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Multi-analito Biochip (MAB) Com base em eletrodos íon-seletivos All-solid-state (ASSISE) para a pesquisa fisiológica

DOI:

10.3791/50020

April 18th, 2013

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Summary

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Eletrodos íon-seletivo All-solid-state (Jornadas) construídos a partir de um polímero (CP) transdutor condutor fornecer vários meses de vida funcional em meio líquido. Aqui, descrevemos o processo de Jornadas em um formato de lab-on-a-chip fabricação e calibração. O ASSISE é demonstrado ter mantido um perfil de encosta quase Nernstiana após armazenamento prolongado em meios biológicos complexos.

Abstract

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Aplicações Lab-on-a-chip (LOC) em pesquisa ambiental, biomédico, agrícolas, biológicos e vôos espaciais exigem um eletrodo íon-seletivo (ISE), que podem suportar o armazenamento prolongado em meios biológicos complexos 1-4. Um íon-seletivo-eletrodo all-solid-state (ASSISE) é especialmente atraente para as aplicações mencionadas. O eletrodo deve ter as seguintes características favoráveis: construção fácil, baixa manutenção, e (potencial) de miniaturização, permitindo o processamento em lote. Um ASSISE microfabricado destinadas à quantificação de H +, Ca 2 + e CO 3 2 - iões foi construído. É constituída por uma camada de metal nobre do eléctrodo (isto é, Pt), uma camada de transdução, e uma membrana selectiva de iões (ISM) camada. As funções da camada de transdução de transduzir o potencial químico dependente da concentração da membrana selectiva de iões num sinal eléctrico mensurável.

Tele tempo de vida de um ASSISE é encontrado para dependem da manutenção do potencial de a camada de membrana / interface de 5-7 condutora. Para prolongar o tempo de vida útil ASSISE e, assim, manter os potenciais estáveis ​​nas camadas interfaciais, utilizamos o condutor polímero (CP) de poli (3,4-etilenodioxitiofeno) (PEDOT) 7-9 no lugar de prata / cloreto de prata (Ag / AgCl) como camada de transdutor. Construímos o ASSISE em um formato de lab-on-a-chip, que chamamos o biochip multi-analito (MAB) (Figura 1).

As calibrações em soluções de ensaio demonstrou que o MAB pode monitorar o pH (gama operacional de pH 4-9), CO 3 2 - (medido gama de 0,01 mM - 1 mM), e Ca2 + (intervalo de log-linear de 0,01 mM a 1 mM). O MAB para pH fornece uma resposta encosta quase Nernstiana depois de quase um mês de armazenamento em meio de algas. Os biochips carbonato apresentam um perfil potenciométrica semelhante à de um eléctrodo selectivo de iões convencional. Fisiológicoogical medições foram utilizados para monitorizar a actividade biológica do sistema modelo, a microalga Chlorella vulgaris.

O MAB transmite uma vantagem em tamanho, versatilidade e capacidade de detecção do analito multiplexada, que a torna aplicável a muitas situações de monitorização confinados, em terra ou no espaço.

Biochip Desenho e Métodos Experimentais

O biochip é de 10 x 11 mm de dimensão e tem 9 Jornadas designados como eletrodos de trabalho (EVs) e 5 eletrodos de referência de Ag / AgCl (REs). Cada eléctrodo de trabalho (WE) é de 240 m de diâmetro e são igualmente espaçados a 1,4 mm da ER, que são de 480 m de diâmetro. Estes eléctrodos são ligados às almofadas de contacto eléctrico com uma dimensão de 0,5 mm x 0,5 mm. O esquema é mostrado na Figura 2.

Voltametria cíclica (CV), e métodos de deposição galvanostáticas são utilizados para as películas electropolymerize PEDOT utilizando um BIOANALYTICal Systems Inc. (BASI) estande célula C3 (Figura 3). O contra-íon para o filme de PEDOT é adaptado para atender o íon analito de interesse. Um PEDOT com poli (estirenossulfonato) contra-ião (PEDOT / PSS) é utilizado para a H + e CO 3 2 -, enquanto que um com sulfato de sódio (adicionado à solução como CaSO 4) é utilizado para o Ca 2 +. As propriedades eletroquímicas do PEDOT revestido WE é analisado usando currículos em solução redox-ativo (ou seja, 2 mM de ferricianeto de potássio (K 3 Fe (CN) 6)). Com base no perfil de CV, análise de Randles-Sevcik foi usada para determinar a área de superfície efectiva 10. Spin-coating a 1.500 rpm é usado para lançar ~ 2 mm de espessura membranas íon-seletivo (ISMs) sobre os eletrodos de trabalho MAB (EVs).

