Automatic Translation

This translation into Russian was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE Chemistry

Аптамер на основе датчика для нехелатированной гадолиния (III)

1, 1, 1, 1, 1

1Department of Chemistry and Biochemistry, California State University, East Bay

Article
    Downloads Comments Metrics Publish with JoVE

    You must be subscribed to JoVE to access this content.

    Enter your email to receive a free trial:

    Welcome!

    Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!


    Admit it, you like to watch.

     

    Summary

    Cite this Article

    Edogun, O., Chan, T. Y., Nguyen, N. H., Luu, A., Halim, M. An Aptamer-based Sensor for Unchelated Gadolinium(III). J. Vis. Exp. (119), e55216, doi:10.3791/55216 (2017).

    Introduction

    Возрастающее значение магнитно - резонансной томографии (МРТ) в клинической диагностике, которая ограничена присущей чувствительности метода, привело к быстрому росту исследований в области разработки новых гадолиния основе контрастных агентов (GBCAs) 1. GBCAs представляют собой молекулы, которые вводят для улучшения качества изображения, и они , как правило , имеют химическую структуру трехвалентного иона гадолиния (Gd 3+) координирован с полидентатным лигандом. Это комплексообразование имеет решающее значение как нехелатированной Gd 3+ является токсичным; он участвует в развитии нефрогенной системного фиброза у некоторых больных с почечной недостаточностью или недостаточностью 2. Следовательно, обнаружение водного свободного иона играет важную роль в обеспечении безопасности GBCAs. Присутствие нехелатированной Gd 3+ в растворах GBCA часто является результатом неполной реакции между лигандом и ионом, диссоциации комплекса или displacemenт других биологических катионов металлов 3.

    Среди нескольких методов , используемых в настоящее время для определения присутствия Gd 3+, те , которые полагаются на хроматографии и / или спектрометрического ранга высшей точки зрения универсальности и применимости 4. Среди их сильные стороны являются высокая чувствительность и точность, возможность анализа различных матриц проб ( в том числе сыворотки человека 5, мочи и волос 6, 7 сточной воды, а также композиций , агентов контрастных 8), а также одновременного количественного определения нескольких 3+ комплексов Gd (листинг исследований до 2013 года описана в комплексном обзоре Telgmann и др.) 4. Единственным недостатком является то, что некоторые из этих методов требует контрольно- измерительные приборы (например, с индуктивно связанной плазмой масс - спектрометрии) 4 , что некоторые лаборатории не могут иметь доступ. В контексте нового открытия GBCA на исследования и доказательство правильности концепции уровней, арelatively более удобный, быстрый и экономически эффективный метод спектроскопического основе (например, УФ-Vis поглощения или флуоресценции), может служить ценным альтернативой. С помощью этих приложений в виду, флуоресцентный аптамеры на основе датчика для водного раствора Gd 3+ был разработан 9.

    Аптамеров (Gd-аптамеров) представляет собой 44-щелочное долго одноцепочечной молекулой ДНК с определенной последовательностью оснований, выделенный в процессе систематического выделение лигандов экспоненциальным обогащением (SELEX) 9. Для адаптации аптамер в флуоресцентным датчиком, флуорофор присоединен к концу 5 'нити, которая затем гибридизуют с жаждоутоляющей нити (QS) через 13 дополнительных оснований (рисунок 1). QS помечен темной молекулой гасителя на 3'-конца. При отсутствии Gd 3+, датчик (Gd-сенсор), состоящий из соотношении 1: 2 моль Г.Д.-аптамеров и QS соответственно будут иметь минимальное излучение флуоресценции из - за тпередача энергии от о флуорофора к гасителя. Добавление водного раствора Gd 3+ сместит QS из Gd-аптамеров, что приводит к увеличению флуоресцентной эмиссии.

