Name: ホールマウントマッスル分析による再現性のあるマウスの坐骨神経クラッシュと再生のその後の評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: 学ぶマウスの坐骨神経クラッシュとホールマウント筋肉分析による再生評価法。止血鉗子を用いた再現性の高い神経損傷モデルで、筋肉の再神経支配を詳細に観察できます。神経再生研究に有用です。

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この作品は、関節リウマチの国立研究所からの筋骨格系疾患のためのペンセンター、賞の数P30AR050950さらに、NIHの助成金K08NS065157（TAFまで）によってサポートされていました、筋骨格系と皮膚疾患は、（TAFとSteven S.シェーラー）この作業をサポートしていました。最後に、シュライナーズ小児研究センターのシード資金（TAF）は、この作業をサポートしていました。私たちは、最初に図1のスケッチを製造する彼女の援助全体のマウント手順とエイミーA.キムを示すために博士·ヨンジンの息子に感謝します。

<ol><li>Pan, Y. A., Misgeld, T., Lichtman, J. W., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+neurotoxic+and+neuroprotective+agents+on+peripheral+nerve+regeneration+assayed+by+time-lapse+imaging+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Effects of neurotoxic and neuroprotective agents on peripheral nerve regeneration assayed by time-lapse imaging in vivo.</a> J. Neurosci. 23, 11479-11488 (2003).</li>
<li>Magill, C., Tong, A., Kawamura, D., Hayashi, A., Hunter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reinnervation+of+the+tibialis+anterior+following+sciatic+nerve+crush+injury%3A+A+confocal+microscopic+study+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Reinnervation of the tibialis anterior following sciatic nerve crush injury: A confocal microscopic study in transgenic mice.</a> Exp. Neurol. 207, 64-74 (2007).</li>
<li>Amado, S., Simñes, M. J., Armada-da-Silva, P. A. S., Luís, A. L., Shirosaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+hybrid+chitosan+membranes+and+N1E-115+cells+for+promoting+nerve+regeneration+in+an+axonotmesis+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Use of hybrid chitosan membranes and N1E-115 cells for promoting nerve regeneration in an axonotmesis rat model.</a> Biomaterials. 29, 4409-4419 (2008).</li>
<li>Luís, A. L., Rodrigues, J. M., Geuna, S., Amado, S., Simðes, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+cell+transplantation+effects+on+sciatic+nerve+regeneration+after+a+standardized+crush+injury+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Neural cell transplantation effects on sciatic nerve regeneration after a standardized crush injury in the rat.</a> Microsurgery. 28, 458-470 (2008).</li>
<li>Luís, A. L., Amado, S., Geuna, S., Rodrigues, J. M., Simðes, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+functional+and+morphological+assessment+of+a+standardized+rat+sciatic+nerve+crush+injury+with+a+non-serrated+clamp%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Long-term functional and morphological assessment of a standardized rat sciatic nerve crush injury with a non-serrated clamp.</a> J. Neurosci. Methods. 163, 92-104 (2007).</li>
<li>Baptista, A. F., de Souza Gomes, J. R., Oliveira, J. T., Santos, S. M. G., Vannier-Santos, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+to+assess+function+after+sciatic+nerve+lesion+in+the+mouse+-+adaptation+of+the+sciatic+static+index%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A new approach to assess function after sciatic nerve lesion in the mouse - adaptation of the sciatic static index.</a> J. Neurosci. Methods. 161, 259-264 (2007).</li>
<li>Ronchi, G., Raimondo, S., Varejão, A. S. P., Tos, P., Perroteau, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+crush+injury+of+the+mouse+median+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Standardized crush injury of the mouse median nerve.</a> J. Neurosci. Methods. 188, 71-75 (2010).</li>
<li>Berg, A., Zelano, J., Cullheim, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Netrin+G-2+ligand+mRNA+is+downregulated+in+spinal+motoneurons+after+sciatic+nerve+lesion%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Netrin G-2 ligand mRNA is downregulated in spinal motoneurons after sciatic nerve lesion.</a> Neuroreport. 21, 782-785 (2010).</li>
<li>Girolami, E. I., Bouhy, D., Haber, M., Johnson, H., David, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+and+potential+role+of+SOCS1+and+SOCS3+in+Wallerian+degeneration+in+injured+peripheral+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Differential expression and potential role of SOCS1 and SOCS3 in Wallerian degeneration in injured peripheral nerve.</a> Exp. Neurol. 223, 173-182 (2010).</li>
<li>Hossain-Ibrahim, M. K., Rezajooi, K., Stallcup, W. B., Lieberman, A. R., Anderson, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+axonal+regeneration+in+the+central+and+peripheral+nervous+systems+of+the+NG2-deficient+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Analysis of axonal regeneration in the central and peripheral nervous systems of the NG2-deficient mouse.</a> BMC Neurosci. 8, 80-80 (2007).</li>
<li>Thornton, M. R., Mantovani, C., Birchall, M. A., Terenghi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+N-CAM+and+N-cadherin+expression+in+axotomized+and+crushed+rat+sciatic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anat%22%5BJournal%5D)">Quantification of N-CAM and N-cadherin expression in axotomized and crushed rat sciatic nerve.</a> J. Anat. 206, 69-78 (2005).</li>
<li>Beer, G. M., Steurer, J., Meyer, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardizing+nerve+crushes+with+a+non-serrated+clamp%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reconstr.+Microsurg%22%5BJournal%5D)">Standardizing nerve crushes with a non-serrated clamp.</a> J. Reconstr. Microsurg. 17, 531-534 (2001).</li>
</ol>

