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Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

University of Texas Medical Branch

university of texas medical branch

FAT10 &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x578B;&#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x6837;&#x4FEE;&#x9970;&#x7B26;&#x8FDB;&#x884C;&#x7F16;&#x7801;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x76F8;&#x5BB9;&#x6027;&#x4E14;&#x534F;&#x540C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50; &alpha;-&#x548C; &gamma; &#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x7531;&#x6CDB;&#x7D20;&#x6837;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57DF;&#x7EC4;&#x6210;&#xFF0C;&#x62E5;&#x6709;&#x514D;&#x8D39;&#x7684; C &#x7EC8;&#x7AEF; diglycine &#x6BCD;&#x9898;&#x6240;&#x9700;&#x7684; FAT10 &#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x6E38;&#x79BB;&#x7684; FAT10 &#x548C; FAT10 &#x5171;&#x8F6D;&#x8FC5;&#x901F;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x3002;FAT10 N &#x603B;&#x7AD9;&#x5F88;&#x957F;&#x5BFF;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x4E0E;&#x6CDB;&#x7D20;&#x878D;&#x5408;&#x4E00;&#x6837;&#x7684;&#x5148;&#x5929;&#x589E;&#x5F3A;&#x5176;&#x964D;&#x89E3;&#x7387;&#x3002;FAT10 &#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0D;&#x4E86;&#x4F46;&#x5B8C;&#x5168;&#x5206;&#x89E3;&#x964D;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E; FAT10 &#x7684; deconjugating &#x9176;&#x4E0D;&#x5728;&#x573A;&#x4E2D;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62;&#x6CDB;&#x7D20;&#x5316;&#x7684; FAT10 &#x7531;&#x6240;&#x6709; lysines &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x6216;&#x6CDB;&#x7D20;&#x5316;&#x7F3A;&#x9677;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD; FAT10 &#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4E0E; FAT10 &#x7684;&#x5171;&#x8F6D;&#x662F;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x6CDB;&#x7D20;-&#x72EC;&#x7ACB;&#x9488;&#x5BF9;&#x7531;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E0E; polyubiquitylation&#xFF0C;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x578B;&#x548C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x8F6C;&#x3002;

FAT10&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

FAT10 is a small ubiquitin-like modifier that is encoded in the major histocompatibility complex and is synergistically inducible by tumor necrosis factor alpha and gamma interferon. It is composed of two ubiquitin-like domains and possesses a free C-terminal diglycine motif that is required for the formation of FAT10 conjugates. Here we show that unconjugated FAT10 and a FAT10 conjugate were rapidly degraded by the proteasome at a similar rate. Fusion of FAT10 to the N terminus of very long-lived proteins enhanced their degradation rate as potently as fusion with ubiquitin did. FAT10-green fluorescent protein fusion proteins were not cleaved but entirely degraded, suggesting that FAT10-specific deconjugating enzymes were not present in the analyzed cell lines. Interestingly, the prevention of ubiquitylation of FAT10 by mutation of all lysines or by expression in ubiquitylation-deficient cells did not affect FAT10 degradation. Thus, conjugation with FAT10 is an alternative and ubiquitin-independent targeting mechanism for degradation by the proteasome, which, in contrast to polyubiquitylation, is cytokine inducible and irreversible.

FAT10, a ubiquitin-independent signal for proteasomal degradation.

FAT10 est un modificateur d&#39;ubiquitin-comme petit qui est cod&eacute; dans le complexe majeur d&#39;histocompatibilit&eacute; et est synergiquement inductible par le facteur de n&eacute;crose tumorale alpha et gamma interf&eacute;ron. Il est compos&eacute; de deux domaines d&#39;ubiquitin-comme et poss&egrave;de un motif de la diglycine C-terminal libre qui est requis pour la formation de conjugu&eacute;s FAT10. Nous montrons ici que non conjugu&eacute;s FAT10 et un conjugu&eacute; de FAT10 sont rapidement d&eacute;grad&eacute;s par le prot&eacute;asome au m&ecirc;me rythme. Fusion de FAT10 &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N terminale de prot&eacute;ines de tr&egrave;s longue dur&eacute;e de vie am&eacute;lior&eacute; leur taux de d&eacute;gradation aussi puissamment comme fait de la fusion avec l&#39;ubiquitine. Fusion de FAT10-green fluorescent protein prot&eacute;ines n&#39;&eacute;taient pas totalement cliv&eacute;s d&eacute;grad&eacute;e, ce qui sugg&egrave;re que les enzymes d&eacute;conjugantes FAT10 sp&eacute;cifiques n&#39;&eacute;taient pas pr&eacute;sents dans les lign&eacute;es de cellules analys&eacute;es. Fait int&eacute;ressant, la pr&eacute;vention de l&#39;ubiquitination de FAT10 par mutation de tous les lysines ou expression dans les cellules d&eacute;ficientes en ubiquitination n&#39;affecte pas la d&eacute;gradation FAT10. Ainsi, conjugaison avec FAT10 est une alternative et ciblant le m&eacute;canisme de d&eacute;gradation par le prot&eacute;asome ubiquitine ind&eacute;pendant, qui, contrairement &agrave; polyubiquitylation, est cytokine inductible et irr&eacute;versible.

FAT10, un signal d&#39;ubiquitine-ind&eacute;pendant pour la d&eacute;gradation de l&#39;activit&eacute;.

FAT10, eine Ubiquitin-unabh&#xE4;ngige Signal f&#xFC;r den proteasomalen Abbau.

FAT10 &egrave; un piccolo modificatore di ubiquitin-like che &egrave; codificato nel complesso di istocompatibilit&agrave; ed &egrave; sinergicamente inducibile da fattore di necrosi tumorale alfa e gamma interferone. Esso &egrave; composto da due domini di ubiquitin-like e possiede un motivo di diglycine C-terminale libero che &egrave; necessario per la formazione dei FAT10 coniugati. Qui vi mostriamo che FAT10 non coniugata e un coniugato FAT10 erano rapidamente degradate dal proteasoma ad un tasso simile. Fusione di FAT10 per il N-terminale di proteine molto longevi rafforzata potentemente come fusione con il ubiquitin ha fatto loro tasso di degradazione. Fusione FAT10-green fluorescent protein proteine non sono stata spaccate ma interamente degradati, suggerendo che gli enzimi deconjugating FAT10 specifici non erano presenti nelle linee di cellule analizzate. Curiosamente, la prevenzione di ubiquitylation di FAT10 da mutazione di tutte le Lisine o espressione in cellule di ubiquitylation-carenti non ha influito FAT10 degradazione. Cos&igrave;, coniugazione con FAT10 &egrave; un&#39;alternativa e targeting meccanismo per degradazione dal proteasoma ubiquitina-indipendente, che, in contrasto con polyubiquitylation, cytokine inducibili e irreversibile.

FAT10, un segnale di ubiquitin-indipendente per degradazione proteosomale.

FAT10 &#x4E3B;&#x8981;&#x7D44;&#x7E54;&#x9069;&#x5408;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x3067;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x58CA;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50; &alpha; &#x3084; &gamma; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x76F8;&#x4E57;&#x7684;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3067;&#x3059;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x306E;&#x4FEE;&#x98FE;&#x5B50;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C; FAT10 &#x62B1;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x7121;&#x6599; C &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB; diglycine &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x6240;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x975E; FAT10 &#x3068; FAT10 &#x5171;&#x5F79;&#x304C;&#x4F3C;&#x3066;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;FAT10 &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9577;&#x547D;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x878D;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x5F37;&#x529B;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x7387;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304C;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x88C2;&#x304B;&#x308C;&#x305F;&#x306A;&#x3044; FAT10 &#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x878D;&#x5408;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B; FAT10 &#x56FA;&#x6709; deconjugating &#x9175;&#x7D20;&#x304C;&#x5206;&#x6790;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BB;&#x30EB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x63D0;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x6B20;&#x640D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x308B; FAT10 &#x306E;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x4E88;&#x9632; FAT10 &#x52A3;&#x5316;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;.&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x62B1;&#x5408;&#x306E; FAT10 &#x306F;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3042;&#x308A;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x72EC;&#x7ACB;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x3067;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306A;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

FAT10&#x3001;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4FE1;&#x53F7;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x3002;

Fat10&#xB294; &#xC8FC;&#xC694; &#xC870;&#xC9C1; &#xC801;&#xD569;&#xC131; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; &#xBA70; synergistically &#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC694;&#xC778; &#xC54C;&#xD30C; &#xBC0F; &#xAC10;&#xB9C8; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; &#xD55C;&#xC815;&#xC790;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; FAT10 conjugates&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBB34;&#xB8CC; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; diglycine &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xACB0;&#xD569;&#xD615;&#xB41C; fat10&#xC640; FAT10 &#xACF5;&#xC561; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4;&#xB85C; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD558; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Fat10&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC218;&#xBA85;&#xC774; &#xAE34; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC735;&#xD569; potently &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;&#xACFC; &#xD4E8;&#xC804; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC800;&#xD558; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD5A5;&#xC0C1;. FAT10 &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xBD99;&#xC5B4; &#xD558;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4; &#xC800;&#xD558;, &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; FAT10 &#xAD00;&#xB828; deconjugating &#xD6A8;&#xC18C; &#xBD84;&#xC11D;&#xB41C; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xBAA8;&#xB4E0; lysines&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xB610;&#xB294; ubiquitylation &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; FAT10 ubiquitylation &#xC608;&#xBC29; FAT10 &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, fat10&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD65C;&#xC6A9; &#xB300;&#xC548; &#xC774;&#xBA70; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;-&#xB3C5;&#xB9BD; &#xB41C; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C;,&#xC774;, polyubiquitylation, &#xB2EC;&#xB9AC;&#xB294; cytokine &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD558; &#xACE0; &#xB3CC;&#xC774;&#xD0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294;.

FAT10, proteasomal &#xC131;&#xB2A5; &#xC800;&#xD558; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xD638;.

