Name: Uso de Citometria de imagem para quantificação de fungos patogênicos em associação com células do hospedeiro (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-19T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 58 s
Description: Aprenda a usar citometria de imagem para quantificar fungos patogênicos em associação com células do hospedeiro. Este método oferece uma alternativa eficiente à contagem tradicional de unidades formadoras de colônias.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Infecção de macrófagos com H. capsulatum, Candida albicans <ol><li> 16 horas antes da infecção, os macrófagos de sementes com uma densidade desejada em placas de 24 poços. Neste protocolo, foi utilizada uma densidade de 3,0 x 10 5 células / poço. </li><li> Adicionar células fúngicas em crescimento de fase log a uma multiplicidade desejada de infecção (MOI). Este protocolo pode acomodar uma gama de MOI (0,2-5,0). Para a infecção de macrófagos RAW264.7 com H. capsulatum, foi utilizada uma MOI de 0,2. </li><li> Após 1,5 horas para permitir a fagocitose, macrófagos lavar três vezes com PBS para remover fungos extracelulares. </li><li> Incubar número desejado de horas antes da análise de amostras. Em baixa MOI (0,2 na nossa experiência), células de macrófagos infectados permanecem viáveis ​​durante vários dias, e as amostras podem ser analisadas aproximadamente a cada 12-24 horas. </li></ol> 2. Lise de macrófagos <ol><li> Para libertar os fungos a partir de células de macrófagos, ao remover a mídia, lavar 3 vezes com PBS, eadicionar 0,5 ml de água estéril. Sob estas condições, os macrófagos e irá lisar células fúngicas permanecerá intacta. </li><li> Incubar durante 5 min a temperatura ambiente. </li><li> Transferir lysate para tubo estéril, manter em gelo. </li><li> Transferir 20 uL de ligado a um tubo separado, em seguida, adicionar 20 ul AO / PI solução. Prosseguir diretamente para a etapa 5: &quot;Preparação de Amostras para análise por citometria de imagem&quot; </li></ol> 3. UFC chapeamento <ol><li> Realizar diluição de dez vezes de lisados ​​(do passo 2.3) em meios. </li><li> Placa de 100 ul de cada diluição em duplicado, em placas HMM-agarose. Incubar as placas numa câmara húmida a 37 ° C com 5% de CO 2 durante 7-8 dias. </li><li> Contar manualmente colônias em placas indicam um mínimo de 100 e um máximo de 1.000 colônias distintas. </li></ol> 4. Visualização de fungos no interior dos macrófagos ao vivo <ol><li> Para a coleta de macrófagos ao vivo, lave as células três vezes com PBS. Adicionar 0,5 ml de PBS, e incubar durante 30 min a 4 ° C.</li><li> Para remover os macrófagos dos poços de cultura de tecidos, pipeta suavemente para cima e para baixo várias vezes. Transferência líquida para tubo estéril, manter em gelo. </li><li> Transferir 20 uL de amostra a um tubo separado, em seguida, adicionar 20 ul AO / PI solução. Prosseguir diretamente para a etapa 5: &quot;Preparação de Amostras para análise por citometria de imagem&quot;. </li></ol> 5. Preparação de amostras para análise por citometria de imagem <ol><li> Pipetar a amostra-alvo e completamente em seguida, transferir 20 mL de amostra para a célula descartável câmara de contagem. </li><li> Permitir que as células se instalar na câmara por 30 segundos. </li><li> Insira câmara de contagem para o citômetro de imagem. </li></ol> 6. Configuração do Instrumento Cellometer <ol><li> Insira a ótica de fluorescência Módulos: VB-535-402 e VB-660-502 para o sistema e verifique se eles estão presos no local. <ol><li> VB-535-402 (excitação a 475 nm, emissão a 535 nm), é usada para a detecção de laranja de acridina e de GFP. </li><li> VB-660-502 (excitatiem 540 nm, emissão a 660 nm) é utilizado para a detecção de iodeto de propídio. </li></ol></li><li> Ligue o citômetro de imagem e abrir o software