Occhio Difetti Nei Recettori Proteina-tirosina Fosfatasi Alfa Knock-down Zebrafish

Developmental Dynamics : an Official Publication of the American Association of Anatomists. Mar, 2002  |  Pubmed ID: 11836793

Alfa del ricevitore della proteina tirosina fosfatasi (alpha RPTP) è altamente espressa nella retina di diverse specie in via di sviluppo, ma poco si sa circa la sua funzione ci. Qui, segnaliamo che iniezione di morpholinos antisenso in zebrafish embrioni ridotta RPTP alfa espressione a quasi nondetectable livelli a postfertilization 3 giorni (dpf). RPTP alpha è rilevabile ancora da 4 dpf in avanti. RPTP alfa knock-down ha provocato gli occhi più piccoli. Esame di sezioni della retina a differenti stadi di sviluppo hanno dimostrato che già a postfertilization 28 ore (hpf) poche cellule erano presenti nella retina di embrioni RPTP alfa-oligonucleotides-iniettato. Al dpf 3, l'organizzazione a strati della retina era assente. Inoltre, la morfologia e l'etichettatura con un anticorpo specifico assone, tubulina acetilata, ha dimostrato che la maggior parte delle cellule sembrava essere indifferenziato. Sorprendentemente, presso dpf 5 la laminazione della retina è stato parzialmente restaurato, concomitante con riespressione della proteina alfa RPTP. Anche se le cellule della retina ora sono state differenziate, la stratificazione della retina è rimasto perturbata e lacune significative sono state osservate nello strato delle cellule amacrine. Pertanto, knock-down della proteina alfa RPTP fornisce la prova che RPTP alpha è essenziale per il normale sviluppo della retina.

Embrioni Di Zebrafish Come Host Di Modello Per L'analisi in Tempo Reale Di Infezioni Di Salmonella Typhimurium

Cellular Microbiology. Sep, 2003  |  Pubmed ID: 12925130

Virulenza batterica è meglio studiato in modelli animali. Tuttavia, la mancanza di possibilità di analisi in tempo reale e la necessità di analisi invasiva e laboriosa campione limitare l'uso di animali da esperimento. Nel presente studio 28 h-vecchio zebrafish embrioni sono stati infettati con cellule DsRed muniti di Salmonella typhimurium. Utilizzando multidimensionale microscopia di imaging digitale, siamo stati in grado di determinare la posizione esatta e il destino di questi agenti patogeni batterici in un host di vertebrati viventi durante tre giorni. Una bassa dose di selvaggio-tipo S. typhimurium provocato un'infezione letale con batteri residenti e moltiplicando sia in macrofago-come le cellule dell'epitelio dei vasi sanguigni. Mutanti di lipopolisaccaride (LPS) di S. typhimurium, noto per essere attenuato nel modello murino, ha dimostrato di essere non patogeni in embrioni di zebrafish e parzialmente sono stati lisati nel flusso sanguigno o degradate in macrofago-come le cellule. Tuttavia, iniezione di mutanti di LPS nel tuorlo dell'embrione ha provocato incontrollata proliferazione batterica. Batteri uccisi dal calore, selvaggio-tipo completamente sono stati lisati extracellularly in pochi minuti dopo l'iniezione, il che dimostra che il sangue di questi embrioni di zebrafish già contenere attività litico. In conclusione, il modello di embrione di zebrafish permette rapido, non invasivo e analisi in tempo reale di infezioni batteriche in un vertebrato ospite.

Una Stella Con Strisce: Zebrafish Come Modello Di Infezione

Trends in Microbiology. Oct, 2004  |  Pubmed ID: 15381194

Ceppi Di Mycobacterium Marinum Possono Essere Suddivisi in Due Tipi Distinti Sulla Base Di Virulenza E Diversità Genetica

