Name: 화학 생물학에서의 자유 부수 : 화학 행동의 Biomarker 개발에 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 22 s
Description: 배우세요 화학 생물학에서 자유기 기반 생체유사 화학을 활용한 생물분자 변형 및 바이오마커 개발 방법을. UV 개시 합성과 분석 기법을 통해 생물학적 환경에서의 분자 인식을 연구합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ministero dell&#39;Istruzione, dell&#39;Universitá 델라 Ricerca (인화-2009K3RH7N_002)와 마리 퀴리 사내 유럽 휄로 십 (CYCLOGUO-298555)뿐 아니라 &#39;자유 화학 생물학의 부수 및 비용 액션에 대한 COST 액션 CM0603의 후원의 재정 지원 &quot;Biomimetic 급진적 화학&quot;에 CM1201은 굉장히 인정하고 있습니다.

1. Cholesteryl 에스테르의 모노 트랜스의 Isomers의 합성 <ol><li> 2 - 프로 파놀의 cholesteryl 에스테르 (linoleate 또는 arachidonate cholesteryl 에스테르) (15 MM)을 분해. 더 나은 solubilization를 들어, 샘플은 아르곤에 따라 15 분에 sonicated했다. </li><li> (7 MM 농도에 도달하기 위해, thiol의 2 M 주식 솔루션에서) 2 - 프로 파놀에 2 메르 캅토 에탄올을 추가, 석영 광화학 반응에 솔루션을 전송합니다. 솔루션에 산소의 존재를 제거하기 위해 20 분을 위해 아르곤과 반응 혼합물을 플러시. </li><li> 22에서 5.5W 저압 수은 램프를 사용하여 UV 빛에 반응 혼합물을 비추다 ± 2 ° C 4 분에. 모니터로 분석 자세 - TLC (실버 얇은 층 크로마토 그래피)를 증거 모노 트랜스 cholesteryl 에스테르의 형성을 (화학 수식에 대한 그림 1 참조)합니다. TLC의 착색은 세륨 암모늄 molibdate (CAM) 솔루션에 판을 붓는에 의해 수행, 그리고 장소에는 난방에 표시되어 있습니다판. 전체 생산량의 증가를 취득 이성 질화의 다른 순찰을 수행하는 재사용 할 수있는 출발 물질을 복구하기 위해 초기 단계에서의 반응을 해소. </li><li> 2 - 프로 파놀 몇 ML로 장치를 세척, 원형 바닥 플라스크에 반응 혼합물를 수집합니다. 용매 제거하고 같은 문헌에 설명 된 자세 - TLC에 의한 cholesteryl 에스테르의 모노 트랜스 isomers을 정화 5. 사용 모노 트랜스 cholesteryl linoleate isomers의 eluent로 헥산-디 에틸 에테르 (9시 1분 V / V), 반면에 사용 헥산 모노 트랜스 cholesteryl arachidonate의 isomers위한 디 에틸 에테르 - 아세트산 (9:1:0,1 브이 / v). </li></ol> 2. 인간 혈청에서 Cholesteryl 에스테르 비율의 절연 <ol><li> 염수의 1 ML과 함께 인간의 혈청 (혈액의 원심 분리하여 얻은) 1 ML을 희석과 유물 (예를 들면 산화 알데히드 부가 물) 방지하기 위해 아르곤의 흐름에 따라 분리 깔때기에 솔루션을 부어. 추가 10 ML 클로로포름 - 메탄올 (2: 세 번 1 V / V). 알부민의 존재로 인해 에멀젼의 형성을 제한하기 위해 매우 천천히 분리 깔때기를 흔들어. </li><li> 염수 (10 ML)로 한 번 유기 레이어를 씻어 다음 무수 나트륨 황산염 이상 건조, 아르곤의 흐름에 따라 Erlenmeyer 플라스크에 수집합니다. 노란 기름 (총 플라즈마 지질 분획)을 여유하는 로터리 증발기의 휘발성 물질을 제거합니다. </li><li> 클로로포름 - 메탄올의 1 ML (2시 1분 V / V), 아르곤의 흐름에 따라 예비 TLC로 부하로 원유를 타고 eluent로 헥산-디 에틸 에테르 (9시 1분 브이 / v)의 혼합을 사​​용하여 . cholesteryl 에스테르 분획을 포함하는 실리카 부분을 긁어 병에 부어. 그런 다음, 클로로포름 - 메탄올 (2시 1분 브이 / v)로 (3 × 5 ML) 실리카를 추출 유기 레이어를 수집하고 cholesteryl 에스테르 (보통 ~ 1.5 밀리그램)의 순수한 일부를 감당 증발 한 후 용매를 제거합니다. </li><li> -20 ° C.에 아르곤 및 매장에서 알루미늄 호일에 포함 어두운 병에 cholesteryl 에스테르 유지 Cholesteryl 전자sters은 빛과 산소에 민감합니다. </li></ol> 3. 라만 분광법에 의한 모노 트랜스 Cholesteryl 에스테르의 특성 <ol><li> 2 절에서 설명한 바와 같이 인간의 혈청 (≥ 0.7 밀리그램)에서 cholesteryl 에스테르을 추출, 탄소 tetrachloride (≤ 10 μl)와 병에 장소의 작은 금액을 분해. 의 라만 신호를 cholesteryl 에스테르 분석의 관심 지역과 중복되지 않기 때문에 CCL (4) 용매로 선택됩니다. </li><li> 일회용 유리 피펫을 통해 샘플 홀더에 솔루션을 전송 한 후 신중하게 아르곤의 느린 흐름으로 용매를 제거합니다. 균일 한 기름 필름 샘플 홀더의 내부 벽에 형성되면, 측정을위한 악기로 후자를 배치합니다. </li><li> 푸리에는 cholesteryl 에스테르의 라만 스펙트럼이 직접 모든 derivati​​zation 반응없이 지질 추출물에 얻어진다 변형. 샘플에 레이저 전원 샘플 손상을 방지하려면 &lt;100 MW이다. 스캔의 총 수각 스펙트럼에 대한 배경 소음을 최소화 할 수 ≥ 800입니다. </li><li> 이 분자 (C = C 모드를 스트레칭)에있는 C = C 이중 결합의 기여를 반영 이후 라만 스펙트럼의 1,700-1,630 cm -1 범위는 분석입니다. 곡선 피팅 분석함으로써 수 있도록이 지역에서 수행 된 지방산 알킬 체인 및 콜레스테롤의 고리 B의 이중 결합 (그림 2 참조)에서 CIS 및 트랜스 더블 채권에서 겹쳐 기여의 구별. </li><li> 올바르게 진동 밴드에 맞게 일부 매개 변수는 고정 또는 합리적인 한도 내에서 제한되어야한다. 반 높이 대역폭이 가장 컴퓨터 최적화 루틴에 따라 결정됩니다 반면, 구성 요소 피크 프로필은 Lorentzian와 가우스 함수의 선형 조합으로 설명되어 있습니다. 구성 요소 봉우리의 수와 위치는 일부 약한 구성 요소 대역을 감지 할 수 있도록 번째 파생 스펙트럼을 사용하여 얻을 수 있습니다. 이후 신호따라서 잡음 비율 해상도와 신호 사이의 권리 타협을 얻을 수 있습니다, 신호의 차별화에 따라 악화 번째 파생의 사용을 배제 할 수 13 점 Savitsky - 골 레이 기능이 넷째 파생 부드럽게, 활용의 역할 잡음 비율 . 베스트 곡선 피팅은 가장 낮은 C이 값을 얻을 수 있습니다. </li><li> 트랜스 isomers의 존재는 1671의 구성 요소 ± 1 지방산 체인으로 인해 약간 낮은 주파수쪽으로 이동과 더불어 cm -1, 적어도 두 가지 구성 요소, 그리고 콜레스테롤 C = C 이중 결합에 의해 드러났습니다. 플라즈마 cholesteryl 에스테르 대표 라만 스펙트럼은 그림 9에 표시됩니다. 삽입에 cholesteryl linoleate와 모노 트랜스 cholesteryl 리놀레산 isomers과 특정 지역의 비교가 표시됩니다. </li></ol> 4. 지방산 메틸 에스테르 (명성) 및 가스 크로마토 그래피에 의한 분석에 Derivati​​zation <ol><li> 디졸브아르곤 아래에 알루미늄 호일이 적용 어두운 병에 1 M의 벤젠 - 메탄올의 수산화 나트륨의 솔루션 (2시 3분 V / V)과 장소의 0.5 ML로 cholesteryl 에스테르 (~ 1.5 MG). </li><li> 혼합물이 eluent로 헥산-디 에틸 에테르 (9시 1분 브이 / v)의 혼합을 사​​용하여 TLC에 의한 실내 온도와 모니터에 감동 둡니다. 반응 시간은 보통 30 분이지만주의 반응 모니터링이 필요합니다. 해당 메틸 에스테르가 형성되는 후 사실, 반응은 저하 및 사이드 제품의 형성을 방지하기 위해 침묵해야합니다. TLC는 메틸 에스테르의 양적 형성을 보여 주었다. </li><li> 염수의 1 ML을 추가하여 반응 혼합물을 해소하고 N-헥산 (3 × 2 ML)과 메틸 에스테르의 압축을 풉니 다. 병에 유기 레이어를 수집하고 더 정화없이 GC 분석에 사용되는 메틸 에스테르 분율을 감당 회전 증발하여 용매를 제거합니다. </li><li> N-헥산의 최소 수량 (보통 5 일 MG에서 메틸 에스테르를 해산0 μl)와 60m × 0.25 mm × 0.25 μm (50 % - cyanopropyl) methylpolysiloxane 열 갖춘 GC에 주입. 다음 오븐 프로그램 불꽃 이온화 검출기 (FID)를 사용 : 165의 온도 시작 ° C, 1의 증가에 이어 3 분을 위해 개최 ° C / 195 분까지 ° C, 두 번째에 이어 40 분을 위해 개최 (10)의 증가 ° C / 240까지 분 ° C, 10 분 동안 누르고 있습니다. 