que o acompanha. </li></ol> 7. Instalação de Software Cellometer <ol><li> Selecione o preset &quot;Tipo de Ensaio&quot; e &quot;Tipo de célula&quot; no menu suspenso de Ensaio. <ol><li> Para a viabilidade, o ensaio é optimizado para a detecção de laranja de acridina e iodeto de propídio. </li><li> Para a detecção de infecção por Cândida albicans, o ensaio é optimizado para a detecção de GFP. </li></ol></li><li> Selecione &quot;Opções&quot; na parte superior e clique em &quot;Take imagem de fundo&quot;, e permitir que a operação seja concluída. </li><li> Clique em &quot;Imagem de campo claro.&quot; </li></ol> 8. Imagem Procedimento de Aquisição <ol><li> Insira na câmara de amostra preparada para o citômetro de imagem. </li><li> Use o botão de foco e ajustar o foco. </li><li> De vez em foco, clique em &quot;Count&quot;, e permitir que a operação de aquisição de imagem para ser concluído. </li><li> Remove a câmara de contagem descartáveis ​​e descartar adequadamente. </li></ol> 9. Imagem de Análise de Dados <ol><li> Concentração e de medição da viabilidade <ol><li> Uma vez que a contagem é concluída, a concentração e a viabilidade das células-alvo são apresentados na página de resultado. </li><li> Clique em &quot;Exportar&quot; para exportar os dados para o FCS Express 4 para análise da população celular da GFP em Candida albicans experiência infecção. </li></ol></li><li> Análise FCS expresso de células infectadas com Cândida albicans <ol><li> Importe o arquivo &quot;. NXDAT&quot; em FCS Express 4 e enredo os resultados em um histograma de fluorescência. </li><li> Aplicar portão população de células com o histograma para determinar a percentagem de população de células infectadas com Cândida albicans. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Worsham, P. L., Goldman, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+plating+of+Histoplasma+capsulatum+without+addition+of+conditioned+medium+or+siderophores%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Vet.+Mycol%22%5BJournal%5D)">Quantitative plating of Histoplasma capsulatum without addition of conditioned medium or siderophores.</a> J. Med. Vet. Mycol. 26, 137-143 (1988).</li>
<li>Goihman-Yahr, M., Pine, L., Albornoz, M. C., Yarzabal, L., de Gomez, M. H., San Martin, B., Ocanto, A., Molina, T., Convit, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+plating+efficiency+and+estimation+of+viability+of+suspensions+of+Paracoccidioides+brasiliensis+yeast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mycopathologia%22%5BJournal%5D)">Studies on plating efficiency and estimation of viability of suspensions of Paracoccidioides brasiliensis yeast cells.</a> Mycopathologia. 71, 73-83 (1980).</li>
<li>Bhatti, M. A., Hjertstedt, J., Hahn, B. L., Sohnle, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inefficient+delivery+of+yeast+cells+as+an+explanation+for+reduced+plating+efficiency+of+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Mycol%22%5BJournal%5D)">Inefficient delivery of yeast cells as an explanation for reduced plating efficiency of Candida albicans.</a> Med. Mycol. 40, 465-469 (2002).</li>
<li>Chang, W. L., vander Heyde, H. C., Klein, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+quantitation+of+yeast%3A+a+novel+technique+for+use+in+animal+model+work+and+in+vitro+immunologic+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric quantitation of yeast: a novel technique for use in animal model work and in vitro immunologic assays.</a> Journal of Immunological Methods. 211, 51-63 (1998).</li>
<li>Green, L., Petersen, B., Steimel, L., Haeber, P., Current, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+determination+of+antifungal+activity+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Rapid determination of antifungal activity by flow cytometry.</a> Journal of Clinical Microbiology. 32, 1088-1091 (1994).</li>