FAT10 es un modificador de ubiquitina-como peque&ntilde;o que est&aacute; codificado en el complejo principal de histocompatibilidad y es sin&eacute;rgico inducible por el factor de necrosis tumoral alfa y gamma interfer&oacute;n. Se compone de dos dominios de ubiquitina-como y posee un motivo de diglycine C-terminal libre que se requiere para la formaci&oacute;n de conjugados de FAT10. Aqu&iacute; mostramos que no conjugada FAT10 y un FAT10 conjugado se degradaci&oacute;n r&aacute;pidamente por el proteasoma en una tasa similar. Fusi&oacute;n de FAT10 a la terminal N de prote&iacute;nas muy duraderas mejora su tasa de degradaci&oacute;n tan potentemente como fusi&oacute;n con ubiquitina. Fusi&oacute;n de la prote&iacute;na fluorescente verde FAT10 prote&iacute;nas no fueron troceadas pero totalmente degradado, sugiriendo que las enzimas deconjugating FAT10 espec&iacute;ficos no estaban presentes en las l&iacute;neas celulares analizadas. Curiosamente, la prevenci&oacute;n de ubiquitylation de FAT10 por mutaci&oacute;n de lisinas todos o por la expresi&oacute;n en c&eacute;lulas ubiquitylation-deficientes no afect&oacute; la degradaci&oacute;n FAT10. As&iacute;, conjugaci&oacute;n con FAT10 es una alternativa y ubiquitina-independiente dirigida a mecanismo de degradaci&oacute;n por el proteasoma, que, en contraste con poliubiquitinaci&oacute;n, citoquina inducible e irreversible.

FAT10, una se&ntilde;al de ubiquitina-independiente para degradaci&oacute;n proteasomal.

&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x4E3A;&#x9009;&#x62E9;&#x6807;&#x6709;&#x591A;&#x4E2A;&#x6CDB;&#x7D20;&#x5206;&#x5B50;&#x548C;&#x968F;&#x540E;&#x88AB;&#x5206;&#x89E3;&#x7684; 26 S &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x3002;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x542B;&#x6709;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6CDB;&#x7D20;&#x76F8;&#x5173; (&#x4E4C;&#x5DF4;) &#x57DF;&#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6CDB;&#x7D20;&#x6837; (&#x62C9;&#x4E39;) &#x57DF;&#x8868;&#x660E;&#x53EF;&#x5145;&#x5F53; 26 S &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x6CDB;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x548C;&#x9000;&#x5316;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x5F15;&#x5165;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7ED1;&#x5B9A; ubiquitylated &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x4E4C;&#x5DF4;&#x57DF;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x62C9;&#x4E39;&#x57DF; 26 S &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x548C;&#x4FBF;&#x5229;&#x57FA;&#x677F;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x63A5;&#x89E6;&#x3002;NEDD8 &#x6700;&#x7EC8;&#x5DF4;&#x65AF; 1 &#x957F; (NUB1L) &#x5C5E;&#x4E8E;&#x6B64;&#x7C7B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5305;&#x542B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x62C9;&#x4E39;&#x548C;&#x4E4C;&#x5DF4;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x57DF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x62A5;&#x9053; NUB1L FAT10 &#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x6837;&#x4FEE;&#x9970;&#x7B26;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x52A0;&#x901F;&#x5176;&#x9000;&#x5316;&#x548C;&#x53CA;&#x5176;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7F3A;&#x5931;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; NUB1L &#x7684;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x62C9;&#x4E39;&#x57DF;&#x4ECD;&#x7136;&#x80FD;&#x591F;&#x7ED1;&#x5B9A; FAT10 &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x548C;&#x4E0D;&#x518D;&#x52A0;&#x901F; FAT10 &#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x7248;&#x672C; NUB1L &#x7684;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x4E4C;&#x5DF4;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x53E6;&#x4E00;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x4E27;&#x5931;&#x80FD;&#x529B;&#x8981;&#x7ED1;&#x5B9A; FAT10&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ECD;&#x7136;&#x80FD;&#x591F;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x52A0;&#x901F;&#x9000;&#x5316;&#x7684; FAT10&#x3002;&#x53EA;&#x6709; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x62C9;&#x4E39;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x4E00;&#x4E2A; FAT10 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x4E5F;&#x4ECD;&#x52A0;&#x901F; NUB1L&#xFF0C;&#x5373;&#x4F7F;&#x4E0D;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; FAT10 &#x548C;&#x5176;&#x72EC;&#x81EA;&#x7684;&#x62C9;&#x4E39;&#x57DF;&#x4E4B;&#x4E00;&#x53EF;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5;&#x4E0E; 26 S &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; NUB1L &#x4E0D;&#x53EA;&#x884C;&#x4E3A;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x4E4B;&#x95F4; 26 S &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x548C;&#x6CDB;&#x7D20;&#x6837;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x6301;&#x4EBA;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x964D;&#x89E3;&#x3002;

NUB1L &#x7684;&#x4E4C;&#x5DF4;&#x57DF;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E3A;&#x52A0;&#x901F;&#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x6837;&#x4FEE;&#x9970;&#x7B26; FAT10&#x3002;

Proteins selected for degradation are labeled with multiple molecules of ubiquitin and are subsequently cleaved by the 26 S proteasome. A family of proteins containing at least one ubiquitin-associated (UBA) domain and one ubiquitin-like (UBL) domain have been shown to act as soluble ubiquitin receptors of the 26 S proteasome and introduce a new level of specificity into the degradation system. They bind ubiquitylated proteins via their UBA domains and the 26 S proteasome via their UBL domain and facilitate the contact between substrate and protease. NEDD8 ultimate buster-1 long (NUB1L) belongs to this class of proteins and contains one UBL and three UBA domains. We recently reported that NUB1L interacts with the ubiquitin-like modifier FAT10 and accelerates its degradation and that of its conjugates. Here we show that a deletion mutant of NUB1L lacking the UBL domain is still able to bind FAT10 but not the proteasome and no longer accelerates FAT10 degradation. A version of NUB1L lacking all three UBA domains, on the other hand, looses the ability to bind FAT10 but is still able to interact with the proteasome and accelerates the degradation of FAT10. The degradation of a FAT10 mutant containing only the C-terminal UBL domain is also still accelerated by NUB1L, even though the two proteins do not interact. In addition, we show that FAT10 and either one of its UBL domains alone can interact directly with the 26 S proteasome. We propose that NUB1L not only acts as a linker between the 26 S proteasome and ubiquitin-like proteins, but also as a facilitator of proteasomal degradation.

The UBA domains of NUB1L are required for binding but not for accelerated degradation of the ubiquitin-like modifier FAT10.

S&eacute;lectionn&eacute; pour la d&eacute;gradation de prot&eacute;ines sont marqu&eacute;es avec plusieurs mol&eacute;cules d&#39;ubiquitine et sont ensuite cliv&eacute;s par le prot&eacute;asome 26 S. Une famille de prot&eacute;ines contenant au moins une ubiquitine-associ&eacute;s (UBA) et un ubiquitin-comme (LBM) domaine montrent agissent comme des r&eacute;cepteurs solubles ubiquitine du prot&eacute;asome 26 S et introduire un nouveau niveau de sp&eacute;cificit&eacute; dans le syst&egrave;me de d&eacute;gradation. Ils lient les prot&eacute;ines ubiquitylated par l&#39;interm&eacute;diaire de leurs domaines UBA et le prot&eacute;asome 26 S par l&#39;interm&eacute;diaire de leur domaine d&#39;Oussama ben Laden et facilitent le contact entre le substrat et la prot&eacute;ase. NEDD8 ultime buster-1 long (NUB1L) appartient &agrave; cette classe de prot&eacute;ines et contient un UBL et trois domaines de l&#39;UBA. Nous avons r&eacute;cemment rapport&eacute; que NUB1L interagit avec le modificateur d&#39;ubiquitin-comme FAT10 et acc&eacute;l&egrave;re sa d&eacute;gradation et celle de ses conjugu&eacute;s. Ici, nous montrons qu&#39;un mutant de d&eacute;l&eacute;tion de NUB1L manque le domaine d&#39;Oussama ben Laden est toujours capable de se lier FAT10 mais pas le prot&eacute;asome et acc&eacute;l&egrave;re la d&eacute;gradation de le FAT10 n&#39;est plus. Une version de NUB1L manquent tous les trois domaines UBA, en revanche, perd la capacit&eacute; de lier FAT10 mais est toujours capable d&#39;interagir avec le prot&eacute;asome et acc&eacute;l&egrave;re la d&eacute;gradation des FAT10. La d&eacute;gradation d&#39;un mutant FAT10 contenant seulement le domaine C-terminal Oussama ben Laden est toujours aussi acc&eacute;l&eacute;r&eacute;e par NUB1L, m&ecirc;me si les deux prot&eacute;ines n&#39;interagissent pas. En outre, nous montrons que les FAT10 et l&#39;un de ses domaines d&#39;Oussama ben Laden seuls peuvent interagir directement avec le prot&eacute;asome 26 S. Nous proposons que NUB1L agit non seulement comme un &eacute;diteur de liens entre les 26 S proteasome et ubiquitin-comme les prot&eacute;ines, mais aussi comme un facilitateur de la d&eacute;gradation de l&#39;activit&eacute;.

Les domaines de l&#39;UBA de NUB1L sont n&eacute;cessaires pour la liaison, mais pas pour acc&eacute;l&eacute;r&eacute; la d&eacute;gradation du modificateur ubiquitin-comme FAT10.