일정한 압력 모드 (29 PSI)이 선택됩니다. 헬륨이나 수소는 캐리어 가스로 사용하실 수 있습니다. 메틸 에스테르는 본격적인 샘플의 보유 시간과 비교하여 확인할 수 있습니다. 그림 10은 플라즈마 cholesteryl의 에스테르로부터 얻은 명예의 대표 GC 분석을 보여줍니다. </li></ol> 5. 의 합성 (5&#39;R) - (5의) -5 &#39;,8-cyclo-2&#39;-deoxyadenosine <ol><li> 1 ㎜ 농도에 도달하기 위해 아세토 니트릴 8 - 브로 모-2&#39;-deoxyadenosine의 33 MG (8-BR-징두리 판벽) (100 ML)를 분해. photoreactor에 가스 흐름 (아르곤 또는 N2)를 규제하고 appa을 채울8 BR-징두리 판벽의 솔루션을 ratus. </li><li> photoreactor의 입력에 해당하는 크기의 중격을 준비하고 중심을 통해 불활성 가스 라인에 연결된 바늘을 전달합니다. 심장과 시스템을 닫습니다. 30 분의 불활성 가스를 플러시. </li><li> 22에서 125W 중간 압력 수은 램프를 사용하여 UV 빛으로 비추다 ± 2 ° C 15 분 동안 250 ML 둥근 바닥 플라스크에 솔루션을 수집합니다. 10 ML의 아세토 니트릴로 photoreactor을 씻고 같은 병에 washings를 수집합니다. </li><li> 1 M NH 4 OH 솔루션으로 원유 반응 혼합물을 해소하고 회전 증발기에서 용매를 증발. </li><li> 알려진 조건 하에서 분석 칼럼과 고성능 액체 크로마토 그래피 분석 (HPLC-UV)을 (계장 섹션을 참조) 실행하고 참조 화합물과 프로필을 비교합니다. </li><li> 다음 솔을 사용하여 분석 컬럼 (계장 섹션을 참조) 고성능 액체 크로마토 그래피 분석 (HPLC-UV)를 실행통풍구 및 그라디언트 : 2 밀리미터 암모늄 편대 용매로하여 아세토 니트릴 용매 B. 1 ML / 분 및 2.2 분에 도달 할 0퍼센트 용매 B에서 0.3 % 용매 B에 그라디언트에 유량을 설정으로. 4.8 분에서 4.0 분으로 다음 1% 용매 B에서 다음 0.8 % 용매 B. 6 분에 8% 용매 B로 이동 한 후 9 분 1 % 용매 B를 유지합니다. 4 분에서 10 % 용매 B로 이동 30 % 용매 B에 5 분에서와 다른 5 분 30 % 용매 B의 유지 후. 두 개의 다른 병에 두 diastereomeric 제품에 해당하는 크로마토 그래피 피크를 수집합니다. </li><li> UV 분광 광도계에있는 두 수집 분수의 흡광도를 측정하고 Lamber - 맥주 법 (A는 흡광도입니다 A = εlC, ε 흡광 계수와 나 셀의 길이)에 따라 정확한 농도를 계산합니다. (260 nm 정도의 15,400 M -1 cm -1) (징두리 판벽) 2&#39;-deoxyadenosine의 흡광 계수 (ε)를 사용합니다. </li></ol> 6. 의 합성 (5&#39;R) -D (5의) -5 &#39;,8-cyclo-2&#39;-deoxyguanosine <ol><li> 각각 1mM과 2mM 농도에 도달하기 위해 증류수 (100 ML) 8 - 브로 모-2&#39;-deoxyguanosine의 35 MG (8-BR-dGuo)과 나트륨 요오드화물 (NAI (Network Advertising Initiative))의 30 밀리그램을 분해. photoreactor에 연결 불활성 가스 (아르곤 또는 N 2) 흐름을 조절하고 반응 솔루션을 photoreactor을 입력합니다. </li><li> 로 (B 단계) 절차 5에 설명 된 반응 혼합물을 Degass. </li><li> 22에서 125W 중간 압력 수은 램프를 사용하여 UV 빛으로 비추다 ± 2 ° C 30 분 동안 250 ML 둥근 바닥 플라스크에 솔루션을 수집합니다. 물 10 ML과 photoreactor을 씻고 같은 병에 washings를 수집합니다. </li><li> 1 M NH 4 OH 솔루션으로 원유 반응 혼합물을 해소하고 진공 용매를 증발. </li><li> (g까지 단계 전자) 절차 5에 설명 된대로 분석을 수행합니다. (260 nm 정도의 11,700 M -1 cm -1) (dGuo) 2&#39;-deoxyguanosine의 흡광 계수 (ε)를 사용합니다. </li></ol> 7. Isotopic 레이블 Purine (5&#39;R)의 합성 - (5의) -5 &#39;,8-cyclonucleosides <ol><li> 15 N isotopic 표시 purine의 nucleosides의 1mM 수용액 (증류수)의 2 ML을 준비 ([15N 5] 징두리 판벽 또는 [15N 5] dGuo) 중격 캡이있는 유리관 (4 ML)에 있습니다. </li><li> 심장 캡과 병을 연결하고 유리 병의 바닥에 도달 심장에 바늘을 통해 가스 라인 (솔루션의 채도에 대한 N 2 O)에 연결합니다. 심장 캡의 또 다른 짧은 바늘이 가스 출구로 작동합니다. </li><li> 30 분에 대한 N 2 O와 솔루션을 플러시. 가스의 흐름은 매우 낮은 것으로 규정되어 있습니다. </li><li> 출구 바늘이 먼저 꺼 냈습니다 1 &#39;이후 긴 하나는 유리 병 안에 작은 압력을하기 위해 다음과 수 있습니다. </li><li> 8 시간 (복용 률 CA. 4.5 GY / 분을 기준으로 계산)에 대한 감마 radiolysis의 장치에 솔루션을 놔. </li><li> 반응은 1 M NH 4 원유을 해소 한 후 </sUB&gt; 솔루션 OH. </li><li> 알려진 조건, 6에서 고성능 액체 크로마토 그래피 분석 (HPLC-UV)를 실행하고 표준 참조와 크로마토 그램을 비교합니다. </li></ol> 8. DNA 수성 솔루션의 감마 Radiolysis <ol><li> 0.5 MG / 송아지 thymus DNA의 ML 솔루션 (증류수) 1 ML을 준비하고 심장 캡이있는 유리관 (2 ML)에 넣어. </li><li> (단계 BD) 절차 7에 설명 된대로 반응을 Degass. </li><li> 30 분 (용량 / 속도 CA. 4.5 GY / 분을 기준으로 계산)에 대한 감마 radiolysis의 장치에 솔루션을 놔. </li></ol> 9. DNA의 효소 소화 <ol><li> DNA의 80 μg을 포함하는 Eppendorf 튜브에, nuclease P1, phosphodiesterase II, 300 MM 나트륨 아세테이트 (산도 5.6), 10 MM 아연 염화물의 20 μl의 EHNA 20 nmol의 0.01 U의 8 U를 추가합니다. 48 시간에 37 ° C에서 혼합물을 품다. </li><li> 다음 알칼리성 인산 가수 분해 효소의 8 U의 혼합, phosphodiesteras의 0.02 U를 추가전자 I, 혼합 소화에 0.5 M 트리스 - HCL 버퍼 (산도 8.9) 40 μl 인치 샘플은 2 시간에 37 ° C에서 incubated입니다. </li><li> 혼합물은 10 % 개미 산성의 추가에 의해 무력화된다. </li><li> Amicon 울트라 0.5 원심 필터 장치 (컷오프 3 kDa)에 샘플을 전송, tridistilled H 2 O. 200 μl를 추가합니다 15 분에 14,000 XG에서 원심 분리기 회 전자에 울트라 필터를 놓습니다. 그런 다음 microcentrifuge 관에서 울트라 필터 장치를 분리합니다. microcentrifuge 관 효소 무료 솔루션을 Lyophilize. </li></ol> 10. 분석에 앞서 DNA 샘플 Desalinization <ol><li> 분석 칼럼과 고성능 액체 크로마토 그래피 분석 (HPLC-UV) (계장 섹션을 참조) 알려진 조건에 따라 6. 실행 </li><li> H 2 O의 20 μl에 동결 건조 된 소화 DNA를 해산하고 HPLC-UV에 주입. </li><li> 소금 용출 (첫 분) 후에 바로 용출 팀 전에 병에 샘플을 수집크로마토 그래피 프로그램의 말까지 첫 번째 뉴 클레오 사이드 (5&#39;R-cdGuo)의 5. </li><li> 샘플은 동결 건조 된 20 μl 물에 resolubilized 있습니다. </li></ol> 11. LC-MS/MS 정량 분석 <ol><li> 분석 방법 및 MS 검출기 (ESI)에 대한 방법을로드하여 분석을 시작하기 전에 HPLC-MS/MS을 (트리플 quadrupole) 준비 6. </li><li> 절차 7에서 준비한 샘플의 isotopic 라벨 화합물 혼합물의 1 μl를 추가합니다. </li><li> 증류수의 아군 소화 DNA 솔루션 20 μl를 삽입. </li><li> 얻은 크로마토 그래피 데이터는 참조 화합물과 이전 보정에 근거하여 정교합니다. 대표 HPLC는 아데노신과 2&#39;-deoxyribonucleosides 및 산화와 cyclo 파생 구아노 신이 그림 11에 표시되어 포함 실행합니다. </li></ol>