<li>Kirk, S. M., Callister, S. M., Lim, L. C., Schell, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+susceptibility+testing+of+Candida+albicans+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Rapid susceptibility testing of Candida albicans by flow cytometry.</a> Journal of Clinical Microbiology. 35, 358-363 (1997).</li>
<li>Chan, L. L. -Y., Lai, N., Wang, E., Smith, T., Yang, X., Lin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+detection+method+for+apoptosis+and+necrosis+measurement+using+the+Cellometer+imaging+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">A rapid detection method for apoptosis and necrosis measurement using the Cellometer imaging cytometry.</a> Apoptosis. 16, 1295-1303 (2011).</li>
<li>Chan, L. L. -Y., Shen, D., Wilkinson, A. R., Patton, W., Lai, N., Chan, E., Kuksin, D., Lin, B., Qiu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+image-based+cytometry+method+for+autophagy+detection+in+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">A novel image-based cytometry method for autophagy detection in living cells.</a> Autophagy. 8, 1371-1382 (2012).</li>
<li>Chan, L. L., Wilkinson, A. R., Paradis, B. D., Lai, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Image-based+Cytometry+for+Comparison+of+Fluorescent+Viability+Staining+Methods%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Fluorescence%22%5BJournal%5D)">Rapid Image-based Cytometry for Comparison of Fluorescent Viability Staining Methods.</a> Journal of Fluorescence. 22, 1301-1311 (2012).</li>
<li>Chan, L. L., Zhong, X., Pirani, A., Lin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+kinetic+measurements+of+rare+cell+proliferation+using+Cellometer+image-based+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">A novel method for kinetic measurements of rare cell proliferation using Cellometer image-based cytometry.</a> J. Immunol. Methods. 377, 8-14 (2012).</li>
<li>Chan, L. L., Zhong, X., Qiu, J., Li, P. Y., Lin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellometer+Vision+as+an+alternative+to+flow+cytometry+for+cell+cycle+analysis%2C+mitochondrial+potential%2C+and+immunophenotyping%5BTitle%5D)+AND+%22Cytom.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Cellometer Vision as an alternative to flow cytometry for cell cycle analysis, mitochondrial potential, and immunophenotyping.</a> Cytom. Part A. 79, 507-517 (2011).</li>
<li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285, 1271-1275 (1999).</li>
<li>Berkes, C. A., Chan, L. L., Wilkinson, A., Paradis, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Quantification+of+Pathogenic+Fungi+by+Cellometer+Image-Based+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Micro.+Meth%22%5BJournal%5D)">Rapid Quantification of Pathogenic Fungi by Cellometer Image-Based Cytometry.</a> J. Micro. Meth. 91, 468-476 (2012).</li>
<li>Nguyen, V. Q., Sil, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-induced+switch+to+the+pathogenic+yeast+form+of+Histoplasma+capsulatum+requires+Ryp1%2C+a+conserved+transcriptional+regulator%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Temperature-induced switch to the pathogenic yeast form of Histoplasma capsulatum requires Ryp1, a conserved transcriptional regulator.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (12), 4880-4885 (2008).</li>
<li>Wenisch, C., Linnau, K. F., Parschalk, B., Zedtwitz-Liebenstein, K., Georgopoulos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+susceptibility+testing+of+fungi+by+flow+cytometry+using+vital+staining%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Rapid susceptibility testing of fungi by flow cytometry using vital staining.</a> Journal of Clinical Microbiology. 35, 5-10 (1997).</li>
</ol>