Proteine, die f&uuml;r Abbau ausgew&auml;hlt sind mit mehreren Ubiquitin-Molek&uuml;le gekennzeichnet und werden anschlie&szlig;end von den 26 S Proteasom zerspaltet. Eine Familie von Proteinen, enth&auml;lt mindestens ein Ubiquitin-assoziierte (UBA)-Dom&auml;ne und eine Ubiquitin-&auml;hnliche (UBL) sind gezeigt worden, als l&ouml;sliche Ubiquitin-Rezeptoren von den 26 S Proteasom fungieren und ein neues Niveau der Spezifit&auml;t in den Abbau-System einf&uuml;hren. Sie binden Ubiquitylated Proteine &uuml;ber ihre UBA-Domains und die 26 S Proteasom &uuml;ber ihre Domain UBL und erleichtert den Kontakt zwischen Substrat und Protease. NEDD8 ultimative Buster-1 lang (NUB1L) geh&ouml;rt zu dieser Klasse von Proteinen und enth&auml;lt einen UBL und drei UBA-Dom&auml;nen. Vor kurzem berichteten wir, dass NUB1L mit der Ubiquitin-&auml;hnliche-Modifizierer FAT10 interagiert und den Abbau und der seine Konjugate beschleunigt. Hier zeigen wir, dass eine L&ouml;schung-Mutante des NUB1L fehlt die UBL-Domain noch in der Lage ist, FAT10 aber nicht das Proteasom zu binden und nicht mehr FAT10 Abbau beschleunigt. Eine Version des NUB1L fehlen alle drei UBA-Dom&auml;nen, auf der anderen Seite verliert die F&auml;higkeit, FAT10 binden aber kann weiterhin auf die Interaktion mit dem Proteasom und beschleunigt den Abbau von FAT10. Der Abbau der FAT10 Mutanten mit nur der C-terminalen UBL-Dom&auml;ne ist auch noch durch NUB1L, beschleunigt, obwohl die beiden Proteine nicht interagieren. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass FAT10 und einem seiner UBL Domains allein direkt mit den 26 S Proteasom interagieren k&ouml;nnen. Wir schlagen NUB1L fungiert nicht nur als ein Linker zwischen 26 S Proteasom und Ubiquitin-&auml;hnliche Proteine, sondern auch als Vermittler von Proteasomal Abbau.

Die UBA-Dom&auml;nen der NUB1L sind erforderlich f&uuml;r die Bindung doch nicht f&uuml;r beschleunigte Verschlechterung des Modifizierers Ubiquitin-wie FAT10.

Selezionato per la degradazione di proteine sono etichettate con pi&ugrave; molecole di ubiquitina e successivamente vengono scissi dalla proteasoma 26 S. Una famiglia di proteine contenenti almeno un dominio (UBA) associate all&#39;ubiquitina e un dominio di ubiquitin-like (LBM) hanno dimostrato di agire come recettori solubili di ubiquitin del proteasoma 26 S e introdurre un nuovo livello di specificit&agrave; nel sistema degradazione. Lo legano proteine ubiquitylated via loro domini UBA e 26 S proteasoma tramite loro dominio UBL e facilitare il contatto tra il substrato e la proteasi. NEDD8 ultimate buster-1 long (NUB1L) appartiene a questa classe di proteine e contiene una UBL e tre domini UBA. Abbiamo recentemente segnalato che NUB1L interagisce con il ubiquitin-like modifier FAT10 e accelera la sua degradazione e quella dei suoi coniugati. Qui vi mostriamo che un mutante di delezione di NUB1L manca il dominio UBL &egrave; ancora in grado di associare FAT10 ma non il proteasoma e non accelera la degradazione di FAT10. Una versione di NUB1L mancano tutti i tre domini UBA, d&#39;altra parte, perde la capacit&agrave; di legarsi al FAT10, ma &egrave; ancora in grado di interagire con il proteasoma e accelera la degradazione di FAT10. Il degrado di un mutante di FAT10 contenente solo il dominio C-terminale UBL &egrave; accelerato anche ancora da NUB1L, anche se le due proteine non interagiscono. Inoltre, mostriamo che FAT10 e uno dei suoi domini UBL da solo pu&ograve; interagire direttamente con il proteasoma 26 S. Proponiamo che NUB1L non solo agisce come un linker tra le 26 S proteasoma e ubiquitina-come le proteine, ma anche come un facilitatore di degradazione proteosomale.

I domini UBA di NUB1L sono necessari per l&#39;associazione ma non per accelerata degradazione del modificatore di ubiquitin-like FAT10.

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306F;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x3068;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3001;26 S &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x5F8C;&#x3002;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023; (&#x59E5;) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8; &#xFF08;UBL&#xFF09; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x542B;&#x6709;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306F; 26 S &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x52D5;&#x3057;&#x3001;&#x52A3;&#x5316;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;.&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x59E5;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x56DE;&#x5FA9; ubiquitylated &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068; 26 S &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E; UBL &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x3066;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x57FA;&#x677F;&#x9593;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NEDD8 &#x7A76;&#x6975;&#x306E;&#x30D0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; 1 &#x30ED;&#x30F3;&#x30B0; (NUB1L) &#x3053;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306B;&#x5C5E;&#x3059;&#x308B;&#x3057;&#x3001;1 &#x3064;&#x306E; UBL &#x3068; 3 &#x3064;&#x306E;&#x59E5;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6700;&#x8FD1; NUB1L&#x3001;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x4FEE;&#x98FE; FAT10 &#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x62B1;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x52A0;&#x901F;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x79C1;&#x9054;&#x306F; UBL &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x6B20;&#x5931;&#x5909;&#x7570; NUB1L &#x306E;&#x307E;&#x3060; FAT10 &#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3001;&#x3082;&#x306F;&#x3084; FAT10 &#x52A3;&#x5316;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;3 &#x3064;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x59E5;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B; NUB1L &#x306E;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x4E00;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;FAT10 &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5931;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3001;FAT10 &#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x52A0;&#x901F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2 &#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A; UBL C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x307F;&#x3092;&#x542B;&#x3080; FAT10 &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x3082;&#x307E;&#x3060; NUB1L &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x52A0;&#x901F;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;FAT10 &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x3060;&#x3051;&#x3067; UBL &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B; 26 S &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NUB1L &#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F; 26 S &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x9593;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x52A3;&#x5316;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B7;&#x30EA;&#x30C6;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x59E5;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; NUB1L &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x305F;&#x3081;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x4FEE;&#x98FE; FAT10 &#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x52A0;&#x901F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD0DD; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBD84;&#xC790; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xD6C4; 26 S &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD99;&#xC5B4;. &#xD558;&#xB098; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAD00;&#xB828; (UBA) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; (UBL) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC00;&#xC871; 26 S &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB85C; &#xD589;&#xB3D9; &#xD558; &#xACE0; &#xC800;&#xD558; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; UBA &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; ubiquitylated &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; UBL &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; 26 S &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xBC0F; &#xAE30;&#xD310; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC811;&#xCD09;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C;. NEDD8 &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xBC84;&#xC2A4;&#xD130;-1 &#xB871; (NUB1L) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758;&#xC774; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD558;&#xACE0; &#xD558;&#xB098; UBL UBA &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; 3 &#xAC1C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC; NUB1L &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; &#xD55C;&#xC815;&#xC790; fat10&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xC640; &#xC790;&#xC0AC;&#xC758; conjugates&#xC758; &#xAC00;&#xC18D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; nub1l&#xC758; &#xBD80;&#xC871; UBL &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; FAT10 &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218; &#xC774;&#xBA70; &#xB354; &#xC774;&#xC0C1; FAT10 &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xAC00;&#xC18D;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. UBA &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; 3 &#xAC1C; &#xBAA8;&#xB450; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; nub1l&#xC758; &#xBC84;&#xC804; &#xB2E4;&#xB978; &#xD55C;&#xD3B8;&#xC73C;&#xB85C;, FAT10 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218; looses &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xBC0F; fat10&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xAC00;&#xC18D;. C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; UBL &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xB9CC;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; FAT10 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC800;&#xD558; &#xB610;&#xD55C; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; NUB1L&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC00;&#xC18D; &#xBE44;&#xB85D; &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; FAT10 &#xD558; &#xACE0; &#xD63C;&#xC790; &#xADF8; UBL &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC911; &#xD558;&#xB098; 26 S &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xC640; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; NUB1L proteasomal &#xC800;&#xD558;&#xC758; &#xAE30;&#xD68D;&#xC790;&#xB85C; &#xC11C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; 26 S &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xACFC; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xB9C1;&#xCEE4;&#xB85C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Nub1l&#xC758; UBA &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xAC00;&#xC18D; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; &#xD55C;&#xC815;&#xC790; fat10&#xC758; &#xC800;&#xD558; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Seleccionado para la degradaci&oacute;n de prote&iacute;nas est&aacute;n marcadas con m&uacute;ltiples mol&eacute;culas de ubiquitina y posteriormente son divididas por el proteasoma S 26. Una familia de prote&iacute;nas que contienen al menos un dominio (UBA) de ubiquitina-asociados y un dominio de ubiquitina-like (UBL) han demostrado act&uacute;an como receptores solubles de la ubiquitina del proteasoma S 26 e introducir un nuevo nivel de especificidad en el sistema de degradaci&oacute;n. Ellos unen prote&iacute;nas ubiquitylated trav&eacute;s de sus dominios de la UBA y el proteasoma S 26 mediante su dominio UBL y facilitan el contacto entre el sustrato y proteasa. NEDD8 &uacute;ltimo buster-1 largo (NUB1L) pertenece a esta clase de prote&iacute;nas y contiene una UBL y tres dominios de la UBA. Recientemente informamos que NUB1L interact&uacute;a con el modificador de ubiquitina-como FAT10 y acelera su degradaci&oacute;n y de sus conjugados. Aqu&iacute; demostramos que un mutante de eliminaci&oacute;n de NUB1L falta el dominio UBL es todav&iacute;a capaz de enlazar FAT10 pero no el proteasoma y ya no acelera la degradaci&oacute;n de la FAT10. Una versi&oacute;n de NUB1L que carecen de los tres dominios de la UBA, por el contrario, pierde la capacidad de enlazar FAT10 pero es todav&iacute;a capaz de interactuar con el proteasoma y acelera la degradaci&oacute;n de FAT10. La degradaci&oacute;n de un mutante de FAT10 que contiene s&oacute;lo el dominio c-terminal UBL tambi&eacute;n todav&iacute;a se acelera por NUB1L, a pesar de que las dos prote&iacute;nas no interactuar. Adem&aacute;s, demostramos que FAT10 y uno de sus dominios UBL solos pueden interactuar directamente con el proteasoma S 26. Proponemos que la NUB1L no s&oacute;lo act&uacute;a como un enlazador entre los 26 S proteasoma y ubiquitina-como prote&iacute;nas, sino tambi&eacute;n como un facilitador de degradaci&oacute;n proteasomal.

Los dominios de la UBA de NUB1L se requieren para el enlace pero no para la aceleraron degradaci&oacute;n de los modificadores de ubiquitina-como FAT10.

