Name: 心臓組織工学のためのフィブリンゲルにおける心筋細胞のカプセル化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 18 s
Description: 学ぼう、フィブリンゲルへの新生ラット心筋細胞カプセル化法。心臓組織工学のための細胞分離、ゲル封入、2週間培養、収縮力評価の手法を解説。心筋梗塞治療や心臓発生研究への応用も示す。

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国立心肺血液研究所（賞＃R00HL093358にLDB） - この作品は、国立衛生研究所によってサポートされていました。

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</ol>

利害の衝突は宣言されません。

心筋システムのin vitroモデルにおける一貫性と実行可能な三次元におけるフィブリンゲルの結果の新生児ラット心筋細胞のカプセル化。細胞が捕捉されたとき、彼らは代謝活性と、コンパクト化改造およびネイティブの心臓組織12との一貫性のある細胞外マトリックスを再作成することが可能であるため、フィブリンが望ましい生体材料です。我々は心筋細胞はこの環境で自分自身を整列することを可能にするので、それらの機能は、等方性の組織6に比べてより大きな収縮力で、その結果心筋のより特徴的です。潜在的な治療のアプリケーションでは、それは実行可能性と機能性の両方を促進する物質の中で細胞をカプセル化する必要があります。プロトコルは、3次元の微小環境における心筋細胞の挙動を制御するために、フィブリンネットワークを作成するための効率的かつ正確な手段を示すここで紹介。 いくつかの潜在的な問題は、これらのコンストラクトの作成と培養中に発生する可能性があります。つの潜在的な問題は大幅に構造の機能に影響を与える前に、カプセル化に細胞の生存率の維持、である。努力が分離し、フィブリンゲル内の細胞のカプセル化の間の時間を減らすことによって、分離後の細胞死を制限するためになされるべきである。構文は、厳密なスケジュールで一日おきにメディアを提供する必要があります。さらに、使用されるソリューションのすべてに均一性を確保することが重要です。フィブリノーゲン、トロンビンと細胞の混合物は、異機種環境を生成する場合、ECMを改造する細胞の能力は、機械的に夫婦と契約が潜在的に遮断されていない。エンジニアリング組織の継続性の乱れを防ぐために、構造の注入時の気泡の形成を防止することも重要です。この問題を緩和する一つの方法は、シリンジに構造を作り、ゆっくりと注入する必要以上のゲルを描くです。最後に、一度フィブリンマトリックスが設定されていると24時間培養液中にされている、それはフィブリンゲルの細胞ベースの圧縮を促進するため、リング型の側面から構造を切り離すことが不可欠です。金型の中央に構造を維持すること、ガスと栄養素の交換が容易になります。リングの金型の側面への付着はまた、所望の細胞整列が中断される場合があります。 その意識断頭は国立衛生研究所の両方からのガイドラインの下で承認された方法とアメリカ獣医学協会であるこのプロトコルでは安楽死の方法として使用されている点が重要です。しかし、一部の金融機関は、新生児ラットの断頭続いて麻酔を使用することをお勧めします。それは、摘出した心臓組織/細胞のための低酸素条件下での時間の最小量を保証するため、我々は意識的な斬首を選択している。低酸素の比較的少量では虚血と有意にこのプロトコルの結果に影響を与える可能性のある潜在的に心筋細胞死を、筋細胞につながることができます。

