यहां, हम मूषक पशु मॉडल की चिंता के स्तर में परिवर्तन की जांच करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । उन्नत प्लस भूलभुलैया (EPM) परीक्षण, एक वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर के साथ एक साथ प्रयोग किया जाता है, एक विश्वसनीय विधि नैदानिक प्रयोगशाला परिदृश्यों में विभिन्न संभावित anxiolytic उपचार के प्रभाव दस्तावेज़ प्रदान करता है ।
इस अध्ययन का समग्र लक्ष्य एक वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर के साथ संयोजन में ऊंचा प्लस भूलभुलैया (EPM) परीक्षण की कार्यप्रणाली का वर्णन है । विधि के प्रयोजन के लिए प्रयोगशाला कुतर मॉडलों पर विभिंन संभावित anxiolytic उपचार के प्रभाव दस्तावेज है । EPM परीक्षण खुले स्थानों और ऊंचाइयों, और उनके सहज तीव्र प्रेरणा के लिए उपंयास वातावरण का पता लगाने के लिए संरक्षित, संलग्न अंधेरे रिक्त स्थान और बिना शर्त डर की ओर कुतर ‘ proclivity पर आधारित है । EPM परीक्षण anxiolytic या कुतर दिया दवाओं है कि व्यवहार को प्रभावित करने के लिए जाना जाता है की anxiogenic प्रतिक्रियाओं की जांच के लिए एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया व्यवहार परीक्षण है । निरीक्षण बंद हथियारों पर खर्च समय की एक घटी हुई अनुपात का प्रदर्शन, खुले हथियारों पर खर्च समय का एक बढ़ा अनुपात, प्रविष्टियों की एक कम संख्या के हथियार बंद करने के लिए, और प्रविष्टियों की एक उन्नत संख्या EPM परीक्षण द्वारा मापा हथियार खोलने के लिए कम प्रतिबिंबित हो सकता है चिंता का स्तर । इस विधि का उपयोग, चिंता से संबंधित व्यवहार पर exogenous कीटोंन की खुराक के प्रभाव Sprague Dawley (एसपीडी) चूहों में परीक्षण किया है. Exogenous कीटोंन की खुराक क्रोनिक ८३ दिन या जीर्ण और तीव्रता से मौखिक रूप से gavaged के लिए चूहों को खिलाया जाता है, दैनिक 7 दिनों के लिए, EPM परीक्षण आयोजित करने से पहले. व्यवहार डेटा संग्रह उपचार के अंत में एक अंधा पर्यवेक्षक द्वारा स्मार्ट वीडियो ट्रैकिंग प्रणाली का उपयोग किया जाता है । मुख्य निष्कर्षों EPM परीक्षण कीटोंन पूरक-प्रेरित anxiolytic प्रभाव का पता लगाने के लिए एक प्रभावी तरीका है कि संकेत मिलता है और दवा या चयापचय आधारित चिकित्सा के साथ जुड़े चिंता व्यवहार में परिवर्तन का आकलन करने के लिए एक संवेदनशील उपाय माना जा सकता है.
इस लेख के लक्ष्य के लिए एक वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर के साथ संयोजन में EPM परीक्षण की कार्यप्रणाली का वर्णन करने के लिए चिंता में परिवर्तन से संबंधित व्यवहार और प्रयोगशाला में उपंयास उपचार में बदलाव की निगरानी के लिए है । EPM परीक्षण एक अपेक्षाकृत सरल व्यवहार मूल्यांकन विधि है, जो चिंता व्यवहार के स्तर और दवा उपचार1के आवेदन के बाद चूहों की चिंता प्रतिक्रियाओं को बढ़ाता है की जांच के लिए विकसित किया गया है. दरअसल, यह प्रदर्शित किया गया है कि EPM परीक्षण एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया और प्रभावी कुतर1,2की चिंता के स्तर में परिवर्तन की जांच के लिए व्यवहार परख है । कुतर (मुख्य रूप से चूहों और चूहों) में EPM परीक्षण की प्रयोज्यता, खुली जगह की एक अनकंडीशनल डर (परिहार), और उनके उच्च स्तर के सहज प्रेरणा के उपंयास का पता लगाने के लिए संलग्न, डार्क spaces (दृष्टिकोण) की ओर उनके proclivity पर आधारित है वातावरण. नतीजतन, EPM परीक्षण एक दृष्टिकोण पर आधारित एक अच्छी तरह से स्थापित पद्धति है-परिहार संघर्ष2,3.