&#x671F;&#x95F4; misfolded &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x53BB;&#x4E59;&#x9170; 6 (HDAC6) &#x51FD;&#x6570;&#x7528;&#x4F5C;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x808C;&#x7535;&#x673A;&#x548C;&#x904D;&#x4E4B;&#x95F4;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x89E3;&#x7684; polyubiquitylated &#x5230; aggresome &#x7684;&#x8D27;&#x7269;&#x8FD0;&#x8F93;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x51FA;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F19;&#x4F34;&#x7684; HDAC6&#xFF0C;FAT10 &#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x6837;&#x4FEE;&#x9970;&#x7B26; &#xFF08;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A;&#x6B20;&#x5E73;&#x8861;&#x94BB;&#x4E95;)&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x548C;-&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x6CDB;&#x7D20;-&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EA;&#x4E92;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3002;HDAC6 &#x5230; FAT10 &#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x57DF;&#xFF1A; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x6CDB;&#x7D20;&#x7ED3;&#x5408;&#x950C;&#x6307; &#xFF08;&#x8702;&#x9E23;&#x5668;&#x57DF;&#xFF09; &#x7684; HDAC6 &#x548C;&#x5176;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5373;&#x4F7F;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; HDAC6 &#x4E0D;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x548C; ectopically &#x8868;&#x793A; FAT10 &#x4EE5;&#x53CA;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x5171;&#x8F6D; FAT10 GFP &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E3A; aggresome &#x5FAE;&#x7BA1;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728;&#x89C4;&#x6A21;&#x548C; HDAC6 &#x7F3A;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; FAT10 &#x5305;&#x542B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6CDB;&#x7D20;&#x542B; aggresomes&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF0C;&#x5982;&#x679C; FAT10 &#x4E0D;&#x53D7;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x964D;&#x89E3;&#x53CA;&#x5176;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x53E6;&#x4E00;&#x6761;&#x9014;&#x5F84;&#x91C7;&#x53D6;&#x786E;&#x4FDD;&#x5176;&#x87AF;&#x5408;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x8FD8;&#x9700;&#x8981;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x968F;&#x540E;&#x53BB;&#x9664;&#x7531;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x8FD0;&#x5F80;&#x901A;&#x8FC7;&#x8BE5;&#x534F;&#x4F1A;&#x4E0E; HDAC6 aggresome&#x3002;

&#x6CDB;&#x7D20;&#x6837;&#x4FEE;&#x9970;&#x7B26; FAT10 HDAC6 &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5411;&#x4E0B;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x6291;&#x5236; aggresomes &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;

During misfolded-protein stress, the cytoplasmic protein histone deacetylase 6 (HDAC6) functions as a linker between the dynein motor and polyubiquitin to mediate the transport of polyubiquitylated cargo to the aggresome. Here, we identify a new binding partner of HDAC6, the ubiquitin-like modifier FAT10 (also known as UBD), which is cytokine-inducible and - similar to ubiquitin - serves as a signal for proteasomal degradation. In vivo, the two proteins only interacted under conditions of proteasome impairment. The binding of HDAC6 to FAT10 was mediated by two separate domains: the C-terminal ubiquitin-binding zinc-finger (BUZ domain) of HDAC6 and its first catalytic domain, even though catalytic activity of HDAC6 was not required for this interaction. Both endogenous and ectopically expressed FAT10 as well as the model conjugate FAT10-GFP localized to the aggresome in a microtubule-dependent manner. Furthermore, FAT10-containing as well as ubiquitin-containing aggresomes were reduced in both size and number in HDAC6-deficient fibroblasts. We conclude that, if FAT10 fails to subject its target proteins to proteasomal degradation, an alternative route is taken to ensure their sequestration and possibly also their subsequent removal by transporting them to the aggresome via the association with HDAC6.

The ubiquitin-like modifier FAT10 interacts with HDAC6 and localizes to aggresomes under proteasome inhibition.

Au cours du stress pli&eacute;e-prot&eacute;ine, la prot&eacute;ine cytoplasmique histone d&eacute;sac&eacute;tylase 6 (HDAC6) fonctionne comme un &eacute;diteur de liens entre le moteur de la dyn&eacute;ine et la polyubiquitine d&#39;arbitrer le transport de fret de polyubiquitylated &agrave; l&#39;aggresome. Ici, nous identifions un nouveau partenaire de liaison de HDAC6, le modificateur d&#39;ubiquitin-comme FAT10 (&eacute;galement connu sous le nom UBD), qui est inductible par cytokine et - similaire &agrave; l&#39;ubiquitine - sert de signal pour la d&eacute;gradation de l&#39;activit&eacute;. In vivo, les deux prot&eacute;ines interagissent uniquement dans des conditions de d&eacute;ficience du prot&eacute;asome. La liaison de HDAC6 &agrave; FAT10 a &eacute;t&eacute; v&eacute;hicul&eacute;e par deux domaines distincts : le C-terminal ubiquitine-liaison-doigt de zinc (domaine BUZ) de HDAC6 et son premier domaine catalytique, m&ecirc;me si l&#39;activit&eacute; catalytique de HDAC6 n&#39;&eacute;tait pas n&eacute;cessaire pour cette interaction. Tant endog&egrave;nes et exprim&eacute;s de fa&ccedil;on ectopique FAT10 que le mod&egrave;le conjugu&eacute; FAT10-GFP, localis&eacute;e &agrave; l&#39;aggresome d&#39;une mani&egrave;re d&eacute;pendante de microtubules. En outre, agr&eacute;somes FAT10 contenant comme contenant de l&#39;ubiquitine ont &eacute;t&eacute; r&eacute;duits en taille et en nombre dans les fibroblastes d&eacute;ficients HDAC6. Nous concluons que, si FAT10 ne parvient pas &agrave; soumettre ses prot&eacute;ines cibles &agrave; la d&eacute;gradation de l&#39;activit&eacute;, un itin&eacute;raire alternatif est pris pour assurer leur s&eacute;questration et peut-&ecirc;tre aussi leur &eacute;limination ult&eacute;rieure de leur transport vers l&#39;aggresome par l&#39;interm&eacute;diaire de l&#39;association avec HDAC6.

Le modificateur d&#39;ubiquitin-comme FAT10 interagit avec HDAC6 et se localise &agrave; agr&eacute;somes en vertu de l&#39;inhibition du prot&eacute;asome.

Bei Stress misfolded Protein fungiert der zytoplasmatischen Protein-Histon-Deacetylase 6 (HDAC6) als ein Linker zwischen Dynein Motor und Polyubiquitin, den Transport von Polyubiquitylated Fracht an den Aggresome zu vermitteln. Hier wir identifizieren neuer Bindung Partner der HDAC6, der Ubiquitin-&auml;hnliche-Modifizierer FAT10 (auch bekannt als UBD), der Zytokin-inducible ist und - &auml;hnlich wie Ubiquitin - dient als Signal f&uuml;r Proteasomal Abbau. In-vivo, interagiert die zwei Proteine nur unter Bedingungen der Proteasom-Beeintr&auml;chtigung. Die Bindung des HDAC6 an FAT10 wurde von zwei separaten Dom&auml;nen vermittelt: der C-terminalen Ubiquitin-Bindung Zink-Finger (BUZ Dom&auml;ne) HDAC6 und seine ersten katalytischen Dom&auml;ne, auch wenn der katalytischen Wirkung des HDAC6 nicht f&uuml;r diese Interaktion erforderlich war. Sowohl endogene und ectopically ausgedr&uuml;ckt FAT10 als auch das Modell Konjugat FAT10-GFP Microtubule-abh&auml;ngigen Weise auf die Aggresome lokalisiert. Dar&uuml;ber hinaus wurden FAT10-haltigen sowie Ubiquitin-haltige Aggresomes in Gr&ouml;&szlig;e und Anzahl in HDAC6-defizienten Fibroblasten reduziert. Wir schlie&szlig;en, dass FAT10 nicht seine Zielproteinen Proteasomal Abbau zu unterwerfen, eine alternative Route genommen wird, ihre Sequestrierung und m&ouml;glicherweise auch ihre anschlie&szlig;ende Entfernung zu f&ouml;rdern, indem zu den Aggresome &uuml;ber die Assoziation mit HDAC6 transportieren.

Der Ubiquitin-&auml;hnliche-Modifizierer FAT10 interagiert mit HDAC6 und zu Aggresomes unter Proteasom-Hemmung lokalisiert.

Durante lo sforzo della proteina denatura, il deacetylase dell&#39;istone proteina citoplasmatica 6 (HDAC6) funziona come un linker tra il motore di dineina e polyubiquitin a mediare il trasporto di merci polyubiquitylated per la aggresome. Qui, ci identifichiamo un nuova associazione partner di HDAC6, il modificatore di ubiquitin-like FAT10 (noto anche come UBD), che &egrave; inducibile citochine e - simile alla ubiquitina - serve come un segnale di degradazione proteosomale. In vivo, le due proteine interagivano solo in condizioni di compromissione del proteasoma. L&#39;associazione di HDAC6 a FAT10 fu mediata da due domini separati: il C-terminale di ubiquitin-associazione zinc-finger (dominio BUZ) di HDAC6 e il relativo primo dominio catalitico, anche se l&#39;attivit&agrave; catalitica di HDAC6 non &egrave; stato richiesto per questa interazione. FAT10 endogeni ed ectopically espresso cos&igrave; come il modello coniugato FAT10-GFP localizzato per il aggresome in modo microtubule-dipendente. Inoltre, contenenti FAT10, nonch&eacute; di ubiquitin-contenente aggresomes sono stati ridotti in dimensione e numero nei fibroblasti HDAC6-carenti. Possiamo concludere che, se FAT10 non riesce a sottoporre le proteine bersaglio per degradazione proteosomale, un itinerario alternativo &egrave; preso per garantire loro il sequestro e possibilmente anche loro successiva rimozione da li trasporta a aggresome tramite l&#39;associazione con HDAC6.

Il ubiquitin-like modifier FAT10 interagisce con HDAC6 e si localizza a aggresomes sotto l&#39;inibizione del proteasoma.