Infection and Immunity. Nov, 2004  |  Pubmed ID: 15501758

Mycobacterium marinum provoca una malattia sistemica tubercolosi-come in un gran numero di animali pecilotermi e viene utilizzato come un modello per patogenesi micobatteriche. Nel presente studio, abbiamo infettato il pesce zebra (Danio rerio) con diversi ceppi di M. marinum a determinare la variazione nella patogenicità. A seconda dell'isolato M. marinum, il pesce ha sviluppato una malattia acuta o cronica. Malattia acuta è stato caratterizzato da una crescita incontrollata del patogeno e la morte di tutti gli animali entro 16 giorni, considerando che la malattia cronica è caratterizzata dalla formazione di granulomi in vari organi e la sopravvivenza degli animali per almeno 4-8 settimane. Analisi genetica degli isolati di polimorfismo di lunghezza del frammento amplificato ha mostrato che i ceppi di M. marinum potrebbero essere diviso in due cluster. Cluster che contenute prevalentemente ceppi isolati dagli esseri umani con granuloma serbatoio di pesce, considerando che la maggior parte dei ceppi II cluster sono stata isolata da specie pecilotermi. La progressione della malattia acuta è stata notata solo con ceppi appartenenti al cluster, considerando che tutti gli isolati cronica-malattia-causanti appartenevano al cluster II. Questa differenza di virulenza è stata inoltre osservata in vitro: cluster isolare Mma20 è stato in grado di infettare e sopravvivere in modo più efficiente il macrofago umana THP-1 e le linee di cellule di carpa leucocita CLC che è stato il cluster II isolare Mma11. Concludiamo che ceppo caratteristiche giocano un ruolo importante nella patogenesi di M. marinum. Inoltre, la correlazione tra variazioni genetiche e host origine suggerisce quel cluster sono isolati sono più patogeni per gli esseri umani.

Transcriptome Profilatura Di Zebrafish Adulto Nella Fase Tardiva Della Tubercolosi Cronica a Causa Di Infezione Da Mycobacterium Marinum

Molecular Immunology. Jun, 2005  |  Pubmed ID: 15829308

Il modello infezione di Mycobacterium marinum-zebrafish è stato utilizzato in questo studio per l'analisi di una risposta transcriptome ospite all'infezione da mycobacterium a livello organismica. RNA isolato da zebrafish adulto che ha mostrato i segni tipici della tubercolosi del pesce a causa di un'infezione cronica progressiva con M. marinum è stato confrontato con RNA da pesci sani nelle analisi di microarray. Macchiato del oligonucleotide sets (progettato da Sigma-Compugen e MWG) e Affymetrix GeneChips sono stati usati, in totale comprendente 45.465 annotazioni di trascrizione di zebrafish. Basato su una dettagliata analisi comparativa e analisi di reverse transcriptase-PCR quantitativa, presentiamo una serie di riferimento convalidati di 159 geni cui regolamento è fortemente influenzata da infezione micobatterica in tre tipi di microarrays analizzati. Inoltre, abbiamo analizzato i set di dati separato di microarrays con particolare enfasi sui profili di espressione di geni correlati a immunitario. Sovraregolati geni includono molti componenti noti della risposta infiammatoria e diversi geni che in precedenza sono stati implicati nella risposta ad infezioni micobatteriche in colture di cellule di altri organismi. I diversi geni marcatori del lignaggio mieloide che sono stati caratterizzati in zebrafish ha anche mostrarono maggiore espressione. Inoltre, gli omologhi di zebrafish di molti geni di trasduzione di segnale con rapporto alla risposta immunitaria erano indotta da infezione da M. marinum. Future analisi funzionale di questi geni possono contribuire a comprendere i meccanismi della patogenesi micobatteriche. Dal momento che un folto gruppo di geni legati alla risposta immunitaria non ha mostrato espressione alterata negli animali infetti, questi risultati suggeriscono risposte specifiche in malattia indotta da mycobacterium.

MyD88 Funzione Immunitaria Innata in Un Modello Di Infezione Dell'embrione Di Zebrafish

Infection and Immunity. Apr, 2006  |  Pubmed ID: 16552074

Meccanismi di segnalazione di immunità innata durante l'embriogenesi vertebrato sono in gran parte sconosciuti. Per lo studio del recettore Toll-like (TLR) funzione del modello di embrione di zebrafish di segnalazione, abbiamo progettato un setup sperimentale per atterramento di antisense oligonucleotides sotto condizioni di infezione batterica. Liquidazione dei batteri della Salmonella enterica sierotipo Typhimurium Ra era significativamente ridotta dopo atterramento di fattore di differenziazione mieloide 88 (MyD88), una proteina dell'adattatore comuni in TLR e interleuchina-1 receptor signaling. Quindi, noi dimostrare per la prima volta che la risposta immunitaria innata dell'embrione in via di sviluppo comporta la segnalazione MyD88-dipendente, che stabilisce ulteriormente l'embrione di zebrafish come modello per lo studio dei vertebrati dell'immunità innata.

