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Correlative Microscopy for 3D Structural Analysis of Dynamic Interactions

Cryo-electron tomography (cryoET) allows 3D visualization of cellular structures at molecular resolution in a close-to-physiological state1. However, ...

University of Pittsburgh School of Medicine

It has been recently shown that recombinant adeno-associated virus serotype 8 (rAAV8) is a robust alternative serotype vector that overcomes many of the limitations of rAAV2 and transduces various tissues efficiently and globally through systemic vector administration. AAV9 is a serotype newly isolated from human tissues, but our knowledge of the biology of rAAV9 in vivo is currently limited. Here, we demonstrate by a series of comprehensive side-by-side experiments with rAAV8 and 9 vectors delivered via different routes or at various doses in mice that rAAV9 vectors share the robustness of rAAV8, i.e., (1) very high liver transduction efficiency irrespective of whether vectors are administered intravascularly or extravascularly and (2) substantial transduction in the heart, skeletal muscle, and pancreas by peripheral vein injection. Importantly, rAAV9 transduced myocardium 5- to 10-fold higher than rAAV8, resulting in over 80% cardiomyocyte transduction following tail vein injection of as low as 1.0 x 10(11) particles per mouse. Thus rAAV9, as well as rAAV8, is a robust vector for gene therapy applications and rAAV9 is superior to rAAV8 specifically for cardiac gene delivery by systemic vector administration.

Robust systemic transduction with AAV9 vectors in mice: efficient global cardiac gene transfer superior to that of AAV8.

Il a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; r&eacute;cemment que recombinants adeno-associated virus de s&eacute;rotype 8 (rAAV8) est un vecteur de s&eacute;rotype alternative robuste qui surmonte beaucoup des restrictions de rAAV2 et transduit divers tissus efficacement et dans le monde par le biais de l&#39;administration syst&eacute;mique de vecteur. AAV9 est un s&eacute;rotype nouvellement isol&eacute; de tissus humains, mais notre connaissance de la biologie des rAAV9 in vivo est actuellement limit&eacute;. Ici, nous d&eacute;montrons par une s&eacute;rie d&#39;exp&eacute;riences de side-by-side complets avec rAAV8 et 9 vecteurs envoy&eacute;es par des voies diff&eacute;rentes ou &agrave; des doses diff&eacute;rentes chez la souris que les vecteurs rAAV9 partagent la robustesse des rAAV8, c&#39;est-&agrave;-dire, efficacit&eacute; de la transduction du foie (1) tr&egrave;s &eacute;lev&eacute;e ind&eacute;pendamment de savoir si les vecteurs sont administr&eacute;s par voie intravasculaire ou extravascularly et transduction (2) importante dans le c&oelig;ur, muscle squelettique et le pancr&eacute;as par injection dans la veine p&eacute;riph&eacute;rique. Ce qui est important, rAAV9 transduites myocarde 5 &agrave; 10 fois plus &eacute;lev&eacute; que rAAV8, ayant pour r&eacute;sultat plus de 80 % qui suit transduction cardiomyocyte queue injection dans la veine d&#39;aussi bas que 0 x 10 (11) de particules par la souris. Ainsi, rAAV9, comme rAAV8, est un vecteur robuste pour des applications de la th&eacute;rapie g&eacute;nique et rAAV9 est sup&eacute;rieure &agrave; rAAV8 sp&eacute;cialement pour la livraison de g&egrave;ne cardiaque par l&#39;administration syst&eacute;mique de vecteur.

Robuste transduction syst&eacute;mique avec des vecteurs de la AAV9 chez les souris : transfert efficace g&egrave;ne cardiaque globale sup&eacute;rieur &agrave; celle de AAV8.