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント</th></tr><tr><td>ナトリウム塩化</td><td>シグマ</td><td> S7653 </td><td> PBS </td></tr><tr><td>カリウム塩化</td><td>シグマ</td><td> P9333 </td><td> PBS </td></tr><tr><td>ナトリウム二塩基性リン酸</td><td>シグマ</td><td> S7907 </td><td> PBS </td></tr><tr><td>一塩基性リン酸カリウム</td><td>シグマ</td><td> P5655 </td><td> PBS </td></tr><tr><td>グルコース</td><td>シグマ</td><td> G5400 </td><td>分離</td></tr><tr><td>止血剤</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 91308〜12 </td><td>分離</td></tr><tr><td>細かいピンセット</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11251〜20 </td><td>分離</td></tr><tr><td>大きなはさみ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 91401〜14 </td><td>分離</td></tr><tr><td>マイクロはさみ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 91501〜09 </td><td>分離</td></tr><tr><td>メスハンドル</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 10008〜13 </td><td>分離</td></tr><tr><td>メス刃</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 08から918 - 5A </td><td>分離</td></tr><tr><td>吸収ベンチunderpad </td><td> VWR </td><td> 56617-014 </td><td>分離</td></tr><tr><td>滅菌ドレープ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> GM42526 </td><td>分離</td></tr><tr><td>オートクレーブバッグ</td><td>フィッシャー</td><td> 01-812-54 </td><td>分離</td></tr><tr><td>ガーゼのパッド</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 13-761-52 </td><td>分離</td></tr><tr><td> betadine </td><td>パーデュー大学の製品</td><td> 67618-150-01 </td><td>分離</td></tr><tr><td>滅菌手袋</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 19から020 </td><td>分離</td></tr><tr><td>無菌トランスファーピペット</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 9962 </td><td>分離</td></tr><tr><td>コラゲナーゼ</td><td>ワージントン</td><td> CLS2 </td><td>分離</td></tr><tr><td>テフロンロッド1 / 4インチ直径</td><td>マクマスター - カー</td><td> 8546K11 </td><td>型の部</td></tr><tr><td>テフロンチューブ1 / 4インチID、1 / 2インチOD </td><td>マクマスター - カー</td><td> 8547K31 </td><td>型の部</td></tr><tr><td>シリコンO -リング1 / 4インチID、1 / 2インチOD </td><td>マクマスター - カー</td><td> 9396K204 </td><td>型の部</td></tr><tr><td>テフロンチューブ1 / 4インチID、5 / 16インチ外径</td><td>マクマスター - カー</td><td> 52355K14 </td><td>型の部</td></tr><tr><td>ケンドールmonojectシリンジ6cc </td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 05-561-41 </td><td>型の部</td></tr><tr><td> BDシリンジ3CC </td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 309585 </td><td>型の部</td></tr><tr><td>ウシフィブリノーゲン</td><td>シグマ</td><td> F8630 </td><td>構築する</td></tr><tr><td>ウシトロンビン</td><td>シグマ</td><td> T7513 </td><td>構築する</td></tr><tr><td> 1 M HEPES </td><td>シグマ</td><td> H0887 </td><td>構築する</td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>シグマ</td><td> S7653 </td><td>構築する</td></tr><tr><td> DMEM </td><td>インビトロジェン</td><td> 10569 </td><td>構築する</td></tr><tr><td>プルロニックF - 127 </td><td>シグマ</td><td> P2443 </td><td>構築する</td></tr><tr><td>塩化カルシウム</td><td>シグマ</td><td> 383147 </td><td>構築する</td></tr><tr><td> 0.2ミクロンフィルター</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> SCGVT05RE </td><td>構築する</td></tr><tr><td> 40ミクロ​​ンのセルストレーナー</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 22-363-547 </td><td>構築する</td></tr><tr><td> 0.45ミクロンのボトルトップフィルター</td><td>コー​​ニング</td><td> 430627 </td><td>構築する</td></tr><tr><td>ガラスプレフィルター</td><td>ミリポア</td><td> AP2007500 </td><td>構築する</td></tr><tr><td> 18G 1 1 / 2インチの長い針</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 14から826 - 5D </td><td>構築する</td></tr><tr><td> 21G 1インチの針</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 14 - 826C </td><td>構築する</td></tr><tr><td> jarファイルを構築する</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 2116 </td><td>構築する</td></tr><tr><td>ペニシリン - ストレプトマイシン</td><td>インビトロジェン</td><td> 15140 </td><td>メディアの</td></tr><tr><td>馬血清</td><td>シグマ</td><td> H1138 </td><td>メディアの</td></tr><tr><td>ウシ胎仔血清</td><td>インビトロジェン</td><td> 16000 </td><td>メディアの</td></tr><tr><td>アミノカプロン酸</td><td>アクロスオーガニック</td><td> 103305000 </td><td>メディアの</td></tr><tr><td>アスコルビン酸</td><td>シグマ</td><td> A5960 </td><td>メディアの</td></tr><tr><td>インスリン</td><td>シグマ</td><td> I9278 </td><td>メディアの</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド、16％ </td><td>電子顕微鏡学</td><td> 15710 </td><td>組織学</td></tr><tr><td>最適な切削温度（OCT） </td><td>テッドペラ</td><td> 2705​​0 </td><td>組織学</td></tr><tr><td> 2 - メチルプタン</td><td>フィッシャー</td><td> 03551〜4 </td><td>組織学</td></tr><tr><td>マウスMYH1/2/4/6一次抗体</td><td>サンタクルスバイオテクノロジー</td><td> SC - 32732 </td><td>組織学</td></tr><tr><td>ウサギコネキシン43の一次抗体</td><td>セルシグナリングテクノロジー</td><td> 3512 </td><td>組織学</td></tr><tr><td> Dylight 549 -結合ロバ抗マウス二次抗体</td><td>ジャクソンイムノ研究所</td><td> 715-505-151 </td><td>組織学</td></tr><tr><td> Dylight 488標識Donke抗ウサギ二次抗体</td><td>ジャクソンイムノ研究所</td><td> 711-485-152 </td><td>組織学</td></tr><tr><td> LIVE / DEADアッセイ</td><td>インビトロジェン</td><td> L - 3224 </td><td>分析</td></tr></tbody></table>