<ol><li>Ferreri, C., Chatgilialoglu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+lipidomics+and+the+geometry+of+unsaturated+fatty+acids%3A+from+biomimetic+models+to+biological+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Membrane lipidomics and the geometry of unsaturated fatty acids: from biomimetic models to biological consequences.</a> Methods Molecular Biology. 579, 391-412 (2009).</li>
<li>Chatgilialoglu, C., Ferreri, C., Terzidis, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purine+5%27%2C8-cyclonucleoside+lesions%3A+chemistry+and+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">Purine 5',8-cyclonucleoside lesions: chemistry and biology.</a> Chemical Society Reviews. 40 (3), 1368-1382 (2011).</li>
<li>Chatgilialoglu, C., Ferreri, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-induced+reductive+modifications+of+sulfur-containing+amino+acids+within+peptides+and+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Radiation-induced reductive modifications of sulfur-containing amino acids within peptides and proteins.</a> Journal of Proteomics. 74 (11), 2264-2273 (2011).</li>
<li>Chatgilialoglu, C., Ferreri, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans+lipids%3A+the+free+radical+path%5BTitle%5D)+AND+%22Accounts+Chemical+Research%22%5BJournal%5D)">Trans lipids: the free radical path.</a> Accounts Chemical Research. 38 (6), 441-448 (2005).</li>
<li>Melchiorre, M., Torreggiani, A., Chatgilialoglu, C., Ferreri, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+markers+of+geometrical+radical+stress%3A+synthesis+of+mono-trans+cholesteryl+esters+isomers+and+detection+in+human+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Lipid markers of geometrical radical stress: synthesis of mono-trans cholesteryl esters isomers and detection in human plasma.</a> Journal of the American Chemical Society. 133 (38), 15184-15190 (2011).</li>
<li>Wang, J., Yuan, B., Guerrero, C., Bahde, R., Gupta, S., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+Oxidative+DNA+Lesions+in+Tissues+of+Long-Evans+Cinnamon+Rats+by+Capillary+High-Performance+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+Coupled+with+Stable+Isotope-Dilution+Method%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Quantification of Oxidative DNA Lesions in Tissues of Long-Evans Cinnamon Rats by Capillary High-Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry Coupled with Stable Isotope-Dilution Method.</a> Analytical Chemistry. 83 (6), 2201-2209 (2011).</li>
<li>Boussicault, F., Kaloudis, P., Caminal, C., Mulazzani, Q. G., Chatgilialoglu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fate+of+C5%27+radicals+of+purine+nucleosides+under+oxidative+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">The fate of C5' radicals of purine nucleosides under oxidative conditions.</a> Journal of the American Chemical Society. 130 (26), 8377-8385 (2008).</li>
<li>Ferreri, C., Kratzsch, S., Brede, O., Marciniak, B., Chatgilialoglu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans+lipids+formation+induced+by+thiols+in+human+monocytic+leukemia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radicals+Biology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">Trans lipids formation induced by thiols in human monocytic leukemia cells.</a> Free Radicals Biology & Medicine. 38 (9), 1180-1187 (2005).</li>
<li>Zambonin, L., Ferreri, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+of+trans+fatty+acids+in+rats+fed+a+trans-free+diet%3A+a+free+radical-mediated+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radicals+Biology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">Occurrence of trans fatty acids in rats fed a trans-free diet: a free radical-mediated formation.</a> Free Radicals Biology & Medicine. 40 (9), 1549-1556 (2006).</li>
<li>Puca, A. A., Andrew, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acids+profile+of+erythrocyte+membranes+as+possible+biomarker+of+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Rejuvenation+Research%22%5BJournal%5D)">Fatty acids profile of erythrocyte membranes as possible biomarker of longevity.</a> Rejuvenation Research. 11 (1), 63-72 (2008).</li>
<li>Belmadoui, N., Boussicault, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-induced+formation+of+purine+5%27%2C8-cyclonucleosides+in+isolated+and+cellular+DNA%3A+high+stereospecificity+and+modulating+effect+of+oxygen%5BTitle%5D)+AND+%22Organic+%26+Biomolecular+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Radiation-induced formation of purine 5',8-cyclonucleosides in isolated and cellular DNA: high stereospecificity and modulating effect of oxygen.</a> Organic & Biomolecular Chemistry. 8 (14), 3211-3219 (2010).</li>
<li>Chatgilialoglu, C., Bazzanini, R., Jimenez, L. B., Miranda, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%285%27S%29-+and+%285%27R%29-5%27%2C8-cyclo-2%27-deoxyguanosine%3A+mechanistic+insights+on+the+2%27-deoxyguanosin-5%27-yl+radical+cyclization%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Research+in+Toxicology%22%5BJournal%5D)">(5'S)- and (5'R)-5',8-cyclo-2'-deoxyguanosine: mechanistic insights on the 2'-deoxyguanosin-5'-yl radical cyclization.</a> Chemical Research in Toxicology. 20 (12), 1820-1824 (2007).</li>
<li>Wang, J., Clauson, C. L., Robbins, P. D., Niedernhofer, L. J., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oxidative+DNA+lesions+8%2C5%27-cyclopurines+accumulate+with+aging+in+a+tissue-specific+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">The oxidative DNA lesions 8,5'-cyclopurines accumulate with aging in a tissue-specific manner.</a> Aging Cell. 11 (4), 714-716 (2012).</li>
<li>Ferreri, C., Chatgilialoglu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+fatty+acid-based+functional+lipidomics+in+the+development+of+molecular+diagnostic+tools%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Molecular+Diagnostics%22%5BJournal%5D)">The role of fatty acid-based functional lipidomics in the development of molecular diagnostic tools.</a> Expert Review of Molecular Diagnostics. 12 (7), 767-780 (2012).</li>
</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