Os autores Leo Li-Ying Chan e Benjamin Paradis são funcionários da Nexcelom Bioscience LLC.

Citometria de imagem permite ao usuário capturar imagens de alta qualidade e, usando um software especializado, realizar rápida quantificação de células. Um desafio potencial para a adopção de citometria de imagem no domínio da patogênese microbiana é que os microrganismos sejam contados presente numa população mista de células, incluindo células hospedeiras de mamífero. Aqui, demonstramos que a citometria de imagem pode ser utilizada para a quantificação de leveduras patogénicas viáveis ​​durante a infecção de...

Estudos de fungos patogénicos em associação com os seus hospedeiros e / ou células hospedeiras exigem frequentemente a quantificação de células de fungos viáveis ​​ao longo de um curso de tempo ou sob diferentes condições de infecção. Enumeração das unidades formadoras de colónias (UFC) é o método padrão pelo qual o número de células de fungos viáveis ​​foi medida, no entanto, esta técnica tem várias desvantagens e limitações. Em primeiro lugar, muitas espécies de fungos são de crescimento lento. O crescimento das colônias visíveis em meios sólidos pode levar 1-2 semanas, diminuindo significativamente o ritmo da investigação. Por outro lado, a manipulação de amostras durante CFU chapeamento é um processo laborioso, uma vez que várias diluições deve ser revestida para garantir um número de colónias contáveis. Em terceiro lugar, o número de UFC é tipicamente menor do que o número de organismos viáveis ​​plaqueadas porque a eficiência de plaqueamento é bem abaixo de 100%. Por exemplo, a eficiência de revestimento para o dimórfico Histoplasma capsulatum patógeno fúngico pode ser tão alto como 90%, mas são habitualmente tão acessível quanto30% e são ainda mais baixos (10%) para o fungo relacionado Dimorfa Paracoccidioides brasiliensis 1, 2. Eficiência chapeamento de Candida albicans também está sujeito à variabilidade 3. Finalmente, a análise de CFU representa apenas as células vivas e dividindo activamente capazes de estabelecer o crescimento em meios sólidos, ao passo que, em muitas situações, pode ser útil para determinar a presença e concentração de células mortas inactivos e / ou metabolicamente. Anteriormente, os métodos de citometria de fluxo para a quantificação de várias espécies de fungos patogénicos tem sido descrita 4-6. No entanto, devido a questões de biossegurança de contenção envolvidos com o uso de nível de biossegurança 2 (BSL2) ou patógenos de nível BSL3 em cytometers fluxo compartilhados, a adoção dessa técnica tem sido limitada. Como citometria de fluxo, citometria de imagem é um método sensível e rápido de quantificação celular. No entanto, a imagem de citometria pode ser realizada a uma fracção do custo com resultados comparáveis ​​7 -11. Aqui, descrevemos os métodos para a realização de citometria de imagem de fungos patogênicos em associação com células hospedeiras. Nós demonstramos nossos métodos usando dois fungos patógenos humanos: Histoplasma capsulatum e Candida albicans H.. capsulatum é um fungo dimórfico que causa doença respiratória, em seres humanos, que cresce levedura como brotamento e replica no interior de macrófagos alveolares Candida albicans é uma espécie comensais humanos que provoca ocasionalmente candidíase.. Nós mostramos que a citometria de imagem permite uma rápida quantificação dessas leveduras, juntamente com a capacidade de visualização.

<table><tbody><tr><td colspan="4">REAGENTS</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Life Technologies</td><td>11965-084</td><td></td></tr><tr><td>Soro Bovino Fetal</td><td>Life Technologies</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>Solução AO/PI</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td>CSK-0102</td><td></td></tr><tr><td>Câmara de Contagem Descartável</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td>CHT4-SD100</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">EQUIPMENT</td></tr><tr><td>Cellometer Vision</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cellometer Vision Software</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

uso de citometria de imagem para quantificação de fungos patogênicos em associação com células do hospedeiro

Use of Image Cytometry for Quantification of Pathogenic Fungi in Association with Host Cells

Estudos dos mecanismos de patogênese celulares de leveduras patogênicas como a Candida albicans, Histoplasma capsulatum e Cryptococcus neoformans comumente empregam infecção de hospedeiros mamíferos ou células hospedeiras (ou seja, macrófagos), seguido pela quantificação de leveduras utilizando análise de unidade formadora de colônia ou citometria de fluxo. Enquanto a unidade de formação de colónia enumeração tem sido o método mais comummente utilizado no campo, esta técnica tem as desvantagens e limitações, incluindo crescimento lento de algumas espécies de fungos em meios sólidos e eficiências de baixo e / ou variável de revestimento, que é de preocupação particular quando se compara o crescimento de estirpes de tipo selvagem e mutante. A citometria de fluxo podem proporcionar informação quantitativa rápida quanto viabilidade celular, no entanto, a adopção de citometria de fluxo para a detecção de leveduras patogénicas tem sido limitada por um número de razões práticas, incluindo o seu elevado custo e as considerações de biossegurança. Aqui, nós demonstramos uma baseada em imagemmetodologia de citometria usando a visão Cellometer (Nexcelom Bioscience, LLC), para a quantificação de leveduras patogênicos em co-cultura com macrófagos. Nossos estudos concentram-se na detecção de dois fungos patógenos humanos: Histoplasma capsulatum e Candida albicans H.. capsulatum coloniza macrófagos alveolares, replicando dentro do fagossoma do macrófago, e aqui, nós quantitativamente avaliar o crescimento de H. leveduras capsulatum em RAW 264,7 macrófagos usando laranja de acridina / coloração iodeto de propídio em combinação com a citometria de imagem. Nosso método fielmente recapitula as tendências de crescimento, medida pela unidade formadora de colônia tradicional enumeração, mas com um aumento significativo de sensibilidade. Além disso, avaliar diretamente a infecção de macrófagos ao vivo com uma cepa GFP-expressando de C. albicans. Nossa metodologia oferece um meio rápido, preciso e econômico para a detecção e quantificação de importantes fungos patógenos humanos em associação sagacidadeAs células hospedeiras h.

