Name: Herbivore 유도 블루베리 휘발성 물질과 내부 식물 신호 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 28 s
Description: 학습하세요 블루베리 휘발성 물질 수집을 위한 푸시-풀 방법과 초식동물 유도 반응 분석 기법을. 가스크로마토그래피를 활용한 식물 내부 신호 전달 메커니즘 연구에 적용할 수 있습니다.

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저자는 기술 지원 로버트 Holdcraft 감사드립니다. 이 연구는 USDA CSREES 특별 권한 부여 (2009-34155-19957) 및 해치 자금 (NJ08192)에 의해 부분적으로 투자되었다.

1. 휘발성 물질의 유도 지역 : herbivore 손상 <ol><li> 블루베리 식물의 두 가지가 잡아 늘인 폴리에스터 슬리브로 체포됩니다. </li><li> 여섯 집시 나방의 유충은 (2 차 -3 층 instars) 가방 안에 사전 휘발성 컬렉션에 2 일간 식물에 피드를 사용할 수 있습니다. 제어 식물은 어떤 유충을받지 않습니다. </li><li> 휘발성 배출량은 3 일 (그림 1)에서 (프로토콜 # 7) 아래에 설명된대로 수집하고 있습니다. 폴리에스터 슬리브 탈출에서 곤충을 방지하기 위해 식물에 남아 있습니다. </li></ol> 2. 휘발성 물질의 유도 지역 : 기계적 손상 <ol><li> 식물 기계적 손상이 집시 나방에 의해 제거 잎 영역의 금액을 모방하기 위해 구멍을 펀칭 자국으로합니다. </li><li> 공장마다 다섯 잎은 일 1과 2의 끝에 기지와 나뭇잎의 상단 부분에 위치한이 7 mm 구멍이 부상하고 있습니다. 제어 치료 기계적 손상을받지 않습니다. </li><li></ol> 3. 휘발성 물질의 유도 지역 : MeJA <ol><li> 블루베리 식물은 0.1 % 십대 초반 - 2​​0 솔루션 MeJA 중 하나가 1 또는 1.5 MM 솔루션의 10 ML로 취급됩니다. </li><li> MeJA는 2 온스 스프레이 병을 사용하여 적용됩니다. 제어 식물은 0.1 % 십대 초반 - 2​​0 용액 10 ML과 함께 분무 있습니다. </li><li> 식물은 16시 시간에 처리하고, 17 cm 직경 휘발성 컬렉션하기 전에 35 cm 높은 플렉시 챔버 내부에 15 시간을위한 온실에 보관됩니다. </li><li> 아래에 설명된대로 휘발성 배출을 수집하고 있습니다. </li></ol> 4. 휘발성 물질의 체계적 유도 : 내부 신호 <ol><li> 블루베리 식물의 낮은 지점은 스펀 폴리 에스테르 슬리브와 함께 체포와 가방 내부 육 (2 차 -3 층 instars) 집시 나방의 유충을 배치하여 손상되었습니다. </li><li> 손상된 지점은 휘발성 수집 챔버 밖에서 남아있는 동안 branche손상된 지점 위의들 (그림 2) 챔버 내부에 배치됩니다. </li><li> 쐐기 벌레는 2 일 동안 바닥 지점에 먹이를 사용할 수 있습니다. </li><li> 일 3 시작, 휘발성 물질이 손상된 식물의 손상 부분에서 수집하고 있습니다. </li><li> 휘발성 물질 7 연속 일 동안 수집하고 있습니다. 제어 식물은 유사한 방식으로 취급되지만 herbivore 손상을받지 못했습니다. </li></ol> 5. 혈관 연결 <ol><li> 이 연구는 블루베리 공장 내의 서로 다른 지점 사이에 혈관 연결의 정도를 결정. </li><li> 공장에서 낮은 지점의 최종 부분으로 Orians 외에 설명된 Rhodamine - B (시그마 - 올드 리치) 염색 (0.25 % W / V), 6 ML 솔루션을 포함하는 꽃의 물 선택을 지원하기 위해 절단됩니다. 11 </li><li> 식물을 통해 염료의 운동은 7 일 동안 매일 모니터링합니다. </li><li> 7 일 후, 붉은 얼룩의 크기는 시각 식물의 다른 위치에서 평가됩니다. </li></ol> 6. HIPVs에 노출 : 외부 신호 <ol><li> 공장 내에서 가지는 두 인접한 지점에서 HIPVs에 노출 또는 HIPVs에 전혀 노출을받지 않습니다. </li><li> HIPVs에 지점을 노출 한 낮은 지점은 폴리 에스테르 슬리브 여섯 (2 차 -3 층 instars) 집시 나방의 유충이 봉지 (그림 3) 내부 배치와 함께 체포됩니다. </li><li> 공장은 위에서 설명한 것과 유사한 플렉시 챔버 내부에 갇힌입니다. 