Identificazione E L'imaging in Tempo Reale Di Una Popolazione Del Neutrofilo Che Esprimono Myc Coinvolta Nell'infiammazione E Formazione Di Granuloma Micobatterica in Zebrafish

Developmental and Comparative Immunology. 2008  |  Pubmed ID: 17553562

Da trap rinforzatore di screening abbiamo identificato una linea transgenica di zebrafish mostrando espressione YFP specifici dei leucociti durante la fine dell'embrione e precoce sviluppo larvale. Vicino romanzo membro della famiglia proto-oncogene myc codifica fattori di trascrizione, noti per essere importante per la regolazione myelopoiesis umano è stato mappato il suo inserimento di rilevamento enhancer. Caratterizzazione della famiglia zebrafish myc ha mostrato che solo questo gene myc particolare è fortemente espresso nei leucociti. Per identificare il tipo di cella myc/YFP-esprimendo, abbiamo riesaminato specificità dei marcatori mieloidi descritti da multiplex ibridazione in situ fluorescente, mostrando che lcp1 può essere considerato come un indicatore generale del leucocita, csf1r come un marcatore specifico del macrofago e mpx e lyz come marcatori specifici di neutrofili. Analisi successive presenza definite cellule YFP-positivo come un sottoinsieme della popolazione dei neutrofili. Utilizzo in tempo reale immagini confocal dimostreremo che queste cellule migrano verso siti di infiammazione e sono coinvolte nella risposta immunitaria innata verso infezioni, compresa la formazione di granuloma indotto marinum Mycobacterium.

Trasmissione Di Mycobacterium Marinum Da Pesce Per Un Bambino Molto Piccolo

The Pediatric Infectious Disease Journal. Jan, 2008  |  Pubmed ID: 18162949

Mycobacterium marinum provoca la tubercolosi nei pesci e possono causare infezioni della pelle negli esseri umani che nuotare in acque contaminate o che sono a diretto contatto con i pesci infetti. Riportiamo il caso di studio di una ragazza di 18 mesi con ascessi marinum M., che ha acquisito l'infezione attraverso il contatto indiretto con un secchio contaminato. Adeguata pulizia delle apparecchiature acquario è molto importante, specialmente con bambini piccoli in casa.

Specificità Della Risposta Dell'ospite Transcriptome Zebrafish Infezione Micobatterica Acuta E Cronica E Il Ruolo Dei Componenti Di Sistema Immunitario Innati E Adattivi

Molecular Immunology. Jul, 2009  |  Pubmed ID: 19409617

Micobatteri patogeni hanno la capacità di sopravvivere all'interno dei macrofagi e persistono all'interno dei granulomi. Contrassegnato alterazioni del profilo di espressione del gene host come risultato delle interazioni ospite-patogeno complesse che determinano l'esito di un processo di infezione micobatterica. Qui abbiamo usato il modello zebrafish per studiare la specificità della risposta dell'ospite alle infezioni con due ceppi di mycobacterium che danno risultati distinti malattia: una malattia acuta con mortalità precoce o una malattia cronica con formazione di granuloma, causate da ceppi di Mycobacterium marinum Mma20 ed E11, rispettivamente. Abbiamo effettuato uno studio microarray di diversi stadi di progressione della malattia in zebrafish adulto e ha trovato che l'acuta e croniche ceppi evocato parzialmente sovrapposti firme transcriptome host, nonostante che inducono fenotipi malattia profondamente diverse. Entrambi i ceppi colpite molte cascate di segnalazione, tra cui percorsi WNT e TLR. È interessante notare le differenze più forti sono state osservate nella fase iniziale della malattia. La risposta immediata al ceppo acuta è caratterizzata da maggiore espressione dei geni codifica MHC classe I proteine, matrix metalloproteinases, fattori di trascrizione, citochine e altre proteine comuni la risposta immunitaria. Al contrario, piccola GTPasi e istone gene gruppi hanno mostrato maggiore espressione in risposta al ceppo cronico. Abbiamo anche trovato che quasi il 1000 mycobacterium-reattiva geni sovrappongono tra le firme di espressione degli adulti infetti zebrafish ed embrioni nelle diverse fasi della formazione di granuloma. Poiché zebrafish adulto possiedono un sistema immunitario adattativo simile a mammiferi ed embrioni di zebrafish si basano esclusivamente sull'immunità innata, questa sovrapposizione indica un importante contributo della componente innata del sistema immunitario in risposta alle infezioni micobatteriche. Presi insieme, il nostro confronto delle risposte transcriptome coinvolte in acuto versus infezioni croniche e in embrionali versus adulti situazione fornisce importanti nuovi cavi per indagare il meccanismo di patogenesi micobatteriche.