자연스럽게 기하학적 트랜스 isomers에 시스 불포화 지방산을 발생의 변환은 생물학적 환경에서 급진적 인 스트레스의 생산과 관련된 변화이다. 지방산이 포함되어 세포막의 지질은, 급진적 인 스트레스와 관련있는 생물학적 대상이며, 우리가 먼저 각각의 경우에 분석 프로토콜을 평가 배양 한 세포, 동물과 인간의 내생 CIS-트랜스 phospholipids의 이성 질화를 공부했습니다. 8-10 우리는 증명이 이러한 변화 다른 급진적 인 스트레스 조건 하에서 thiyl 급진파를 생성 할 수 있습니다 thiols, thioethers 및 disulfides, 즉 isomerizing 에이전트 (그림 3)를 포함하여 S-함유 화합물, 다양한에서 발생할 수 있습니다. 이 문서에 표시된 예는 엄격하게 지방 단백질의 대사에 관여하는 혈장 지질의 잘 알려진 일부를 대표 cholesteryl 에스테르의 클래스에 초점을 맞추고 있습니다. 지방산과 초 사이의 에스테르 결합lesterol는 phosphatidylcholine의 글리세롤 잔기의 위치 2에서 콜레스테롤로 지방산의 양도, transferase 효소 레시틴 콜레스테롤 아실 (LCAT)에 의해 촉매 단계에서 biosynthesized 있습니다. 따라서, 플라즈마 cholesteryl 에스테르는 엄격하게 막 지질 매출로 연결하고, 고도 불포화 지방산 phosphatidylcholines에 일반적으로 존재하는 산 (PUFA), 즉, linoleic와 아라키돈 산의 비교적 높은 비율을 포함하고 있습니다. 지방 단백질 형성은 심혈관 및 대사 질환에 관한 일을하고있다. 자유 래디칼과 자연 cholesteryl 에스테르의 반응성은 (구조 그림 1 참조) 해당 횡단 기하학적 isomers에 변환 할 수있는 linoleate의 이중 채권, arachidonate 잔류 물에서 발생할 수 있습니다. 생물학적 샘플에서 트랜스 cholesteryl 에스테르 내용의 특성화는 biomarker 개발에 대한 흥미 롭습니다. 간접 방법론은 cholestery의 변화로 구성되어 있습니다난 에스테르는 플라즈마에서 해당 지방산 메틸 에스테르 (명성) 및 가스 크로마토 그래피 프로토콜에 의해 분리에 고립. 이 경우, CIS 및 트랜스 지방산 메틸 에스테르의 표준 참조의 교정은 샘플에있는 횡단 콘텐츠의 quantitation를 허용하기 위해 수행됩니다. cholesteryl 에스테르 라이브러리에서 수행 분석 연구를 바탕으로, 우리는 (그림을 참조 해당 명성을 더 derivatization 않고, 또한 플라즈마로부터 격리 cholesteryl 에스테르 분율에 직접 수행 할 수 있습니다 라만 분광법을 기반으로 한 방법을 적용하기 위해 제안 2 9). 이제 더 성공적인 방법은 같은 대신 cholesteryl 에스테르 hydroperoxides에서 설명 별도 CIS 및 HPLC에 의해 지질을 포함하는 지방산의 트랜스 isomers에 설명되지 않습니다하도록 점을 지적 가치가있다. 지금까지 간접적 인 가스 크로마토 그래피 방법은 지금까지 여전히 가장 근접한 방법입니다. 이 방법은 첫 번째 양적 evalu으로건강한 과목의 플라즈마로부터 격리 cholesteryl 에스테르에서 파생 된 모노 트랜스 컨텐츠 ation가 제공되었습니다. 불꽃 이온화 검출기 (FID) detectability의 한계를 사용하면 만족입니다 (ppb) 및 화합물의 nanomolar 수량이 감지되었습니다. 5. 다른 탐지 시스템과이 제한도 낮아 할 수 있습니다. cholesteryl 에스테르의 이온화 방사선의 효과는 선형 응답이 적용 복용에 상대적으로 획득되어 있는지, 추가 연구의 문제입니다. 두 번째 예를 들어, 우리는 DNA의 자유 라디칼 손상에 의해 발생 할 수 있습니다 수정 nucleosides를 선택했습니다. 히드 록실 래디칼 (HO •) DNA에 화학 수정을 일으킬 수있는 능력에 가장 해로운 반응성 산소 종 (ROS)으로 알려져 있습니다. 하나 또는 여러 개의 병변은 진핵 세포의 핵 및 미토콘드리아에 자리 잡고 있다는 DNA에 발생할 수 있습니다. DNA에 산화 생성 손해의 주요 클래스의 식별 및 측정 appropr이 필요합니다분석 프로토콜을 설정하기 위해 분자 라이브러리를 늦게. 우리는 기지와 자유 라디칼 공격에 의해 생성 된 설탕 moieties 사이에 추가 공유 결합을 갖는, purine 5아르 가장 작은 협동 병변, &#39;,8-cyclo-2&#39;-deoxyribonucleosides에 우리의 관심을 초점을 맞추 었습니다. 화합물은 5 &#39;,8-cyclo-2&#39;-deoxyadenosine 5 &#39;,8-cyclo-2&#39;-deoxyguanosine 5&#39;R와 5의 diastereomeric 형태 (그림 5)에서 기존합니다. 자유 라디칼 스트레스 마커가 자신의 잠재력은 기초 연구의 문제입니다.이 사실, DNA는 HO에 노출 될 때 • 설탕 C5 &#39;위치에서 급진적 인 수소 추출이 협동 병변의 형성으로 이어지는 수있는 이벤트 중 하나입니다. Purine 5 &#39;,8-cyclonucleosides는 산소의 생리적 수준에 산소의 양식 부재가는 1-12 병변 / 10 6 nucleosides / GY에서 다양한 효소 소화 γ-방사능 DNA 샘플에 HPLC-MS/MS에 의해 diastereomers의 합으로 측정 될 수 나는N의 조직, diastereomeric 비율은 5&#39;R / 5의 ~ 5 4 ~ 3 &#39;,8-cdAdo 5&#39;,8-cdGuo, 각각 (그림 11). 11는 지적 가치가되는 방사선 선량과의 관계 세포 DNA에서 발견 5 &#39;,8-cdAdo 5&#39;,8-cdAdo의 병변은 이해되지는 거리가 멀다. 2kGy 조사를 기반으로 한 실험 실험에보고하는 것은 결정적으로 간주 될 수 없습니다.이 친절하고 네 개의 병변의 분석 quantitation 11 추가 실험은 관계를 정의하는 데 필요합니다. 이러한 병변의 탐지 및 인기 산화 변환 (예 : 8 - 옥소-2&#39;-deoxyguanosine, 8 oxodGuo 등) 산화 신진 대사를하는 동안 두 병변의 중요성을 증명, 강렬한 조사의 문제입니다. 6,13 HPLC의 사용 -MS/MS (트리플 quadrupole)는 네 가지 병변에 대한 가까운 30fmol에 검색 제한이 있습니다. 마지막 개선 악기 produ에 의해 attomol 수준의 검출 한계에 도달 주장 아르cers. 아주 최근의 문헌을 바탕으로, 6 분석 절차는 MS / MS / MS (이온 트랩) 또는 MS / MS (트리플 quadrupole)를 사용의 감지 한계를 충족하기 위해 샘플과 농축의 적절한 정리를 포함해야 우리의 경우 인치 화합물 1-4의 바이오 영감을 합성 절차는 8 bromopurine의 아래에서 파생 또는 광분해부터 개발되었다. 7,12 이러한 절차는 급진적 인 캐스케이드 (5)의 형성 DNA 손상 메커니즘을 모방 반응 &#39;,8-cdAdo 5&#39;를 포함 ,8-cdGuo의 병변. 생물학적 관점에서, 그것은 이러한 병변은 DNA 복구 메커니즘이 병변에서 유전 물질을 보존 불충분 한 것을 증거를 제공하는 조직에 특정한 방식 (간&gt; 신장&gt; 뇌)에서 노화와 축적을 발견했습니다. 13 사실, 염기 절단 수리 (NER) 유일한 경로는 현재 이러한 병변의 수리를 위해 식별됩니다. 2 두 클래스도 1 및도 5에 도시 된 화합물의 에스는 현재 상업적으로 사용할 수 없습니다 그러나 문학에 설명 된 합성 전략으로는 상업적으로 사용에 대해 이러한 화합물을 준비하는데 불편 함이 없을 것입니다. 화학 생물학 연구에 의해 제공 학제 접근 방식뿐만 아니라 생물학적 환경에서 발생하는 소설 메커니즘의 식별에 엄청난 가치를 가지고뿐만 아니라, 궁극적으로 보건 의료 및 예방 전략에 참신함을 가져, biomarker 발견 및 진단에 근본적인 기여를 할 수 있습니다. 14 화학 기여들은 예측 할 수있을 때 불확실성과 실패를 줄이는 치료 및 영양 중 개입 디자인의 최적의 합리화, 수 있도록 예상됩니다 신진 대사 프로파일 링을위한 통합 플랫폼 및 패널을 만들어, 분자 의학의 성공적인 개발을 위해 필요합니다.

자유 래디칼의 반응은 노화와 염증 등 많은 생물 이벤트에 대한 거대한 중요성을 공개했다. 현재, 그것은 자유 래디칼과 손상의 수리 컨트롤에 대한 기본 메커니즘과 관찰하다 효과적인 전략을 이해하기 위해 더 분명이 반응성에 관련된 각 화학 단계의 설명이 필요한 것입니다. 화학 연구의 기여는 기본이지만, 다른 프로세스의 superimposition이 복잡하고 결과와 관련 결론의 시험을 perturbs 때문에 생물학적 환경에서 직접 연구 어려울 수 있습니다. 따라서, 생물학적으로 관련 조건 하에서 자유 라디칼 반응을 모델링의 전략은 생물학 화학 메커니즘의 연구에 기본 단계가되었습니다. 지난 10 년 우리 그룹은 biomimetic 조건 하에서 자유 라디칼 프로세스 모델을 개발했습니다. 특히 우리는 EN불포화 지방산, nucleosides, 그리고 유황 함유 아미노산의 생물학적 관련성이 높은 변형을 visaged 및 건강 상태의 생체으로 평가하고 검증 할 수있는 트랙에 넣었습니다. 1-4가 우리 일반적인 접근 방식은 세 모듈로 구성 : <ul><li> 적절하게 수정 분자에 대한 액세스를 제공 유기 합성,. 합성 계획도 따라서 biomimetic 급진적 인 화학의 원칙입니다 관심의 생물학적 과정을 시뮬레이션 할 수 조건을 적용, 생물학적 환경에서 발생하는 자유 라디칼 프로세스를 시뮬레이션하기 위해 설계 할 수 있습니다. biomimetic 모델에서 반응 매체는 물이나 친수성과 소수성 구획의 공존으로 인해 이기종 매체입니다. biomimetic 모델에서 작동 할 수있는 장점은 가능성이 발견, 반응성 및 제품은 자세한 내용에 검토 할 수 있습니다 알려져 반응 파트너와 함께 간단한 환경을 가지고하는 것입니다소설 화학 경로. 이 단계에서 기계론의와 운동 정보를 수집 할 수 있습니다; </li><li> 분자 라이브러리를 정리하고보다 복잡한 생물학적 환경을 recognition.in 촉진하기 위해 수정 된 분자의 구조 및 화학 정보를 제공하는 제품의 정제, 분석 및 특성. 프로토콜은 이러한 생물 표본에서 파생 된 것과 같은 화합물의 복잡한 혼합물을 해결의 관점에서도 설치되어있다; </li><li> 생물 배양 한 세포를 사용하여 시험 관내 실험 중 하나로 파생 샘플, 그리고 동물과 인간의 생체 연구를 사용하여 Biomarker 개발. biomimetic 모델로 개발 된 프로토콜은 다음 다른 조건 하에서 자유 라디칼 변환을 관찰하다하는 샘플의 복잡한 분석에 적용됩니다. 합성에 의해 개발 된 분자 도서관은 생명 과학의 발견에 엄청난 도움이됩니다. 정보는 자유 라디칼 변환 giv에 모여전자 기회 수리 및 예방 전략을 찾아 내야합니다. 결과의 데이터베이스는 biomarker의 중요성뿐만 아니라 가능한 관련 요인 변수 분석하여 신중한 평가에 사용할 수 있습니다. </li></ul> cholesteryl 에스테르와 purine 5 &#39;,8-cyclo-2&#39;-deoxyribonucleosides : 우리는이 방법을 믿다에 관련된 생체의 두 과목을 선택했습니다.