곤충은 인접 가지는 유도 방출 지점에서 휘발성 물질에 노출되는 등, 2 일간 식물에 피드를 사용할 수 있습니다. </li><li> 노출 후 (3 일), 노출된 지점은 곤충 부상에 지점 밖으로 (그림 2에서 볼 수)두고, 휘발성 수집 챔버 내부에 배치됩니다. </li><li> HIPV 노출 가지의 휘발성 물질은 아래에 설명된대로 수집하고 있으며, 낮은 지점에서 소비 잎 영역의 크기는 귀공자 이미지 Softwa를 사용하여 측정다시. </li></ol> 7. HIPVs으로 노출 : 마중물 <ol><li> 공장 HIPV 노출 후 "준비하는"여부를 확인하려면, 식물은 프로토콜 # 5에서와 같이 취급됩니다. </li><li> 식물 중 절반은 유도 인접 지점에서 HIPVs에 노출되며, 나머지 절반은 손상되지 않은 지점에 노출되는 동안. </li><li> 3 일, 맨투맨으로 초기 2 기 - instar의 집시 나방의 유충은 각 공장에 배치하고 아래에 설명된대로 휘발성 물질은 (그림 4) 수집하고 있습니다. </li><li> 휘발성 컬렉션 후, 처음, 집시 나방의 유충뿐만 아니라 3 일에 손상되는 사람에 의해 손상된 잎을 excised 있으며, 잎 지역 소비의 금액이 측정됩니다. </li></ol> 8. 휘발성 물질의 수집 <ol><li> HIPV 배출은 푸시풀 시스템을 사용하여 온실에서 샘플입니다. herbivore 손상 치료에 유충을 포함하여 화분에 심은 식물의 위 지상 부분 (줄기, 가지, 그리고 단풍이), 4 L vola 내부에 배치됩니다타일​​ 수집 챔버. 2 조각의 단두대는 식물의 기반을 지원합니다. 정화 공기 2 L / 분 속도로 각 챔버의 상단에 들어갑니다. </li><li> 휘발성 물질은 Alltech 슈퍼 - Q 1 L / 분 속도로 실에서 공기를 당겨 흡착제의 30 MG 가득 트랩으로 수집하고 있습니다. </li><li> 휘발성 수집 장치는 네 가지 식물 (그림 1)에서 휘발성 물질의 동시 모음에 대한 허용, 넷 챔버로 구성되어 있습니다. </li><li> 컬렉션은 오전 9 시부터 17시 H.으로 낮에는 실시 </li><li> 수집 후, 식물의 모든 잎은 수확되며, C ° 60 건조 오븐, 그리고 무게, 그리고 여왕님 수돗물과 70 % 에탄올로 씻어서 있습니다. </li></ol> 9. 휘발성 물질의 분석 <ol><li> 슈퍼 - Q 트랩에서 수집한 휘발성 물질은 dichloromethane (150 μl) 400 N - 옥탄의 NG 내부 표준과 함께 추가됩니다 eluted 있습니다. </li><li> 화합물의 분리 및 부량은 휴렛 팩커드 6890 시리즈 이루어집니다불꽃 이온화 검출기 (FID) 및 장착된 기체 크로마토 그래프 (GC) (그림 5), 애질런트 HP - 1 컬럼 (10 MX 0.53 mm X 2.65 μm의) 및 캐리어 가스로 사람을 사용 (일정한 흐름 = 5 ML / 분 , 속도 = 39cm / 초). 온도 프로그램이 40에서 시작 ° C 14에서 증가, 1 분 유지 ° 180 C / 분 ° C (2 분) 후, 40 ° 200 C / 분 ° C와 200 ° C에서 보관 2 분 . </li><li> 화합물의 임시 신분증은 캐리어 가스로 Supelco MDN - 5 열 (30 MX 0.32 mm X 0.25 μm의)을 갖춘 Finnigan 매트 8,230 질량 분석기 (MS)에 결합 Varian 3400 GC,과 그가 함께 수행됩니다. MS는 250에서 전자 이온화 (조회) 및 총 이온 크로마토 그램 (TIC) 모드에서 운영 ° C (소스 온도). 이 프로그램은 35 ° C (1 분), ° C / 분, 170 ° C, 15 ° 그리고 280 C / 분 ° C. 4 증가에서 시작 </li><li> 화합물은 미정 NIST 라이브러리와 B의 기능과 스펙트럼 데이터의 비교에 의해 식별됩니다Y GC 보존 지수와 상용 화합물의 그 자신의 유지 시간을 비교하여. </li></ol> 10. 대표 결과 : 스물 둘 휘발성 물질은 블루베리 잎 (그림 6)에서 식별되었습니다. 그림 7은 손상되지 않은 블루베리 잎의 대표 크로마토 그래프를 보여줍 집시 나방에 의해 먹이에 의해 손상을 떠납니다. 집시 나방의 유충에 의해 기계적 손상과 수유 컨트롤 (그림 8)에 비해 블루베리 나뭇잎에서 로컬 휘발성 물질의 배출량을 증가시켰습니다. 