Usamos o Cellometer Visão imagem citômetro para monitorar o crescimento de H. capsulatum do macrófago. Células RAW 264.7 foram infectados com H. células de levedura capsulatum e em vários pontos de tempo, as amostras foram submetidas a AO / PI coloração seguida por análise de citometria de imagem baseado. Em paralelo, as amostras foram analisadas por contagem de CFU tradicional. Em cada ponto de tempo, as amostras foram incubadas em água para lisar os macrófagos e as células de levedura libert...

Aqui, demonstramos como citometria de imagem pode ser usada para quantificação de fungos patogénicos em associação com as células hospedeiras em cultura. Esta técnica pode ser usado como uma alternativa para CFU enumeração.

Uso de Citometria de imagem para quantificação de fungos patogênicos em associação com células do hospedeiro

Studies of the cellular pathogenesis mechanisms of pathogenic yeasts such as Candida albicans, Histoplasma capsulatum, and Cryptococcus neoformans ...

O objetivo geral deste procedimento é quantificar leveduras patogênicas em associação com células hospedeiras sem o plaqueamento de unidades formadoras de colônias. Primeiro, infecte as células de macrófago com leveduras de H capsulation ou C albicans e corar as células de macrófago infectadas com laranja de acridina e iodeto de propídio para destacar as leveduras viáveis. Em seguida, utilizando um citômetro de imagem, capture uma série de imagens e analise os parâmetros de tamanho e forma para enumerar com precisão as células leveduriformes.Os resultados da citometria de imagem podem ser efetivamente utilizados para quantificar leveduras patogênicas em associação com células hospedeiras. Tive a ideia inicial deste método ao realizar pesquisas na área de patogênese fúngica, na qual eu precisava repetidamente semear e contar unidades formadoras de colônias para quantificar o fungo patogênico Histoplasma capsulatum. A principal vantagem da citometria de imagem em relação ao método padrão de enumeração de UFC é sua maior velocidade, pois elimina as etapas demoradas e trabalhosas de semeadura, incubação e contagem de múltiplas diluições seriadas de UFC ao comparar o crescimento de cepa

use-image-cytometry-for-quantification-pathogenic-fungi-association

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este vídeo demonstra um método para quantificar a fagocitose de esporos de fungos patogênicos marcados com FITC por leucócitos humanos. Os esporos fagocitados são discernidos dos esporos aderentes às células por meio de contracoloração, seguida de análise por citometria de fluxo.

Medição Quantitativa por Citometria de Fluxo de Fagocitose de Esporos Fúngicos por Fagócitos Humanos

Aqui, descrevemos um ensaio fenotípico aplicável às telas de alto rendimento/alto conteúdo de pequenas interfissões de RNA sintético (siRNA), composto químico e bibliotecas mutantes mycobacterium tuberculosis. Este método baseia-se na detecção de Mycobacterium tuberculosis rotulado fluorescentemente dentro de célula hospedeira fluorescente rotulada usando microscopia confocal automatizada.