心臓組織工学のためのフィブリンゲルにおける心筋細胞のカプセル化

Encapsulation of Cardiomyocytes in a Fibrin Hydrogel for Cardiac Tissue Engineering 

三次元ハイドロゲルの環境で培養する細胞は組織工学のための構造を開発するだけでなく、in vitroで種々の培養条件下で細胞応答を研究するための重要なテクニックです。三次元環境では、より密接に細胞が原因で、すべての次元1の機械的および化学的刺激のアプリケーションに、in vivoで観察するものを模倣している。三次元のヒドロゲルは、どちらかのようなPEG - DA 2およびPLGA 3またはそのようなコラーゲン4、ヒアルロン酸5またはフィブリン6,7のような天然のタンパク質の数などの合成高分子から行うことができます。フィブリン、天然由来の血液凝固タンパク質、から作成されたハイドロゲルは、身体の自然な創傷治癒のプロセス8の一部であるメッシュを形成するために重合することができます。フィブリンは、組織工学のために理想的な一時的な足場作り、細胞分解性と潜在的に自家9です。 ここでは、3つの日齢の仔ラットと組織工学のためのフィブリンハイドロゲルの構造でカプセル化するための細胞の調製から詳細に新生児心筋細胞の単離を説明します。新生児の心筋細胞は、心臓組織の形成と工学4のin vitro試験で使用される一般的な細胞源です。フィブリンゲルは、酵素トロンビンと混合フィブリノゲンによって作成されます。トロンビンは、他のモノマー10との相互作用の結合部位を明らかに、フィブリノーゲンからfibrinopeptides FPAとFPBを切断する。これらの相互作用は、単量体は、ヒドロゲルのメッシュを形成する繊維に自己集合させる。この酵素反応のタイミングがフィブリノゲンにトロンビンの比、またはトロンビンへのカルシウムの比率を変えることによって調整できるので、一つは射出成形金型は、異なる形状11,12の数で構築できます。さらに我々は文化は13ゲルを制約する方法により、結果として組織のアライメントを生成することができます。 培養静的条件下での二週間のための工学心臓組織の構成要素の後に、心臓の細胞が構造を改造し始めていると電気的ペーシングの条件6歳未満の収縮力を生成することができます。このプロトコルの一部として、我々はまた、機能的な心筋によって生成されたアクティブな力の分析、最終的な細胞の生存を決定するための電気刺激だけでなく、方法によって構築する（ライブデッド含む培養期間後に心筋の設計組織を分析するための方法を説明します。アッセイ）と収縮（ミオシン重鎖またはMHC）と心筋細胞間の細胞結合（コネキシン43またはCx43）のための重要な典型的なタンパク質の発現と形態を調べるために免疫組織染色。

我々は、新生児の心筋細胞と組織工学のためのフィブリンハイドロゲルの構造でカプセル化するための細胞の調製の分離を説明します。我々は、電気刺激と細胞の生存および免疫組織染色により発生する活性力を含む培養期間後に心筋培養組織を分析するための方法を説明します。