    Рисунок 1
    Рисунок 1. Датчик (Gd-сенсор) , который состоит из 44-основания длинной аптамеров (Gd-аптамеров) метили флуоресцеина (флуорофор) и 13-база длиной цепи закалки (QS) помеченным dabcyl (темный гасителя) , При отсутствии нехелатированной Gd 3+, флуоресценция датчика минимальна. С добавлением Gd 3+, смещение QS происходит и наблюдается увеличение эмиссии флуоресценции. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

    Существует в настоящее время широко используется один спектроскопического основе метод обнаруженияИНГ водного Gd 3+. В этом анализе используют молекулу ксиленоловым апельсин, обнаруживающая сдвиг максимума длины волны поглощения от 433 до 573 нм при хелятации к иону 10. Отношение этих двух максимумов поглощения могут быть использованы для определения количества нехелатированной Gd 3+. Датчик аптамеров является альтернативой (также может быть комплементарной) к ксиленол оранжевого анализа, поскольку эти два метода имеют разные условия реакции (например, рН и состав буферных растворов, используемых), задачи селективностью, линейные диапазоны количественной оценки, а также методов обнаружения 9.

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Protocol

    Примечание: Молекулярная биология класс вода используется во всех буферных растворов и препаратов. Все одноразовые трубки (микроцентрифужных и ПЦР) и пипетки советы DNase- и РНКазы. Пожалуйста, обратитесь к листам безопасности (MSDS) для всех химических веществ перед использованием. Использование соответствующих средств индивидуальной защиты (СИЗ) настоятельно рекомендуется.

    1. Приготовление аптамера маточные растворы

    1. Покупка 2 пряди polydeoxynucleotide на коммерческой основе. Заказать обе нити с очисткой с помощью высокой жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
      Strand 1 (GD-аптамер):
      5 '- / 56-FAM / AGGCTCTCGGGACGACCAGTTGGTCCCGCTTTATGTGTCCCGAG-3'
      Strand 2 (QS):
      5'-GTCCCGAGAGCCT / 3Dab / -3 '
    2. Растворить каждую прядь в воде, чтобы сделать 100 мкМ индивидуальных исходных растворов GD-аптамеров и СМО.
    3. Храните эти решения при -20 ° С. Растворы стабильны до сих пор, в течение 3-х лет.
    4. Чтобы свести к минимуму FREEZЦиклы электронной оттаивание, хранить растворы в 10 мкл аликвоты.

    2. Подготовка 2x Gd-датчика решения

    1. Подготовка буфера для анализа (20 мМ HEPES, 2 мМ MgCl 2, 150 мМ NaCl, 5 мМ КСl). Доводят рН до ~ 7,4 с помощью NaOH и HCl, и фильтруют через стерильные одноразовые бутылки верхних фильтров с ПЭС 0,2 мкм мембраны. Хранить в стерильные бутылки. Если фильтруется и хранится надлежащим образом (при комнатной температуре), буфер стабилен до сих пор, в течение 2-х лет.
    2. Развести 1 мкл Б-г-аптамеров маточного раствора со стадии (1.2) и 2 мкл исходного раствора QS (со стадии 1.2) в 497 мкл буфера для анализа. Хорошо перемешать с помощью вихря. Их концентрации в растворе Б-г-датчика 2x 200 нм и 400 нм, соответственно.
      Примечание: Объем раствора Gd-датчика 2x полученное на этом этапе составляет 500 мкл, что достаточно для тестирования 6 - 7 различные концентрации Gd 3+ для калибровочной кривой и решений контрастирующего агента(шаг 3). Каждый образец даст повторяющиеся скважины в 384-луночного планшета.
      1. Отрегулируйте объем раствора Gd-датчика 2x в соответствии с количеством Gd 3+ решений , которые должны быть проверены.
    3. Переносят раствор Gd-датчика 2x на 9 ПЦР-пробирки с 50 мкл в каждую пробирку. Место труб в амплификатор.
    4. Установите программу в термоциклеру для нагрева раствора в трубах до 95 ° С, в течение первых 5 мин, а затем медленно охлаждают растворов до 25 ° С в течение ~ 15 мин (со скоростью ~ 0,05 - 0,1 ° С / с). Нагрева и охлаждения цикла для обеспечения оптимальной гибридизации между Gd-аптамеров и СМО. Частичные результаты гибридизации в неполной закалке и более высокой фоновой флуоресценции датчика. Если амплификатор не доступен, осуществить этот процесс, используя ванну с горячей водой вместо этого.
    5. После охлаждения до 25 ° С, немедленно использовать раствор, или держать в термоциклеру (приблизительно до 2 ч) до полной готовности, чтобы бытьиспользуемый. Когда ванна вода используется для отопления, оставьте трубки в ванне, поскольку вода медленно остывает до комнатной температуры.

