Artigo de método
Nós descrevemos um método para avaliar o efeito da imunidade pré-existente contra vírus da dengue sobre a infecção pelo vírus Zika usando soro humano, células humanas primárias e quantificação de infecção por reação em cadeia da polimerase em tempo real quantitativa.
O recente surgimento dos flavivirus Zika e complicações neurológicas, como síndrome de Guillain-Barré e microcefalia em lactentes, tem trazido preocupações sérias de segurança pública. Entre os fatores de risco, realce dependente de anticorpos (ADE) é uma ameaça a mais significativa, como o recente ressurgimento do vírus Zika (ZIKV) é principalmente em áreas onde a população foi exposta e está em um estado de pré-imunidade para outras estreitamente relacionadas flavivírus, especialmente o vírus da dengue (DENV). Aqui, descrevemos um protocolo para quantificar o efeito dos anticorpos de soro humano contra DENV na infecção ZIKV em células humanas primárias ou linhas celulares.
Entre as doenças virais transmitidas por mosquitos, Zika infecção é um do mais clinicamente importantes1. A infecção é causada pelo flavivirus ZIKV que, na maioria dos casos, usa o Aedes aegypti como seu principal vetor1,2. No entanto, existem estudos que relataram Aedes albopictus como um vetor primário em alguns focos ZIKV3. Embora a infecção é assintomática em muitos casos, os sintomas mais comuns são febre, dor de cabeça e dor de músculo2. Não há cura ou vacina disponível para infecção ZIKV e o tratamento disponível n....
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Amostras de soro utilizadas neste estudo foram obtidas de humanos participantes de uma coorte de Columbia. Coleta de amostra foi aprovada pelo Conselho de revisão interna (IRB) na Universidad de Pamplona (Columbia, América do Sul) e Los Potios Hospital8. As amostras foram fornecidas anonimamente e os investigadores não tinham acesso a informações do paciente. As amostras de soro foram verificadas para o sorotipo DENV. As amostras foram confirmadas para neutralizar a infecção DENV in vitro. Para controle, utilizaram-se amostras de soro de indivíduos saudáveis (HC) dos EUA.
Nota: Este protocol....
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Na Figura 1, há uma ilustração diagramática passo a passo de todas as etapas envolvidas para realizar o protocolo de ADE. É um diagrama esquemático mostrando todo o processo de ADE de ZIKV devido a imunidade preexistente para DENV. A Figura 2 mostra como soro amostras foram categorizadas em três grupos diferentes: amostras DENV-confirmada a infecção são referidas como o grupo de DENV-infectados, DENV anticorpo-confirmado as amost.......
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Reatividade cruzada de anticorpos DENV levando para o ADE de outros sorotipos DENV tem dificultado o desenvolvimento de uma vacina eficaz11. ZIKV pertence à mesma família, Flaviviridae e tem uma considerável homologia com outros flavivírus, especialmente DENV12. O alvo principal de anticorpos neutralizantes para ZIKV e DENV é a proteína de envelope, que compartilha uma homologia de sequência estrutural e quaternário muito alta entre os dois vírus13
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Os autores não têm nada a declarar.
Este trabalho foi generosamente apoiado por 1R21AI129881-01 (a T.M.C), start-up fundos de emergentes infecciosas doenças laboratórios nacionais e o Boston University School of Medicine.
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Soro Fetal Bovino | GEMINI | 100-106 | |
| iCycler | BioRad | 785BR02188 | Modelo nº Módulo de Óptica CFX96 |
| Microfuge 18 Centrífuga | Beckman Coulter | 367160 | |
| Nanodrop-1000 | Termocientífico | Kit RT-PCR 1072 | |
| Quantifast SYBR-One Step | Qiagen | 204154 | Usado para 1 passo RT-qPCR |
| RNeasy RNA Isolation Kit | Qiagen | 74106 | Usado para extração de RNA |
| RPMI-medium | Gibco | 11875093 |
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