Um ensaio fenotípico microscópico para quantificação de micobactérias intracelulares adaptadas para triagem de alto rendimento/alto conteúdo

Aqui, descrevemos um protocolo para avaliar a atividade antifúngica de células imunes humanas primárias em tempo real usando fluorescente Aspergillus repórter conídios em conjunto com microscopia de vídeo ao vivo de células e citometria de fluxo. Dados gerados fornecer informações sobre hospedeiras cell- interacções Aspergillus tais como actividade fungicida, a fagocitose, a migração de células e inibição do crescimento de fungos.

Imagens ao vivo de antifúngicos Atividade por neutrófilos humanos primários e monócitos em resposta à<em&gt; A. fumigatus</em

Aqui descrevemos um protocolo para determinar a carga fúngica pulmonar em camundongos com aspergilose invasiva pela quantificação de prata de methanamine modificada de Gomori coloração em cortes histológicos. Uso desse método resultou em resultados comparáveis com menos animais comparados a avaliação da carga fúngica por PCR quantitativo de DNA fúngico de pulmão.

Histológica quantificação para determinar o pulmão carga fúngica em aspergilose Experimental

Este papel detalha um protocolo para preparar uma cocultura de pilhas e de amebas criptocócica que é estudado usando imagens imóveis, fluorescentes e imagens de alta resolução do microscópio de elétron da transmissão. Ilustrados aqui é como os dados quantitativos podem complementar tais informações qualitativas.

Uso complementar de técnicas microscópicas e leitura de fluorescência no estudo de Cryptococcus-Amoeba interações

Nós descrevemos um protocolo que utiliza a hibridação in situ da fluorescência (peixes) para visualizar RNAs herpética múltiplas dentro das pilhas humanas liticamente contaminadas, na suspensão ou no aderente. Este protocolo inclui a quantificação da fluorescência produzindo uma relação Mimivírus e pode ser estendido para o visualização simultâneo do anfitrião e das proteínas virais com imunofluorescência (se).

Hibridação in situ da fluorescência quantitativa (peixes) e immunofluorescence (se) de produtos específicos do gene em pilhas KSHV-infectadas

O objetivo deste protocolo é visualizar candida albicans forma celular e localização no trato gastrointestinal de mamíferos.

Visualização de candida albicans no trato gastrointestinal murina usando fluorescente in situ hibridização

Este protocolo fornece um método rápido e confiável para medir quantitativamente a fagocitose de Aspergillus fumigatus conidia por phagocitos primários humanos usando citometria de fluxo e para discriminar a fagocitose da conidia de mera adesão a leukócitos.

Medição de phagocitose de Aspergillus fumigatus Conidia por Leukocytes Humanos usando citometria flow

Corantes fluorescentes vitais são ferramentas essenciais para análises de imagens de células vivas na biologia moderna das células fúngicas. Este artigo detalha a aplicação de corantes fluorescentes estabelecidos e menos conhecidos para rastrear a dinâmica da membrana plasmática, endo-/exocitose e mordogênese da parede celular em fungos filamentous.

Aplicação de corantes fluorescentes seletivos da membrana e da parede de pilha para a imagem latente da Viver-pilha de fungos de Filamentous

Aqui, apresentamos um protocolo para traçar o perfil entre hospedeiro e patógeno durante a infecção por proteômica baseada em espectrometria de massa. Este protocolo usa quantificação livre de rótulos para medir mudanças na abundância de proteínas tanto do hospedeiro (por exemplo, macrófagos) quanto de patógenos (por exemplo, Cryptococcus neoformans) em um único experimento.

Fluxo de trabalho de proteômica quantitativa sem rótulo para interações de patógenos de host-pathogen orientadas para a descoberta

Apresentamos um método, que utiliza uma abordagem de análise de imagem generalizada baseada em área para identificar a contagem de células. A análise de diferentes populações celulares explorou as diferenças significativas de altura celular e estrutura entre tipos de células distintas dentro de um algoritmo adaptativo.

Algoritmo de análise de imagem baseado em área para quantificação de coculturas de macênfago-fibroblasto

Aprenda a usar citometria de imagem para quantificar fungos patogênicos em associação com células do hospedeiro. Este método oferece uma alternativa eficiente à contagem tradicional de unidades formadoras de colônias.

Uso de Citometria de imagem para quantificação de fungos patogênicos em associação com células do hospedeiro

Explorar mais vídeos