O MAB está contida numa câmara de célula de fluxo microfluidico cheio com um volume de 150 ul do meio de algas, as almofadas de contacto estão ligados electricamente ao sistema BASI (Fig.ure 4). A atividade fotossintética de Chlorella vulgaris é monitorado em luz ambiente e condições de pouca luz.

Protocol

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1. Preparação de Poli (3,4-etilenodioxitiofeno): Poly (sódio 4 estirenossulfonato) (PEDOT: PSS) Solution eletropolimerização de H + e CO 3 2 - Íons

  1. Adicionar 70 mg de poli (4-estirenosulfonato de sódio) (PSS Na + -) a 10 ml de água desionizada (DI) e vórtice até estar completamente disperso (aproximadamente 10 segundos).
  2. Adicionar 10.7 ul de 3,4-ethlyenedioxythiophene (EDOT) à solução em 1,1 e vortex até que a solução é completamente misturada.

2. Preparação de Poli (3,4-etilenodioxitiofeno): sulfato de cálcio (PEDOT: CaSO 4) Solução eletropolimerização de íon....

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Results

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Um exemplo de um resultado voltamograma cíclico (CV) de PEDOT: PSS e do seu correspondente pico de corrente catódica (I p) versus a velocidade de varrimento (V 1/2) são mostrados nas figuras 5a e 5b, respectivamente. PEDOT: CaSO 4 em várias taxas de varredura e sua corrente de pico catódica não são mostradas. Usando Randles-Sevcik análise 10, as áreas de superfície efectiva do sólido contacto PEDOT: PSS e PEDOT: CaSO4

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Discussion

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O MAB biochip consiste assises que são construídos a partir de um ISM no topo de uma camada à base de PEDOT transdução conjugado de proteína sobre um eléctrodo de Pt, a combinação dos quais transduz a concentração iónica de interesse para um sinal eléctrico mensurável. Um potencial de eléctrodo estável é definida tanto pela camada CP e a camada ISM. Ambas as camadas também determinar o tempo de vida útil do MAB e a qualidade (ruído, desvio) do sinal eléctrico de medição.

PEDOT é especialment.......

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Disclosures

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Não temos nada a divulgar.

Acknowledgements

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Gostaríamos de agradecer a NASA Astrobiology Science and Technology Development Instrument (ASTiD) Programa de apoio financeiro (números de conceder 103.498 e 103.692), Gale Lockwood da Nantechnology Centro Birck na Universidade de Purdue para wirebonding dos dispositivos MAB e Hyeong Joon Park para a desenho CAD da câmara de célula de fluxo.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
3,4-EtilenodioxitiofenoSigma-Aldrich483028
Poli(4-estirenossulfonato de sódio)Sigma-Aldrich243051
EC epsilon galvanostato/potenciostatoBioanalytical Systems Inc.e2P
Saturado Ag / AgCl eletrodo de referênciaBioanalytical Systems Inc.MF-2052
Pt gazeAlfa Aesar10283
Ferricianeto de potássioSigma-AldrichP-8131
Nitrato de potássioJ.T. Baker3190-01
Bicarbonato de sódioMallinckrodt / Macron7412-12
Carbonato de sódioSigma-AldrichS-7127
Cloreto de cálcioJ.T. Baker1311-01
Cloretode potássio Sigma-AldrichP9541
Sulfato de cálcioSigma-Aldrich237132
Suporte de célula C3Bioanalytical Systems Inc.EF-1085
chip de célula de fluxopersonalizado, cortesia da NASA Ames
Lumináriapersonalizada, cortesia da NASA Ames
Tabela 2. Reagentes e equipamentos específicos.
Suporte de elétrica de célula de fluxo

References

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  1. Migdalski, J., Bas, B., Blaz, T., Golimowski, J., Lewenstam, A. A Miniaturized and Integrated Galvanic Cell for the Potentiometric Measurement of Ions in Biological Liquids. J. Solid State Electrochem. 13, 149-155 (2009).
  2. Designing a Water-quality Monitor with Ion-selective-electrodes. Buehler, M. G., Kounaves, S. P., Martin, D. P. Proceedings of the IEEE Aerospace Conference, 1, 331-....

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All solid state Ion selective ElectrodesMulti analyte BiochipIon selective MembranePEDOT Transducer LayerCyclic VoltammetrySpin coatingMicrofluidic Flow cellPhysiological ResearchChlorella vulgarisIon Activity Monitoring

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