3次元ハイドロゲル環境で細胞を培養することは、組織工学用の構築物を開発するだけでなく、……を研究する上でも重要な手法である。

この手順の全体的な目的は、心臓組織工学のために、新生ラット心筋細胞をFIハイドロゲルで封入することです。まず、生後2〜3日の新生ラットから心臓を分離し、次に、その心臓をコラゲナーゼで消化することでこれを達成します。心筋細胞を細胞外マトリックスから分離させるため、心筋細胞をフィブリンハイドロゲルに封入します。最後に、構築物を2週間培養します。最終的に、これらの構築物は電気刺激に応じて約1.3 milli Newtonsの収縮力を発生させる能力を持つことが結果から示されました。さらに、構築物の配向構造は、心筋細胞タンパク質の組織学的染色によって観察することができます。作製された心筋構築物は、瘢痕化した組織を作製組織で修復または置換することを可能にし、それによって損傷や疾患後の心機能を改善させることで、心筋梗塞の潜在的な治療法となり得ます。これらの構築物は、さまざまな刺激が収縮力や正常および病態生理学的な心臓の発達に及ぼす影響を研究するための、有用なin vitroモデルシステムとして活用できます。各担当者の培地の調製と手術器具の滅菌を完了した後、フードの作業台に吸水性のベンチパッドを敷き、その上を滅菌ドレープで覆います。滅菌済みの手術器具と4×4インチのガーゼパッドを滅菌ドレープの上に置きます。器具に触れないようにして、滅菌済みの20番メス刃を開封し、ドレープの上に置きます。仔マウスを断頭した後、ベタジンに浸したガーゼで胸部をスワブします。肩甲骨を互いに寄せてつねることで、仔マウスを固定します。部分胸腔切開を行い心臓を露出させ、肩甲骨にかける圧力を強めることで、心臓を肋骨の外へ押し出します。肩甲骨の解剖では、メスを心臓の後方に滑らせて大血管を切断し、心臓を取り出します。心臓をPBSグルコースを含むペトリ皿に入れ、氷上で保持します。心臓を単離した後、氷冷したPBSグルコースで洗浄し、残留した血液や結合組織を除去します。各心臓の上部1/3を取り除き、下部2/3を残します。心室組織の大部分のみを単離し、氷冷したPBSグルコースを含む新しいペトリ皿に組織を移します。滅菌済みのマイクロ鋏とピンセットを用いて、心臓を約1 cubic millimeterの大きさに注意深く細切します。組織を50 mL遠心チューブに移し、バッファーを10 mL残してすべて取り除きます。コラゲナーゼ溶液を7 mL加えます。コラゲナーゼと組織の混合物を37 °Cで7分間振盪します。ピペットで10回ほど穏やかに混ぜ、組織片を分散させます。組織片を沈殿させた後、上清を吸引して廃棄します。組織片に7 mLのコラゲナーゼを加え、さらに7分間消化させます。残りの各ステップにおいて、ピペットで静かに10回ピペッティングし、組織片を分散させます。組織片が沈殿した後、上清を吸い出して回収します。別の50 milliliterコニカルチューブに、組織片と7 milliliterのコラゲナーゼを加え、さらに7分間消化させます。消化後の上清を回収するたびに、それぞれ異なるセロロジカルピペットを用いて、各上清チューブに10 milliliterの停止溶液を加えます。フィブリンゲルの作製準備については、プロトコルの記述部分を参照してください。あらかじめ作製したマンドレルを6 ccシリンジのケーシングに挿入し、3 ccシリンジをプランジャーとして使用して、Oリングとテフロンワッシャーの間を密閉します。1 mLのフィブリンゲルを作製するには、コニカルチューブに112 µLのフィブリノゲンストック液と558 µLの20 mM HEPESを加え、F溶液を作成します。別のコニカルチューブに0.9%生理食塩水中のバッファーを準備します。トロンビンストック液17 µLと2倍濃度カルシウム溶液1.3 µLを135 µLのDMEMに加えることで、T溶液を作成します。3つ目のコニカルチューブで細胞を遠心分離し、細胞濃度を29.4 million cells/mL（または構築物における最終目的細胞濃度の6倍）になるように再懸濁します。一般的に、この手法を初めて行う方は、コンストラクトの作製ステップに苦労します。フィブリノゲン溶液とトロンビン溶液を混合すると、フィブリンの重合が急速に起こります。そのため、注入時にモールドへの気泡の混入を防ぎつつ、均質な溶液を確保できるよう、迅速に作業を行う必要があります。