Criando anatomicamente precisos e reprodutíveis intracraniana Xenoenxertos de tumores cerebrais humanos

Summary

O cérebro é um local único, com qualidades que não são bem representados por análises in vitro ou ectópicas. Ortotópico modelos de mouse com localização e características de crescimento reprodutíveis podem ser criados de forma confiável com injeções intracranianas utilizando um instrumento de fixação estereotáxica e uma bomba de seringa de baixa pressão.

Abstract

Modelos de tumor ortotópico Atualmente a melhor maneira de estudar as características de um tipo de tumor, com e sem intervenção, no contexto de um animal vivo - especialmente em locais com qualidades fisiológicas e arquitectónicas únicas, tais como o cérebro in vitro e modelos ectópica não pode. responsáveis ​​por funções como a vasculatura, a barreira hemato-encefálica, metabolismo, distribuição de medicamentos e toxicidade, e uma série de outros fatores relevantes. Ortotópico modelos têm as suas limitações também, mas com células tumorais técnica adequada de interesse podem ser precisamente em vós implantada no tecido que melhor imita as condições do cérebro humano. Empregando os métodos que proporcionam volumes medidos com precisão a localizações definidas com precisão a uma taxa consistente e pressão, os modelos murinos de tumores cerebrais humanos, com taxas de crescimento previsível pode ser criado de forma reprodutível e são adequados para a análise fiável de diversas intervenções. O protocolo descrito aqui enfoca a technical detalhes de concepção e preparação para uma injeção intracraniana, a realização da cirurgia, e garantir o crescimento do tumor de sucesso e reprodutível e fornece pontos de partida para uma variedade de condições que podem ser personalizadas para uma gama de diferentes modelos de tumor cerebral.

Introduction

Estudos in vitro de células tumorais do cérebro são de valor inestimável para dissecar mecanismos moleculares crescimento, sobrevivência, migração e invasão das células cancerosas de condução; experiências em células cultivadas pode definir as vias de sinalização, sugerem potenciais alvos terapêuticos, e caracterizar a resposta celular ao tratamento com droga. Mas in vitro sistemas são demasiado simplista para prever a resposta do organismo aos medicamentos; faltam as reacções fisiológicas, as respostas imunes, microambiente celular, e heterogeneidade global dos sistemas de animais vivos. Geneticamente modificados modelos pode ser inestimável, quand....

Protocol

Todos os procedimentos foram revistos e aprovados por nosso comitê de cuidados com os animais e uso institucional.

1 Plano do Experimento

1. Escolha células a serem injectadas. As células a partir de uma variedade de fontes, são candidatos para injecção: as linhas de cultura de células aderentes, clones geneticamente modificados, culturas de células primárias, Neurosphere ou tumores desagregados. O tipo de modelo desejado irá definir o local mais apropriado da injecção.
   1. Determinar o número de células de injeção. O número de células é necessária para formar os tumores varia com a linha de células e têm de ser determinadas ....

Results

Xenografts intracranianas confiáveis ​​podem ser criados com esta técnica descrita. Identificando as estruturas críticas do crânio do rato (Figura 1) vai permitir o reconhecimento do bregma e guiar o investigador para um local de injecção precisa e reprodutível. Nestes estudos, a linha parental U251, células U251 transfectadas com luciferase (U251-Luc), ou U87 células imortalizadas de cultura de tecidos humanos GBM foram suspensos em 4 a 6 mL de SF-DMEM e injectados 2,5 milímetros lateral (direita), 1,5.......

Discussion

Modelos de mouse ortotópico de câncer de cérebro humano pode ser uma excelente ferramenta para avaliar a eficácia das terapias clínicas, mas é preciso ter cuidado para otimizar a colocação de células no tecido cerebral. Estudos têm demonstrado que os volumes de alíquotas excessivas, técnica de injeção abaixo do ideal e taxas de injecção precipitadas podem levar a leakiness eo aparecimento de células tumorais em locais indesejáveis ​​(ventrículos, medula espinhal, regiões extradurais, etc.) E alta variação no ta.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Equipment
Small Animal Stereotaxic Instrument with Digital Display Console	Kopf	Model 940
Mouse Gas Anesthesia Head Holder	Kopf	Model 923-B
Mouse Ear Bars	Kopf	Medel 922
Fiber Optic Illuminator	Fisher	12-562-36
UltraMicroPump III	WPI	UMP3
Micro4 microprocessador	WPI	UMC4
Broca rotativa manual de velocidade variável	Broca Dremel	Modelo 300
para dentista, 1,0 mm	Spoelting	514554
Adaptador para broca para broca dentária: pinça de 3/32 polegadas	Dremel	481
Almofada			para ratos
		vaporizador de isoflurano	para camundongos
		Tubulação médica e conectores	para conectar o vaporizador de isoflurano com estrutura
Instrumentos
Precision 25 μ l microsseringa	Hamilton	7636-01	Modelo 702, sem agulha
Agulhas de microsseringa, 26s G	Hamilton	7804-04	RN, estilo de ponta de 25 mm 2
Tesouras de ponta fina (retas, afiadas/afiadas)
Tesouras
Pinças
Hemostáticos serrilhados (2)
Pinças
Suprimentos
Suturas 5-0 vicryl P-3 13 mm (Ethicon)	MWI	J463G
Lâminas cirúrgicas #10, inoxidável (Pena)	Fisher	296#10
Isoflurane (Fluriso)	VetOne	NDC 13985-528-60	Item # 502017. Anestésico inalatório líquido. A lei federal restringe este medicamento ao uso por ou por ordem de um veterinário licenciado.
Carprofeno (Rimadyl Injetável 50 mg/ml)	Pfizer	NDC 61106-8507-01	diluído em solução salina
Pomada oftálmica (lágrimas artificiais)	Rugby	NDC 0536-6550-91
Antibiótico tópico (AK-Poly-Bac)	Akorn	NDC 17478-238-35
Anti-séptico tópico de iodopovidona, 10% (Betadine)	Betadine	NDC 67618-150-04
Peróxido de hidrogênio, 30%	Fisher	H325-100	para visualizar marcos do crânio
Solução salina estéril	VetOne	NDC 13985-807-25	para diluir soluções, limpar o tecido
Cera	WPI	Item #501771
Campos estéreis	McKesson	25-517
Luvas cirúrgicas estéreis	McKesson	(para caber)
Almofadas de gaze estéreis, 2 x 2	Fisherbrand
Almofadas de gaze estéreis, 4 x 4	Marca Fisher	22-415-469
Almofadas de preparação de álcool (médio)	PDI	B603
Aplicadores estéreis com ponta de algodão	Marca Fisher	23-400-114
Tubo estéril de 0,5 ml com tampa de rosca com tampas para células	USA Scientific	1405-4700	para células
Pipetas de dispo estéreis embaladas individualmente Fisher		BD 357575	para soluções de limpeza
agulhas Seringas de insulina BD com agulhas	Fisher	329461	para analgésico
70% Etanol			para limpeza
DiH2O			estéril para limpeza
Tubos de microfuga para soluções			limpeza para soluções de limpeza de agulhas
Caneta hidrográfica (dedicada)			para marcação de crânio