&#x30DF;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6642;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20; 6 (HDAC6)&#x3001;aggresome &#x306B; polyubiquitylated &#x8CA8;&#x7269;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC; &#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3; &#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068; polyubiquitin &#x9593;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x578B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC; HDAC6&#x3001;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x4FEE;&#x98FE; FAT10 &#xFF08;UBD &#x3068;&#x3082;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x307E;&#x3059;) &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3066; - &#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3; - &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x52A3;&#x5316;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;In vivo &#x3067; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;HDAC6 FAT10 &#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; 2 &#x3064;&#x306E;&#x5225;&#x3005; &#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x3063;&#x305F;: C &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB; &#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x4E9C;&#x925B; - &#xFF08;BUZ &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF09; &#x306E;&#x6307; HDAC6 &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;HDAC6 &#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x4E0D;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3002;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x3068;&#x57F9;&#x990A;&#x8868;&#x73FE;&#x306E; FAT10 &#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB; FAT10 GFP &#x306B; aggresome &#x306F;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x5171;&#x5F79;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;FAT10 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080; aggresomes HDAC6 &#x6B20;&#x640D;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6570;&#x3068;&#x898F;&#x6A21;&#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3092;&#x670D;&#x5F93;&#x3055;&#x305B;&#x308B; FAT10 &#x304C;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x4EE3;&#x66FF;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C8; HDAC6 &#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; aggresome &#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x9694;&#x96E2;&#x3084;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306B;&#x3082;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x3092;&#x78BA;&#x4FDD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x4FEE;&#x98FE; FAT10 HDAC6 &#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x3066; aggresomes &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Misfolded &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xB3D9;&#xC548; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; deacetylase 6 (HDAC6)&#xB294; aggresome&#xC5D0; polyubiquitylated &#xD654;&#xBB3C;&#xC758; &#xC218;&#xC1A1;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xD68C; &#xBAA8;&#xD130;&#xC640; polyubiquitin &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xB9C1;&#xCEE4;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; HDAC6, &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; &#xD55C;&#xC815;&#xC790; fat10&#xC758; (UBD &#xB77C;&#xACE0;&#xB3C4; &#xD568;)&#xC740; cytokine&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; proteasomal &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638;-&#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;-&#xC5ED;&#xD560;. Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xB9CC; &#xC791;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xC7A5;&#xC560;&#xC758; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C;. Fat10&#xC5D0;&#xB294; hdac6&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xBCC4;&#xB3C4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD588;&#xB2E4;: C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC544;&#xC5F0;-&#xC190;&#xAC00;&#xB77D; (BUZ &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;) HDAC6 &#xBC0F; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;, &#xBE44;&#xB85D; hdac6&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638;&#xC774; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD; &#xD558; &#xACE0; ectopically &#xD45C;&#xD604; fat10&#xC640; &#xBAA8;&#xB378; FAT10 GFP microtubule &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; aggresome&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xCF24;&#xB808;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; FAT10 aggresomes &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; HDAC6 &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC218;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; FAT10 proteasomal &#xC800;&#xD558; &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC774; &#xB418;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD558;&#xBA74; hdac6&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD611;&#xD68C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; aggresome&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xC6B4;&#xBC18; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558; &#xAC8C; &#xB610;&#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD6C4;&#xC18D; &#xC81C;&#xAC70;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC7A5; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB300;&#xCCB4; &#xACBD;&#xB85C; &#xCC0D;&#xC740;, &#xACB0;&#xB860;.

&#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; &#xD55C;&#xC815;&#xC790; FAT10 hdac6&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; aggresomes &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; localizes.

Durante el estr&eacute;s del mal-prote&iacute;na, la prote&iacute;na citopl&aacute;smica Histona deacetilasa 6 (HDAC6) funciona como un enlazador entre el motor de la dine&iacute;na y la poliubiquitina para mediar el transporte de carga de polyubiquitylated a la aggresome. Aqu&iacute;, identificamos a un nuevo enlace socio de HDAC6, el modificador de ubiquitina-como FAT10 (tambi&eacute;n conocido como UBD), que es inducible por citocina y - similar a la ubiquitina - sirve como una se&ntilde;al para degradaci&oacute;n proteasomal. In vivo, las dos prote&iacute;nas s&oacute;lo interactuaron en condiciones de deterioro del proteasoma. La Uni&oacute;n de HDAC6 a FAT10 fue mediada por dos dominios separados: el c-terminal ubiquitin-enlace-dedo de cinc (dominio BUZ) de HDAC6 y su primer dominio catal&iacute;tico, a pesar de que la actividad catal&iacute;tica de HDAC6 no fue requerida para esta interacci&oacute;n. Tanto FAT10 end&oacute;geno y ect&oacute;picamente expresado como el modelo conjugado FAT10-GFP localizada a la aggresome en una forma dependiente de microt&uacute;bulos. Adem&aacute;s, aggresomes que contienen FAT10 como que contienen ubiquitina fueron reducidos en tama&ntilde;o y n&uacute;mero en fibroblastos HDAC6 deficientes. Concluimos que, si FAT10 no someter sus prote&iacute;nas Diana a degradaci&oacute;n proteasomal, se toma una ruta alternativa para su secuestro y posiblemente tambi&eacute;n su retiro subsecuente transport&aacute;ndolos a la aggresome mediante la asociaci&oacute;n con HDAC6.

El modificador de ubiquitina-como FAT10 interact&uacute;a con HDAC6 y localiza a aggresomes bajo la inhibici&oacute;n del proteasoma.

&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x6837;&#x4FEE;&#x9970;&#x7B26; FAT10 &#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x52A0;&#x901F;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7531;&#x62C9;&#x4E39;&#x4E4C;&#x5DF4;&#x57DF;&#x86CB;&#x767D; NEDD8 &#x6700;&#x7EC8;&#x5DF4;&#x65AF; 1 &#x957F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E; FAT10 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x53D1;&#x751F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x4FDD;&#x5229;-&#x6CDB;&#x7D20;&#x5316;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x51C0;&#x5316; 26S &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x5BB9;&#x6613;&#x9000;&#x5316; FAT10-&#x4E8C;&#x6C22;&#x53F6;&#x9178;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176; (DHFR) &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x6CDB;&#x7D20;-DHFR &#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;26S &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x53EF;&#x80FD;&#x53EA;&#x6709; FAT10 DHFR &#x65F6;&#xFF0C;&#x4F1A;&#x964D;&#x4F4E; NUB1L &#x51FA;&#x5E2D;&#x4E86;&#x4F1A;&#x8BAE;&#x3002;NUB1L &#x649E;&#x51CF;&#x6BD2; FAT10 DHFR &#x6697;&#x793A; NUB1L &#x786E;&#x5B9A; FAT10 &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x964D;&#x89E3;&#x7387;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x5EFA;&#x7ACB; FAT10 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4F46; NUB1L &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x9776;&#x5411;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

FAT10 &#x7531; 26S &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x964D;&#x89E3;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x5316;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; NUB1L&#x3002;

The ubiquitin-like modifier FAT10 targets proteins for degradation by the proteasome, a process accelerated by the UBL-UBA domain protein NEDD8 ultimate buster 1-long. Here, we show that FAT10-mediated degradation occurs independently of poly-ubiquitylation as purified 26S proteasome readily degraded FAT10-dihydrofolate reductase (DHFR) but not ubiquitin-DHFR in vitro. Interestingly, the 26S proteasome could only degrade FAT10-DHFR when NUB1L was present. Knock-down of NUB1L attenuated the degradation of FAT10-DHFR in intact cells suggesting that NUB1L determines the degradation rate of FAT10-linked proteins. In conclusion, our data establish FAT10 as a ubiquitin-independent but NUB1L-dependent targeting signal for proteasomal degradation.

Degradation of FAT10 by the 26S proteasome is independent of ubiquitylation but relies on NUB1L.

Les prot&eacute;ines cibles ubiquitin-comme modificateur FAT10 pour la d&eacute;gradation par le prot&eacute;asome, un processus acc&eacute;l&eacute;r&eacute; par la prot&eacute;ine de domaine UBL-UBA NEDD8 buster ultime long-1. Ici, nous montrons que la d&eacute;gradation induite par la FAT10 survient ind&eacute;pendamment de poly-ubiquitination comme purifi&eacute;s prot&eacute;asome 26 s facilement d&eacute;grad&eacute;es FAT10-dihydrofolate r&eacute;ductase (DHFR) mais pas ubiquitine-DHFR in vitro. Fait int&eacute;ressant, le prot&eacute;asome 26 s pourrait d&eacute;grader seulement FAT10-DHFR lorsque NUB1L &eacute;tait pr&eacute;sent. Pr&eacute;cipitation de NUB1L a att&eacute;nu&eacute; la d&eacute;gradation de la DHFR-FAT10 dans les cellules intactes, ce qui sugg&egrave;re que les NUB1L d&eacute;termine le taux de d&eacute;gradation des prot&eacute;ines li&eacute;es &agrave; FAT10. En conclusion, nos r&eacute;sultats &eacute;tablissent FAT10 comme un signal de ciblage ubiquitine ind&eacute;pendant mais d&eacute;pendante de NUB1L pour la d&eacute;gradation de l&#39;activit&eacute;.

La d&eacute;gradation par le prot&eacute;asome 26 s de FAT10 est ind&eacute;pendante de l&#39;ubiquitination mais s&#39;appuie sur NUB1L.

Ubiquitin-&auml;hnliche-Modifizierer FAT10 Ziele Proteine f&uuml;r Abbau durch das Proteasom, ein Prozess durch das BMG-UBA-Dom&auml;ne-Protein NEDD8 ultimative Buster 1 langen beschleunigt. Hier zeigen wir, dass FAT10-vermittelte Abbau unabh&auml;ngig von Poly-Ubiquitylation tritt, wie gereinigt, 26S Proteasom FAT10-Dihydrofolate Reduktase (DHFR) aber nicht Ubiquitin-DHFR in-vitro-leicht abgebaut. Interessanterweise konnte die 26S Proteasom nur FAT10-DHFR beeintr&auml;chtigen, wenn NUB1L vorhanden war. Knock-Down der NUB1L vermindert den Abbau von FAT10-DHFR in intakten Zellen, die darauf hindeutet, dass NUB1L die Abbau-Rate FAT10-chromosomale Proteine bestimmt. Abschlie&szlig;end stellen unsere Daten FAT10 als ein Ubiquitin-unabh&auml;ngige aber NUB1L-abh&auml;ngige zielende Signal f&uuml;r Proteasomal Abbau.