EPM चार ऊंचा हथियार है, जो हैंडल और मिठानी4 (चित्रा 1) द्वारा वर्णित किया गया है के साथ मिलकर एक प्लस के आकार का उपकरण है, और दो विपरीत हथियार है कि आसपास के लिए खुले है (खुली बाहों) के होते हैं, जबकि दो बंद विपरीत हथियार (बंद हथियार) दीवारों से लैस हैं । उपचार के बाद, अगर समय में वृद्धि हुई खुली बाहों पर खर्च किया जाता है और/या खुले हाथ प्रविष्टियों की एक वृद्धि की संख्या नियंत्रण की तुलना में (अनुपचारित) जानवरों EPM पर पता चला है, यह एक anxiolytic प्रभाव2,3इंगित करता है । सबसे मजबूत परिहार प्रतिक्रिया शुरू होने के बाद पहले 5 मिनट में प्रदर्शन किया गया है (EPM के चार हथियारों के चौराहे में चूहों के स्थान) EPM परख के5; इसलिए, एक इलाज के बाद किसी भी व्यवहार आमतौर पर 5 मिनट के लिए EPM पर दर्ज की गई है । एक चिंता स्तर के अतिरिक्त उपाय के रूप में, सिर में गिरावट की संख्या, रियर (दो हिंद पैर पर कुतर के ऊर्ध्वाधर खड़े), मल boli, साथ ही साथ कुल शाखा प्रविष्टियां (सहज मोटर गतिविधि) और विभिंन मुद्राओं (खींच या ठंड), भी दर्ज किया जा सकता है पर EPM2. इस प्रकार, कई व्यवहार मानकों चिंता से संबंधित व्यवहार का एक व्यापक आकलन प्रदान करने के लिए संकलित किया जा सकता है ।
आदेश में परिणामों की वैधता बढ़ाने के लिए, दो से तीन व्यवहार परख सामांयतः एक साथ प्रयोग किया जाता है, जैसे प्रकाश अंधेरे विकल्प परीक्षण के रूप में, सामाजिक संपर्क परीक्षण, और EPM परीक्षण, विभिंन पशु मॉडल6की चिंता के स्तर को मापने के लिए । EPM परख कुतर पर अकेले प्रदर्शन भी एक उपयुक्त विधि के लिए विभिंन दवाओं7anxiolytic या anxiogenic प्रभाव की जांच है । EPM परीक्षण न केवल बेंजोडाइजेपाइन-प्रकार anxiolytics (जैसे, डायजेपाम)8करने के लिए संवेदनशील है, लेकिन यह भी, दूसरों के अलावा, एमिनो एसिड, monoamine, peptidergic और nucleosidergic यौगिकों के लिए (जैसे, एन मिथाइल-डी-aspartate (मोर्फिन) विरोधी एपी 7, α-अमीनो-3-hydroxy-5-मिथाइल-4-isoxazolepropionic अम्ल (AMPA) विरोधी CNQX, µ-opioid रिसेप्टर एगोनिस्ट अफ़ीम, NPY1 विरोधी BIBP3226, पदार्थ पी, ghrelin, ऑक्सीटोसिन, सेरोटोनिन रिसेप्टर एगोनिस्ट और विरोधी जैसे 8-OH-DPAT और रास्ता-१००६३५, और β1-एड्रीनर्जिक विरोधी betaxolol)9,10,11,12. नतीजतन, कुतर पर EPM परख विभिंन उपचार के प्रभाव की जांच करने के लिए एक उपयुक्त और संवेदनशील तरीका है कि मस्तिष्क anxiolytic प्रभाव में शामिल क्षेत्रों को प्रभावित (जैसे, प्रमस्तिष्कखंड, हिप्पोकैम्पस, और अंगों क्षेत्रों) और कार्रवाई के तंत्र (जैसे, serotonergic, GABAergic, और adenosinergic प्रणाली)2चिंता में फंसा । इन EPM अध्ययनों में परीक्षण एजेंटों exogenous कीटोंन की खुराक है कि एक संवेदनशील विधि व्यवहार परिवर्तन का पता लगाने के लिए आवश्यकता हो सकती है कि सूक्ष्म तरीके में संकेतन बदल मस्तिष्क शामिल हैं ।
इस अनुच्छेद में, हम EPM परीक्षण का वर्णन एक वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर है, जो प्रयोगात्मक पूर्वाग्रह को खत्म करने में मदद करता है और संग्रह और उपंयास anxiolytic उपचार के जवाब में व्यवहार परिवर्तन के विश्लेषण की सुविधा के साथ संयोजन में इस्तेमाल किया ।