<table><tbody><tr><td colspan="4">MATERIALS</td></tr><tr><td>Cholesteryl linoleate &#8805; 98%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0289-100 mg</td><td></td></tr><tr><td>콜레스테릴 아라키도네이트&#8805; 95% </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8753-25mg</td><td></td></tr><tr><td> 2-머캡트&#8211; 탄올</td><td>: 시그마 - 알드리치</td><td>M6250-100 ml</td><td></td></tr><tr><td> 2- 프로판올</td><td>: 시그마 - 알드리치</td><td>34965-1L</td><td></td></tr><tr><td> 메탄올 : 215 SpS </td><td>: Romil</td><td>H409-2,5 L</td><td></td></tr><tr><td> 에탄올</td><td>: 시그마 - 알드리치</td><td>02860-2.5L</td><td></td></tr><tr><td> 클로로포름 : SpS</td><td>: Romil</td><td>H135 2,5 L</td><td></td></tr><tr><td> n- 헥산 95 % SpS</td><td>: Romil</td><td>H389 2,5 L</td><td></td></tr><tr><td> 아세토니트릴 230 SpS</td><td>Romil</td><td>H047 2,5 L</td><td></td></tr><tr><td> 디클로로메탄 SpS</td><td>Romil</td><td>H2022,5 L</td><td></td></tr><tr><td> 사염화탄소</td><td>시그마-알드리치</td><td>107344-1L</td><td></td></tr><tr><td> 요오드화 나트륨</td><td>시그마-알드리치</td><td>383112-100G</td><td></td></tr><tr><td> 탄산수소나트륨</td><td>Carlo Erba</td><td>478536-500 g</td><td></td></tr><tr><td> 디에틸 에테르</td><td>시그마-알드리치</td><td>309966-1L</td><td></td></tr><tr><td> NaCl</td><td>시그마-알드리치</td><td>S7653-5KG</td><td></td></tr><tr><td> NaOH 고체</td><td>시그마-알드리치</td><td>221465-25G</td><td></td></tr><tr><td> NH4OH sol. 28%-30%</td><td>시그마-알드리치</td><td>221228-1L-A</td><td></td></tr><tr><td> 아세트산</td><td>시그마-알드리치</td><td>320099-500ML</td><td></td></tr><tr><td> 암모늄 세륨(IV)설페이트 이수소화물</td><td>시그마-알드리치</td><td>221759-100G</td><td></td></tr><tr><td> 암모늄 몰리브덴산염 사수화물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7302-100G</td><td></td></tr><tr><td> 황산 95%-98%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>320501-1L</td><td></td></tr><tr><td> 질산은</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>209139-25G</td><td></td></tr><tr><td> 무수황산나트륨</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>238597-500G</td><td></td></tr><tr><td> 페니실리움 시트린의 뉴클레아제 P-I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N8630-1VL</td><td></td></tr><tr><td> 포스포디에스테라제 II형 I-sa </td><td>시그마-알드리치</td><td>P9041-10UN</td><td></td></tr><tr><td> 에리스로-9-(2-하이드록시-3-노닐)아데닌, hc</td><td>시그마-알드리치</td><td>E114-25MG</td><td></td></tr><tr><td> 인산가수분해효소 알칼리형 VII-t *bov</td><td>시그마-알드리치</td><td>P6774-1KU</td><td></td></tr><tr><td> 포스포디에스테라제 I 유형 VI</td><td>시그마-알드리치</td><td>P3134-100MG</td><td></td></tr><tr><td> 데옥시리보뉴클레아제 II 유형 IV from * porcin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4138-20KU</td><td></td></tr><tr><td> Trizma (r) base, 생명 공학 성능 ce</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6066-100G</td><td></td></tr><tr><td> EDTA</td><td>시그마 -Aldrich</td><td>E1644-100G</td><td></td></tr><tr><td> 숙신산 bioxtra</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3674-250G</td><td></td></tr><tr><td> 염화칼슘</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670-100G</td><td></td></tr><tr><td> 포름산, 98 % </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>06440-100ML</td><td></td></tr><tr><td> Amicon Ultra-0.5 원심 필터 유닛, Ultracel-3 멤브레인</td><td>Millipore UFC500324</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 8-Bromo-2'-deoxyguanosine</td><td>Berry Associates</td><td>PR3290-1 g</td><td></td></tr><tr><td> 8-Bromo-2'-deoxyadenosine</td><td>Berry Associates</td><td>PR3300-1 g</td><td></td></tr><tr><td> 요오드화 나트륨</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>383112-100G</td><td></td></tr><tr><td> 탄산수소</td>나트륨 <td>Carlo Erba</td><td>478536-500 g</td><td></td></tr><tr><td> 2'-데옥시구아노신:H2O (U-15N5, 96-98%)</td> <td>Cambridge Isotope Laboratories, Inc</td><td>CILNLM-3899-CA-0.1</td><td></td></tr><tr><td> 2'-데옥시아데노신(U-15N5, 98%) 95%+ 화학적 순도</td><td>Cambridge Isotope Laboratories, Inc</td><td>CILNLM-3895-0.1</td><td></td></tr><tr><td> 아산화질소(N2O) </td><td></td> 송아지 흉선의 공기 액체 <td></td><td></td></tr><tr><td> 디옥시리보 핵산</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4522-5MG</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">EQUIPMENT</td></tr><tr><td>60Co-Gammacell</td><td>AECL- Canada</td><td>220</td><td></td></tr><tr><td>침지 우물 반응 중간 압력 125와트 </td><td>Photochemical reactors ltd</td><td>모델 3010</td><td></td></tr><tr><td>증발 플라스크 250 ml</td><td>Heidolph</td><td>P/N NS 29/32 514-72000-00</td><td></td></tr><tr><td>Luna 5 &mu; m C18(2) 100 &#197;, LC 컬럼 250 x 4.6 mm </td><td>Phenomenex</td><td>00A-4252-E0</td><td></td></tr><tr><td>Alltima C8 컬럼 250 x 10 mm 5 &mu; m</td><td>Grace</td><td>88081</td><td>반분취</td></tr>용 <tr><td>SecurityGuard Kit</td><td>Phenomenex</td><td>KJ0-4282</td><td>분석 홀더 키트 및 액세서리</td></tr><tr><td>10.0mm ID 카트리지용 홀더</td><td>Phenomenex</td><td>AJ0-7220</td><td>반분취용 홀더 </td></tr><tr><td>10.0mm ID 카트리지 </td><td>Phenomenex</td><td>AJ0-7221</td><td></td></tr><tr><td>고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) </td><td>Agilent</td><td>1100</td><td></td></tr><tr><td>LC/MS/MS </td><td>Applied Biosystems</td><td>4000QTRAP 시스템</td><td></td></tr><tr><td>탠덤 질량 ESI 분광계</td><td>(Bruker Daltonics)</td><td>Esquire 3000 plus</td><td></td></tr><tr><td>바이알 2-4ml </td><td>SUPELCO</td><td>Cod 27516</td><td></td></tr><tr><td>바이알 4ml </td><td>SUPELCO</td><td>Cod 27517</td><td></td></tr></tbody></table>

화학 생물학에서의 자유 부수 : 화학 행동의 biomarker 개발에

Free Radicals in Chemical Biology: from Chemical Behavior to Biomarker Development

생명 과학에서 자유 래디칼의 참여가 지속적으로 시간이 증가하고 여러 생리 학적 및 병리학 프로세스에 연결되었습니다. 이 주제는 생명, 건강과 노화의 품질 개량에 응용 프로그램, 생물학, 의학에 물리적, 생물학적 및 bioorganic 화학에서 걸치는, 다양한 과학 분야를 포용. 종합 기술은 지식을 기본 프로세스와 메커니즘을 발표했다에 중요한 역할을 담당하고 생물 환경 화학의 근본적인 프로세스의 여러면의 전체 조사가 필요합니다. 우리는 기계론의 경로와 제품에 대한 정보를 제공, 생물 공정과 자유 라디칼 화학 반응성을 연결할 수 화학 생물학 접근 방식을 개발했습니다. 이 방법의 핵심은 반응 통찰력을 획득, 수성 시스템에 생체 분자 동작을 (지질, 핵산 및 단백질) 공부하는 biomimetic 모델의 설계 것은 물론 경로S는 자유 라디칼 반응 제품의 분자 라이브러리를 구축. 이 문맥이 성공적으로 biomarker 발견에 사용될 수 있으며 예는 화합물의 두 클래스와 함께 제공됩니다 : 합성과 인간의 플라즈마의 검출에 대한 참조로 사용되는 cholesteryl 에스테르의 모노 트랜스의 isomers, 그리고 purine 5 &#39;,8-cyclo-2 &#39;-deoxyribonucleosides, 준비 DNA 샘플에 이러한 병변의 검출을위한 프로토콜의 참고 자료로 사용 이온화 radiations 후 또는 다른 건강 상태에서 얻은.

