Caracterização das Células Endoteliais de Crescimento Sanguíneo (CBO) do Sangue Periférico Porcino

Abstract

O endotélio é uma estrutura dinâmica integrada que desempenha um papel importante em muitas funções fisiológicas, como angiogênese, hemostasia, inflamação e homeostase. O endotélio também desempenha um papel importante em fisiopatologias como aterosclerose, hipertensão e diabetes. As células endoteliais formam o revestimento interno dos vasos sanguíneos e linfáticos e exibem heterogeneidade em estrutura e função. Vários grupos têm avaliado a funcionalidade de células endoteliais derivadas do sangue periférico humano com foco em células progenitoras endoteliais derivadas de células-tronco hematopoéticas ou células endoteliais maduras (ou células formadoras de colônias endoteliais). Essas células fornecem um recurso autólogo para a terapêutica e modelagem de doenças. As células xenogênicas podem fornecer uma fonte alternativa de terapêutica devido à sua disponibilidade e homogeneidade alcançadas pelo uso de animais geneticamente semelhantes criados em condições semelhantes. Assim, um protocolo robusto para o isolamento e expansão de células endoteliais de crescimento sanguíneo altamente proliferativo do sangue periférico suíno tem sido apresentado. Essas células podem ser usadas para inúmeras aplicações, tais como engenharia de tecido cardiovascular, terapia celular, modelagem de doenças, triagem de drogas, estudo da biologia celular endotelial e co-culturas in vitro para investigar respostas inflamatórias e de coagulação em xenotransplante.

Introduction

O endotélio é uma estrutura dinâmica e altamente complexa e um componente vital da parede vascular. Ele reveste a superfície interna dos vasos sanguíneos para fornecer uma interface física entre o sangue circulante e os tecidos circundantes. Sabe-se que essa estrutura heterogênea desempenha várias funções, como angiogênese, inflamação, vasorregulação e hemostasia1,2,3,4. As células endoteliais da veia umbilical humana são um tipo celular amplamente estudado para avaliar a funcionalidade das células endoteliais. No entanto, a variabilidade do....

Protocol

Todos os estudos em animais foram aprovados pelos respectivos Comitês Institucionais de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) no Medical College of Wisconsin e na Mayo Clinic.

OBS: Neste estudo, foram utilizados suínos domésticos cruzados Yorkshire/Landrace/Duroc (Sus domesticus), machos e fêmeas, de 40-80 kg, com 3-6 meses de idade.

1. Coleta de sangue periférico suíno

1. Prepare materiais.
   1. Diluir a solução de heparina a 100 U/mL em solução salina estéril.
   2. Adicionar 3-4 mL de solução de heparina a cada um dos dois tubos cônicos de 50 mL e duas seringas de 60 mL.

Results

A morfologia das células cultivadas foi observada desde o início do cultivo até a observação de colônias de BOEC (Figura 1). Uma população menor de células aderentes começou a se fixar às placas de cultura e crescer, enquanto as células não aderentes foram removidas com mudanças no meio de cultura (Figura 1B). As colônias apareceram pela primeira vez no 6º dia como uma coleção de células endoteliais-símile proliferando radialmente para fora a partir de um ponto .......

Discussion

As CBAA são uma poderosa ferramenta que pode ser utilizada em diversas abordagens científicas e terapêuticas ^7,8,16. As BOECs têm sido utilizadas para analisar a expressão gênica da CE para elucidar os principais fatores responsáveis pelo desenvolvimento de doenças vasculares e câncer5,19,20,21. Os BOE.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agulha de 19 G	Covidien	1188818112
tubos cônicos de 50 mL Corning		352098
placa de 6 poços	BD Falcon	353046
seringas de 60 mL	Solução de	de
(0,8%)	Stemcell Technologies	07850
Solução antibiótica/antimicótica (100x)	Gibco	15240-062
Centrífuga	Thermo Scientific	75-253-839
EGM-2 meio de cultura	Lonza Walkersville	CC-3162
Tubo de extensão	Hanna Pharmaceutical Supply Co.	03382C6227
Soro fetal bovino (FBS)	Atlas Biologicals	F-0500-A
Ficoll-Paque 1077	Cytiva	17144003	Solução de gradiente de densidade
Injeção de heparina sódica (1.000 unidades/mL)	Pfizer	00069-0058-01
Fibronectina plasmática humana	Gibco	33016-015
Gelo	N/A	N/A
Solução salina tamponada com fosfato (PBS)	Gibco	10010-023
Conjunto de pipetas	Eppendorf	2231300004
Água estéril	Gibco	15230-162
Pipeta fina	Celltreat Scientific	229280