    3. Построение калибровочной кривой флуоресценции и обнаружения присутствия нехелатированной Gd 3+ в растворе Gd контрастного агента

    1. Растворите GDCL 3 Твердое вещество в буфере для анализа ( один и тот же буфер , как на шаге 2.1).
    2. Через серийного разведения, готовят 100 мкл каждого из 6 различных Gd 3+ растворов в микроцентрифужных пробирках при двукратном конечных желательных концентраций для калибровочной кривой (2x решений).
      1. Например, чтобы построить калибровку для 0 (буфер только не GdCl 3), 50, 100, 200, 400 и 800 нМ Gd 3+, готовят растворы , содержащие 0, 100, 200, 400, 800 и 1600 нМ иона. Убедитесь в том , чтобы всегда включать 'пустой' с 0 нМ Gd 3+ в качестве отрицательного контроля.
    3. Растворить контрастное вещество, чтобы быть тестэд в буфере для анализа. Подготовьте 2 или 3 различных концентраций растворов контрастного агента через серийного разведения.
      Примечание: Тестирование 3 различных концентраций раствора контрастного вещества рекомендуется. Это должно гарантировать, что эти концентрации в пределах линейного диапазона. Если испытанные образцы не показывают линейную зависимость, уменьшить концентрации контрастного агента.
    4. Возьмите пробирки для ПЦР, содержащих раствор 2x Gd-датчика со стадии 2.5 из термоциклеру.
    5. Добавьте 50 мкл каждого раствора Gd 3+ со стадии 3.2 в 6 из 9 ПЦР - пробирки , содержащие раствор 2x Gd-датчика. Смешайте с помощью пипетки вверх и вниз. Каждая трубка ПЦР теперь содержит требуемую концентрацию Gd 3+ быть испытанным, 100 нм GD-аптамер и 200 нм QS.
    6. Для остальных пробирки для ПЦР, содержащих раствор Б-г-датчика 2x, добавить 50 мкл растворов контрастирующего агента с шага 3.3. Хорошо перемешать с помощью пипетки вверх и вниз несколько раз.
    7. Инкубируйте Solutions в пробирки для ПЦР в течение приблизительно 5 мин при комнатной температуре. Они могут быть оставлены стоять в течение до 30 мин.
    8. Перенесите 45 мкл в каждую пробирку в 384-луночный планшет. Каждая трубка ПЦР дает дублированные лунки.
    9. Регистрируют флуоресценции каждой лунки на тарелке читателя. Флуорофор (FAM), используемый в конструкции Б-датчика имеет возбуждения и испускания максимумов 495 и 520 нм соответственно, как указано на сайте поставщика. Выберите соответствующие возбуждения и эмиссии длин волн или фильтров в зависимости от того, планшет-ридер является monochromator- или фильтр на основе.
    10. Постройте график флуоресценции в произвольных единицах флуоресценции (AFU) против концентрации Gd 3+.
    11. Постройте график , как изменение флуоресценции раза по сравнению с концентрацией Gd 3+. Рассчитать изменение флуоресценции раза путем деления AFU каждой концентрации в ВСУ от "чистого" решения (с 0 нМ Gd 3+). Изменение флуоресценции раза позволит пormalization результатов, должны ли дисплей AFU некоторые периодические ( в разные дни и т.д.) вариации.
    12. Сравните флуоресценции раствора , содержащего контрастный агент и "пустым", который является раствор , содержащий 0 нМ GDCL 3 (только буфер).
      Примечание: Чем выше флуоресценции раствора GBCA подразумевает наличие нехелатированной Gd 3+, которые могут потребовать дальнейшей очистки контрастного агента. Количество нехелатированной Gd 3+ настоящее время может быть оценена с помощью калибровочной кривой , построенную на этапе 3.10 или 3.11.

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Representative Results

    Типичное изменение флуоресценции раствора Gd-датчика в присутствии нехелатированной Gd 3+ показана на рисунке 2. Излучение может быть нанесены в виде изменения флуоресценции кратному (фиг.2А) , или сырой флуоресценции чтения (Фигура 2В) в произвольных единицах (АФУ). Оба участка дают очень близкие калибровочные кривые с линейным диапазоном для концентрации Gd 3+ ниже 1 мкМ и насыщения сигнала при> 3 мкм. Предел обнаружения составляет ~ 100 нм с отношением сигнал-шум 3.