Abbau von FAT10 durch die 26S Proteasom ist unabh&auml;ngig von Ubiquitylation, sondern st&uuml;tzt sich auf NUB1L.

Le proteine di bersagli di ubiquitin-like modifier FAT10 per degradazione dal proteasoma, un processo accelerato dalla proteina dominio UBL-UBA NEDD8 ultimate buster 1-lungo. Mostriamo qui, che FAT10-mediato degradazione avviene indipendentemente dal poli-ubiquitylation come purificato 26S proteasoma prontamente degradata FAT10-diidrofolato reduttasi (DHFR) ma non di ubiquitin-DHFR in vitro. &Egrave; interessante notare che, il proteasoma 26S potrebbe degradare solo FAT10-DHFR quando NUB1L era presente. Knock-down di NUB1L attenuato la degradazione di FAT10-DHFR in cellule intatte suggerendo che NUB1L determina il tasso di degradazione delle proteine FAT10-collegato. In conclusione, i nostri dati stabiliscono FAT10 come un segnale di targeting di ubiquitin-indipendente ma NUB1L-dipendente per degradazione proteosomale.

Degradazione di FAT10 dal proteasoma 26S &egrave; indipendente di ubiquitylation ma si basa su NUB1L.

&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x4FEE;&#x98FE; FAT10 &#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5206;&#x89E3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x308B; UBL &#x59E5;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; NEDD8 &#x7A76;&#x6975;&#x30D0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; 1 &#x9577;&#x3044;&#x52A0;&#x901F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x751F; FAT10 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x52A3;&#x5316;&#x30DD;&#x30EA;-&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3068;&#x3057;&#x3066; 26 s &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x306A;&#x3044;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;-DHFR &#x304C; in vitro FAT10 &#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x8449;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20; &#xFF08;DHFR&#xFF09; &#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;NUB1L &#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D; 26 s &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x307F; FAT10 DHFR &#x4F4E;&#x4E0B;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NUB1L &#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F; FAT10-DHFR NUB1L FAT10 &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x7387;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; FAT10 &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x52A3;&#x5316;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x72EC;&#x7ACB;&#x8005;&#x3057;&#x304B;&#x3057; NUB1L &#x4F9D;&#x5B58;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

26 S &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x308B; FAT10 &#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x306F;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;NUB1L &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; &#xD55C;&#xC815;&#xC790; FAT10 &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; NEDD8 &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xBC84;&#xC2A4;&#xD130; 1-&#xAE34; UBL UBA &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB85C; &#xAC00;&#xC18D;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; FAT10 &#xC911;&#xC7AC; &#xC800;&#xD558; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD3F4; &#xB9AC; ubiquitylation &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC815;&#xD654; 26S &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xC740; &#xC27D;&#xAC8C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;-DHFR &#xCCB4; &#xC678; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; FAT10 dihydrofolate reductase (DHFR) &#xC800;&#xD558; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, NUB1L &#xC874;&#xC7AC; &#xD55C; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; 26S &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; FAT10 DHFR &#xC800;&#xD558;&#xB9CC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB178;&#xD06C; &#xB2E4;&#xC6B4; nub1l&#xC758; NUB1L FAT10 &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC800;&#xD558; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xC790; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC140;&#xC5D0; FAT10-DHFR &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xAC10;&#xC1E0;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; NUB1L &#xC885;&#xC18D; &#xB300;&#xC0C1; &#xC2E0;&#xD638; proteasomal &#xC131;&#xB2A5; &#xC800;&#xD558;&#xB85C; fat10&#xB97C; &#xC124;&#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

26S &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; fat10&#xC758; &#xC800;&#xD558; ubiquitylation&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC; nub1l&#xC5D0; &#xC758;&#xC874;.

Las prote&iacute;nas de objetivos de ubiquitina-como modificador FAT10 para la degradaci&oacute;n por el proteasoma, un proceso acelerado por la prote&iacute;na de dominio de UBL-UBA NEDD8 ultimate buster 1-largo. Aqu&iacute;, demostramos que la degradaci&oacute;n mediada por FAT10 ocurre independientemente de poli-ubiquitylation como purificados proteasoma 26S f&aacute;cilmente degradado FAT10-dihidrofolato reductasa (DHFR) pero no ubiquitin-DHFR in vitro. Curiosamente, el proteasoma 26S s&oacute;lo pod&iacute;a degradar FAT10-DHFR cuando NUB1L estaba presente. Precipitaci&oacute;n de NUB1L aten&uacute;a la degradaci&oacute;n de FAT10-DHFR en las c&eacute;lulas intactas, lo que sugiere que la NUB1L determina la tasa de degradaci&oacute;n de prote&iacute;nas FAT10-ligado. En conclusi&oacute;n, nuestros datos establecen FAT10 como una se&ntilde;al dirigida a ubiquitina-independiente pero NUB1L-dependiente para degradaci&oacute;n proteasomal.

Degradaci&oacute;n de FAT10 por el proteasoma 26S es independiente de ubiquitylation pero se basa en NUB1L.

&#x6CDB;&#x7D20;&#x6837;&#x4FEE;&#x9970;&#x7B26; FAT10 &#x76EE;&#x6807;&#x7531;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x964D;&#x89E3;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5E76;&#x901A;&#x8FC7; E1 &#x9176; UBA6 &#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F5C;&#x4E3A; FAT10 &#x4E92;&#x52A8;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#x6807;&#x8BC6; UBA6 &#x7279;&#x5B9A; E2 &#x9176; (USE1)&#x3002;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4ECE; UBA6 &#x5230; USE1 &#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; FAT10 &#x548C;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; USE1 &#x548C; FAT10 &#x53EF;&#x4EE5;&#x662F; coimmunoprecipitated &#x4ECE;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;USE1 &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5C0F;&#x5E72;&#x6270; RNA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E0B;&#x8C03;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; USE1 FAT10 &#x5171;&#x8F6D;&#x53F6;&#x6805;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981; E2 &#x9176; FAT10 &#x5171;&#x8F6D;&#x5F62;&#x6210;&#x8F83;&#x5F3A;&#x7684;&#x8FD8;&#x539F;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#x62C9;&#x4E01;&#x8BED;&#x7684;&#xFF0C;USE1 &#x9996; E2 &#x9176;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x662F;&#x62C9;&#x4E01;&#x8BED;&#x7684;&#x8FD8; FAT10&#xFF0C;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x57FA;&#x6750;&#x90A3;&#x6837;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x81EA;&#x52A8; FAT10ylated &#x5728;&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;&#x4E2D;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x8DE8;&#x4E2D;&#x3002;

USE1 &#x662F;&#x5171;&#x8F6D;&#x6CDB;&#x7D20;&#x548C; FAT10&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D; FAT10ylates &#x9176;&#x53CC;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x672C;&#x8EAB;&#x5728;&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;&#x4E2D;&#x3002;

The ubiquitin-like modifier FAT10 targets proteins for degradation by the proteasome and is activated by the E1 enzyme UBA6. In this study, we identify the UBA6-specific E2 enzyme (USE1) as an interaction partner of FAT10. Activated FAT10 can be transferred from UBA6 onto USE1 in vitro, and endogenous USE1 and FAT10 can be coimmunoprecipitated from intact cells. Small interfering RNA-mediated downregulation of USE1 mRNA resulted in a strong reduction of FAT10 conjugate formation under endogenous conditions, suggesting that USE1 is a major E2 enzyme in the FAT10 conjugation cascade. Interestingly, USE1 is not only the first E2 enzyme but also the first known substrate of FAT10 conjugation, as it was efficiently auto-FAT10ylated in cis but not in trans.

USE1 is a bispecific conjugating enzyme for ubiquitin and FAT10, which FAT10ylates itself in cis.

Le modificateur d&#39;ubiquitin-comme FAT10 cible les prot&eacute;ines pour la d&eacute;gradation par le prot&eacute;asome et est activ&eacute; par l&#39;enzyme E1 UBA6. Dans cette &eacute;tude, nous identifions l&#39;enzyme sp&eacute;cifique UBA6 E2 (v&eacute;t&eacute;rinaire1) en tant que partenaire d&#39;interaction de FAT10. FAT10 activ&eacute;s peuvent &ecirc;tre transf&eacute;r&eacute;es depuis UBA6 sur Canada1 in vitro, et endog&egrave;ne Canada1 et FAT10 peuvent &ecirc;tre coimmunoprecipitated de cellules intactes. Petite interf&eacute;rente-mediated RNA downregulation de mRNA Canada1 a entra&icirc;n&eacute; une forte r&eacute;duction de la formation de conjugu&eacute;s FAT10 conditions endog&egrave;nes, sugg&eacute;rant que Canada1 est une importante enzyme E2 dans la cascade de conjugaison FAT10. Fait int&eacute;ressant, Canada1 est non seulement la premi&egrave;re enzyme E2, mais aussi le premier substrat connu de conjugaison FAT10, tel qu&#39;il &eacute;tait efficace auto-FAT10ylated en cis, mais pas en trans.

Canada1 est un bisp&eacute;cifiques conjugaison &agrave; l&#39;ubiquitine et FAT10, qui FAT10ylates lui-m&ecirc;me dans la CEI.

Modifizierers Ubiquitin-artigen FAT10 zielt auf Proteine f&uuml;r Abbau durch das Proteasom und wird durch das Enzym E1 UBA6 aktiviert. In dieser Studie identifizieren wir das Enzym UBA6-spezifische E2 (USE1) als Partner der FAT10 Interaktion. Aktivierte FAT10 von UBA6 auf in-vitro-USE1 &uuml;bertragen werden k&ouml;nnen k&ouml;nnen, und endogene USE1 und FAT10 Coimmunoprecipitated aus intakten Zellen. Kleine interferierender RNA-vermittelte Heraufregulation USE1 mRNA ergab eine starke Reduzierung der FAT10 konjugierte Bildung unter endogenen Voraussetzungen darauf hindeutet, dass USE1 eine gro&szlig;e E2-Enzym in der FAT10 Konjugation Kaskade. Interessanterweise ist USE1 nicht nur des ersten enzyms E2, sondern auch die erste bekannte Substrat des FAT10 Konjugation, wie es Auto-FAT10ylated in GUS, aber nicht in Trans effizient war.

