחין בינם לבין רקמות אחרות, ו (3) כיצד להסיר oenocyte אשכולות שלמים מן integument הבטן. האיור ניסיוני קצר של איך זה הכנה ניתן להשתמש כדי לבחון את הביטוי של גנים המעורבים סינתזה פחמימנים כלול. הכנת גזור הפגינו בזאת תאפשר ניתוח מולקולרי גנטי מפורט של הפונקציה oenocyte של זבוב הפירות הבוגרים.

בשנת חרקים, oenocytes לייצר תרכובות פחמימנים cuticular. תרכובות אלו להגן מפני התייבשות ולאפשר תקשורת כימית. כאן אנו להפגין טכניקה לנתיחה להשתמש כדי לבודד את oenocytes מן הבוגרים<em&gt; תסיסנית melanogaster</em&gt;, וכן להדגים כיצד זה הכנה יכול להיות מנוצל ללימוד גנים המעורבים בסינתזה פחמימנים.

Dissection של Oenocytes מן למבוגרים תסיסנית melanogaster</em

ב-Drosophila melanogaster, בדומה לחרקים אחרים, שכבת שעווה על פני השטח החיצוני של הקוטיקולה, המורכבת בעיקר מתרכובות פחמימניות, מספקת...

שלום, שמי ג'ושוע קרופ (Joshua Krupp). אני עמית פוסט-דוקטורט במעבדה של ג'ואל לוין (Joel Levine) באוניברסיטת טורונטו במיסיסוגה. מאמר וידאו זה ידגים טכניקת נתיחה שפיתחתי לבידוד של תאים בוגרים מנתיב העיכול (esophagal mal gaster) בזבובים וביתבובים אחרים.שכבה שעוותית המורכבת מתרכובות פחמימנים מצפה את השטח החיצוני של הקוטיקולה. שכבה שעוותית זו מספקת עמידות מפני התייבשות ומגנה על בעל החיים מפני אתגרים סביבתיים אחרים. חלק מתרכובות פחמימנים ספציפיות אלו משמשות גם כאותות סמיוכימיים.כך, הם מתווכים תקשורת הורמונלית ומשפיעים על ההתנהגות. התאים, תאי הג'ל, מדגימים כיצד לבצע דיסקציה ונחשבים לאתר מרכזי לייצור תרכובות פחמימניות ספציפיות אלו. ההכנה המנותחת המוצגת כאן תאפשר ניתוח מולקולרי וגנטי מפורט של התאים מזבוב פירות בוגר.עבור הליך נתיחה זה, נדרשים מספר כלי נתיחה בסיסיים. ראשית, נדרשת פיפטת פסטור להגשת מצע חרקים מקורר. שנית, נדרש חוט טונגסטן להכנת מחט נתיחה עדינה; כדי לייצר מחט זו, יש להשחיל תחילה את חוט הטונגסטן דרך מחט היפודרמית בעלת קוטר פנימי צר.פעולה זו מספקת לסיב tungsten את התמיכה הדרושה. לאחר מכן מעבירים את ה-tsin לאט דרך להבה. פעולה זו שורפת חלק מה-tsin בקצה, ובכך יוצרת מחט דקה וחדה מאוד.בשלב הבא דרושה פלטת נתיחה מסוג so guard; פלטת ה-so guard מגיעה במספר גוונים של אפור, או שהיא יכולה להיו

dissection-of-oenocytes-from-adult-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

הגורם המגביל בשימוש של...

אחד תסיסנית אומטידיום Dissection והדמיה

הגישה הסטנדרטית כדי להכין את...

הכנת למבוגרים תסיסנית עיניים עבור חתך דק ניתוח מיקרוסקופי

סרטון זה מתאר את האנטומיה הכללית של שחלה דרוזופילה וכולל שיטה לניתוח שחלות לצורך הדמיה חיה או קבועה.