&Egrave; stato dimostrato recentemente che recombinant virus adeno-associato sierotipo 8 (rAAV8) &egrave; un vettore di sierotipo alternativa robusto che supera molte delle limitazioni di rAAV2 e transduces vari tessuti in modo efficiente e a livello globale attraverso somministrazione sistemica vettoriale. AAV9 &egrave; un sierotipo recentemente isolato da tessuti umani, ma la nostra conoscenza della biologia di rAAV9 in vivo &egrave; attualmente limitato. Mostriamo qui, da una serie di esperimenti di side-by-side completi con 9 vettori consegnati tramite diverse vie o a varie dosi in topi che vettori rAAV9 condividono la robustezza dei rAAV8, cio&egrave;, l&#39;efficienza di trasduzione di fegato (1) molto elevato indipendentemente dal fatto se i vettori sono amministrati intravascularly o extravascularly e trasduzione (2) consistente nel cuore, muscolo scheletrico e pancreas per iniezione in vena periferica e rAAV8. Importante, rAAV9 transduced miocardio 5 a 10 volte superiore a rAAV8, con conseguente oltre l&#39;80% seguito trasduzione cardiomyocyte coda vena iniezione di basso quanto 1.0 x 10(11) particelle per mouse. Cos&igrave; rAAV9, come rAAV8, &egrave; un vettore affidabile per applicazioni di terapia genica e rAAV9 superiore a rAAV8 specificamente per la consegna di gene cardiaco da somministrazione sistemica vettoriale.

Robusto trasduzione sistemica con vettori AAV9 nei topi: trasferimento efficiente gene cardiaca globale superiore a quella del AAV8.

&#x5728;&#x5C1D;&#x8BD5;&#x5BF9;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; (CNS) &#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x75AB;&#x82D7;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x6807;&#x51C6;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (DC) &#x4E0E;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E0E;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x80FD;&#x529B; 1 &#x504F;&#x5149; DCs (DC1) &#x8BF1;&#x4F7F;&#x80F6;&#x8D28;&#x7624;&#x7279;&#x5B9A;&#x7C7B;&#x578B; 1 Ctl &#x4E0E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x80BF;&#x7624;&#x76F8;&#x5173;&#x5BFB;&#x5C5E;&#x6027;&#x548C;&#x5176;&#x4F5C;&#x7528;&#x673A;&#x7406;&#x3002;6 &#x5929;&#x4E2D;&#x57F9;&#x517B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;/&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x96C6;&#x843D;&#x523A;&#x6FC0;&#x56E0;&#x5B50; (GM-CSF) &#x4E0E; C57BL/6 &#x5C0F;&#x9F20;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; CD11c(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x968F;&#x540E;&#x57F9;&#x517B;&#x4E0E; GM-CSF&#x3001; rmIFN-&#x4F3D;&#x9A6C;&#x3001; rmIFN alpha&#x3001; rmIL-4 &#x548C;&#x80DE;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x548C; 24 &#x5C0F;&#x65F6;&#x7FA7;&#x7532;&#x57FA;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7D20;&#x751F;&#x6210; DC1s&#x3002;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x540C;&#x884C;&#xFF0C;&#x9F20;&#x6807; DC1s &#x5C55;&#x51FA;&#x6210;&#x719F; DCs &#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x6807;&#x8BB0;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4EA7;&#x751F;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12 &#x548C; CXCL10 &#x7684;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x4E3A;&#x5176;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x764C;&#x75C7;&#x75AB;&#x82D7;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD; DC1s &#x7A33;&#x5B9A;&#x4FDD;&#x7559;&#x5176;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x8868;&#x578B;&#x5373;&#x4F7F;&#x66B4;&#x9732;&#x5728;&#x952E;&#x5165; 2 &#x4FC3;&#x8FDB;&#x6216;&#x89C4;&#x7BA1; T &#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;Treg&#xFF09;-&#x4FC3;&#x8FDB;&#x73AF;&#x5883;&#x3002;&#x59CB;&#x7EC8;&#x5982;&#x4E00;&#xFF0C;&#x9F20;&#x6807; DC1s &#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x7387;&#x6BD4;&#x65E0;&#x6781; DCs &#x4F53;&#x5916;&#x8BF1;&#x5BFC; 1 &#x578B;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; Ctl&#x3002;&#x9274;&#x4E8E; DC1s s.c.&#x8FC1;&#x79FB;&#x5230;&#x5F15;&#x6D41;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x3001; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; Ctl &#x548C;&#x538B;&#x5236; Treg &#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;DC1s s.c.&#x514D;&#x75AB;&#x52A0;&#x8F7D;&#x4E0E;&#x8111;&#x80F6;&#x8D28;&#x7624;&#x76F8;&#x5173;&#x6297;&#x539F; (GAA)-&#x6D3E;&#x751F;&#x7684; CTL &#x8868;&#x4F4D;&#x591A;&#x80BD;&#x5EF6;&#x957F;&#x751F;&#x5B58;&#x7684; CNS GL261 &#x80F6;&#x8D28;&#x7624;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x5173;&#x8054; GAA &#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; Ctl&#x3002; &#x7624;&#x5185;&#x6CE8;&#x5C04;&#x9AD8;&#x6548;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x80F6;&#x8D28;&#x7624;&#x5F52;&#x5DE2;&#x4E0E;&#x80BD;&#x52A0;&#x8F7D; DC1s &#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x52A0;&#x5F3A;&#x6297;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x80F6;&#x8D28;&#x7624;&#x514D;&#x75AB;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x57FA;&#x4E8E; DC1 &#x7684;&#x8D44;&#x6DF1;&#x5927;&#x5F8B;&#x5E08;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x529F;&#x80FD;&#x88AB;&#x5E9F;&#x9664;&#x4E0E; CXCL10(-/-) &#x9F20;&#x6807;&#x6D3E;&#x751F; DC1s.&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6297;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8111;&#x80F6;&#x8D28;&#x7624;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x57FA;&#x4E8E; DC1 &#x548C; CXCL10 &#x65B0;&#x578B;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x57FA;&#x4E8E; DC &#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