Zebrafish Sviluppo E Rigenerazione: Nuovi Strumenti Per La Ricerca Biomedica

The International Journal of Developmental Biology. 2009  |  Pubmed ID: 19557689

Ricerca di base nella formazione del modello riguarda la generazione di fenotipi e tessuti. Può quindi portare a nuovi strumenti per la ricerca medica. Questi includono le analisi fenotipica screening, applicazioni in tissue engineering, nonché generale i progressi nelle conoscenze biomediche. Il nostro obiettivo è quello di discutere questo campo emergente, con particolare riferimento a strumenti basati sulla biologia dello sviluppo dello zebrafish. Descriviamo screening fenotipica dosaggi in fase di sviluppo nel nostro e in altri laboratori. Nostri saggi riguardano: (i) amministrazione locale o sistemica di un composto in esame o farmaco di zebrafish in vivo; (ii) la successiva rilevazione o "lettura" di un cambiamento fenotipico definito. Una lettura positiva può provocare dal legame del composto in esame ad un target molecolare coinvolto in un percorso di sviluppo. Vi presentiamo i dati preliminari sui dosaggi per composti che modulano la creazione dello scheletro, turnover osseo, risposte immunitarie, infiammazione e stress primi anni di vita. I dosaggi utilizzano live zebrafish embrioni e larve, nonché pesce adulto in fase di rigenerazione della pinna caudale. Descriviamo il proof-of-concept studi sul targeting dei composti localizzati in blastemas di rigenerazione utilizzando microcarriers. Zebrafish sono meno costosi da mantenere di roditori, produrre un gran numero di uova trasparenti, e alcuni saggi di zebrafish potevano essere scalato fino in schermi di media ed alta velocità di trasmissione. Tuttavia, gli avanzamenti in automazione e imaging sono richiesti. Zebrafish non può sostituire i modelli dei mammiferi nella pipeline di sviluppo della droga. Tuttavia, possono fornire un ponte conveniente tra cell-based assays e modelli intero organismo dei mammiferi.