דרוזופילה מלנוגסטר דיסקציה שחלתית: טכניקה להכנת רקמות Ex Vivo

מטרת טכניקה זו היא לאפשר לחוקרים לבצע דיסקציה, צביעה חיסונית והרכבה של דיסקים של עין גולם מדרוזופילה מלנוגסטר בכל גיל.

נתיחה והתקנה<em&gt; דרוזופילה</em&gt; גלמי דיסקי העין

פרוטוקול זה מתאר את הקרע של immunostaining של המבוגרים דרוזופילה melanogaster רקמות המוח. באופן ספציפי, פרוטוקול זה מדגיש את השימוש נוירונים הגוף, קולט אור פטריות דרוזופילה בתור דוגמה עצביים קבוצות משנה יכול לשמש באופן מדויק לחשוף את עקרונות כלליים שבבסיס היבטים רבים של ההתפתחות העצבית.

ניתוח Immunofluorescent מכתים של פטריות הגוף והנפש ומה קולט אור נוירונים במוח למבוגרים דרוזופילה melanogaster

השחלה דרוזופילה הוא מערכת דגם מעולה ללימוד פיתוח גומחת תאי גזע. על פי שיטות ניקוד השחלות זחל ומבוגרים פורסמו, השחלה הגולמי והניתוחים דורשות טכניקות שונות זה לא פורסמו בפירוט. כאן אנחנו חלוקה לרמות פרוטוקול לנתח, מכתים של הרכבה השחלות הגולמי.

חיתוך, צביעה של השחלות הגולמי דרוזופילה

מאמר זה מציג שיטה כירורגית ניקוד דרוזופילה הרשתיות הגולמי יחד עם פרוטוקולים עיבוד רקמה אימונוהיסטוכימיה, ניתוח המערבי של RNA-חילוץ.

דיסקציה של הרשתית הגולמי דרוזופילה אימונוהיסטוכימיה, ניתוח המערבי של RNA בידוד

הציגו כאן הן שיטות מפורטות לחיתוך וליפיד droplet כתמים של oenocytes ב הזחלים Drosophila ילה באמצעות BODIPY 493/503, שומנים בצבעי פלורסנט ספציפי לשומנים.

לחיתוך וליפיד Droplet כתמים של Oenocytes בתוך דרוזופילה הזחלים

כאן, אנו מספקים פרוטוקול דיסקציה הנדרש כדי לצלם בשידור חי את הגונד הזכר העוברי המנוח של דרוזופילה . פרוטוקול זה יאפשר תצפית על תהליכים תאיים דינמיים בתנאים רגילים או לאחר מניפולציה מהונדסת או פרמקולוגית.

דיסקציה והדמיה חיה של דרוזופילה גונד העוברית המאוחרת

כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט לביצוע הדמיה חיה של החלוקה הא-סימטרית של תאי גזע של קו הנבט (GSCs) בנישת השחלות של דרוזופילה. אנו משתמשים בקו טרנסגני המבטא בכל מקום היתוך חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) של חלבון הספקטרוזום Par-1.

הדמיה חיה מורחבת של נישות תאי גזע נקבות Drosophila melanogaster

כאן, אנו מציגים זרימת עבודה מהירה, בעלות נמוכה, עבור הדמיה ברזולוציה גבוהה של עיני דרוזופילה בוגרות כדי לכמת דפוסי דפוס ופגמי גדילה. אנו מתארים את הפרוטוקול שלנו להכנת דגימות על ידי הרכבה נקודתית, רכישת תמונה ברזולוציה גבוהה וניתוח תמונה.

תהליך עבודה מהיר ופשוט לכימות מבני דרוזופילה חיצוניים למבוגרים

למד טכניקת ניתוח לבידוד אנוציטים מזבובי פירות בוגרים Drosophila melanogaster. שיטה זו מאפשרת ניתוח מולקולרי וגנטי מפורט של תאים המייצרים תרכובות הידרוקרבון להגנה מיובוש ותקשורת כימית.

Dissection של Oenocytes מן למבוגרים תסיסנית melanogaster

גלה סרטונים נוספים