애벌레의 먹이에 비해 MeJA 처리는 집시 나방 (그림 9)에 의해 유도된 17 화합물 밖으로 11 유도. 칠일 초기 먹이 손상 (즉, 내부 신호 부족) (그림 10) 이후 집시 나방 - 손상 식물의 잎 손상에서 휘발성 물질의 체계 유도의 증거는, 그러나,이 없었다. 또한, 일주일 뒤에, 매우 움직임을 느리게빨간 염료의 ment는 블루베리 식물의 지점 (그림 11) 사이에서 관찰되었다. 높은 혈관 연결은 단일 지점 사이 잎 사이가 발생했습니다. 그러나, 두 수직 촬영 이내에 정렬된 지점, 그리고 촬영의 반대편에서 두 가지 사이의 낮은 연결 사이 중급 - 투 - 낮은 연결이있었습니다. HIPVs (그림 12)에 노출되지 않은 비교 HIPVs에 노출 지점에서 방출되는 휘발성 물질의 양의 차이가 없었다. 그러나, HIPVs은 블루베리의 외부 방어 신호로 작동. 나뭇잎을 먹이 집시 나방의 유충은 이전 unexposed 제어 단풍 (그림 13)에서 그 공급했던 것보다 71% 적은 잎 자료를 소비 HIPVs에 노출. 또한, HIPV 노출 지점에서 소비 잎 영역의 금액 당 방출 휘발성 물질의 금액 표시, unexposed 가지 (그림 14)에 비해 4 배 높은 것을 HIPV - 예에서 출발 포즈를 가지는 herbivory (즉, 그들이 준비하는 줄)에 더 반응했다. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 푸시풀 시스템은 블루베리 식물의 휘발성 물질을 수집하는 데 사용됩니다. 식물은 유리 챔버 내부에 배치하고 깨끗한 공기는 그들을 통해 전달됩니다. 흡착제 자료를 포함하는 필터는 공장에서 배출 트랩 휘발성 물질 각 챔버의 측면에 붙어 있 었지. 진공은 필터를 통해 챔버 내부의 공기를 끌어하는 데 사용됩니다. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 블루베리 식물의 체계적 휘발성 반응을 연구하기 위해, 낮은 블루베리 가지는 중 집시 나방의 유충 (오른쪽 챔버) 또는 왼쪽 손상 (왼쪽 챔버)에 의해 손상되었다. 이일 (3 일)를 후, 손상 및 손상되지 않은 식물에서 피해가 상위 지점에서 휘발성 물질이 수집되었다. ontent "&gt; <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 3"> 그림 3. 손상되지 않은 지점에서 낙엽이 손상된 지점에서 HIPVs에 응답할 수 있는지 여부를 테스트하려면, 난 블루베리 식물의 각 지점 중 하나를 체포. 나는 그 식물의 절반의 가방 내부 집시 나방의 유충을 배치. 내 안에서 가방의 외부로 휘발성 물질의 움직임을 허용 사용되는 가방. 식물은 HIPVs에 손상 지점을 폭로 플렉시 챔버 내부에 배치했다. 휘발성 물질은 다음 노출 지점에서 수집되었다. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig4.jpg" alt="그림 4" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 4"> 그림 4. 손상되지 않은 지점에서 나뭇잎이 HIPVs에 노출 후 "준비하는"수 있는지 여부를 테스트하려면 실험은 그림 3에 설명되어 있지만 집시 나방의 유충은 각 휘발성 수집 챔버 내부 HIPV 노출과 unexposed 지점에 위치 것처럼 반복했다. G "고도는 ="그림 5 "/&gt; 그림 5. 휘발성 컬렉션 후, 샘플 블루베리 식물에서 방출되는 휘발성 물질을 확인하고 수치로 기체 크로마토 그래프 (GC)에 주입하고 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig6.jpg" alt="그림 6" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 6"> 그림 6. 적어도 22 화합물은 블루베리 잎에서 방출됩니다. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig7.jpg" alt="그림 7" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 7"> 그림 7. 손상 블루베리에서 일반 chromatographs은 나뭇잎과 집시 나방의 유충에 의해 피해를 떠납니다. 