O presente protocolo descreve um método simples e eficiente para a identificação de metabólitos do 2,4-dibromofenol em plantas.
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Artigo de método
O presente protocolo descreve um método simples e eficiente para a identificação de metabólitos do 2,4-dibromofenol em plantas.
As culturas podem ser extensivamente expostas a poluentes orgânicos, uma vez que o solo é um importante sumidouro de poluentes descartados no meio ambiente. Isso cria exposição humana potencial através do consumo de alimentos acumulados por poluentes. A elucidação da absorção e metabolismo de xenobióticos em culturas é essencial para a avaliação do risco de exposição dietética em humanos. No entanto, para tais experimentos, o uso de plantas intactas requer experimentos de longo prazo e protocolos complexos de preparação de amostras que podem ser afetados por vários fatores. Culturas de calos vegetais combinadas com espectrometria de massas de alta resolução (HRMS) podem fornecer uma solução para a identificação precisa e econômica de metabólitos de xenobióticos em plantas, pois pode evitar a interferência do microambiente microbiano ou fúngico, encurtar a duração do tratamento e simplificar o efeito de matriz de plantas intactas. O 2,4-dibromofenol, um retardante de chama típico e desregulador endócrino, foi escolhido como substância modelo devido à sua ampla ocorrência no solo e ao seu potencial de absorção pelas plantas. Neste trabalho, calos vegetais foram gerados a partir de sementes de assepsia e expostos a meio de cultura estéril contendo 2,4-dibromofenol. Os resultados mostraram que oito metabólitos do 2,4-dibromofenol foram identificados nos tecidos do calo vegetal após 120 h de incubação. Isso indica que o 2,4-dibromofenol foi rapidamente metabolizado nos tecidos do calo vegetal. Assim, a plataforma de cultura de calos vegetais é um método eficaz para avaliar a absorção e o metabolismo de xenobióticos em plantas.
Um número crescente de poluentes orgânicos tem sido descartado no meio ambiente devido às atividades antrópicas 1,2, sendo o solo considerado um importante sumidouro desses contaminantes 3,4. Os contaminantes presentes no solo podem ser absorvidos pelas plantas e potencialmente transferidos para organismos de nível trófico superior ao longo das cadeias alimentares, entrando diretamente no corpo humano por meio do consumo das culturas, levando consequentemente à exposição não intencional 5,6. As....
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1. Diferenciação do calo de cenoura
NOTA: Autoclave todos os equipamentos utilizados aqui e realize todas as operações em uma bancada ultralimpa esterilizada por UV.
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As etapas do protocolo estão representadas na Figura 1. Seguindo o protocolo, comparamos o cromatograma do extrato de calo de cenoura do tratamento com 2,4-dibromofenol com os controles, e encontramos oito picos distintos que estão presentes no tratamento com 2,4-dibromofenol, mas ausentes nos controles (Figura 2). Isso indica que um total de oito metabólitos de 2,4-dibromofenol (M562, M545, M661, M413, M339, M380, M424 e M187) foram detectados com sucesso no ca.......
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Este protocolo foi desenvolvido para identificar eficientemente a biotransformação de xenobióticos em plantas. A etapa crítica deste protocolo é o cultivo do calo vegetal. A parte mais difícil é a diferenciação e manutenção do calo vegetal, pois o calo vegetal é facilmente infectado e desenvolvido para os tecidos vegetais. Portanto, é importante certificar-se de que todos os equipamentos utilizados sejam autoclavados e que todas as operações sejam realizadas em condições assépticas. A diferenciação e manutenção do calo v.......
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Os autores não têm nada a revelar.
Este estudo foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (21976160) e pelo Projeto de Pesquisa de Aplicação de Tecnologia de Bem-Estar Público da Província de Zhejiang (LGF21B070006).
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Ácido 2,4-diclorofenoxiacético | WAKO | 1 mg/L | |
| 20% H2O2 | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 10011218-500ML | |
| 4-n-NP, >99% | Dr. Ehrenstorfer GmbH | ||
| 4-n-NP-d4 | Pointe-Claire | ||
| 6-benzilaminopurina | WAKO | 0,5 mg/L | |
| 75% etanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 1269101-500ML | |
| 7890A-5975 cromatografia gasosa | Agilent | ||
| ACQULTY ultra-performance cromatografia líquida | Frascos | ||
| Incubadora de clima artificial | Ningbo DongNan Lab Equipment Co., LTD | RDN-1000A-4 | |
| Autoclaves | STIK | MJ-Series | |
| C18 coluna | ACQUITY UPLC BEH | ||
| Centrifuge | Thermo Fisher | ||
| Coluna capilar DB-5MS | Agilent | ||
| Diclorometano | Sigma-Aldrich | 40071190-4L | |
| Liofilizador | SCIENTZ | ||
| Triturador de tecidos de alto rendimento | SCIENTZ | ||
| Methanol | Sigma-Aldrich | ||
| MicrOTOF-QII | Bruker Daltonics | ||
| Sistema Milli-Q | Millipore | MS1922801-4L | |
| Murashige & Skoog medium | HOPEBIO | HB8469-7 | |
| N-hexano | Sigma-Aldrich | H109658-4L | |
| Instrumento de sopro de nitrogênio | Isômeros AOSHENG | MD200-2 | |
| NP, >99% | Dr. Ehrenstorfer GmbH | ||
| Cartuchos Oasis HLB | Waters | 60 mg / 3 mL | |
| Pesquisa mais | Eppendorf | 100-1000 e micro; L | |
| Sementes de cenoura do dedo mindinho (Daucus carota var. sativus) | Shouguang Seed Industry Co., Ltd | ||
| Agitação Incubadoras | Shanghai bluepard instruments Co., ltd. | THZ-98AB | |
| Extrator de fase sólida | AUTO SCIENCE | ||
| Máquina de ultrassom | ZKI | UC-6 | |
| Bancada ultra-limpa esterilizada por UV | AIRTECH |
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