    В растворах , содержащих GBCA интерес, наличие нехелатированной Gd 3+ будет переведен на увеличение флуоресценции датчика по сравнению с «пустой» решения. Изменения флуоресценции в растворах 2-х разных партий Gd-DOTA комплекс, один из более высокой чистоты, чем с другой, являются шоуп в качестве примеров репрезентативных результатов (рисунок 3). Gd-DOTA (gadoteric кислота) представляет собой гадолиний комплекс Gd 3+ окружен органическим лигандом DOTA , который находится в коммерческом контрастного агента. Партия более высокой чистоты не показывает значительное увеличение выбросов до 20 мМ Gd-DOTA. Когда нехелатированной Gd 3+ присутствует, наблюдается изменение , которое заметно даже при концентрациях , Gd-DOTA ниже 5 мМ. В этом примере , где точки данных построен график зависимости изменения флуоресценции кратном датчика, количественное определение количества нехелатированной Gd 3+ может быть оценена с помощью калибровочной кривой на рисунке 2А.

    фигура 2
    Рисунок 2. Типичные Gd-датчик флуоресценции калибровочной кривой участков. Все данные точки были выполнены, по крайней мере в двух повторах и средние значения участкаTed со стандартным отклонением, как и погрешностями. (A) калибровочной кривой , полученной с использованием 100 нМ GD-аптамер и 200 нм QS. График строится с изменением флуоресценции раза по оси у. (В) Та же калибровочной кривой , как в (а) , с сырой флуоресценции в произвольных единицах (AFU) в качестве оси у. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

    Рисунок 3
    Рисунок 3. Представитель изменения Gd-датчик флуоресценции при тестировании на наличие нехелатированной Gd 3+ в образцах молекулы Gd-DOTA. Две различные партии Gd-DOTA комплексных решений показаны на этом графике, одна из более высокой чистоты (круг маркер) и другой , содержащей нехелатированной Gd 3+ (синий trianglе маркер). Каждая точка данных представляет собой среднее значение двух измерений со стандартным отклонением, как и погрешностями. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Discussion

    Использование аптамеров на основе Gd-сенсор, увеличение эмиссии флуоресценции, которая пропорциональна концентрации нехелатированной Gd 3+ наблюдается. Для того, чтобы свести к минимуму количество используемого образца, анализ может выполняться в микропланшет 384-луночного с общим объемом образца 45 мкл на лунку. В этой конструкции, выбор флуоресцеина (FAM) и dabcyl (Dab) была в основном основана на стоимости реагентов; для изменения длины волны излучения, другую спаривание флуорофором и гасителем может быть использовано 11.

    Важно отметить, что для получения наилучшего результата с датчиком, одним из важных этапов является нагревание до 95 ° С и медленным охлаждением (шаг 2,4) в буфере для анализа с целью достижения оптимальной гибридизации между Gd-аптамеров и QS пряди. Как упоминалось ранее в протоколе, если амплификатор не доступен, инкубация при 95 ° С может быть проведена в водяной бане. Другим ключевым параметром для управления является тон Композиции из буферных растворов; использование буфера для анализа, указанного в шаге 2.1, чтобы растворить контрастное вещество рекомендуется, или деионизированная вода также может быть использован. Тем не менее, растворы, которые содержат потенциальные мешающих его следует избегать. Примером такого буфера является тот , который содержит фосфат - анионы, которые могут координатные к нехелатированной Gd 3+ с образованием нерастворимого фосфата гадолиния 12. Осадок не вступает в реакцию с датчиком, в результате ложного отрицательного результата.