&#x514D;&#x75AB;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80F6;&#x8D28;&#x7624; 1 &#x578B;&#x504F;&#x632F;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; &mdash; &mdash; CXCL10 &#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

In an attempt to develop effective vaccines against central nervous system (CNS) tumors, we evaluated the ability of vaccines with standard dendritic cells (DC) versus type 1 polarizing DCs (DC1) to induce glioma-specific type 1 CTLs with CNS tumor-relevant homing properties and the mechanism of their action. C57BL/6 mouse-derived bone marrow cells were cultured with mouse granulocyte/macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) for 6 days, and CD11c(+) cells were subsequently cultured with GM-CSF, rmIFN-gamma, rmIFN-alpha, rmIL-4, and polyinosinic-polycytidylic acid stabilized by lysine and carboxymethylcellulose for 24 hours to generate DC1s. In analogy to their human counterparts, mouse DC1s exhibited surface marker profiles of mature DCs and produced high levels of IL-12 and CXCL10. Importantly for their application as cancer vaccines, such DC1s stably retained their type 1 phenotype even when exposed to type 2-promoting or regulatory T cell (Treg)-promoting environments. Consistently, mouse DC1s induced antigen-specific type 1 CTLs more efficiently than nonpolarized DCs in vitro. DC1s given s.c. migrated into draining lymph nodes, induced antigen-specific CTLs, and suppressed Treg accumulation. In addition, s.c. immunization with DC1s loaded with glioma-associated antigen (GAA)-derived CTL epitope peptides prolonged the survival of CNS GL261 glioma-bearing mice, which was associated with efficient CNS glioma homing of antigen-specific CTLs. Intratumoral injections of GAA peptide-loaded DC1s further enhanced the anti-CNS glioma effects of DC1-based s.c. immunization. Interestingly, the antitumor functions were abrogated with CXCL10(-/-) mouse-derived DC1s. Collectively, these findings show the anti-CNS glioma effects of DC1-based therapy and a novel role of CXCL10 in the immunologic and therapeutic activity of DC-based cancer vaccines.

Effective immunotherapy against murine gliomas using type 1 polarizing dendritic cells--significant roles of CXCL10.

