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Articles by Cynthia L. Montana in JoVE
JoVE Neuroscience
Die Quantifizierung der Aktivität von Cis-Regulatorische Elemente in der Maus Retina durch Explantation Elektroporation
Department of Pathology and Immunology, Washington University School of Medicine
Dieses Protokoll beschreibt eine einfache und kostengünstige Möglichkeit, um die Aktivität von cis-regulatorischen Elemente (dh Enhancer / Promotoren) in lebenden Maus Netzhaut via Explantation Elektroporation zu quantifizieren. DNA-Präparation, Netzhaut-Dissektion, die Elektroporation, Netzhaut-Explantat-Kultur, und nach der Fixierung Analyse und Quantifizierung beschrieben.
Other articles by Cynthia L. Montana on PubMed
Erbkrankheiten Der Photorezeptoren Und Aussichten Für Gentherapie
Die Sehzellen der Netzhaut unterliegen eine Vielzahl von genetischen Krankheiten. Diesen Bericht fasst Aktuelles wissen über eine wichtige Gruppe von Netzhauterkrankungen, verursacht durch Mutationen in Genen Photorezeptor-bereichert. Darüber hinaus wird die Fortschritte bei der Behandlung einer Vielzahl dieser Krankheiten in Tiermodellen über Adeno-assoziierte Virus Gentherapie beschrieben. Obwohl keine menschlichen Studien noch zur Behandlung von Erkrankungen durch Mutationen in Genen Photorezeptor angereicherten eingeleitet wurden, gibt es viel Optimismus über die Aussichten für die Behandlung dieser Krankheiten, die mit Gentherapie Adeno-assoziierte Viren.
Transkriptionelle Regulation Der Neuronale Netzhaut Des Leucins (Nrl), Photorezeptoren Zelle Schicksal Bestimmender Faktor
Die Transkription Faktor neuronale Netzhaut des Leucins (Nrl) ist eine wichtige Determinante der Stab Photorezeptor Zelle Schicksal und ein wichtiger Regulator der Stab Differenzierung. NRL(-/-) Stab Vorstufen nicht einschalten Stab Gene und stattdessen als Zapfen unterscheiden. Außerdem verursacht NRL Mutationen beim Menschen Retinitis Pigmentosa. Trotz der Entwicklungs- und klinische Bedeutung dieses Gens ist wenig bekannt über die transkriptionelle Regulation der Nrl selbst. Wir wollten in dieser Studie die Cis - und Trans wirkende Faktoren verantwortlich für Initiierung und Aufrechterhaltung der Nrl Transkription in der Netzhaut Maus zu definieren. Verwendung einer quantitativen Maus retinale Explant Electroporation Assay, entdeckten wir eine phylogenetisch konservierten, 30-Base paar Region unmittelbar oberhalb der Transkription Start Website, die für Nrl-Promotor-Aktivität erforderlich ist. Diese Region enthält Bindungsstellen für die Retina Transkriptionsfaktoren CRX, OTX2 und RORβ und Punktmutationen in dieser Sites komplett abzuschaffen Promotor-Aktivität im Leben Netzhaut. Gel-Schicht Experimente zeigen, dass CRX, OTX2 und RORβ an der kritische Bereich in vitro binden können, wohingegen ChIP Experimente Bindung der CRX und OTX2 an der kritische Bereich in-vivo demonstrieren. So deuten unsere Ergebnisse, dass CRX, OTX2 und RORβ Nrl Transkription durch Bindung an kritischen Standorten innerhalb der Nrl-Projektträger direkt zu regulieren. Wir schlagen eine Modell in der Nrl Ausdruck hauptsächlich initiiert von OTX2 und RORβ und später auf einem hohen Niveau von CRX und RORβ verwaltet.