    Несколько шагов в экспериментах, могут быть изменены без влияния на результат. Во- первых, для упрощения анализа и расчета, готовят как раствор Б - г-датчика и водной GDCL 3 для калибровочной кривой при концентрациях 2x. При желании, другие коэффициенты разбавления могут быть использованы (например, 10x растворы), при условии, что конечные концентрации Количественный анализ Gd-аптамеров и СМО поддерживают при 100 нМ и 200 нМ, соответственно. Во-вторых, буфер для анализа гOES не должны быть точно рН 7,4. Любое значение в пределах от 7 - 7.4 произведут необходимое повышение флуоресценции, до тех пор, как тот же буфер используется в течение всего эксперимента. В-третьих, как только получают показание флуоресцентное излучение, точки данных могут быть нанесены либо как сырой флуоресценции в произвольной единицы (ФФА), либо как изменение флуоресценции кратном. Для того, чтобы вычислить изменение флуоресценции раза, сырой чтение флуоресценции каждой концентрации нормированы (делится на) чтение отрицательного контроля (0 нМ Gd 3+). Как показано на фигурах 2А и В, тенденции выбросов флуоресценции в обоих графиках практически идентичны. Изменение раз может быть более удобным способом для анализа данных, если ридер отображает некоторые изменения в исходных показаний, записанных в разное время. И, наконец, если лаборатория оснащена флуорометре, но не ридере, каждая точка данных может быть измерена с помощью кювету, вместо микропланшет. В зависимости от размера Oе имеющихся кюветах, объемы растворов, приготовленных в анализе может потребоваться корректировка.

    Метод сообщаемые здесь является альтернативой chromatographic- и / или спектрометрические на основе методики обнаружения водного Gd 3+. По сравнению с последним, анализ Gd-датчик более ограничен с точки зрения чувствительности, точности и способности для одновременного определения нескольких видов. С другой стороны, датчик спектроскопического основе требует инструментов, которые могут быть, возможно, более легко доступны, может быть выполнена в течение более короткого периода времени, а подготовка образца минимальна. Контрастное вещество может быть просто растворили в буферном растворе, смешивают с раствором Б-датчика, и флуоресцентное излучение непосредственно измерены. Кроме того, датчик способен обнаруживать гораздо более низкую концентрацию нехелатированной Gd 3+ , чем индикатор ксиленол оранжевый (около 2 порядка величины разницы между этими двумя методами) и имеетболее высокая селективность для Gd 3+ в течение нескольких других биологически важных и переходных ионов металлов 9.

    Есть два недостатка этого анализа, которые могут ограничить его использование при некоторых экспериментальных условиях. Одно ограничение заключается в том , что датчик не является специфическим для Gd 3+; он отображает ответ на другие ионы лантанидов (например, Eu 3+ и Tb 3+) 9. Тем не менее, они не являются ионы обычно встречаются в контрастных агентов или биологических систем и, следовательно, их вмешательство минимальны. Второй момент , следует отметить, что при более высоких концентрациях (выше ~ 10 мкМ) Gd 3+, постепенное уменьшение эмиссии флуоресценции Gd-датчика наблюдается. Эффект закалке ионами лантанидов является хорошо документированы явление 13 , который также используется в качестве методики для обнаружения и количественной оценки их 14. В то время как это ограничивает полезность датчика для измерения высоких концентраций Gd 3+

    В этой работе, использование удобного флюоресценции на основе методики обнаружения токсичного нехелатированной Gd 3+ в водном растворе было описано. Этот анализ предназначен для оценки на ранней стадии гадолиния на основе чистоты контрастного агента, в частности , в процессе синтеза и разработки для проведения экспериментов в лабораторных условиях . С ростом тока магнитно-резонансной томографии в диагностике, все большее число новых контрастных агентов постоянно разрабатываются и тестируются. Аптамеры на основе Б - г-датчик будет способствовать этому развитию, обеспечивая средство для быстрого обнаружения присутствия суб-микромолярную концентраций непрореагировавшего или диссоциированы Gd 3+ в водном растворе при комнатной рН. Кроме того, так как датчик показывает перекрестную реактивность с другими ионами трехвалентных лантанидов, ее применение может бытьраспространялась на эти области исследований.