USE1 ist ein Bispezifischer konjugierenenzym f&uuml;r Ubiquitin und FAT10, welche FAT10ylates selbst in Cis.

Il ubiquitin-like modifier FAT10 obiettivi le proteine per la degradazione del proteasoma e viene attivato dall&#39;enzima E1 UBA6. In questo studio, identifichiamo l&#39;enzima specifico UBA6 E2 (USE1) come partner di interazione di FAT10. FAT10 attivato pu&ograve; essere trasferito da UBA6 sul USE1 in vitro, e USE1 endogeni e FAT10 pu&ograve; essere coimmunoprecipitated da cellule intatte. Piccola interferenza RNA-mediata downregulation del mRNA di USE1 ha provocato una forte riduzione della formazione di coniugato FAT10 condizioni endogene, suggerendo che il USE1 &egrave; un importante enzima E2 in cascata della coniugazione FAT10. Interessante, USE1 &egrave; non solo il primo enzima E2, ma anche il primo substrato noto di coniugazione FAT10, come &egrave; stato efficacemente auto-FAT10ylated in cis, ma non in trans.

USE1 &egrave; un bispecific coniugazione dell&#39;enzima ubiquitina e FAT10, che FAT10ylates stesso in cis.

&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x4FEE;&#x98FE; FAT10 &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;E1 &#x9175;&#x7D20; UBA6 &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x6211;&#x3005; &#x304C; FAT10 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066; UBA6 &#x56FA;&#x6709; E2 &#x9175;&#x7D20; (USE1) &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; FAT10 UBA6 USE1 in vitro &#x4E0A;&#x304B;&#x3089;&#x8EE2;&#x9001;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E; USE1 &#x3068; FAT10 coimmunoprecipitated &#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306A;&#x30BB;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;USE1 mRNA &#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5E72;&#x6E09; RNA &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; FAT10 3 &#x5171;&#x5F79;&#x5F62;&#x6210; USE1 FAT10 &#x5171;&#x5F79;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A; E2 &#x9175;&#x7D20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x5F37;&#x3044;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;-FAT10ylated &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3067;&#x306F; cis &#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3068; USE1 &#x306F;&#x6700;&#x521D;&#x306E; E2 &#x9175;&#x7D20;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x3082; FAT10 &#x5171;&#x5F79;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x57FA;&#x677F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

USE1 &#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CD;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068; FAT10&#x3001;&#x3069;&#x306E; FAT10ylates &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x81EA;&#x4F53; cis &#x3067;&#x3002;

&#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC19;&#xC740; &#xD55C;&#xC815;&#xC790; FAT10 &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; E1 &#xD6A8;&#xC18C; uba6&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; fat10&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xB85C; e 2&#xB294; UBA6 &#xD2B9;&#xC815; &#xD6A8;&#xC18C; (USE1)&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; FAT10 &#xCCB4; &#xC678;, use1&#xC5D0;&#xB294; uba6&#xC5D0;&#xC11C; &#xC62E;&#xACA8;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xACE0; &#xC0DD; USE1 &#xBC0F; FAT10 coimmunoprecipitated &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC140; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. USE1 Mrna&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA &#xC911;&#xC7AC; downregulation FAT10 USE1 FAT10 &#xD65C;&#xC6A9; &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xC694; e 2 &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294; &#xC81C;&#xC548; &#xC0DD; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5B4;&#xC6D0;&#xC774; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xAC15;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC790;&#xB3D9;-FAT10ylated cis &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xCC98;&#xC74C; e 2 &#xD6A8;&#xC18C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; FAT10 &#xD65C;&#xC6A9;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xAE30;&#xD310;&#xB3C4; USE1&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Use1&#xC740; bispecific &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;&#xACFC; fat10&#xB294; fat10ylates&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xC5B4;&#xADFC; cis&#xC5D0; &#xC790;&#xCCB4;.

El modificador de ubiquitina-como FAT10 objetivos de prote&iacute;nas para la degradaci&oacute;n por el proteasoma y es activado por la enzima E1 UBA6. En este estudio, identificamos la enzima espec&iacute;fica UBA6 E2 (USE1) como un socio de la interacci&oacute;n de FAT10. FAT10 activado se pueden transferir desde UBA6 a USE1 in vitro y end&oacute;geno USE1 y FAT10 pueden ser coinmunoprecipit&oacute; de las c&eacute;lulas intactas. Peque&ntilde;o interferente downregulation mediada por RNA de mRNA USE1 dio lugar a una fuerte reducci&oacute;n de formaci&oacute;n conjugada FAT10 condiciones end&oacute;genas, sugiriendo que USE1 es una importante enzima E2 en la cascada de FAT10 verbal. Curiosamente, USE1 es no s&oacute;lo la primera enzima E2, sino tambi&eacute;n el primer sustrato conocido de FAT10 verbal, como lo fue eficientemente auto-FAT10ylated en cis pero no en trans.

USE1 es una tienen que conjugar la enzima ubiquitina y FAT10, que FAT10ylates s&iacute; mismo en cis.

&#x88C2;&#x8C37;&#x70ED;&#x75C5;&#x6BD2; (RVFV &#xFF1B; &#x5BB6;&#x5EAD; Bunyaviridae&#xFF0C;&#x5C5E; Phlebovirus) &#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x53CD;&#x520D;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x65B0;&#x5174;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3002;&#x5176; NSs &#x86CB;&#x767D;&#x4EE5;&#x524D;&#x5DF2;&#x88AB;&#x5217;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x6291;&#x5236;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x9632;&#x5FA1;&#xFF1A; &#x5B83;&#x76F4;&#x63A5;&#x6291;&#x5236; &beta; &#x5E72;&#x6270;&#x7D20; (&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &beta;) &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x53CC;&#x94FE; RNA &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (&#x6551;&#x6D4E;&#x6B3E;) &#x548C;&#x6270;&#x4E71;&#x5927;&#x4F1A;&#x901A;&#x8FC7;&#x87AF;&#x5408;&#x4F5C;&#x7528;&#x5176; p44 &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; TFIIH&#xFF0C;&#x5B83;&#x538B;&#x5236;&#x4E3B;&#x673A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x9664;&#x4E86;&#x6551;&#x6D4E;&#x6B3E;&#xFF0C;NSs &#x4E5F;&#x4FC3;&#x8FDB; TFIIH &#x4E9A;&#x57FA; p62 &#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x3002;RVFV MP 12 &#x75AB;&#x82D7;&#x682A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x611F;&#x67D3;&#x51CF;&#x5C11; p62 &#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x5BF9;&#x521D;&#x671F;&#x611F;&#x67D3;&#x68C0;&#x6D4B;&#x9650;&#x5EA6;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x3002;&#x6B64; NSs &#x4ECB;&#x5BFC; p62 &#x7684;&#x4E0B;&#x8C03;&#x662F;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4E0D;&#x53D7;&#x6291;&#x5236;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6216;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C; MP 12 &#x611F;&#x67D3;&#x4E86; p62 mRNA &#x6C34;&#x5E73;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x6291;&#x5236;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x9178;&#x5316;&#x6216;&#x6838;&#x51FA;&#x53E3;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E0B; NSs p62 &#x8D8B;&#x4E8E;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4ECE;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88C2;&#x89E3;&#x4E0E; NSs coprecipitated p62&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; RVFV NSs &#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x4E0E;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185; TFIIH &#x4E9A;&#x57FA; p62 &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5176;&#x9000;&#x5316;&#xFF0C;&#x90FD;&#x53EF;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D;&#x51FA;&#x73B0;&#x3002;

NSs &#x7684;&#x88C2;&#x8C37;&#x70ED;&#x75C5;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684; TFIIH &#x4E9A;&#x57FA; p62&#x3002;

Rift Valley fever virus (RVFV; family Bunyaviridae, genus Phlebovirus) is an important emerging pathogen of humans and ruminants. Its NSs protein has previously been identified as a major virulence factor that suppresses host defense through three distinct mechanisms: it directly inhibits beta interferon (IFN-Î²) promoter activity, it promotes the degradation of double-stranded RNA-dependent protein kinase (PKR), and it suppresses host transcription by disrupting the assembly of the basal transcription factor TFIIH through sequestration of its p44 subunit. Here, we report that in addition to PKR, NSs also promotes the degradation of the TFIIH subunit p62. Infection of cells with the RVFV MP-12 vaccine strain reduced p62 protein levels to below the detection limit early in the course of infection. This NSs-mediated downregulation of p62 was posttranslational, as it was unaffected by pharmacological inhibition of transcription or translation and MP-12 infection had no effect on p62 mRNA levels. Treatment of cells with proteasome inhibitors but not inhibition of lysosomal acidification or nuclear export resulted in a stabilization of p62 in the presence of NSs. Furthermore, p62 could be coprecipitated with NSs from lysates of infected cells. These data suggest that the RVFV NSs protein is able to interact with the TFIIH subunit p62 inside infected cells and promotes its degradation, which can occur directly in the nucleus.

NSs protein of rift valley fever virus promotes posttranslational downregulation of the TFIIH subunit p62.

Rift Valley fever virus (RVFV), belonging to the genus Phlebovirus, family Bunyaviridae, is endemic to sub-Saharan Africa and causes a high rate of abortion in ruminants and hemorrhagic fever, encephalitis, or blindness in humans. MP-12 is the only RVFV strain excluded from the select-agent rule and handled at a biosafety level 2 (BSL2) laboratory. MP-12 encodes a functional major virulence factor, the NSs protein, which contributes to its residual virulence in pregnant ewes. We found that 100% of mice subcutaneously vaccinated with recombinant MP-12 (rMP12)-murine PKRN167 (mPKRN167), which encodes a dominant-negative form of mouse double-stranded RNA (dsRNA)-dependent protein kinase (PKR) in place of NSs, were protected from wild-type (wt) RVFV challenge, while 72% of mice vaccinated with MP-12 were protected after challenge. rMP12-mPKRN167 induced alpha interferon (IFN-Î±) in sera, accumulated RVFV antigens in dendritic cells at the local draining lymph nodes, and developed high levels of neutralizing antibodies, while parental MP-12 induced neither IFN-Î± nor viral-antigen accumulation at the draining lymph node yet induced a high level of neutralizing antibodies. The present study suggests that the expression of a dominant-negative PKR increases the immunogenicity and efficacy of live-attenuated RVFV vaccine, which will lead to rational design of safe and highly immunogenic RVFV vaccines for livestock and humans.

