Caracterização da morfologia vascular da degeneração macular relacionada à idade neovascular pela angiografia com indocianina verde

Resumo

Atualmente, a angiografia fluoresceínica (AF) é o método preferido para identificar padrões de vazamento em modelos animais de neovascularização de coroide (CNV). Entretanto, a AF não fornece informações sobre a morfologia vascular. Este protocolo descreve o uso da angiografia verde com indocianina (ICGA) para caracterizar diferentes tipos de lesões de CNV induzida por laser em modelos de camundongos.

Resumo

A degeneração macular relacionada à idade (DMRI) é uma das principais causas de cegueira entre indivíduos mais velhos, e sua prevalência está aumentando rapidamente devido ao envelhecimento da população. A neovascularização da coroide (NVC) ou DMRI úmida, responsável por 10%-20% de todos os casos de DMRI, é responsável por alarmantes 80%-90% da cegueira relacionada à DMRI. As terapias anti-VEGF atuais mostram respostas subótimas em aproximadamente 50% dos pacientes. A resistência ao tratamento anti-VEGF em pacientes com CNV está frequentemente associada à CNV arteriolar, enquanto os respondedores tendem a ter CNV capilar. Embora a angiografia fluoresceínica (AF) seja comumente usada para avaliar padrões de vazamento em pacientes com DMRI úmida e modelos animais, ela não fornece informações sobre a morfologia vascular da NVC (CNV arteriolar vs. CNV capilar). Este protocolo introduz o uso da angiografia verde com indocianina (ICGA) para caracterizar tipos de lesões em modelos de CNV induzida por laser. Este método é crucial para investigar os mecanismos e estratégias de tratamento da resistência anti-VEGF na DMRI úmida. Recomenda-se incorporar ICGA ao lado de FA para avaliação abrangente de vazamento e características vasculares da CNV em estudos mecanísticos e terapêuticos.

Introdução

A degeneração macular relacionada à idade (DMRI) é uma condição prevalente que leva à perda grave da visão em indivíduos idosos¹. Somente nos Estados Unidos, o número de pacientes com DMRI deve dobrar, chegando a quase 22 milhões até 2050, em comparação com os atuais 11 milhões. Globalmente, espera-se que o número estimado de casos de DMRI atinja impressionantes 288 milhões até 2040².

A neovascularização da coroide (NVC), também conhecida como DMRI "úmida" ou neovascular, pode ter efeitos devastadores na visão devido à formação de vasos sanguíneos anormais abaixo da retina central. Isso leva a....

Protocolo

Os experimentos com animais realizados neste estudo receberam aprovação dos Comitês Institucionais de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Baylor College of Medicine. Todos os procedimentos foram realizados de acordo com as diretrizes descritas na Declaração da Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) para o uso de animais em pesquisas oftalmológicas e da visão. Camundongos jovens (7-9 semanas) e velhos (12-16 meses) C57BL/6J machos e fêmeas foram usados para o presente estudo. Os animais foram obtidos de fonte comercial (ver Tabela de Materiais).

1. Preparo do sistema de imagem

Resultados

Seguindo o protocolo, ICGA e FA foram realizados em CNV induzida por laser em camundongos C57BL/6J jovens (7-9 semanas) e idosos (12-16 meses). A AF fornece informações sobre a localização e o vazamento das lesões de CNV (Figura 1, painéis esquerdos), enquanto a AGIC revela a morfologia vascular das lesões de CNV (Figura 1, painéis à direita). Em camundongos jovens, a CNV capilar domina as lesões da CNV. Em contraste, camundongos velhos exibem CNV arteriolar car.......

Discussão

Este estudo demonstrou o uso da angiografia verde com indocianina (ICGA) para identificar a morfologia vascular da neovascularização arteriolar e capilar de coroide (CNV) em modelos murinos com CNV induzida por laser. As propriedades da luz infravermelha e ligada à hemoglobina do corante verde de indocianina (ICG) permitiram a detecção da morfologia da CNV, o que é desafiador de se conseguir usando a angiografia fluoresceínica (AF), o método atual empregado pela comunidade de pesquisa.

O prime.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Seringa de Insulina 32-G	MHC Medical Products	NDC 08496-3015-01
Alexa Fluor 488 anticorpo secundário anti-coelho para cabras	Invitrogen	A11008
Anti-alfa; anticorpo de actina de músculo liso	Abcam	ab5694
Albumina de soro bovino	Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-2323
Camundongos C57BL/6J (7-9 semanas)	The Jackson Laboratory	Strain #:000664
Sal de Sódio de Fluoresceína	T Sigma-Aldrich	MFCD00167039
Gaymar Bomba	Gaymar	TP-500	para recuperação de camundongos após imagem
GenTeal Gel	Genteal	NDC 58768-791-15	Gel
lubrificante transparente para os olhosGS-IB4 Alexa-Flour 568 conjugado	Invitrogen	I21412
Heidelberg Eye Explorerer	Heidelberg Engineering, Alemanha	HEYEX2
Indocianina Green	Pfaultz & Bauer	I01250
Cetamina	Vedco Inc.	NDC 50989-996-06
Paraformaldeído	Acros Organics
Solução Oftálmica de Cloridrato de Proparacaína (0,5%)	Sandoz	NDC 61314-016-01
Sistema de Imagem Multimodal Spectralis	Heidelberg Engineering, Alemanha	SPECTRALIS HRA+OCT
Triton X-100	Sigma-Aldrich	X100-1L
(1%)	Bausch & Lomb	NDC 24208-585-64	Para dilatação de pupilas
Xylazine	Lloyd Laboratories	NADA 139-236

Sistema de Terapia de Calor da Bomba de calor de circulação de água 416785000Solução oftálmica de tropicamida