我々は、開示することは何もありません。

我々は、クラッシュサイトの正確なマーキングを確実に完全に坐骨神経のときめきを取得する方法を提案した。前述のように、坐骨神経のときめきは、マウスとラットの末梢神経損傷の一般的なモデルです。ときめきの各メソッドは、その長所と短所がありますが、我々は、このメソッドは、簡単に特殊な装置（例えば特殊なクランプ、等）の最小値でマークされた完全なクラッシュを作り出しました。 クラッシュ·メソッドマウス坐骨神経の粉砕に使用される最も一般的な機器は、第5番斜めピンセットです。それがこの方法を使用して、完全なクラッシュを得ることが可能であるが、我々はこの楽器は、特に新規ユーザーの手の中に、変数クラッシュ（神経を引き裂く免れた軸索または大きすぎるを残してあまりにも少ない力）を生成することがわかった。 ときめきを生成するために使用される他のあまり一般的方法は、小さな動脈瘤クリップ、液体窒素で冷やし鉗子、およびspeciallを含むyが製造され、キャリブレーション、非鋸歯状のクランプ9,12,...

<table border="1"><tbody><tr><td> 名前（説明/数量） </td><td> サプライヤー </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>第0000ブレードミニクリッパー</td><td> Roboz </td><td> RC-5903 </td></tr><tr><td> Nairさんヘアリムーバー（9オンス） </td><td>教会とドワイト株式会社</td><td> N / A </td></tr><tr><td> Betadine外科スクラブ（1ガロン） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 19066452 </td></tr><tr><td>眼軟膏（1オンス） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 19082795 </td></tr></tbody></table> 手術のツール： <table border="1"><tbody><tr><td> 名前（説明/数量） </td><td> サプライヤー </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td> FST 250ホットビーズ滅菌器</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 18000から45 </td> &lt;/ TR&gt; <tr><td>アイリスはさみ（11センチ） </td><td>世界の精密機器</td><td> 500216 </td></tr><tr><td>ポッツ·スミスピンセット（ストレート18センチメートル、1x2の歯） </td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11024から18 </td></tr><tr><td>マクファーソン·Vannasはさみ（5 mmのブレード） </td><td>世界の精密機器</td><td> 14124-G </td></tr><tr><td>デュモン＃5鉗子 - Dumoxel標準的なチップ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11252から30 </td></tr><tr><td>デュモン＃45分の5鉗子 - Dumoxel標準的なチップ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11251から35 </td></tr><tr><td>ウルトラファインHemostats（ストレートスムーズ内側の表面） </td><td>ファイン科学ツール</td><td> 13020から12 </td></tr><tr><td>粉末活性炭（500グラム） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> C272-500 </td></tr><tr><td> C-1ニードル（滅菌、絹、黒、編んだ、とサイズ6から0縫合糸非吸収性、18 &quot;長さ、36のボックス） </td><td> Roboz </td><td> SUT-1073から1011 </td></tr><tr><td>反射クリッププライヤ（9ミリメートルクリップ用） </td><td>世界の精密機器</td><td> 500345 </td></tr><tr><td> 9ミリメートルステンレス鋼反射クリップ（100/box） </td><td>世界の精密機器</td><td> 500346 </td></tr></tbody></table> 動物のケア： <table border="1"><tbody><tr><td> 名前（説明/数量） </td><td> サプライヤー </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td> 0.9％塩化ナトリウム注射液（防腐剤フリー、20 mL）で</td><td>ホスピーラ</td><td> 0409-4888-20 </td></tr><tr><td>柔軟性の高いプローブを用いた完全な恒温動物ブランケットシステム（ミディアム、115 VAC、60 Hz）を</td><td>ハーバード装置</td><td> 507222F </td></tr></tbody></table> 外科Platformとトラクター。 （地元の金物店で購入） <table border="1"><tbody><tr><td> 名前（説明/） </td><td> 量 </td></tr><tr><td>ステンレス鋼のプラットフォーム（ミルド。〜12 &quot;X12&quot; X1 / 8 &quot;） </td><td> 1 </td></tr><tr><td>ボタンマグネット（例：EclipseのE825） </td><td> 3 </td></tr><tr><td>ステンレスボルト（3 &quot;ロング、ボタンマグネットによって決定される直径） </td><td> 3 </td></tr><tr><td>ステンレスナット（ボルトに合わせてサイズ） </td><td> 9 </td></tr><tr><td>ゴムバンド（ライトテンション） </td><td> 3 </td></tr><tr><td>虫ピン（両端がフックをフォームにベント） </td><td> 3 </td></tr></tbody></table> セミ薄く： <table border="1"><tbody><tr><td> 名前（説明/数量） </td><td> サプライヤー&lt;/強い&gt; </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド（1キロ） </td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> P6148-1KG </td></tr><tr><td>リン酸ナトリウム二塩基性無水（500グラム、リン酸緩衝液を調製するのに使用） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> S375-500 </td></tr><tr><td>ナトリウム一塩基性リン酸無水（1キロ、リン酸緩衝液を調製するのに使用） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> AC38987-0010 </td></tr><tr><td>グルタルアルデヒド（50％、10×10 mL）で</td><td>テッド·ペラ社</td><td> 18431 </td></tr><tr><td>四酸化オスミウム（4％水溶液、10×10 mL）で</td><td>テッド·ペラ社</td><td> 18465 </td></tr><tr><td>プロピレンオキサイド（450 mL）を</td><td>テッド·ペラ社</td><td> 18601 </td></tr><tr><td>埋め込み812（キット、ハードブロック/高画像コントラストのために） </td><td>電子顕微鏡学</td><td> 14120 </td></tr><tr><td> ToluidiNEブルー（25グラム） </td><td>テッド·ペラ社</td><td> 19451 </td></tr></tbody></table>全体のマウント筋の調製と免疫組織化学： <table border="1"><tbody><tr><td> 名前（説明/数量） </td><td> サプライヤー </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド（1キロ） </td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> P6148-1KG </td></tr><tr><td>リン酸ナトリウム二塩基性無水（500グラム、リン酸緩衝液を調製するのに使用） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> S375-500 </td></tr><tr><td>ナトリウム一塩基性リン酸無水（1キロ、リン酸緩衝液を調製するのに使用） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> AC38987-0010 </td></tr><tr><td> 10％BSA希釈液/ブロッキング溶液（200 mL）で</td><td>キルケゴール＆ペリー·ラボラトリーズ社</td><td> 50-61-00 </td></tr><tr><td>トリトンX-100（100mL）中</td&gt; <td>ドットサイエンティフィック株式会社</td><td> 9002-93-1 </td></tr><tr><td>グリシン、98％（1キロ） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> AC12007-0010 </td></tr><tr><td>組織テッククライオ-OCT化合物（12の場合、4オンスボトル） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 14-373-65 </td></tr><tr><td> Sylgardダウ170（2ポンドキット） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> NC9492579 </td></tr><tr><td>ステンレス鋼の昆虫ピン、サイズ1（100/pkg） </td><td>ファイン科学ツール</td><td> 26001から40 </td></tr><tr><td>テトラメチルローダミン-ブンガロトキシン（0.5 mg）を</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> T0195-.5MG </td></tr><tr><td> SMI-312（0.1 mL）をに対するマウスモノクローナル抗体</td><td> Covance </td><td> SMI-312R </td></tr><tr><td> SV2（0.1 mL）をに対するマウスモノクローナル抗体</td><td>発達研究ハイブリドーマバンク（DSHB） </td><td> SV2 </td></tr><tr><td>ウサギポリGAP-43に対するモノクローナル抗体</td><td>ノーバスバイオ</td><td> NB300-143 </td></tr><tr><td> Flourescein共役ヤギ抗マウスIgG、Fcγ受容サブクラス1特異的</td><td>ジャクソンイムノ</td><td> <a href="http://www.jacksonimmuno.com/MERCHANT2/merchant.mv?Screen=BASK&amp;Store_Code=JI&amp;Action=ADPR&amp;Product_Code=115-095-205&amp;Attributes=Yes&amp;Quantity=1">11 5-095-205</a> </td></tr><tr><td> DyLight 649共役ロバ抗ウサギIgG </td><td>ジャクソンイムノ</td><td> <a href="http://www.jacksonimmuno.com/MERCHANT2/merchant.mv?Screen=BASK&amp;Store_Code=JI&amp;Action=ADPR&amp;Product_Code=711-495-152&amp;Attributes=Yes&amp;Quantity=1">711-495-152</a> </td></tr><tr><td> 4 &#39;,6-ジアミジノ-2 - フェニルインドール（DAPI、dilactate、10 mg）を</td><td>インビトロジェン</td><td> D3571 </TD&gt; </tr><tr><td> Vectashield封入剤（10mL）中</td><td>ベクターラボラトリーズ</td><td> H-1000 </td></tr><tr><td> Superfrostプラス顕微鏡スライド（ホワイト、サイズ：75×25ミリメートル、144のパック） </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> Fisherfinestプレミアムカバーガラス（サイズ：40×22ミリメートル、1オンスのパック）。 </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 12から548-5C </td></tr></tbody></table>