The dominant-negative inhibition of double-stranded RNA-dependent protein kinase PKR increases the efficacy of Rift Valley fever virus MP-12 vaccine.

FAT10 is a ubiquitin-like modifier proposed to function in apoptosis induction, cell cycle control and NF-ÎºB activation. Upon induction by pro-inflammatory cytokines, hundreds of endogenous substrates become covalently conjugated to FAT10 leading to their proteasomal degradation. Nevertheless, only three substrates have been identified so far to which FAT10 becomes covalently attached through a non-reducible isopeptide bond, and these are the FAT10-conjugating enzyme USE1 which auto-FAT10ylates itself in cis, the tumor suppressor p53 and the ubiquitin-activating enzyme UBE1 (UBA1). To identify additional FAT10 substrates and interaction partners, we used a new monoclonal FAT10-specific antibody to immunopurify endogenous FAT10 conjugates from interferon (IFN)Î³-and tumor necrosis factor (TNF)Î±-stimulated cells for identification by mass spectrometry. In addition to two already known FAT10-interacting proteins, histone deacetylase 6 and UBA6, we identified 569 novel FAT10-interacting proteins involved in different functional pathways such as autophagy, cell cycle regulation, apoptosis and cancer. Thirty-one percent of all identified proteins were categorized as putative covalently linked substrates. One of the identified proteins, the autophagosomal receptor p62/SQSTM1, was further investigated. p62 becomes covalently mono-FAT10ylated at several lysines, and FAT10 colocalizes with p62 in p62 bodies. Strikingly, FAT10ylation of p62 leads to its proteasomal degradation, and prolonged induction of endogenous FAT10 expression by pro-inflammatory cytokines leads to a decrease of endogenous p62. The elucidation of the FAT10 degradome should enable a better understanding of why FAT10 has evolved as an additional transferable tag for proteasomal degradation.

The proteomic analysis of endogenous FAT10 substrates identifies p62/SQSTM1 as a substrate of FAT10ylation.

Rift Valley fever virus (RVFV), belongs to genus Phlebovirus of the family Bunyaviridae, causes high rates of abortion and fetal malformation in infected ruminants as well as causing neurological disorders, blindness, or lethal hemorrhagic fever in humans. RVFV is classified as a category A priority pathogen and a select agent in the U.S., and currently there are no therapeutics available for RVF patients. NSs protein, a major virulence factor of RVFV, inhibits host transcription including interferon (IFN)-Î² mRNA synthesis and promotes degradation of dsRNA-dependent protein kinase (PKR). NSs self-associates at the C-terminus 17 aa., while NSs at aa.210-230 binds to Sin3A-associated protein (SAP30) to inhibit the activation of IFN-Î² promoter. Thus, we hypothesize that NSs function(s) can be abolished by truncation of specific domains, and co-expression of nonfunctional NSs with intact NSs will result in the attenuation of NSs function by dominant-negative effect. Unexpectedly, we found that RVFV NSs truncated at aa. 6-30, 31-55, 56-80, 81-105, 106-130, 131-155, 156-180, 181-205, 206-230, 231-248 or 249-265 lack functions of IFN-Î² mRNA synthesis inhibition and degradation of PKR. Truncated NSs were less stable in infected cells, while nuclear localization was inhibited in NSs lacking either of aa.81-105, 106-130, 131-155, 156-180, 181-205, 206-230 or 231-248. Furthermore, none of truncated NSs had exhibited significant dominant-negative functions for NSs-mediated IFN-Î² suppression or PKR degradation upon co-expression in cells infected with RVFV. We also found that any of truncated NSs except for intact NSs does not interact with RVFV NSs even in the presence of intact C-terminus self-association domain. Our results suggest that conformational integrity of NSs is important for the stability, cellular localization and biological functions of RVFV NSs, and the co-expression of truncated NSs does not exhibit dominant-negative phenotype.

Functional analysis of Rift Valley fever virus NSs encoding a partial truncation.

Rift Valley fever virus (RVFV) encodes one major virulence factor, the NSs protein. NSs suppresses host general transcription, including interferon (IFN)-Î² mRNA synthesis, and promotes degradation of the dsRNA-dependent protein kinase (PKR). We generated a novel RVFV mutant (rMP12-NSsR173A) specifically lacking the function to promote PKR degradation. rMP12-NSsR173A infection induces early phosphorylation of eIF2Î± through PKR activation, while retaining the function to inhibit host general transcription including IFN-Î² gene inhibition. MP-12 NSs but not R173A NSs binds to wt PKR. R173A NSs formed filamentous structure in nucleus in a mosaic pattern, which was distinct from MP-12 NSs filament pattern. Due to early phosphorylation of eIF2Î±, rMP12-NSsR173A could not efficiently accumulate viral proteins. Our results suggest that NSs-mediated host general transcription suppression occurs independently of PKR degradation, while the PKR degradation is important to inhibit the phosphorylation of eIF2Î± in infected cells undergoing host general transcription suppression.

Rift Valley fever virus NSs inhibits host transcription independently of the degradation of dsRNA-dependent protein kinase PKR.

Toscana virus (TOSV), which is transmitted by Phlebotomus spp. sandflies, is a major etiologic agent of aseptic meningitis and encephalitis in the Mediterranean. Like other members of the genus Phlebovirus of the family Bunyaviridae, TOSV encodes a nonstructural protein (NSs) in its small RNA segment. Although the NSs of Rift Valley fever virus (RVFV) has been identified as an important virulence factor, which suppresses host general transcription, inhibits transcription from the beta interferon promoter, and promotes the proteasomal degradation of double-stranded RNA-dependent protein kinase (PKR), little is known about the functions of NSs proteins encoded by less-pathogenic members of this genus. In this study we report that TOSV is able to downregulate PKR with similar efficiency as RVFV, while infection with the other phleboviruses-i.e., Punta Toro virus, sandfly fever Sicilian virus, or Frijoles virus-has no effect on cellular PKR levels. In contrast to RVFV, however, cellular transcription remains unaffected during TOSV infection. TOSV NSs protein promotes the proteasome-dependent downregulation of PKR and is able to interact with kinase-inactive PKR in infected cells.

Toscana virus NSs protein promotes degradation of double-stranded RNA-dependent protein kinase.

Rift Valley fever is a mosquito-borne zoonotic disease endemic to sub-Saharan Africa. Rift Valley fever virus (RVFV; genus Phlebovirus, family Bunyaviridae) causes high rates of abortion and fetal malformation in pregnant ruminants, and haemorrhagic fever, neurological disorders or blindness in humans. The MP-12 strain is a highly efficacious and safe live-attenuated vaccine candidate for both humans and ruminants. However, MP-12 lacks a marker to differentiate infected from vaccinated animals. In this study, we originally aimed to characterize the efficacy of a recombinant RVFV MP-12 strain encoding Toscana virus (TOSV) NSs gene in place of MP-12 NSs (rMP12-TOSNSs). TOSV NSs promotes the degradation of dsRNA-dependent protein kinase (PKR) and inhibits interferon-Î² gene up-regulation without suppressing host general transcription. Unexpectedly, rMP12-TOSNSs increased death in vaccinated outbred mice and inbred BALB/c or C57BL/6 mice. Immunohistochemistry showed diffusely positive viral antigens in the thalamus, hypothalamus and brainstem, including the medulla. No viral antigens were detected in spleen or liver, which is similar to the antigen distribution of moribund mice infected with MP-12. These results suggest that rMP12-TOSNSs retains neuroinvasiveness in mice. Our findings demonstrate that rMP12-TOSNSs causes neuroinvasion without any hepatic disease and will be useful for studying the neuroinvasion mechanism of RVFV and TOSV.

Rift Valley fever virus MP-12 vaccine encoding Toscana virus NSs retains neuroinvasiveness in mice.

Rift Valley fever virus (RVFV; genus Phlebovirus, family Bunyaviridae) is a mosquito-borne zoonotic pathogen which can cause hemorrhagic fever, neurological disorders or blindness in humans, and a high rate of abortion in ruminants. MP-12 strain, a live-attenuated candidate vaccine, is attenuated in the M- and L-segments, but the S-segment retains the virulent phenotype. MP-12 was manufactured as an Investigational New Drug vaccine by using MRC-5 cells and encodes a functional NSs gene, the major virulence factor of RVFV which 1) induces a shutoff of the host transcription, 2) inhibits interferon (IFN)-Î² promoter activation, and 3) promotes the degradation of dsRNA-dependent protein kinase (PKR). MP-12 lacks a marker for differentiation of infected from vaccinated animals (DIVA). Although MP-12 lacking NSs works for DIVA, it does not replicate efficiently in type-I IFN-competent MRC-5 cells, while the use of type-I IFN-incompetent cells may negatively affect its genetic stability. To generate modified MP-12 vaccine candidates encoding a DIVA marker, while still replicating efficiently in MRC-5 cells, we generated recombinant MP-12 encoding Punta Toro virus Adames strain NSs (rMP12-PTNSs) or Sandfly fever Sicilian virus NSs (rMP12-SFSNSs) in place of MP-12 NSs. We have demonstrated that those recombinant MP-12 viruses inhibit IFN-Î² mRNA synthesis, yet do not promote the degradation of PKR. The rMP12-PTNSs, but not rMP12-SFSNSs, replicated more efficiently than recombinant MP-12 lacking NSs in MRC-5 cells. Mice vaccinated with rMP12-PTNSs or rMP12-SFSNSs induced neutralizing antibodies at a level equivalent to those vaccinated with MP-12, and were efficiently protected from wild-type RVFV challenge. The rMP12-PTNSs and rMP12-SFSNSs did not induce antibodies cross-reactive to anti-RVFV NSs antibody and are therefore applicable to DIVA. Thus, rMP12-PTNSs is highly efficacious, replicates efficiently in MRC-5 cells, and encodes a DIVA marker, all of which are important for vaccine development for Rift Valley fever.

ArticleTotal : 2	Year
Publication title Cited by 33	2011
Publication title Cited by 15	2013

Article	Year
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