Dans le but de d&eacute;velopper des vaccins efficaces contre les tumeurs du syst&egrave;me nerveux central (SNC), nous avons &eacute;valu&eacute; la capacit&eacute; des vaccins avec les cellules dendritiques (DC) standards versus type 1 polarisant DCs (DC1) pour induire la CTL gliome sp&eacute;cifiques de type 1 avec propri&eacute;t&eacute;s de radioralliement tumeurs les CNS et le m&eacute;canisme de leur action. A cultiv&eacute; des cellules de la moelle d&eacute;riv&eacute; de souris C57BL/6 avec souris granulocyte/macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) pour 6 jours, et a par la suite cultiv&eacute; des cellules de CD11c(+) avec le GM-CSF, rmIFN-gamma, alpha-rmIFN, rmIL-4 et l&#39;acide POLYINOSINIQUE-POLYCYTIDYLIQUE stabilis&eacute; par la lysine et de carboxym&eacute;thylcellulose pendant 24 heures pour g&eacute;n&eacute;rer DC1s. Par analogie avec leurs homologues humains, les souris DC1s pr&eacute;sentaient des profils de surface marqueur de DCs matures et produit des niveaux &eacute;lev&eacute;s d&#39;IL-12 et CXCL10. Ce qui est important pour leur application comme les vaccins contre le cancer, ces DC1s stablement conserv&eacute; leur ph&eacute;notype de type 1, m&ecirc;me lorsqu&#39;il est expos&eacute; au type cellule de T 2-promouvoir ou r&eacute;glementaire (Treg)-promouvoir des environnements. Constamment, souris DC1s induite par les CTL sp&eacute;cifiques de l&#39;antig&egrave;ne de type 1 plus efficacement que les contr&ocirc;leurs de domaine non polaris&eacute;es in vitro. S.c. DC1s donn&eacute; migrent dans les ganglions lymphatiques de drainage, induites par les CTL sp&eacute;cifiques de l&#39;antig&egrave;ne et supprim&eacute;e Treg accumulation. En outre, la vaccination l.c. par DC1s charg&eacute; avec antig&egrave;ne associ&eacute; &agrave; gliome (GAA)-d&eacute;riv&eacute;es CTL &eacute;pitope peptides prolonge la survie de souris gliome CNS GL261, qui a &eacute;t&eacute; associ&eacute;e avec domiciliation de gliome CNS efficace d&#39;injection intratumorale CTL. antig&egrave;ne-sp&eacute;cifiques de GAA charg&eacute; peptide DC1s renforc&eacute; les effets anti-CNS gliome de vaccination s.c. bas&eacute; sur DC1. Fait int&eacute;ressant, les fonctions antitumorales ont &eacute;t&eacute; abrog&eacute;es avec CXCL10(-/-) d&eacute;riv&eacute; de souris DC1s. collectivement, ces r&eacute;sultats montrent les effets anti-CNS gliome de la th&eacute;rapie &agrave; base de DC1 et un nouveau r&ocirc;le de CXCL10 dans l&#39;activit&eacute; immunologique et th&eacute;rapeutique des vaccins contre le cancer bas&eacute; &agrave; DC.

Immunoth&eacute;rapie efficace contre les gliomes murins utilisant des cellules dendritiques polarisant type 1--un r&ocirc;le important de CXCL10.