ホールマウントマッスル分析による再現性のあるマウスの坐骨神経クラッシュと再生のその後の評価

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

末梢神経系（PNS）の再生が広く、両方のヒトの疾患との関連性について検討されており、それによっておそらくCNS再生1の障害を照らすPNSニューロンによってマウントされた堅牢な回生応答を理解する。坐骨神経のときめき（軸索断裂）は、げっ歯類の2の末梢神経損傷の最も一般的なモデルの一つです。その再生が3,4に最適ですので、破砕の割り込みはすべての軸索がシュワン細胞基底層は保持されます。これは研究者が正確にシュワン細胞と基底層4の両方と相互作用する軸索成長の能力を研究することができます。ラットは、一般的に実験的な神経の粉砕のための好ましい動物モデルをされている。彼らは広く入手可能であり、その病変坐骨神経は、ヒトの神経病変5,4の合理的な近似値を提供しています。ラットの神経よりもサイズが小さくても、マウスの神経は、多くの類似した性質を持​​っています。最も重要なのはしかし、覚書Eモデルがあるためトランスジェニック系統の幅広い可用性、ますます貴重なものになりまし神経再生6、7の重要な個々の分子の詳細な解剖を可能にします。前の調査官は、単純な直角鉗子、チルド鉗子、止血鉗子、血管クランプ、および治験責任医師に設計されたクランプ8,9,10,11,12含む神経クラッシュやけがを生成するために複数のメソッドを使用しています。捜査官はまた、縫合糸、炭素粒子と蛍光ビーズ13,14,1含む損傷部位のマーキングの様々な方法を使用しています。我々は、クラッシュサイトのマーキングを正確かつ永続的な細かい止血鉗子とそれに続く炭素ときめきサイトマーキングを使用して再現性を完全に坐骨神経のときめきを得るための手法を説明します。坐骨神経挫滅手順の我々の記述の一部として、我々はまた我々はその後再生を定量化するために使用するマウント筋肉全体の比較的単純な方法が含まれている。

本報告では、マウス坐骨神経を粉砕する方法を説明します。このメソッドは、容易に利用可能な止血鉗子を使用して、簡単かつ再現性を完全に坐骨神経のときめきを生成します。さらに、坐骨神経挫滅後の神経再生の解析に適した筋肉全体のマウントを準備する方法について説明します。

