Preparação de grânulos de Gushukang (GSK) para experimentos in vivo e in vitro

Yongjian Zhao; Qiang Wang; Shufen Liu; Yongjun Wang; Bing Shu; Dongfeng Zhao

doi:10.3791/59171

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Artigo de método

Preparação de grânulos de Gushukang (GSK) para experimentos in vivo e in vitro

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DOI:

10.3791/59171

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9 de maio de 2019

Yongjian Zhao¹^,²^,³ , Qiang Wang¹^,²^,³ , Shufen Liu¹^,²^,³ , Yongjun Wang¹^,²^,³^,⁴ , Bing Shu¹^,²^,³ , Dongfeng Zhao¹^,²^,³

¹Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, ²Spine Institute, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, ³Key Laboratory of Theory and Therapy of Muscles and Bones, Ministry of Education, ⁴School of Rehabilitation Science, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine

Neste artigo

Resumo

Este artigo fornece um protocolo detalhado para preparar uma solução de trabalho de grânulos de Gushukang para estudos animais e o grânulo de GSK que contem o soro para in vitro experimenta. Este protocolo pode ser aplicado a investigações farmacológicas de fitoterápicos, bem como prescrições para experimentos in vivo e in vitro.

Resumo

A medicina erval chinesa tradicional joga um papel como um método alternativo em tratar muitas doenças, tais como a osteoporose na pós-menopausa (PNF). Os grânulos de gushukang (GSK), uma prescrição comercializada em China, têm efeitos osso-protetores em tratar o PNF. Antes da administração ao corpo, um procedimento padrão da preparação é exigido geralmente, que visa promover a liberação de constituintes ativos das ervas cruas e realçar os efeitos farmacológicos assim como resultados terapêuticos. Este estudo propõe um protocolo detalhado para o uso de grânulos de GSK em ensaios experimentais in vivo e in vitro. Os autores fornecem primeiramente um protocolo detalhado para calcular as dosagens animal-apropriadas dos grânulo para a investigação in vivo: pesando, dissolvendo, armazenamento, e administração. Em segundo lugar, este artigo descreve protocolos para a varredura do Micro-CT e a medida de parâmetros do osso. Foram avaliados a preparação da amostra, protocolos para a execução da máquina de microtomografia computadorizada e quantificação dos parâmetros ósseos. Em terceiro lugar, os grânulos GSK contendo soro são preparados, e o soro contendo medicamentos é extraído para osteoclastogênese in vitro e osteoblastogênese. Os grânulos de GSK foram administrados intragástrica duas vezes por o dia aos ratos por três dias consecutivos. O sangue foi então coletado, centrifugado, inativado e filtrado. Finalmente, o soro foi diluído e usado para executar o osteoclastogênese e o osteoblastogenesis. O protocolo descrito aqui pode ser considerado uma referência para investigações farmacológicas de medicamentos de prescrição de ervas, como grânulos.

Introdução

A medicina tradicional chinesa (TCM) é uma das importantes abordagens complementares e alternativas para o tratamento da osteoporose^1,2. A decocção de água é a forma básica e mais comumente usada da fórmula³. No entanto, desvantagens também existem: mau gosto, inconveniente para o transporte, vida útil curta e protocolos inconsistentes, limitando os usos, bem como os efeitos curativos. Para evitar as desvantagens acima, bem como para perseguir melhores efeitos, os grânulos foram desenvolvidos e têm sido amplamente utilizados⁴. Embora muitos estudos tenham explora....