이성 질화 과정은 생물학적 환경에서 자유 라디칼 스트레스 조건 하에서 발생할 수 있습니다이 공격의 첫 번째 제품으로 그림 1에 표시된 모노 트랜스 linoleic의 isomers와 아라키돈의 산을 affording cholesteryl 에스테르에 대한 특정에 설명되어 있습니다. 5 그림 3에서 CIS - 트랜스 이중 결합의 이성 질화에 참여 화학 장치가 표시됩니다. 급진적 인 소스는 S-중심의 급진파 여유가 할 수있는 일반적인 방법으로 표시됩니다. 설명 프로토콜에서 급진적 인 소스 homolitically thiol 분자 RSH의 SH 채권 선물을 깰 수 있습니다 UV 빛입니다. 그림 4는 인간의 플라즈마의 수정 된 지질 클래스와 감지의 합성을위한 3 단계 프로토콜을 요약 : 합성 biomimetic 자유 라디칼 과정을 의미하고 또한 geomet에 한 냄비 편리하게 항목을 제공합니다위치 isomers에 의한 오염이없는 rical isomers는 정화 및 분리 프로토콜이 나타납니다. 여러 분석 방법은 모노 트랜스 cholesteryl 에스테르 라이브러리의 트랜스 이성체 내용 및 특성의 높은 민감한 검출에 적용 할 수 있습니다. 특히, 라만 분광 (그림 2, 그림 9 참조) derivatization 않고 직접 cholesteryl 에스테르 분율을 수행 할 수 있습니다. 두 번째 예를 들어 문제의 purine 5 &#39;,8-cyclo-2&#39;-deoxyribonucleosides, 위치 설탕 잔기의 C5 &#39;와 설탕과베이스 사이에 공유 결합의 후속 형성에 유리기의 공격에 의해 만들어 DNA의 병변 아르 moieties. 네 구조를 생산할 수, 그 5 &#39;,8-cyclo-2&#39;-deoxyadenosine 5 &#39;,8-cyclo-2&#39;입니다 - deoxyguanosine, 모두 5&#39;R와 5의 diastereomeric 형태 (그림 5)에서 기존. 그림 6t의그가 반응 메커니즘이 표시되어, 그 해당 C8에게 intramolecularly 선택적으로 2&#39;-deoxyadenosin-5&#39;-yl 급진적 인 7 affording C5 &#39;위치에서 수소 원자를 추상화 급진적 6, 부여 8 bromopurine 유도체 (5)의 광분해을 포함한다. 급진적 인 7 범위 10 5 -10 6 초 -1, 2 최종 제품 구를 제공 할 수있는 heteroaromatic 급진적 8 산화 다음의 상수 속도로 cyclization를 겪. 2&#39;-deoxyadenosine 및 2&#39;-deoxyguanosine과 물 radiolysis에 의해 생성 된 히드 록실 래디칼의 반응은, (10) CA 발생하는 발견되었습니다. C5 &#39;위치에서 수소 추출하여 10 %. 7 purine 5 라이브러리에 대한 화학 생물학 접근 방식 &#39;,8-cyclo-2&#39;-deoxyribonucleosides은 (라벨이 화합물 포함) oligonucleotides에서 이러한 병변의 식별과뿐만 아니라 VA에서 얻은 DNA 샘플에서, 그림 7에 도시된다같은 rious 소스는 예를 들어, 급진적 인 스트레스 조건의 모방으로 이온화 방사선 조건 하에서 처리. 그림 8에서는 전형적인 photoreactor 장비가 표시됩니다. 이 장치는 적절한 용매에 용해 화합물을 조사 할 수 있습니다. 그것은으로 구성되어 있습니다 :) 전 불활성 가스 (하단)와 가스 출구 두 유입구 및 시약 첨가에 대한 유입이 장착 된 반응 챔버, II) 적절한 수은 램프를 포함하는 내부 챔버 냉각 시스템에 연결 과 유리 공동을 통해 반응 챔버에 삽입되는 전력. <img alt="그림 1" fo:content-width="6.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50379/50379fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50379/50379fig1.jpg" /> 1 그림. cholesteryl의 linoleate와 arachidonate의 모노 트랜스의 isomers. <p class="jove_content" fo:keep-together.within 페이지 = &quot;항상&quot;&gt; <img alt="그림 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50379/50379fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50379/50379fig2.jpg" /> 그림 2. 라만 분광법에 의한 모노 트랜스의 isomers에 대한 인간의 혈청 및 직접 분석 Cholesteryl 에스테르. <img alt="그림 3" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/50379/50379fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50379/50379fig3.jpg" /> 그림 3. 그 외에도 - 제거 프로세스는 thiyl 래디칼의 두 채권의 CIS - 트랜스 이성 질화로 연결됩니다. <img src="/files/ftp_upload/50379/50379fig4.jpg" alt="그림 4" /> 4 그림. 자유 라디칼 스트레스 biomarker로 모노 트랜스 cholesteryl 에스테르의 개발을위한 세 단계 프로토콜입니다. <img alt="그림 5" fo:content-width="6.5in" fO : SRC = SRC = &quot;/ files/ftp_upload/50379/50379fig5.jpg&quot;/ &quot;를 / files/ftp_upload/50379/50379fig5highres.jpg&quot;&gt; 그림 5. 네 가지 purine 5 &#39;,8-cyclo-2&#39;-deoxyribonucleoside의 diastereoisomers이 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50379/50379fig5large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <img alt="그림 6" fo:content-width="6.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50379/50379fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50379/50379fig6.jpg" /> 6 그림. C5의 세대 &#39;급진파, 중 5 광분해 또는 HO • 래디칼과 10 반응, 그리고 purine (5)의 메커니즘으로&#39;,8-cyclo-2 &#39;deoxyribonucleoside 형성. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50379/50379fig6large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <img src="/files/ftp_upload/50379/50379fig7.jpg" alt="그림 7" /> 그림 7. 프로토콜 F일부 급진적 인 기반 DNA의 병변 또는 식별, mtDNA : mitochondrial의 DNA, nDNA : 핵 DNA. <img src="/files/ftp_upload/50379/50379fig8.jpg" alt="그림 8" /> 그림 8. 광화학 반응. <img src="/files/ftp_upload/50379/50379fig9.jpg" alt="그림 9" /> 9 그림. 플라즈마 cholesteryl 에스테르의 대표 라만 스펙트럼. cholesteryl linoleate 및 cholesteryl 모노 트랜스 리놀레산의 isomers이있는 특정 지역의 삽입 비교합니다. <img src="/files/ftp_upload/50379/50379fig10.jpg" alt="그림 10" /> 10 그림. 명예의 대표 GC 분석은 플라즈마 cholesteryl의 에스테르로부터 얻은. <img alt="그림 11" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50379/50379fig11highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50379/50379fig11.jpg" /> &lt;&gt; 그림 11 강한. 대표 HPLC는 2&#39;-deoxyadenosine 포함을 실행하고 산화 및 purine 5와 함께 2&#39;deoxyguanosine &#39;,8-cyclo-2&#39;-deoxyribo의 nucleosides이 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50379/50379fig11large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> .

급진적 기반 biomimetic 화학은 biomarker 개발에 필요한 건물 업 라이브러리에 적용되었습니다.

화학 생물학에서의 자유 부수 : 화학 행동의 Biomarker 개발에

The involvement of free radicals in life sciences has constantly increased with time and has been connected to several physiological and pathological ...