末梢神経系（PNS）における再生は、ヒトの疾患との関連性、および強力な再生能を理解することを目的として広く研究されています。

本手順の全体的な目的は、坐骨神経挫傷およびその後の筋肉再支配のホールマウント解析における、簡便で再現性のある方法を実演することです。まず、外科的牽引器を適切に配置して神経への良好なアクセスを確保し、坐骨神経を露出させます。次に、止血鉗子で神経を挫傷させ、活性炭で神経に印を付けます。次に、後肢から坐骨神経が支配している個々の筋肉を取り出します。最終ステップとして、免疫染色後、ホールマウント解析のために個々の筋肉を解剖します。最終的に、これらの結果は、再現性のある坐骨神経挫滅を簡便に実施でき、筋肉のホールマウントを用いてその後の再生を解析できることを示しています。この手順の主な利点は、坐骨神経を圧砕し、その後の軸索再生をスコア化するための、簡便で再現性の高い手法を提供することです。まず、術後の痛みを最小限に抑えるため、ケタミン 100 mg/kg とキシラジン 10 mg/kg の混合液を腹腔内投与し、マウスを麻酔します。また、メラノキサム 10 mg/kg を皮下投与します。次に、外科用クリッパーを用いて両後肢を慎重に剃毛します。その後、完全に除毛するために除毛クリームを塗布します。滅菌綿棒とベタジン外科用スクラブを用いて皮膚を洗浄します。その後、滅菌綿棒を用いて眼科用軟膏を眼に塗布します。マウスを予熱した恒温ブランケット上の清潔なステンレス製プレートに置き、動物の体温を37 °Cに維持します。次に、すべての肢をテープで固定します。後肢を、膝関節が身体に対して直角になるように慎重に対称的に配置します。続いて、顕微鏡下で手術部位を滅菌ドレープで覆います。正中線に沿って半円形の切開を行います。皮膚を下の筋肉組織から慎重に剥離し、適宜折り返して保持します。処置中に手術部位を湿潤に保つため、滅菌生理食塩水を約0.1 milliliters投与します。次に、大殿筋と大腿二頭筋短頭の間の筋膜面を開きます。外科的コントロールのために坐骨神経を露出させます。対側の坐骨神経を露出させ、可動化しますが、そのまま保持します。その後、臀筋を元に戻し、縫合します。リトラクターを用いて、同様の方法で実験対象の坐骨神経を露出させます。視認性を高めるため、虹彩切除用ハサミを使用して、周囲の結合組織から坐骨神経を慎重に剥離します。次に、5 45 微細鉗子を用いて、神経を超微細止血鉗子の下顎に配置し、3本の筋膜が重なり合わないように隣り合わせに並べます。止血鉗子の先端から 1.5 mm の位置にはマークが刻まれています。圧砕する前に、坐骨神経の最も外側の部分をこのマークに合わせて配置してください。これにより、均一な幅で圧砕され、圧砕力によって扁平化した際に神経が止血鉗子の顎の外に飛び出さないことが保証されます。神経が鉗子の先端からはみ出している場合、神経の一部しか圧砕されません。あらかじめカーボン粉末に浸した別の止血鉗子を使用して、圧砕部位に印を付けてください。同じ圧挫部位で、3クリックの強さで15秒間神経を圧挫させます。カーボンによる標記が、最初の圧挫範囲を超えて広がらないようにしてください。圧挫部位を正確に標記する必要がある場合は、鉗子をあらかじめカーボンに浸し、手術部位にカーボンが広範囲に付着することを防ぐことが特に重要です。