휘발성 물질은 손상되지 않은 블루베리 잎에서 매우 낮은 금액에 방출하고 있습니다. 하지만, 단풍이 집시 나방의 유충에 의해 손상된 경우, 휘발성 물질의 배출이 급격히 증가했습니다. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig8.jpg" alt="그림 8" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 8"> 그림 8. 그래프 손상 나뭇잎, M에서 방출되는 휘발성 물질 22 각각의 금액을 보여줍니다나뭇잎 echanically - 손상, 그리고 집시 나방의 유충에 의해 피해를 떠납니다. 쐐기 벌레에 의해 제거 잎 영역의 금액을 모방하는 인공 손상 블루베리 잎에서 휘발성 배출을 증가했지만 반응은 집시 나방의 먹이로 나뭇잎의 휘발성 응답과는 다른되었습니다. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig9.jpg" alt="그림 9" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 9"> 그림 9. JA 경로는 블루베리 잎에서 휘발성 방출을 조절 여부를 테스트했습니다. 식물은 MeJA 다양한 양의와 함께 분무되었습니다. 나는 exogenously - 적용 MeJA의 증가 농도는 블루베리 잎에서 휘발성 물질의 배출을 증가 것으로 나타났습니다. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig10.jpg" alt="그림 10" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 10"> 그림 10. 그래프 컨트롤 블루베리 지점에서와 집시 나방 손상 식물 (전신 반응)에서 손상되지 않은 지점에서 방출되는 휘발성 물질의 총 금액을 보여줍니다. 휘발성 물질이 위해 수집되었습니다7 연속 일 할거야​​. 나는 식물의 낮은 지점에 초기 손상 후에도 휘발성 물질 칠일에 대한 체계적 유도를 찾을 수 없습니다. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig11.jpg" alt="그림 11" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 11"> 그림 11. 난 블루베리 식물 내에 지점 간의 연결 혈관에 노출된 정도를 확인 rhodamine - B (적색 염료)를 사용합니다. 그 약 발견했습니다. 80%, 20 %, 5 %와 염료를 포함하는 지점에서 나뭇잎 0 %, 직접 염료, 염료를 포함하는 지점에 걸쳐 지점, 그리고 블루베리 공장 내에서 다른 촬영에 위치한 지점을 포함하는 지점 위에 가지는 각각 있었다 완벽하게 색소로 얼룩진. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig12.jpg" alt="그림 12" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 12"> 그림 12. 그래프 HIPVs와 unexposed 지점에 노출 지점에서 방출되는 휘발성 물질의 양을 보여줍니다. 나는 HIPVs에 노출이 울다에서 휘발성 배출에 영향을 미치지 않았 발견손상 블루베리 가지를 재미. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig13.jpg" alt="그림 13" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 13"> 그림 13. 그래프 HIPVs와 unexposed 지점에 노출 블루베리 지점에서 집시 나방의 유충에 의해 먹이의 양을 보여줍니다. HIPV 노출 가지의 유충은 unexposed 지점에 그에 비해 단풍 적은 금액을 소비. <img src="/files/ftp_upload/3440/3440fig14.jpg" alt="그림 14" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 14"> 그림 14. 전 소비 영역 당 방출 속도를 계산, 나는 HIPV 노출 지점이 증가 휘발성 응답 블루베리 가지의 나뭇잎을 준비하는 HIPVs 해당 노출을 나타내는 unexposed 가지와 비교 휘발성 물질의 방출 속도를 증가했다는 사실을 발견했습니다.