Il Ruolo Dell'interferone Gamma Nell'immunità Innata Nell'embrione Di Zebrafish

Disease Models & Mechanisms. Nov-Dec, 2009  |  Pubmed ID: 19779068

Il genoma di zebrafish contiene dieci geni che codificano i peptidi di cytokine-come II classe, di cui i due che sono più strettamente legati alla gamma dei mammiferi interferone (IFN-gamma) sono stati denominati IFN-gamma1 e IFN-gamma2. Sebbene il Danio rerio è diventato un sistema modello popolare per studiare i meccanismi immuni, e sebbene gli interferoni sono regolatori centrali dell'immunità, zebrafish citochine funzionalmente corrispondenti ai mammiferi IFN-gamma non è stata stabilita. Abbiamo usato gli embrioni di zebrafish di dosaggio le funzioni di IFN-gamma1 e IFN-gamma2 e hanno identificato un sottoinsieme di zebrafish omologhi dei geni dei mammiferi IFN-reattivo come obiettivi di IFN-gamma nell'embrione di zebrafish: questi geni sono sovraregolati in risposta a livelli di IFN-gamma1 o IFN-gamma2. Gli studi di infezione utilizzando due diversi patogeni mostrano che IFN-gamma di segnalazione è necessaria per la resistenza contro le infezioni batteriche nell'embrione giovane e che i livelli di IFN-gamma devono essere strettamente regolato: aumento dei livelli di IFN-gamma sensibilizza gli embrioni di pesce contro le infezioni batteriche. Embrioni iniettati con alte dosi di Escherichia coli sono in grado di eliminare i batteri all'interno di un giorno, e i gamma-interferoni sono necessari per questa reazione di difesa. La risposta protettiva di Yersinia ruckeri, un patogeno di pesce naturale che è letale a dosi basse, richiede anche IFN-gamma. Come l'induzione di geni bersaglio, i due interferoni agiscono almeno parzialmente ridondante. Insieme al tipo precedentemente dimostrato risposta interferone III, questi risultati mostrano che le controparti delle funzioni di difesa di interferone-dipendente dei mammiferi batteriche e virali sono in atto negli embrioni di zebrafish e suggeriscono che zebrafish IFN-gamma1 e IFN-gamma2 sono funzionalmente equivalenti ai mammiferi IFN-gamma.

Scoperta Del Danio Zebrato (Danio Rerio) Catena Alfa Interleuchina-23 (IL-23α), Una Subunità Importante Per La Formazione Di IL-23, Una Citochina Coinvolta Nello Sviluppo Delle Cellule Th17 E Infiammazione

Molecular Immunology. Apr, 2011  |  Pubmed ID: 21324528

Questa carta segnala la clonazione e il sequenziamento di interleuchina (IL)-23 p19 subunità per la prima volta all'interno di una specie di mammiferi, il Danio zebrato (Danio rerio), che è stato scoperto utilizzando un approccio di sintenia. Inoltre, sequenze di aminoacidi sono stati per IL 23 p19 subunità erano anche predetto da spinarello, Fugu e Tetraodon genomi e incluso in questa inchiesta. Il cDNA p19 zebrafish IL 23 consisteva in un 66bp 5' UTR, una 249bp 3' UTR ed un singola open reading frame del 567bp dando un predetto 188 aa 23 IL p19 molecola. Allineamenti multipli di zebrafish p19 IL 23, con altri noti p19 IL 23 e IL-12 p35 amminoacido sequenze ha rivelati aree di conservazione di aminoacidi, come la presenza di quattro predetta α-eliche, importante per la formazione di legami disolfuro cisteine e la conservazione di un noto per interagire con il recettore di triptofano. Amminoacido omologie e analisi filogenetica ha confermato la relazione tra i pesci IL 23 p19 subunità con loro omologhi dei mammiferi. Tutti i pesci teleostei IL 23 p19 subunità sono stati trovati per avere 4 esoni e 3 introni simili a quello di umani e p19 mouse IL 23 e un grado limitato di sintenia è stata trovata tra gli organismi per le regioni contenenti geni p19 IL 23 con solo PAB-dipendente poly (A)-subunità specifiche ribonucleasi 2 (PAN2) e IL 23 p19 trovato nello stesso ordine sul cromosoma umano 12 e tutti i genomi di pesce si guardò. Infine mediante PCR in tempo reale, espressione costitutiva di p40 IL 12 e IL-23 p19 è stata osservata nel rene, fegato, intestino e muscolare con IL-12 p40 espressione superiore a 23 IL p19. Non appena un'ora dopo stimolazione con LPS, c'è stato un aumento di IL-23 p19 in zebrafish leucociti e un aumento di IL-1 β, IL-12 p40 e 23 IL p19 espressione fu trovato dopo l'infezione di zebrafish per 1 o 6 giorni con Mycobaterium marinum strain E11.