フィブリンゲル構造体をキャストする準備ができたら、18ゲージの1.5インチ針を装着した1 mLシリンジを用意します。また、21ゲージの1インチ針も用意しておきます。1 mLのフィブリンゲル溶液を作成するには、50 mL遠心チューブに667 µLのF溶液を加え、続いて167 µLの細胞懸濁液を加えます。最後に、T溶液を167 µL加えます。気泡が入らないように注意して、混合液をピペッティングしてください。この時点で反応が開始されるため、速やかにコンストラクトの注入を行ってください。シリンジと18ゲージ針を用いて、フィブリン溶液を吸い上げます。針の中に気泡が入らないよう、シリンジを逆さまにしないように注意してください。18ゲージ針を21ゲージ針に交換します。シリンジを軽く叩き、気泡を追い出します。次に、テフロンOリングの溝に沿って、ストッパーに囲まれた金型の間にシリンジを挿入し、溶液を金型内に注入します。金型を傾けて、完全に充填されていることを確認してください。次に、残りの型に充填します。型を3つずつパラフィルムで包み、37 °Cのインキュベーターまたはオーブンに入れます。フィブリンが完全に重合するまで、ゲルを20分間インキュベートします。各培養ジャーに、コンストラクト1つあたり21 millilitersの心筋コンストラクト培地を満たします。滅菌済みの3 cc シリンジケーシングをプランジャーとして使用し、コンストラクトが付着したマンドレルをDMEMが入った大きなペトリ皿に押し出します。その後、コンストラクトをサンプルジャーに移します。ジャーを37 °Cで2週間インキュベートします。フィブリン構造クランプの解析を開始するには、スティミュレーターからのリード線にあるアリゲータークリップを、バス内の電極のワイヤーに接続します。データ収集ボード、パルスジェネレーター、および力変換器の電源を入れます。フォーストランスデューサを5G設定に合わせ、ゼロ点調整を行います。フォーストランスデューサからのデータを表示および保存するカスタムのLabVIEWプログラムを開きます。データフォルダ内にサンプルごとの新しい空のテキストファイルを作成します。ピンセットを使用して、コンストラクトリングをテフロンサポートからゆっくりと滑らせて外し、フォース測定システムの固定金属ポストに設置することで、コンストラクトをマンドリルサポートから取り出します。培地バス。ピンセットを使用して、フォーストランスデューサーのポストの周囲で構築物を押し上げます。構築物のもう一方の端をトランスデューサーアームに掛け、トランスデューサーに値が表示されるまで締め付けます。心臓刺激装置で1.0 Gの負荷をかけます。パルス電圧を20 volts、持続時間を6 milliseconds、周波数を1 hertzに設定します。出力ON/OFFボタンを押して電気的ペーシングを開始します。波形が規則的になるまで記録を開始します。MATLABで波形を解析し、収縮速度および弛緩速度を決定します。心筋細胞フィブリン構築物は、当初、モールドの全幅を覆っています。2週間の培養後、構築物は初期幅の約5分の1に収縮します。この構築物を電気的にペーシングすることで、ここに示すような収縮力データが得られます。収縮力は約1.3 millinewtonsになると予想されます。構築物の細胞生存率は、構築物内への酸素拡散の制限があるため、培地と接している構築物表面から細胞がどの程度離れているかに依存します。共焦点顕微鏡を用いた観察では、構築物の表面で高い細胞生存率が認められました。構築物の配向構造は、ミオシン重鎖を赤色で、心筋細胞間の細胞結合に必要なConnexion 43を緑色で染色することによって観察されます。習熟後、プロトコル全体にかかる時間は約5時間です。分離工程には約3時間、コンストラクト作製工程には約2時間かかります。この手順を行う際は、フィブリンネットワークに気泡が混入するのを防ぐため、常に針先を下に向けて保持することが重要です。さらに、金型を傾けることで、注入中に常に針穴が最高点に保たれ、金型の鋳造部分にフィブリン溶液が完全に充填されるようになります。このビデオを視聴することで、まず新生ラットから心筋細胞を単離し、次に組み立てが容易な円筒形金型にフィブリン溶液を射出成形することで、心筋細胞をリング状のフィブリンハイドロゲルに封入する方法について十分に理解できるはずです。