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푸시풀 휘발성 수집 장치는 식물 휘발성 물질의 헤드 스페이스 콜렉션을위한 표준 방법을 나타냅니다 여기서 설명했다. 이 장치는 집시 나방의 유충에 의해 herbivory에 블루베리 나뭇잎의 휘발성 응답을 결정하는 데 사용하며 나를 내부 식물 신호에 HIPVs의 역할에 대한 새로운 증거를 제공하기 위해 허용했다. 결과는 애벌레의 먹이 exogenously - 적용 MeJA를 보여 여기에 제시하고, 기계 지을만한 상처가 다르게 불구하고, 손상의 사이트에서 휘발성 방출을 증가했다. 이러한 결과는 JA의 통로가 블루베리에 HIPVs의 유도에 중요한 역할을 나타냅니다. HIPV 노출은 휘발성 배출을 유발하지 않았다. 그러나, HIPV 노출 가지는 집시 나방의 먹이로 증가 휘발성 응답을 준비하는있었습니다. herbivores의 부재에서 휘발성 배출의 증가 HIPVs에 응답하는 것은 생태 부과될뿐만 아니라 생리 왜냐하면 수TS, HIPVs...

<table border="1"><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 휘발성 수집 챔버 </td><td> 분석 연구 시스템즈 </td><td> VCC - G6X12DT - 1P </td><td> 게인스빌, 플로리다 </td></tr><tr><td> 공기 압축기, 20 여자, 오일 무료, 2 HP </td><td> 서쪽으로 </td><td> 3JR71 </td><td> Grainger 주식 판매 </td></tr><tr><td> 공기 전달 시스템 </td><td> 분석 연구 시스템즈 </td><td> VCS - ADS - 4AFM4C </td><td> 게인스빌, 플로리다 </td></tr><tr><td> 공기 수집 시스템 </td><td> 분석 연구 시스템즈 </td><td> VCS - MVCS - 4CX1P </td><td> 게인스빌, 플로리다 </td></tr><tr><td> 진공 펌프 100 - 150V, ¼ HP </td><td> Gast 제조 주식 회사 </td><td> <a href="http://www.grainger.com/Grainger/GAST-Vacuum-Pump-4F740">4F740</a> </td><td> Grainger 주식 판매 </td></tr><tr><td> 메틸 jasmonate </td><td> 시그마 - 올드 리치 &lt;/ TD&gt; <td> J2500 </td><td> 세인트 루이스, 미주리 </td></tr><tr><td> 십대 초반 - 2​​0 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> 93,773 </td><td> 세인트 루이스, 미주리 </td></tr><tr><td> Rhodamine - B </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td></td><td> 세인트 루이스, 미주리 </td></tr><tr><td> 플라스틱 스프레이 병, 이온스 </td><td> Setco 주식 회사 </td><td></td><td> Cranbury, NJ </td></tr><tr><td> 스펀 폴리 에스테르 소매 </td><td> Rockingham 기회 주식 회사 </td><td></td><td> Reidsville, NC </td></tr><tr><td> 슈퍼 - Q 휘발성 수집 트랩 </td><td> 분석 연구 시스템즈 </td><td> VCT-1/4X3-SPQ </td><td> 게인스빌, 플로리다 </td></tr><tr><td> 귀공자 이미지 소프트웨어 </td><td> 귀공자 주식 회사 </td><td></td><td> 프레더릭, MD </td></tr><tr><td> Dichloromethane </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> 270,997 </td><td> 세인트 루이스, 미주리 </td></tr><tr><td> 기체 크로마토 그래프 HP 6890 </td><td> 휴렛 팩커드 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 기체 크로마토 그래프 Varian 3400 </td><td> Varian </td><tD&gt; </td><td></td></tr><tr><td> N - 옥탄 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> 296,988 </td><td> 세인트 루이스, 미주리 </td></tr><tr><td> 질량 분석계 매트 8230 </td><td> Finnigan </td><td></td><td> 산호세, 캘리포니아 </td></tr><tr><td> HP - 1 GC 칼럼 </td><td> 애질런트 테크놀로지 </td><td></td><td> 팔로 알토, CA </td></tr><tr><td> MDN - 5 GC 컬럼 </td><td> Supelco 주식 회사 </td><td></td><td> Bellefonte, PA </td></tr></table>