सामान्य तौर पर, कई सामान्य रूप से इस्तेमाल किया परीक्षण, जैसे प्रकाश अंधेरे विकल्प परीक्षण, सामाजिक संपर्क परीक्षण, और EPM परीक्षण, विभिन्न पशु मॉडलों में चिंता स्तर को मापने के लिए उपयोग किया जाता है. हालांकि, अकेले EPM परख एक उपयुक्त विधि की जांच करने के लिए, उदाहरण के लिए, ‘ कुतर चिंता के स्तर पर exogenous कीटोंन की खुराक के प्रभाव18,20।
EPM विधि का मुख्य लाभ यह है कि यह ‘ कुतर ‘ सहज proclivity की ओर अंधेरे, संलग्न रिक्त स्थान, ऊंचाइयों के अनकंडीशनल डर के अलावा और खुली जगहों के परिहार पर निर्भर करता है । दूसरी ओर, अंय चिंता की तरह व्यवहार का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया तरीकों जैसे बिजली के झटके के रूप में कुछ हानिकारक उत्तेजनाओं के लिए व्यवहार प्रतिक्रियाओं पर आधारित हैं, भोजन/पानी अभाव, जोर शोर, और शिकारी गंध के लिए जोखिम3। ये परीक्षण आमतौर पर एक वातानुकूलित प्रतिक्रिया में परिणाम है, जबकि EPM भी एक अधिक मानवीय विकल्प का प्रतिनिधित्व करता है । इसके अलावा, EPM अलग मस्तिष्क क्षेत्रों (जैसे, अंग क्षेत्रों, हिप्पोकैम्पस) और अंतर्निहित तंत्र (जैसे, गाबा, ग्लूटामेट, सेरोटोनिन, adenosine) चिंता व्यवहार2की भागीदारी का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी उपकरण हो सकता है ।
जब उपचार है कि पशुओं के लिए काफी तनावपूर्ण है आवेदन (जैसे, मौखिक gavage), यह महत्वपूर्ण है कि सभी जानवरों को उसी तरह से संभाला और एक ही व्यक्ति द्वारा कर रहे हैं, खासकर जब संभावित, सूक्ष्म anxiolytic प्रभाव का आकलन । यदि संभव हो तो, पीने के पानी में या एक स्वादिष्ट ‘ इलाज ‘ के माध्यम से दवा की शुरूआत एक पसंदीदा तरीका हो सकता है । एक ही राशि प्रत्येक जानवर के लिए प्रशासित है कि यह सुनिश्चित करने के लिए, एक मौखिक gavage इस्तेमाल किया जा सकता है । यौगिक के pharmacokinetic गुणों के आधार पर, यह आमतौर पर gavaging के बाद 1 घंटे के भीतर EPM पर जानवरों का परीक्षण करने के लिए सलाह दी जाती है । जब प्रयोगात्मक विषयों का चयन, यह उनके तनाव, लिंग, मद चक्र, और उंर, साथ ही शरीर के वजन, उद्देश्यों और परीक्षण पदार्थ2के अनुसार विचार करने के लिए महत्वपूर्ण है । उंर के संबंध में, जब EPM अध्ययन डिजाइन और डेटा की व्याख्या, यह विचार करना महत्वपूर्ण है कि खुले हाथ प्रविष्टियों का प्रतिशत रैखिकता21 साल की उंर के साथ बढ़ जाती है और EPM व्यवहार में उंर बढ़ने से संबंधित परिवर्तन तनाव विशेष है22।
जब एक EPM परीक्षण का आयोजन, वहां संभावित समस्याओं को संबोधित किया जाना चाहिए रहे हैं । कई बार जानवरों ग़ैर प्रवृत्तियों के कारण विश्लेषण से बाहर रखा जा करने की जरूरत है (जैसे, पशु क्षेत्र जहां यह रखा गया था कभी नहीं छोड़ता, लगभग तंत्र बंद हो जाता है, एक शोर या उपकरण के बाहर घटना से विचलित है). इसके अलावा EPM परीक्षण के साथ जटिलताओं उपचार जो बेहोशी या सक्रियता क्योंकि प्रभाव के इन प्रकार के EPM मापदंडों के माध्यम से मूल्यांकन करने की आवश्यकता के कारण शामिल हो सकते हैं ।