粉末状のカーボンの中で止血鉗子を開きます。その後、ゆっくりと閉じます。滅菌ガーゼを使用して、止血鉗子の外側にあるカーボンを拭き取ります。3倍以上の倍率で鉗子を確認し、圧砕面がカーボン粉末で均一にコーティングされていることを検証します。必要に応じて、再度浸漬し、拭き取ります。その後、対側と同様の手順で臀部筋を再配置し、縫合します。最後に、9 mmのリフレックスクリップを用いて皮膚切開部を閉じます。9 mmのリフレックスクリップで動きが制限される場合は、より小さなリフレックスクリップまたは6つのオートサチャーを使用できます。その代わり、マウスを犠牲にした後、後肢の前脛骨筋、長趾伸筋、長腓骨筋、およびヒラメ筋の4つの筋肉を、結合組織を介して黒色のサルディンコーティング皿にピンで固定しながら慎重に取り出します。その後、PBSで洗浄します。続いて、4% Paraform aldehydeで30分間固定します。黒色のサードコートを施したペトリ皿上で各筋肉を解剖するため、虹彩切除用ハサミを用いて腱を取り除きます。その後、内部の筋線維を剥離して筋肉を薄くします。終板帯を含む筋肉の外表面を慎重に維持してください。次に、得られた筋肉をVector Shieldを用いてプラススライドグラスに載せ、22 by 40 mmのガラスカバースリップで覆い、両側を透明なマニキュアで封止します。適切にスライドに固定されていれば、終板帯がカバースリップに接しているはずです。これは、左後肢におけるその場（in situ）の圧挫部位の例です。圧挫部位はカーボンブラックで示されています。アスタリスクは、大腿筋群に支配を供給する脛骨神経の分枝を示しており、有用な指標となります。圧挫手術において、坐骨神経の脛骨枝は青色、腓骨枝は緑色、そしてsrelは黄色で outlined されています。この半薄切片は、止血鉗子を用いて行われた完全な圧挫を示しています。矢印は、ここで圧挫した線維を示しています。角度付き鉗子で不完全な圧挫を行った別のセミシン切片を示す。矢尻は再び圧挫した繊維を、矢印は保存された軸索を示している。これらは全層標本筋肉のレンダリング画像である。結合組織を除去し、その後薄層化した後、各筋肉における神経終板帯を縁取りします。ここでは、坐骨神経挫滅から14日後の、下層全体の全層標本筋肉を示しています。矢印は、軸索によって再神経支配された神経筋接合部の領域を示しています。ここでは、脱神経した神経筋接合部の実演を示します。矢じりは、GAP-43陽性のシュワン細胞突起を示しています。この脱神経された神経筋接合部には、軸索が見られません。このビデオを視聴することで、静止神経を再現性よく挫滅させ、再生分析のための筋肉ホルモン標本を調製する方法について十分に理解できるはずです。

reproducible-mouse-sciatic-nerve-crush-subsequent-assessment

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

出典: Li, Q., et al.ほ乳類の軸索再生の研究 成体マウス後根神経節のin vivoエレクトロポレーションJ. Vis.