herbivore 유도 블루베리 휘발성 물질과 내부 식물 신호

Herbivore-induced Blueberry Volatiles and Intra-plant Signaling

Herbivore 유도된 식물의 휘발성 물질 (HIPVs)은 일반적으로 herbivore 공격 1,2 후 식물에서 방출됩니다. 이러한 HIPVs은 주로 방어 식물 호르몬 jasmonic 산 (JA) 및 휘발성 메틸 유도체 jasmonate (MeJA) 3,4,5에 의해 규제됩니다. 지난 3 수십 연구자 이상 HIPVs이 격퇴하거나 유치 herbivores를 herbivores의 천적을 확보하고 경우에 그들은 이전 herbivore의 공격을 유발하거나 주요 공장 방어 수 수 문서화합니다. 최근 논문 6, 나는 다르게이라도, 블루베리 식물의 휘발성 물질의 배출을 유도 집시 나방의 유충, 외인성 MeJA 응용 프로그램, 그리고 기계적 손상에 의해 그 먹이를 발표했다. 또한, 블루베리 가지는 JA와 herbivores (즉, 직접 식물의 방어)에 저항의 수준을 증가하여 동일한 식물의 인접 지점에서 방출 HIPVs에 대응하고, 프라이밍 휘발성 배출하여 (즉, 간접 식물 방어). 찾을 유사ings는 쑥의 일종 7, 포플러 8, 리마 콩 9 최근에보고되었습니다 .. 자, 내가 herbivore (집시 나방) 먹이주기, 외인성 MeJA 응용 프로그램, 그리고 기계적 손상에 의해 유도된 블루베리 휘발성 물질을 수집을위한 푸시풀 방법을 설명합니다. 휘발성 수집 유닛은 4 L 휘발성 수집 챔버, 2 피스 단두대, 유입 공기를 정화 공기 공급 시스템 및 휘발성 물질 5,6,10를 수집하는 슈퍼 - Q 흡착제로 가득 함정에 연결된 진공 시스템으로 구성되어 있습니다 . 슈퍼 - Q 트랩에서 수집한 휘발성 물질은 dichloromethane과 eluted 후 분리 및 가스 크로마 토그래피 (GC)를 사용 계량입니다. 이 휘발성 징수 방법은 블루베리 식물 내에 herbivore - 손상된 지점에서 휘발성 물질에 노출 피해가 가지의 휘발성 반응을 조사하는 데 사용되는 N 제 연구 6되었습니다. 이러한 방법은 여기에 설명되어 있습니다. 간단히, 손상 블루베리 가지는 아프로 HIPVs에 노출되는같은 공장 내에서 m 근처 지점. 위에서 설명한 동일한 기술을 사용하여 HIPVs에 노출 후 지점에서 방출되는 휘발성 물질을 수집 분석하고 있습니다.

식물의 휘발성 물질을 수집을위한 푸시풀 방식이 설명되어 있습니다. 방법은 herbivore 먹이, 외인성 메틸 jasmonate, 기계적 손상에 의해 유발되는 휘발성 물질의 비교를 허용합니다. 이 기술은 또한 블루베리 식물 이내 herbivore - 손상된 지점에서 휘발성 물질에 노출 피해가 가지의 휘발성 반응을 조사하는 데 사용됩니다.