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

我々は、合成ハイドロゲル内の細胞の3次元（3D）カプセル化するためのプロトコルを提示する。カプセル化手順は、次の2つの一般的に使用される架橋の方法（マイケル型の加算と光 -...

組織工学のための3Dハイドロゲルの細胞のカプセル化

脱細胞組織から注射マトリックスのゲルを調製し、ラット心筋にそれを注入するための方法...

心筋組織工学のための生物由来注射用材料の作製

このプロトコルは、その周囲の細胞外マトリックスからヒントを得るために、複数の表現型に分化するよう誘導される幹細胞の固有の能力を活用に焦点を当てています。このメソッドの原稿は、同時に脂肪由来幹細胞を共区別するために、PEG-フィブリンおよびコラーゲンから成る二層ハイドロゲルを利用したモデルでは、我々の説明とその特性を拡張する...

ASCの分化を制御するための二層ゲルをエンジニアリング

このモデルシステムは、非破壊における内因性コラーゲン（再）組織実時間を研究するために使用することができる筋線維芽細胞にポピュレートフィブリンゲルから始まる。モデル系は、それが別のセルソース、媒体添加剤と共に使用することができるように、非常に可変であり、特定のニーズに容易に適合させることができる。...

エンジニアリングフィブリンベースの組織の筋線維芽細胞と制約の適用からの構築と細胞とコラーゲン（再）組織を誘導するためにひずみ

げっ歯類モデルでLAD結紮により誘導される心筋梗塞を治療するためbiograftの移植は、従来、2つの心臓切開手術を必要としてきた。死亡率を減少させ、細胞に関連する、固体およびゼラチン状バイオマトリックスを固定するための最適な条件を提供するために、最小侵襲性処置が開発されてきた。...

ラットにおける心不全のための細胞ベースの治療：心筋梗塞および細胞およびバイオマトリックスの心外膜移植のためにダブル開胸

このプロトコルは、心筋梗塞の幹細胞治療のための細胞生着不良の制限を、ハイドロゲルシステムとフィブリンベースの接着剤の使用を通じて緩和することを目的としています。このアプローチにより、梗塞後の細胞間接触を維持でき、損傷部位における有益な薬剤の治療可能性が高まります。...

ヒドロゲルは、構築し、マウス心筋梗塞モデルにおける治療薬を送達するためのフィブリンベースの接着剤のアプローチ。

このプロトコルでは、その細胞外マトリックス成分を維持しながらひと心筋の完全な decellularization...

ひと心筋細胞外マトリックスの in VitroとIn Vivo応用のハイドロゲルを自己組織化に向けての処理

ここハイドロゲルを用いた複雑な形状設計組織を生成するために使用できるカスタム...

カスタム設計されたレーザー エッチングのマスターから培養金型

幹細胞ベースの治療は、心筋梗塞後に負傷した心臓組織を修復するための効率的な戦略として浮上している。酵素的に架橋できるゼラチンハイドロゲルを用いた幹細胞移植に最適なインビボアプリケーションを提供します。...

マウスモデルにおける心筋梗塞後のMSC負荷注入性ヒドロゲルの筋内移植

このプロトコルの目的は、生体整血、コラーゲンベースのヒドロゲル、心臓組織工学、薬物スクリーニング、および疾患モデリングにおける応用のために、心臓線維芽細胞(CF)と共培養された幹細胞由来心筋細胞で構成される、高度に整列したヒト心臓組織の三次元(3D)微小流体モデルの開発を説明し、実証することである。...

マイクロ流体プラットフォーム内での3D組織化ヒト心臓組織の開発

メルトエレクトロスピニングライティング(MEW)、ポリカプロラクトン(PCL)スキャフォールド、フィブリンハイドロゲルをhiPSC由来の心筋細胞および線維芽細胞と組み合わせた3D心筋組織を作製するための再現性の高い方法を紹介します。この手法は、スキャフォールドアーキテクチャを正確に制御し、前臨床薬物試験や心疾患モデリングに適用できます。...

ポリカプロラクトン足場およびhiPSC由来心細胞の溶融エレクトロスピニングライティングを用いたヒト心筋組織作製

学ぼう、フィブリンゲルへの新生ラット心筋細胞カプセル化法。心臓組織工学のための細胞分離、ゲル封入、2週間培養、収縮力評価の手法を解説。心筋梗塞治療や心臓発生研究への応用も示す。

心臓組織工学のためのフィブリンゲルにおける心筋細胞のカプセル化

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