본 실험의 전반적인 목표는 생체 분자의 자유 라디칼 변형 모델을 제공하는 것입니다. 이를 통해 얻은 화학적, 기전적 및 분석적 정보는 생물학, 의학 및 바이오마커 발굴 분야에 적용될 수 있습니다. 이는 먼저 UV 광선으로 개시된 자유 라디칼 조건 하에서 적절하게 변형된 생체 분자를 합성함으로써 달성됩니다.합성 계획은 생물학적 환경에서 발생하는 자유 라디칼 공정을 모사하도록 설계될 수 있으며, 이것이 바로 생의학적 라디칼 화학의 원리입니다. 두 번째 단계로 생성물을 정제, 분석 및 특성 분석하여, 분자 라이브러리를 구성하고 복잡한 생물학적 환경 내에서의 인식을 용이하게 하기 위해 변형된 생체 분자의 구조적 및 화학적 정보를 제공합니다. 사용된 프로토콜은 생물학적 시료에서 유래한 화합물과 같은 복잡한 혼합물의 분리를 가능하게 합니다.마지막으로, 바이오마커를 개발하기 위해 인비트로(in vitro) 세포 배양 실험과 동물 및 인간을 대상으로 한 인비보(in vivo) 연구가 활용됩니다. 이러한 결과들은 복잡한 변환 과정을 이해하는 데 있어 자유 라디칼 반응에 대한 화학생물학적 연구가 중요하다는 것을 보여주며, 이는 생명체 내 신호 전달 및 손상의 기초가 될 수 있습니다. 저희 연구 그룹은 건강 응용 분야를 위해 화학 및 화학적 기술을 생물학적 과정에 접목하는 학제간 연구 접근 방식을 취하고 있습니다.먼저, 자유 라디칼 공정으로 인한 생물학적 관련 분자의 변형 라이브러리를 구축하기 위해 적절하게 설계된 생체 모방 시나리오를 사용하여 화학적 메커니즘을 연구합니다. 그런 다음, 자유 라디칼 공격의 결과로 변형된 화합물이 존재하는 생물학적 시료에 대한 더 복잡한 연구로 전환합니다. 흔히 생물체 내의 자유 라디칼 스트레스는 그 효과를 설명할 수 있는 신뢰할 수 있고 실행 가능한 화학적 메커니즘이 부족한 경우가 많습니다.이러한 접근 방식은 다른 생명 과학 분야와 화학적 지식을 교환할 수 있게 하여, 생물학적 프로세스를 완전히 이해하기 위한 공통의 기반을 마련합니다. 이는 21세기 분자 과학의 연구 과제에 직면하여 다학제적 및 학제간 접근 방식을 갖추어야 하는 차세대 과학자들에게 매우 중요한 교육입니다. 저희 실험실에서 근무하는 5명의 연구원이 해당 절차를 시연할 예정입니다.본 연구소의 정규 연구원인 Anna, 이탈리아 교육부의 지원을 받는 박사후 연구원 Michel, 저희 그룹의 펠로우이자 박사후 연구원인 Mika to Mauri, 그리고 다시 저희 그룹의 정규 연구원인 Annaa Azi가 참여하였습니다. 먼저 15 mM CHO sterile linoleate Ester propanol 용액을 15분 동안 초음파 처리하십시오. 해당 용액을 석영 광화학 반응기로 옮긴 후, 2 M tumor capto ethanol propanol 용액 7.6 µL를 첨가하십시오.램프를 반응기에 삽입하고 아르곤 유량을 조절합니다. 반응 혼합물을 아르곤으로 20분 동안 퍼지합니다. 용액 내 산소를 제거하기 위해, UV 광원을 끈 후 22 ± 2 °C에서 5.5 저압 수은 램프를 사용하여 반응 혼합물을 4분 동안 UV 광선으로 조사합니다.분석용 silver TLC를 통해 mono trans cho sterile ester의 형성을 모니터링합니다. TLC 플레이트를 cerium ammonium MA date 용액에 담근 후, 플레이트에 반점이 나타날 때까지 가열합니다. 다음으로, 반응 혼합물을 둥근 바닥 플라스크에 수집합니다.반응기를 수 밀리리터의 2-propanol로 세척하고 해당 용액을 동일한 플라스크로 옮깁니다. 회전 증발 농축기를 사용하여 용매를 제거합니다. 문헌에 기술된 대로 silver TLC를 이용하여 co steryl linoleate ester의 mono trans 이성질체를 정제합니다.정제 후 용리액으로 헥산과 디에틸 에테르를 9:1 부피비로 사용하십시오. 사람 혈청 1 mL를 브라인(brine) 1 mL로 희석한 다음, 아르곤 기류 하에서 해당 용액을 분별 깔때기로 옮기십시오. 산화 부가물이 생성되는 것을 방지하기 위해, 깔때기에 클로로포름-메탄올 10 mL를 첨가하십시오.에멀젼 형성을 제한하기 위해 분별 깔때기를 매우 천천히 흔들어 줍니다. 알부민의 존재로 인해 두 층이 분리될 때까지 기다린 후, 깔때기 하단의 유기층을 제거합니다. 이 추출 과정을 3회 반복합니다.합쳐진 유기층을 분별 깔때기로 옮기고 10 milliliters의 brine으로 한 번 세척합니다. 아르곤 기류 하에서 유기층을 삼각 플라스크에 수집하고 무수 황산나트륨을 첨가합니다. 솜을 끼운 유리 깔때기로 용액을 여과합니다.여과액을 둥근 바닥 플라스크로 옮기고 회전 증발기로 휘발성 성분을 제거합니다. 조유(crude oil)를 2:1 부피 비율의 클로로포름 및 메탄올 혼합액 1 mL에 녹인 후, 아르곤 기류 하에서 분리용 TLC 플레이트에 로딩합니다. 헥산과 에틸 에테르 혼합물을 전개 용매로 사용하여 콜레스테롤 에스테르 분획이 포함된 실리카 부분을 긁어내어 바이알로 옮깁니다.다음으로, 2:1 클로로포름-메탄올 5 mL를 사용하여 실리카를 3회 추출합니다. 진공 상태에서 뷰히너 깔때기를 통해 실리카를 여과하고 유기층을 둥근 바닥 플라스크로 옮깁니다. 그 후 용매를 증발시켜 순수한 cho sterile 에스테르를 얻습니다.플라스크에 담긴 에스테르를 헥산으로 용해합니다. 용액을 바이알로 옮기고 아르곤 기류 하에서 용매를 증발시킵니다. 콜레스테롤 에스테르를 알루미늄 호일로 감싼 어두운 바이알에 넣어 아르곤 분위기의 -20 °C에서 보관합니다.다음 단계는 8-bromo-2-dioxadenosine 33 mg을 acetonide trial 100 mL에 녹이는 것입니다. 광반응기 하단의 아르곤 가스 흐름을 조절하고 용액을 주입하십시오. 그런 다음 바늘을 격막 중앙으로 통과시켜 반응기 배출구 중 하나에 배치하십시오.그런 다음, 다른 광반응기 입구를 또 다른 격막(septum)으로 밀봉하고 불활성 가스로 30분 동안 퍼지합니다. 이어서 수냉 순환 장치를 조절하고 UV 램프를 켭니다. 22±2 °C에서 125W 중압 수은 램프를 사용하여 15분 동안 UV 광조사를 수행합니다.용액을 250 milliliter 둥근 바닥 플라스크에 수집합니다. 광반응기를 10 milliliters의 acetonitrile으로 세척하고 세척액을 동일한 플라스크로 옮깁니다. 다음으로, 조반응 혼합물을 1 molar ammonium hydroxide로 퀜칭하고 용매를 증발시킵니다.회전 증발기를 사용하여 C 18 분석 컬럼으로 고성능 액체 크로마토그래피 분석을 수행하고, 기준 화합물과 프로파일을 비교하십시오. 용매 A로는 2 mM ammonium formate를, 용매 B로는 ACEDONITE trial을 사용하십시오. 두 가지 DIA 입체 이성질체 생성물에 해당하는 크로마토그래피 피크를 두 개의 서로 다른 파일로 수집하십시오. 크로마토그래피 조건은 텍스트 프로토콜을 참조하십시오.수집된 두 분획의 흡광도를 UV 분광광도계로 측정하고, Lambert-Beer 법칙에 근거하여 정확한 농도를 계산합니다. 2'-deoxyadenosine의 소멸 계수를 사용하십시오. 8-bromo-2'-deoxyguanosine 35 mg을 증류수 100 mL에 녹입니다. 아르곤 유량을 조절하고 포토셀을 채웁니다.앞서 설명한 대로 반응 혼합물을 탈기한 후 반응 용액과 반응시킵니다. 22 ± 2°C에서 125W 중압 수은 램프를 사용하여 30분 동안 UV 광선을 조사하고, 용액을 250mL 둥근 바닥 플라스크에 수집합니다. 광반응물을 세척하고, 10mL의 물과 반응시킨 후 세척액을 동일한 플라스크로 옮깁니다. 조반응 혼합물을 1M 수산화암모늄 용액으로 퀜칭하고, 진공 상태에서 용매를 증발시킵니다.앞서 설명한 대로 분석을 수행하십시오. 증류수에 송아지 흉선 DNA를 0.5 mg/mL 농도로 조제하여 1 mL를 준비하고, 이를 격막 캡이 있는 2 mL 유리 바이알에 옮깁니다. 1인치 바늘을 아산화질소 가스 라인에 연결한 후, 바늘이 바이알 바닥에 닿을 때까지 격막 중앙을 통해 삽입합니다.그 다음, 가스 배출구를 확보하기 위해 격막에 짧은 바늘을 삽입하십시오. 탈기 후 30분 동안 아산화질소로 용액을 퍼지하십시오. 바이알 내부의 압력이 유지될 수 있도록 짧은 배출 바늘을 먼저 뽑은 후, 1인치 바늘을 뽑으십시오.용액을 감마선 조사 장치로 옮기고 80 µg의 DNA가 포함된 DPH 튜브 상단에 30분 동안 조사합니다. 미리 준비된 효소 소화 혼합물을 첨가하고 피펫팅을 통해 부드럽게 섞어줍니다. 혼합물을 37 °C에서 48시간 동안 배양합니다.다음으로, 알칼리성 인산분해효소(alkaline phosphatase)와 포스포디에스테라제(phosphodiesterase)가 포함된 미리 준비된 HCl 완충액 혼합물을 소화 혼합물에 첨가하고, 피펫팅을 통해 부드럽게 섞어줍니다. 혼합물을 37 °C에서 2시간 동안 배양합니다. 마이크로 원심분리 튜브에 장착된 원심분리 필터에 10% formic acid 5 µL를 첨가하여 혼합물을 중화합니다.시료와 200 µL의 3차 증류수를 첨가한 후, 내용을 14,000 ×g에서 15분 동안 원심분리합니다. 그다음 마이크로 원심분리 튜브에서 필터 장치를 분리합니다. 마이크로 원심분리 튜브에 파라필름을 씌우고 액체 질소에 넣어 동결시킵니다.그 다음 마이크로 원심분리관에 담긴 효소 제거 용액을 동결 건조하십시오. 시스-트랜스 이중 결합 이성질화에 관여하는 화학적 메커니즘은 여기에 표시되어 있습니다. 라디칼원은 S 중심 라디칼을 생성하도록 일반적인 방식으로 표시되었습니다.설명된 프로토콜에서 UV 광선은 개시제 역할을 하며, tumor capto ethanol의 SH 결합을 끊습니다. 변형된 지질 클래스 개발을 위한 3단계 프로토콜은 합성 전략, 해당 화합물의 정제 및 특성 분석, 그리고 인간 혈장 내 검출로 구성됩니다. 이 합성은 바이오미메틱 자유 라디칼 공정을 나타내며, 위치 이성질체의 오염 없이 기하 이성질체에 편리하게 접근할 수 있는 원팟(one pot) 경로를 제공합니다.trans 이성질체 함량의 고감도 검출과 mono trans-에스테르 라이브러리의 특성 분석을 위해 여러 분석 방법론이 사용될 수 있습니다. 특히, 라만 분광법은 유도체화 과정 없이 콜레스테롤 에스테르 분획에서 직접 수행할 수 있습니다. 여기 콜레스테롤 에스테르의 대표적인 라만 스펙트럼이 제시되어 있습니다.삽입도는 Cho steryl linoleate와 cho steryl mono trans linoleic acid 이성질체를 비교한 스펙트럼의 특정 영역을 보여줍니다. purine five prime eight cyclo. Two prime diox ribonucleotides는 유리 라디칼이 당 잔기의 C five 위치를 공격하고, 이후 당과 염기 잔기 사이에 공유 결합이 형성되어 생성되는 DNA 손상입니다. 이 반응에서는 4가지 입체 이성질체가 형성될 수 있습니다.5' eight cyclo, 2' diox adenosine 및 5' eight cyclo, 2' deoxy guine은 모두 5' R 및 5' S 형태로 존재합니다. 8-bromo purine 유도체의 광분해 반응 메커니즘이 여기에 제시되어 있습니다. 8-bromo purine 유도체 5의 광분해를 통해 해당 C8 라디칼 6이 생성되며, 이는 이후 C5' 위치에서 수소 원자를 분자 내에서 추상하여 선택적으로 라디칼 7을 생성합니다.라디칼 seven은 고리화 반응을 거친 후 헤테로 방향족 라디칼 eight의 산화 과정을 통해 화합물 nine을 생성합니다. 화합물 10과 물의 방사분해로 생성된 하이드록실 라디칼의 반응은 C five 위치에서의 수소 추출에 의해 약 10% 발생하였습니다. 여기서는 이전에 설명된 분자 라이브러리를 사용하여 올리고뉴클레오타이드 및 다양한 기원에서 얻은 DNA 샘플 내의 이러한 병변을 식별하기 위한 퓨린 five prime eight cyclo, two prime deoxyribo 뉴클레오사이드 라이브러리에 대한 화학생물학적 접근법을 설명합니다.DNA 뉴클레오사이드와 그 산화 및 고리형 유도체의 lc 분석 인식에 대한 대표적인 예가 여기에 제시되어 있습니다. 이 절차를 수행할 때 L-C-M-S-A-G-C와 같은 분석 장비의 효율성은 표준 화합물의 보정을 통해 적절히 확인해야 한다는 점을 기억하는 것이 중요합니다. 또한, 생물학적 시료를 분석할 때는 화합물의 만족스러운 분리를 달성하는 것이 중요합니다.이 영상을 시청한 후, 화학적 지식 및 실험 기술을 생물학적 시스템과 연결하여 분자 라이브러리의 식별 또는 라디칼 기반 변형을 바이오마커 발견 및 세포 스트레스 평가로 전이시키는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