Herbivore 유도 블루베리 휘발성 물질과 내부 식물 신호

초식동물 유도성 식물 휘발성 물질(HIPVs)은 일반적으로 초식동물의 공격 후 식물에서 방출됩니다1,2. 이러한 HIPVs는 주로 방어...

본 절차의 목적은 블루베리 휘발성 물질을 수집하기 위한 push-pull 방법을 설명하고, 임플란트가 삽입된 초식 동물 피해 가지에서 방출된 휘발성 물질에 대해 손상되지 않은 블루베리 가지가 보이는 반응을 조사하는 것입니다. 이는 먼저 집시나방, 애벌레의 기계적 손상 및 식물 호르몬인 methyl jasmonate의 외인성 처리에 의해 손상된 블루베리 식물로부터 국소 및 전신 휘발성 물질을 수집함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 손상되지 않은 블루베리 가지를 초식 동물인 집시나방에 의해 손상된 가지의 휘발성 물질에 노출시킨 후, 초식 동물이 섭식하기 전과 후의 해당 노출 가지로부터 휘발성 물질을 수집하는 것입니다.절차의 세 번째 단계는 수집된 휘발성 물질을 추출하는 것입니다. 마지막 단계는 추출된 휘발성 물질을 가스 크로마토그래프에 주입하는 것입니다. 궁극적으로 push-pull 휘발성 물질 수집 시스템과 가스 크로마토그래피를 통해, 초식 동물의 섭식에 의한 블루베리 휘발성 물질의 유도와 식물 내 신호 전달에서의 역할을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.고상 미세 추출(solid phase micro extraction) 또는 pmi와 같은 기존의 다른 기술과 비교했을 때 push-pull 시스템의 주요 장점은, 수집된 휘발성 샘플이 여러 번의 분석이 가능한 부피로 흡수된다는 점입니다. 이 방법은 식물 휘발성 물질이 식물 방어에서 하는 역할이나 수분 작용과 같은 곤충-식물 상호작용 분야의 의문을 해결하는 데 도움이 될 수 있으며, 초식 동물의 피해로 인한 휘발성 물질 유도를 확인하는 데에도 사용될 수 있습니다. 먼저, 스펀 폴리에스테르 슬리브로 블루 브루(blue brew) 식물의 가지 두 개를 감싸십시오.그런 다음 각 봉투에 매미나방 애벌레 세 마리를 넣고 이틀 동안 식물을 섭식하도록 둡니다. 한편, 대조군 식물에는 애벌레를 넣지 않습니다. 셋째 날에 push-pull 시스템을 사용하여 온실 내의 식물을 샘플링함으로써 휘발성 물질 배출물을 수집합니다.초식 동물 손상 처리군의 애벌레를 포함하여 식물의 지상부를 4L 휘발성 물질 수집 챔버 안에 넣습니다. 2피스 기요틴(guillotine)으로 식물의 기부를 지지한 다음, 30mg의 Alltech super cute 흡착제가 채워진 필터 트랩으로 휘발성 물질을 수집하며, 이때 챔버 내부의 공기를 분당 1L의 속도로 배출합니다. 기계적 손상에 의한 휘발성 물질 유

herbivore-induced-blueberry-volatiles-and-intra-plant-signaling

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

수직, T-미로 olfactometer는 절지 동물의 행동 반응을 시금에 설명되어 있습니다. olfactometer은 두 잠재적 인 냄새 필드에 대상이 때 실험은 실험 대상으로 수행 선택권을 측정 할 수 있습니다. 모두 인력과 odorants의 반발이 장치와 함께 측정 할 수 있습니다.

Odorants에 Arthropod 응답을 수직 T-미로 초이스 분석

병원체 성장의 정량화는 다양한 애기장대(Arabidopsis) 탈리아나(Arabidopsis) 면역 반응을 특성화하는 강력한 도구입니다. 여기에 설명된 방법은 Pseudomonas syringae pv를 정량화하기 위해 최적화된 주사기 침투 분석을 제공합니다. 마쿨리콜라 성체 애기장대에서 ES4326 성장.