圧死後のマウスの坐骨神経における軸索再生

出典: Li, Q. et al.ほ乳類の軸索再生の研究 成体マウス後根神経節のin vivoエレクトロポレーションJ. Vis.

感覚軸索再生を促進するマウス後根核のエレクトロポレーション媒介トランスフェクション

出典: Dalkin, W., et al.腓骨神経損傷法 神経筋接合部を修復する因子を同定し、試験するための信頼できるアッセイJ. Vis. 経験。(2016年)このビデオは、神経筋接合部 (NMJ) の再生を研究するためにマウスに腓骨神経損傷を誘発する外科的処置を示しています。この手順には、腓骨神経を露出させ、制御された圧力を加えて損傷を誘発し、軸索の再生をサポートするために神経外皮が無傷のままであることを確認することが含まれます。時間が経つにつれて、マクロファージは軸索の破片を除去し、神経修復と NMJ...

神経筋接合部の再生を研究するためのマウスの腓骨神経損傷の誘導

私たちは、マウスの筋肉の再神経支配、したがって神経筋接合部の再生を確実に調べるための神経損傷法を開発しました。この技術では、単純で再現性の高い手術で総腓骨神経を損傷します。 その後、長指伸筋を全体に取り付けて評価する筋肉の再神経支配。...

腓骨神経損傷方法：神経筋接合部を修復信頼性の高い同定するためのアッセイおよびテスト要因

エレクトロポレーションは、興味の遺伝子を細胞に提供する効果的なアプローチです。このアプローチは生体内で成体マウス後根神経節 (DRG)...

成体マウス後根神経節の調査の哺乳類の軸索の再生: In Vivoエレクトロポレーション

提示された、ラットの異なるタイプの中央値神経(MN)病変および修復を産生するプロトコルである。さらに、プロトコルは、いくつかの非侵襲的な行動検査および生理学的測定を用いて神経の機能的回復を評価する方法を示す。...

ラットの神経再生の中央値を評価する機能と生理学的方法

自動歩行分析は、末梢神経損傷および脊髄失調損傷のげっ歯類モデルにおける機能回復を評価するための実現可能なツールである。様々な実験モデルで運動機能を評価するために1つのセットアップしか必要としませんが、動物の細心の硬とソフトウェアの調整と訓練は非常に重要です。...

末梢神経または脊髄損傷を伴うげっ歯類の機能回復を評価する自動歩行分析

運動回復の評価は、実験的末梢神経研究におけるベンチマーク結果測定のままである。ラットの脛骨前筋の等角体テタニック力測定は、坐骨神経欠損の再建後の機能的転帰を評価するための非常に貴重なツールである。方法とニュアンスについては、この記事で詳しく説明します。...

ラットにおける脛表筋前筋の最大等角体テタニック力測定

坐骨神経クラッシュ傷害後のラットの行動検査用電池を介して運動行動評価のためのプロトコルを提供する。...

一方的坐骨神経クラッシュ傷害後のラットにおける運動行動の多因子的評価

我々は、ミエリンを解放し、残りの軸索に富む材料の抽出に続いて、非軸索の構造を、溶解する低張培地で神経の束とインキュベーションの解剖に基づいて、成体ラットの坐骨神経からの軸索原形質分離のためのプロトコルを示す。...

ラット坐骨神経からの軸索原形質分離

学ぶマウスの坐骨神経クラッシュとホールマウント筋肉分析による再生評価法。止血鉗子を用いた再現性の高い神経損傷モデルで、筋肉の再神経支配を詳細に観察できます。神経再生研究に有用です。

ホールマウントマッスル分析による再現性のあるマウスの坐骨神経クラッシュと再生のその後の評価

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