In einem Versuch, wirksame Impfstoffe gegen Tumoren des zentralen Nervensystems (ZNS) zu entwickeln, wir evaluieren die F&auml;higkeit von Impfstoffen mit Norm dendritische Zellen (DC) im Vergleich zu Typ 1 Polfilter DCs (DC1), Gliom-spezifischen Typ 1 CTLs veranlassen mit CNS Tumor-relevanten zielsuchende Eigenschaften und ihrem Wirkungsmechanismus. C57BL/6 Maus abgeleitet Knochenmarkzellen wurden mit Maus-Granulozyten/Makrophagen-Kolonie-stimulierende-Faktor (GM-CSF) f&uuml;r 6 Tage kultiviert und CD11c(+) Zellen wurden anschlie&szlig;end mit GM-CSF, RmIFN-Gamma, RmIFN-Alpha RmIL-4 und Polyinosinic Polycytidylic S&auml;ure stabilisiert durch Lysin und Carboxymethylcellulose f&uuml;r 24 Stunden zum Generieren von DC1s kultiviert. In Analogie zu ihren menschlichen Pendants Maus DC1s Oberfl&auml;che Markierung Profile Reifen DCS ausgestellt und produziert hohe IL-12 und CXCL10. Wichtig ist f&uuml;r ihre Anwendung als Impfstoffen gegen Krebs, solche DC1s stabil beibehalten ihre Typ-1-Ph&auml;notyp auch wenn Typ 2-F&ouml;rderung oder regulatorische T-Zellen (Treg) ausgesetzt-Umgebungen zu f&ouml;rdern. Konsequent, induzierte Maus DC1s Antigen-spezifischen Typ 1 CTLs effizienter als in-vitro-Nichtpolarisierter DCs. DC1s gegeben s.c. Entw&auml;sserung Lymphknoten migriert, induzierte Antigen-spezifischen CTLs und unterdr&uuml;ckt Treg Akkumulation. Dar&uuml;ber hinaus s.c. Immunisierung mit DC1s geladen mit Gliom-assoziierte Antigen (GAA)-abgeleitete Peptide der CTL-Epitope verl&auml;ngert das &Uuml;berleben der CNS GL261 Gliom-Lager M&auml;use, die verbunden war mit effizienten CNS Gliom Radarst&ouml;rsender von Antigen-spezifischen CTLs. intratumorale Injektionen von GAA Peptid belasteter DC1s verst&auml;rkt die Anti-CNS Gliom-Auswirkungen der DC1-basierte s.c. Immunisierung. Interessanterweise wurden die antitumor-Funktionen zusammen mit CXCL10(-/-) Maus-abgeleitete DC1s. aufgehoben diese Ergebnisse zeigen die Anti-CNS Gliom-Auswirkungen der Therapie auf der Basis von DC1 und eine neuartige Rolle der CXCL10 in der immunologischen und therapeutische Aktivit&auml;t von Impfstoffen gegen Krebs DC-basierte.

Wirksame Immuntherapie gegen murine Gliomen mit Typ 1 polarisierende dendritischen Zellen--wesentliche Rollen von CXCL10.

Nel tentativo di sviluppare vaccini efficaci contro i tumori del sistema nervoso centrale (SNC), abbiamo valutato la capacit&agrave; dei vaccini con standard cellule dendritiche (DC) versus tipo 1 polarizzatore DCs (DC1) per indurre il glioma specifiche tipo 1 CTL con tumore rilevanti Propriet&agrave; homing CNS e il meccanismo della loro azione. Cellule di midollo osseo derivato mouse C57BL/6 sono state coltivate con mouse/del granulocyte colony-stimulating factor (GM-CSF) per 6 giorni, e le cellule CD11c(+) successivamente sono state coltivate con GM-CSF, rmIFN-gamma, alfa-rmIFN, rmIL-4 e polyinosinic-polycytidylic acido stabilizzato di lisina e carbossimetilcellulosa per 24 ore per generare DC1s. In analogia alle loro controparti umane, mouse DC1s esposto profili marcatore di superficie di DCs maturo e prodotto alti livelli di IL-12 e CXCL10. Soprattutto per la loro applicazione come vaccini contro il cancro, tale DC1s mantenuto stabile loro fenotipo di tipo 1, anche quando esposto al tipo 2-promozione o regolamentazione T cell (Treg)-promuovere ambienti. Coerentemente, mouse DC1s indotta da antigene-specifiche tipo 1 CTL in modo pi&ugrave; efficiente rispetto a DCs non polarizzato in vitro. S.c. DC1s dato migrarono verso i linfonodi di drenaggio, indotta da antigene-specifici CTL e soppressa Treg accumulo. Inoltre, l&#39;immunizzazione s.c. con DC1s caricato con glioma-associated antigen (GAA)-derivate CTL epitopo peptidi prolungato la sopravvivenza di CNS GL261 glioma-cuscinetto topi, che &egrave; stata associata con efficiente homing di glioma CNS di iniezioni CTL. Intratumoral antigene-specifiche del GAA DC1s peptide-caricato ulteriormente migliorato gli effetti anti-CNS glioma di immunizzazione basate su DC1 s.c.. &Egrave; interessante notare che, le funzioni antitumorali erano abrogate con CXCL10(-/-) mouse-derivato DC1s. collettivamente, questi risultati mostrano gli effetti anti-CNS glioma della terapia basata su DC1 e un romanzo ruolo di CXCL10 nell&#39;attivit&agrave; di vaccini basati su DC cancro immunologici e terapeutici.