free-radicals-chemical-biology-from-chemical-behavior-to-biomarker

Research

연구

JoVE Journal

Chemistry

화학

스핀 - 트래핑 ESR 분광법은 공장 산화 억제제 lycopene, pycnogenol와 담배 연기의 가스 상에게 자유 래디 칼을 청소에 포도 종자 추출물의 효과를 연구하는 데 사용되었다.

메인 스트림 담배 연기에 자유 래디 칼을 감지하고 가스 단계 청소를위한 프로토콜

낮은 분야 (L-밴드, 1.2 g h z) 전자 상자성 공명 녹는 nitroxyl 및 trityl 프로브를 사용 하 여 유방암의 마우스 모델에서 종양 microenvironment에 생리 적으로 중요 한 매개 변수 평가 대 한 시연입니다.

Vivo에서 PH, pO2, 산화 환 원 상태, 고 농도의 인산 염 및 종양 Microenvironment에 티의 EPR 평가

이 원고 xenobiotic 유발 산화 스트레스의 시험에 대 한 유전자 인코딩된 fluorogenic 기자 라이브 셀 이미징 응용 프로그램에서 사용을 설명합니다. 이 실험 방법은 많은 독성 산화 스트레스의 검색에 사용 되는 기존 방법의 단점을 피하는 동안 탁월한 spatiotemporal 해상도, 감도 및 특이성을 제공 합니다.

유전자로 인코딩된 Fluorogenic 센서를 사용 하 여 독성 산화 스트레스의 평가에 접근을 이미징

전자 상자성 공명 (EPR) 분광학은 자유 래 디 칼을 측정 하는 명확한 방법입니다. 선택적 스핀 프로브를 사용 하 여 다른 세포질 격실에서 자유 래 디 칼의 검출에 대 한 수 있습니다. 우리는 치료, 저장 및 전송 EPR 측정용 샘플을 용이 하 게 하는 생물 학적 샘플을 수집 하는 실용적이 고 효율적인 방법을 제시.

사용 주위 온도 77 K에서 생물학 견본에서 전자 상자성 공명

우리는 병 변의 민감하고 정확한 정량화를 위한 방법을 여기에 설명 합니다. 8-옥 소-7, 8 디 하이드로 deoxyguanosine),1n6조-2-deoxyadenosine 및1, n6조-2dado deoxyguanosine (1,n2-dguo) DNA에. 이 방법은 노출 된 A/J 마우스의 조직 (폐, 간 및 신장)에서 주변 미세 미 립 자 물질 (PM2.5)의 영향에 대 한 평가에 적용 되었다.

질량 분 광 법에 의해 3 개의 DNA 병 변의 정량화 및 주변 미세 입자 상 물질에 노출 된 마우스의 조직에서 그들의 수준에 대 한 평가

티오바르비투릭 산 반응성 물질 분석의 목표는 532 nm에서 가시파장 분광측을 사용하여 지질 과산화 제품, 주로 말론다이얼데히드의 생산을 측정하여 생물학적 샘플에서 산화 스트레스를 평가하는 것입니다. 여기에 설명된 방법은 인간 혈청, 세포 리스, 저밀도 지단백에 적용될 수 있다.

티오바르비투릭 산 반응성 물질 분석체를 이용한 생물학적 시료의 산화 스트레스 평가

단백질의 빠른 광화학 산화는 단백질의 구조적 특성화를 위한 새로운 기술입니다. 다른 용매 첨가제와 리간드는 다양한 하이드록실 라디칼 청소 특성을 가지고 있습니다. 상이한 조건에서 단백질 구조를 비교하기 위해서는 반응에서 생성된 하이드록실 라디칼의 실시간 보상이 반응 조건을 정상화하는 데 요구된다.

단백질 지형 변화의 측정을 위한 단백질의 빠른 광화학 산화에 실시간 보상 가능하게

반응성 친전자필 및 산화제(Z-REX)를 표적으로 하는 제브라피쉬는 반응성 소분자 신호 조사를 위한 화학 생물학 기반 방법입니다. 이 기술은 다양한 발달 단계의 활어에 적용 할 수 있습니다. 여기에서는 신호 전달 경로 분석을 위해 제브라피쉬의 표준 분석과 Z-REX를 결합합니다.

유충 제브라피쉬의 표적 신호 반응 모니터링 - Z-REX는 친전자성 약물 및 대사 산물의 정확한 메커니즘을 밝힙니다.

이 프로토콜은 고처리량 스크리닝 접근 방식을 사용하여 형광 염료 프로브로 디하이드로에티듐(DHE)을 사용하여 세포 내 활성 산소종(ROS)을 정량화하는 새로운 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 세 가지 서로 다른 간세포 암종 세포주에서 세포 내 활성 산소종(ROS)의 정량적 평가 방법을 설명합니다.

Dihydroethidium(DHE) 형광 염료를 사용한 활성 산소종(ROS) 생성의 고처리량 스크리닝 평가

산화된 글루타치온과 환원된 형태의 글루타치온(각각 GSSG 및 GSH)의 정량화는 오르토프탈알데히드(OPA)를 사용하여 달성되었습니다. OPA는 GSH에 접합되면 고농도 형광성이 되지만 감소될 때까지 GSSG를 접합할 수 없습니다. 여기에서는 정규화를 위해 단백질 정량을 사용하여 두 가지를 모두 정량화하는 다중 파라메트릭 분석에 대해 설명합니다.

In vitro에서 배양된 포유류 세포에서 ortho -phthaldehyde를 사용한 산화 및 환원 형태의 글루타치온의 신속한 정량화

배우세요 화학 생물학에서 자유기 기반 생체유사 화학을 활용한 생물분자 변형 및 바이오마커 개발 방법을. UV 개시 합성과 분석 기법을 통해 생물학적 환경에서의 분자 인식을 연구합니다.

화학 생물학에서의 자유 부수 : 화학 행동의 Biomarker 개발에

더 많은 동영상 탐색