을 사용해서 식물 방어 응답의 미세 특성에 대한 세균성 잎 침투 분석<em&gt; 애기 장대-슈도모나스 시린 개 (Pseudomonas syringae)</em&gt; Pathosystem

우리는 근적외선 분광법으로 개별 블루베리의 총 당, 총 유기산 및 총 안토시아닌 함량을 비파괴적으로 예측하기 위한 모델을 구성하고 검증하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

HPLC 측​​정을 바탕으로 근적외선 분광법에 의한 블루 베리의 성분 내용의 비파괴 예측을위한 모델의 건설

기술 된 수경 공동 배양 시스템은 금속 메쉬 스크린이있는 온전한 식물을지지하고 박테리아와 함께 배양한다. 식물 조직, 박테리아 및 분비 된 분자는 하류 분석을 위해 따로 따로 수확 할 수 있으며 동시에 식물 숙주와 상호 작용하는 미생물 또는 미생물의 분자 반응을 조사 할 수 있습니다.

식물 / 미생물 분자 상호 작용 및 신호의 동시 및 체계적 분석을위한 수경 공동 공동 배양 시스템

이 프로토콜 aphids와 같은 hemipteran 곤충을 먹이로 생성 하는 식물에 칼슘 신호 분석을 위한 간단한 방법을 설명 합니다. 애기 thaliana GFP 칼슘 바이오 센서 GCaMP3으로 변형 시간적, 공간적 해상도 높은 칼슘 역학의 실시간 vivo에서 영상에 대 한 수 있습니다.

실시간 Vivo에서 녹음 애기 칼슘 신호의 곤충 먹이 형광 바이오 센서를 사용 하 여 중

여기, 생물 검정 곰 팡이 병원 체의, Colletotrichum fioriniae, 유리 coverslips에 블루베리 나 크 렌 베리 꽃 추출의 개발을 모니터링 하도록 설계 된 설명 합니다. 물, 클로 프롬 및 필드 빗 물-꽃 추출 기술을 어떻게이 정보를 적용할 수 있습니다에 대 한 통찰력 뿐만 아니라 자세한 위치를 기반으로 합니다.

Colletotrichum fioriniae 물, 클로 프롬 기반 블루베리와 크랜베리 꽃 추출 물 개발

제시 된 방법은 감자의 분리 된 잎에 만두카 sexta 애벌레의 응용 프로그램을 통해 자연 초식 동물 손상된 식물 조직을 만듭니다. 식물 조직은 곤충 허브에 대한 초기 반응에 관여하는 6개의 전사 인자 호몰로그의 발현을 위해 분석된다.

분리 된 잎 어설아는 곤충 만두카 sexta를 츄잉에 의해 감염 하는 동안 감자에 유전자 발현 연구를 단순화 하기 위해

세포외 글루타메이트 트리거 전신 칼슘 신호는 식물의 기계적 상처 및 초식 공격에 대한 식물 방어 대응의 유도에 매우 중요합니다. 이 문서에서는 칼슘과 글루타민염에 민감한 형광 바이오 센서를 표현하는 아라비도시스 탈리아나 식물을 사용하여 이러한 두 요인의 공간 적 및 측두동을 시각화하는 방법을 설명합니다.

아라비도시스에서 지역 및 전신 상처 신호의 넓은 필드, 실시간 이미징

이미징 CA의 기술 2 + 인간 정자의 시그널링

근육 손상을 기본 메커니즘의 확인이 중요합니다. 여기 파라핀 - 임베디드 및 Drosophila 흉부 근육의 부분을 냉동을 준비 histological 기술을 제시한다. 이것은 근육 형태학 및 단백질 및 기타 근육 세포 구성 요소의 로컬 리 제이션의 분석이 가능합니다.

의 파라핀 - 임베디드 및 냉동 섹션 Drosophila 성인 근육

학습하세요 블루베리 휘발성 물질 수집을 위한 푸시-풀 방법과 초식동물 유도 반응 분석 기법을. 가스크로마토그래피를 활용한 식물 내부 신호 전달 메커니즘 연구에 적용할 수 있습니다.

Herbivore 유도 블루베리 휘발성 물질과 내부 식물 신호

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