Immunoterapia efficacia contro gliomi murini utilizzando cellule dendritiche polarizzante tipo 1 - ruoli significativi di CXCL10.

&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB; (CNS) &#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x8A66;&#x307F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x578B;&#x5BFE;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE; (DC) &#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F; DCs (DC1) &#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x81A0;&#x816B; 1 &#x578B; Ctl &#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x816B;&#x760D;&#x95A2;&#x9023;&#x30DB;&#x30FC;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x504F;&#x5149; 1&#x3002;C57BL/6 &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7531;&#x6765;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9846;&#x7C92;&#x7403;&#x30FB; &#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x523A;&#x6FC0;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;GM-CSF&#xFF09; 6 &#x65E5;&#x9593;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;CD11c(+) &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C; GM-CSF rmIFN &#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;&#x3001;rmIFN &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3001;rmIL 4&#x3001;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30BB;&#x30EB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E; 24 &#x6642;&#x9593;&#x3067;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316; polyinosinic polycytidylic &#x9178;&#x3068; DC1s &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x985E;&#x63A8;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x540C;&#x7B49;&#x306B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; DC1s &#x8868;&#x9762;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC; &#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F; Dc &#x306E;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x3001;il-12 &#x3068; CXCL10 &#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x304C;&#x3093;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5FDC;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A; DC1s &#x5B89;&#x5B9A;&#x3067;&#x3082; 2 &#x63A8;&#x9032;&#x3084;&#x898F;&#x5236;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE; &#xFF08;Treg&#xFF09; &#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x305D;&#x306E; 1 &#x578B;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;-&#x74B0;&#x5883;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; DC1s 1 &#x578B;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684; Ctl &#x504F;&#x5411; DCs in vitro &#x3067;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E0E;&#x3048; DC1s &#x30B5;&#x30A6;&#x30B9;&#x30AB;&#x30ED;&#x30E9;&#x30A4;&#x30CA; &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x6392;&#x6C34;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684; Ctl &#x8A98;&#x5C0E;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Treg &#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;DC1s sc &#x306E;&#x63A5;&#x7A2E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30AA;&#x30FC;&#x30DE;&#x95A2;&#x9023;&#x6297;&#x539F; &#xFF08;GAA&#xFF09; &#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;-&#x6D3E;&#x751F; CTL &#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F; CNS GL261 &#x30B0;&#x30EA;&#x30AA;&#x30FC;&#x30DE;&#x8EF8;&#x53D7;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x5EF6;&#x9577; GAA &#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684; Ctl &#x816B;&#x760D;&#x5185;&#x6CE8;&#x5C04;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x81A0;&#x816B;&#x30DB;&#x30FC;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30ED;&#x30FC;&#x30C9; DC1s &#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x53CD;-&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x81A0;&#x816B;&#x52B9;&#x679C; sc &#x306E; DC1 &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x6027;&#x306E;&#x95A2;&#x6570; CXCL10(-/-) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7531;&#x6765; DC1s. &#x3092;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C; DC1 &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x6297;-&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x81A0;&#x816B;&#x52B9;&#x679C;&#x3068; CXCL10 &#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x5F79;&#x5272; DC &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x304C;&#x3093;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E0A;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

1 &#x578B;&#x504F;&#x5149;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;--CXCL10 &#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x795E;&#x7D4C;&#x81A0;&#x816B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x3002;