यह EPM परीक्षण के लिए पशुओं को बेनकाब करने के लिए महत्वपूर्ण है केवल एक बार खुले हथियारों पर कम गतिविधि और केंद्रीय मंच पर खर्च कम कुल समय EPM पर पहली जोखिम की तुलना में कुतर के दूसरे (दोहराया) जोखिम पर प्रदर्शन किया गया 14,15. इसलिए, EPM परीक्षण करने के लिए कुतर के एक एकल जोखिम की पुरजोर सिफारिश की है । हालांकि, अगर वहां EPM के लिए पहला और दूसरा जोखिम के बीच तीन सप्ताह की एक ंयूनतम है और EPM सेट अप दूसरे कमरे (अलग वातावरण) में ले जाया जाता है, जानवरों EPM परीक्षण से अधिक एक बार2से जांच की जा सकती है ।
EPM विभिंन सामग्रियों, आकारों में उपलब्ध है (जैसे, माउस या चूहे के लिए), और रंग, जो अध्ययन विषयों को चुनने पर विचार करने की जरूरत है । यह ध्यान में रखना है कि तंत्र पर पिछले जानवर द्वारा छोड़ दिया गंध बाद में जानवर के व्यवहार को बदल सकते है महत्वपूर्ण है । इसलिए, हम एक सामग्री है कि साफ करने के लिए आसान है, जैसे एक्रिलिक ग्लास (पारदर्शी नहीं) है, जो धोने के बाद गंध बनाए रखने नहीं है की एक EPM का उपयोग करने की सलाह देते हैं । लकड़ी से बने EPM तंत्र से बचें । अधिमानतः, EPM पर परीक्षण जानवरों के रंग से अलग है कि एक मैट रंग का उपयोग करें (जैसे, काले सफेद जानवरों का परीक्षण कर रहे हैं). पशु और बाड़े के बीच बेहतर इसके विपरीत, पशु का पता लगाने के बेहतर और उच्च विश्वसनीयता और परिणाम प्राप्त की परिशुद्धता (दूरी कवर, गति, ट्रैकिंग) । मैट ग्रे सामग्री से बने EPM उपकरण सफेद, काले और सफेद और काले जानवरों के साथ उपयोगी होते हैं ।
वीडियो ट्रैकिंग प्रणाली का एक और लाभ यह है कि EPM के अलावा, यह इस तरह के पानी भूलभुलैया के रूप में व्यवहार परीक्षण, की एक विस्तृत विविधता के साथ इसे स्थापित करने के लिए एक लचीला और आसान तरीका प्रदान करता है, खुले मैदान, प्लस/रेडियल बांह/टी-Y भूलभुलैया, जगह वरीयता, मजबूर तैराकी , और पूंछ निलंबन परीक्षण ।
सारांश में, इस अनुच्छेद के लक्ष्य के लिए EPM एक वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर के साथ संयोजन में इस्तेमाल के लिए इकट्ठा और उपंयास anxiolytic उपचार के जवाब में व्यवहार परिवर्तन का विश्लेषण परीक्षण का वर्णन है । EPM के संभावित अनुप्रयोगों चिंता से संबंधित विकारों के उपचार के लिए नए विकसित औषधीय एजेंटों की प्री-स्क्रीनिंग शामिल हैं । anxiolytic और anxiogenic एजेंटों के अलावा दुर्व्यवहार के विभिन्न हार्मोनों और दवाओं के व्यवहारिक प्रभाव की भी जांच की जा सकती है । उंर बढ़ने और विभिंन तनाव के लिए जोखिम का प्रभाव भी मूल्यांकन किया जा सकता है । इस अध्ययन से यह निष्कर्ष निकला है कि जब उचित कदम उठाए जाते हैं तो EPM के उपयोग में कीटोंन पूरकता18,20के साथ जुड़े व्यवहार परिवर्तन का आकलन करने के लिए एक संवेदनशील विधि सिद्ध हुई है ।
The authors have nothing to disclose.
यह काम एक ONR अनुदान N000141310062 और एक GLUT1D फाउंडेशन अनुदान #6143113500 (डोमिनिक पी D’Agostino), हंगरी की राष्ट्रीय विकास एजेंसी द्वारा समर्थन किया गया था (के तहत अनुदान नहीं । TIOP-1.3.1.-07/2-2F-2009-2008; Kovács Zsolt करने के लिए) और दिग्गजों मामलों के विभाग द्वारा (प्रकार के निशान के लिए) । लेखक इस विषय पर चल रहे अनुसंधान का समर्थन करने के लिए क्वेस्ट पोषण LLC धंयवाद करना चाहते है (Csilla तीव्र श्वसन संक्रमण) ।
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