Schermo Embrione Dello Zebrafish Per Micobatteri Geni Coinvolti Nell'avvio Della Formazione Di Granuloma Rivela Una Componente ESX-1 Recentemente Identificata

Disease Models & Mechanisms. Jul, 2011  |  Pubmed ID: 21372049

Il segno distintivo della tubercolosi (TB) è la formazione di granulomi, che sono raggruppamenti di macrofagi infetti circondati da altri macrofagi, neutrofili e linfociti. Anche se è stato pensato a lungo che i granulomi sono benefiche per l'ospite, c'è evidenza che i micobatteri anche promuovano la formazione di queste strutture. In questo studio, abbiamo mirato a identificare nuovi fattori micobatteriche coinvolti nelle fasi iniziali della formazione di granuloma. Abbiamo sfruttato il modello zebrafish embrioni Mycobacterium marinum infezione per studiare l'iniziazione della formazione di granuloma e sviluppato uno schermo in vivo per selezionare per casuale mutanti marinum M. che erano in grado di indurre la formazione di granulomi in modo efficiente. Su 200 mutanti di screening, tre mutanti ripetutamente avviati ridotta formazione di granuloma. Uno dei mutanti è stato trovato difettoso del gene espL, che si trova nel cluster ESX-1. Il cluster ESX-1 è perturbato nel ceppo di Mycobacterium bovis BCG vaccino e codifica per un sistema di secrezione specializzato conosciuto per essere importante per la virulenza e formazione di granuloma. Sebbene espL non è stata coinvolta nella secrezione di proteine prima, abbiamo osservato un forte effetto sulla secrezione di ESX-1 substrati ESAT-6 ed EspE. Possiamo concludere che il nostro schermo zebrafish embrioni M. marinum è un utile strumento per identificare geni micobatterici coinvolti nelle fasi iniziali della formazione di granulomi e che abbiamo identificato un nuovo componente del sistema di secrezione ESX-1. Siamo fiduciosi che il nostro approccio contribuirà alla conoscenza della virulenza micobatterica e potrebbe essere utile per lo sviluppo di nuovi vaccini di TB.

Identificazione Di Un Glycosyltransferase Da Mycobacterium Marinum Coinvolto in Più Di Un Gruppo Di Caryophyllose in Lipooligosaccharides

Journal of Bacteriology. May, 2011  |  Pubmed ID: 21378187

Eliminazione di Mycobacterium marinum MMAR2333 ha provocato la perdita di tre dei quattro sottoclassi di lipooligosaccharides (perdita). Il mutante è stato in grado di estendere un intermedio (LOS-II) con aggiunta di caryophyllose. Questi dati e la struttura del predetto dominio suggeriscono che il MMAR2333 è un glycosyltransferase coinvolti nella generazione di un donatore di lipidi-legato caryophyllose.

ESX-5-carenti Mycobacterium Marinum è Supervirulenti Nello Zebrafish Adulto

Cellular Microbiology. Jan, 2012  |  Pubmed ID: 22256857

ESX-5 è un tipo di micobatterico VII proteina sistema di secrezione responsabile per il trasporto delle proteine numerose PE e PPE. Esso è coinvolto nell'induzione della morte della cellula ospite e modulazione della risposta delle citochine in vitro. In questo lavoro, abbiamo studiato gli effetti di ESX-5 in zebrafish embrionali ed adulti utilizzando Mycobacterium marinum. Abbiamo trovato che ESX-5-carenti M. marinum era leggermente attenuato in embrioni di zebrafish. Sorprendentemente, il mutante stesso ha mostrato molto maggiore virulenza in zebrafish adulto, caratterizzata da aumentati carichi batterici e insorgenza precoce della formazione di granuloma con rapido sviluppo dei centri necrotici. Questo esordio precoce della formazione di granuloma è stato accompagnato da un'aumentata espressione di citochine pro-infiammatorie e geni in zebrafish infettati con il mutante ESX-5 di rimodellamento del tessuto. Esperimenti utilizzando zebrafish RAG-1-carenti hanno mostrato che la maggiore virulenza del mutante ESX-5 non era dipendente sul sistema immunitario adattativo. Esperimenti di infezioni miste con selvaggio-tipo e batteri mutanti ESX-5 ha mostrato che quest'ultimo aveva un vantaggio specifico di zebrafish adulto e outcompeted batteri wild-type. Insieme nostri esperimenti indicano che la secrezione della proteina ESX-5-mediata è utilizzata da M. marinum per stabilire un'infezione persistente e moderata.