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Disclosures

    Materials

    Name Company Catalog Number Comments
    Gd-aptamer IDTDNA Input sequence and fluorophore modification in the order form A fluorophore with a different emission wavelength may be used. The aptamer may also be ordered from another company.
    Quenching strand IDTDNA Input sequence and quencher modification in the order form A different quencher for optimal energy transfer from the fluorophore may be used. The aptamer may also be ordered from another company.
    Molecular biology grade water No specific manufacturer, both DEPC or non-DEPC treated work equally well
    Gadolinium(III) chloride anhydrous Strem 936416 Toxic
    HEPES Fisher Scientific BP310-500
    Magnesium chloride anhydrous MP Biomedicals 0520984480 - 100 g
    Sodium Chloride Acros Organics 327300025
    Potassium chloride Fisher Scientific P333-500
    Sodium hydroxide, pellets Fisher Scientific BP359 Corrosive
    Hydrochloric acid Fisher Scientific SA49 Toxic and corrosive
    384-well low flange black flat bottom polystyrene NBS plates Corning 3575 Plates which are suitable for fluorescence reading are required.
    Nalgene Rapid-Flow sterile disposable bottle top filter Thermo Scientific 5680020 The bottle top is fitted with 0.2 micron PES membrane
    Disposable sterile bottles 250 mL Corning 430281 A larger or smaller bottle may be used
    1.5 mL microcentrifuge tubes No specific manufacturer, as long as they are DNAse and RNAse-free
    0.2 mL PCR tubes No specific manufacturer, as long as they are DNAse and RNAse-free
    Micropipets No specific manufacturer
    Pipet tips (non filter) of appropriate sizes No specific manufacturer, as long as they are DNAse and RNAse-free
    Equipment
    Plate reader Biotek Synergy H1 Plate readers from other manufacturers would work equally well

    References

    1. Shen, C., New, E. J. Promising strategies for Gd-based responsive magnetic resonance imaging contrast agents. Curr. Opin. Chem. Biol. 17, (2), 158-166 (2013).
    2. Cheong, B. Y. C., Muthupillai, R. Nephrogenic systemic fibrosis: a concise review for cardiologists. Tex. Heart Inst. J. 37, (5), 508-515 (2010).
    3. Hao, D., Ai, T., Goerner, F., Hu, X., Runge, V. M., Tweedle, M. MRI contrast agents: basic chemistry and safety. J Magn. Reson. Imaging. 36, (5), 1060-1071 (2012).
    4. Telgmann, L., Sperling, M., Karst, U. Determination of gadolinium-based MRI contrast agents in biological and environmental samples: a review. Anal. Chim. Acta. 764, 1-16 (2013).
    5. Frenzel, T., Lengsfeld, P., Schirmer, H., Hütter, J., Weinmann, H. -J. Stability of gadolinium-based magnetic resonance imaging contrast agents in human serum at 37 degrees C. Invest. Radiol. 43, (12), 817-828 (2008).
    6. Loreti, V., Bettmer, J. Determination of the MRI contrast agent Gd-DTPA by SEC-ICP-MS. Anal. Bioanal. Chem. 379, (7), 1050-1054 (2004).
    7. Telgmann, L., et al. Speciation and isotope dilution analysis of gadolinium-based contrast agents in wastewater. Environ. Sci. Technol. 46, (21), 11929-11936 (2012).
    8. Cleveland, D., et al. Chromatographic methods for the quantification of free and chelated gadolinium species in MRI contrast agent formulations. Anal. Bioanal. Chem. 398, (7), 2987-2995 (2010).
    9. Edogun, O., Nguyen, N. H., Halim, M. Fluorescent single-stranded DNA-based assay for detecting unchelated gadolinium(III) ions in aqueous solution. Anal. Bioanal. Chem. 408, (15), 4121-4131 (2016).
    10. Barge, A., Cravotto, G., Gianolio, E., Fedeli, F. How to determine free Gd and free ligand in solution of Gd chelates. A technical note. Contrast Med. Mol. Imaging. 1, (5), 184-188 (2006).
    11. Johansson, M. K. Choosing reporter-quencher pairs for efficient quenching through formation of intramolecular dimers. Methods Mol. Biol. 335, 17-29 (2006).
    12. Sherry, A. D., Caravan, P., Lenkinski, R. E. A primer on gadolinium chemistry. J. Magn. Reson. Imaging. 30, (6), 1240-1248 (2009).
    13. Shakhverdov, T. A. A cross-relaxation mechanism of fluorescence quenching in complexes of lanthanide ions with organic ligands. Opt. Spectrosc. 95, (4), 571-580 (2003).
    14. Brittain, H. G. Submicrogram determination of lanthanides through quenching of calcein blue fluorescence. Anal. Chem. 59, (8), 1122-1125 (1987).

    Comments

    0 Comments

    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Metrics

    Waiting
    simple hit counter