&#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (CNS) &#xC885;&#xC591;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD3C9;&#xAC00; &#xC720;&#xD615; &#xB300; &#xD45C;&#xC900; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DC)&#xC640; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825; 1 CNS &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; &#xCD94;&#xC801; &#xC18D;&#xC131; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; DCs (DC1) &#xC2E0;&#xACBD; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xD615; 1 Ctl&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD3B8;&#xAD11;. C57BL/6 &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xACE8; &#xC218; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; granulocyte/&#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xCF5C;&#xB85C; &#xB2C8; &#xC790;&#xADF9; &#xC778;&#xC790; (GM-CSF)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; 6 &#xC77C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD50;&#xC591; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC0F; CD11c(+) &#xC140; &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0; GM-CSF, rmIFN-&#xAC10;&#xB9C8;, rmIFN-&#xC54C;&#xD30C;, rmIL-4, &#xBC0F; DC1s &#xC0DD;&#xC131; lysine&#xC744; 24 &#xC2DC;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; carboxymethylcellulose &#xC548;&#xC815;&#xD654; polyinosinic polycytidylic &#xC0B0; &#xAD50;&#xC591; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04; &#xB4E4;&#xC744; &#xBE44;&#xC720;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; DC1s &#xC131;&#xC219; Dc&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xB9C8;&#xCEE4; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; IL-12&#xC640; cxcl10&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740; &#xC554; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC73C;&#xB85C; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; DC1s &#xC548;&#xC815;&#xC801; &#xC720;&#xC9C0; 2 &#xD64D;&#xBCF4; &#xB610;&#xB294; &#xADDC;&#xC81C; T &#xC138;&#xD3EC; (Treg) &#xC785;&#xB825;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC720;&#xD615; 1 &#xD615;-&#xD658;&#xACBD; &#xD64D;&#xBCF4;. &#xC77C;&#xAD00; &#xB418; &#xAC8C;, &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; DC1s &#xC720;&#xBC1C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xC720;&#xD615; 1 Ctl nonpolarized Dc &#xCCB4; &#xC678; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;. &#xC8FC;&#xC5B4;&#xC9C4; DC1s &#xC0AC;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xCE90;&#xB864;&#xB77C;&#xC774;&#xB098; &#xBC30;&#xCD9C; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB3D9; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xBC1C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; Ctl Treg &#xCD95;&#xC801; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xB610;&#xD55C; dc1s&#xC640; &#xC0AC;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xCE90;&#xB864;&#xB77C;&#xC774;&#xB098; &#xC608;&#xBC29;&#xC811;&#xC885; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD56D; &#xC6D0; (GAA)&#xC640; &#xB85C;&#xB4DC;-&#xD30C;&#xC0DD;&#xB41C; CTL epitope &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xAD00;&#xB828; CNS GL261 glioma &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874; &#xC5F0;&#xC7A5; GAA&#xC758; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; Ctl. Intratumoral &#xC8FC;&#xC0AC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; CNS &#xC2E0;&#xACBD; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB85C;&#xB4DC; DC1s &#xB354; &#xC0AC;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xCE90;&#xB864;&#xB77C;&#xC774;&#xB098; d c 1&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885;&#xC758; &#xC548;&#xD2F0;-&#xC911;&#xCD94; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC15;&#xD654;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, antitumor &#xAE30;&#xB2A5; &#xD588;&#xB2E4; &#xD3D0;&#xC9C0;&#xC640; CXCL10(-/-) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; DC1s. &#xD1B5;&#xCE6D; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; DC &#xAE30;&#xBC18; &#xC554; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD84;&#xBE44;&#xD559; &#xBC0F; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; d c 1&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xC548;&#xD2F0;-&#xC911;&#xCD94; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD6A8;&#xACFC; cxcl10&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC;.

&#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; immunotherapy murine gliomas 1 &#xD615; &#xD3B8;&#xAD11; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;-cxcl10&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;.

En un intento de desarrollar vacunas efectivas contra los tumores del sistema nervioso central (SNC), se evalu&oacute; la capacidad de las vacunas con est&aacute;ndar c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas (DC) versus tipo 1 polarizaci&oacute;n DCs (DC1) para inducir CTLs espec&iacute;ficos de glioma tipo 1 con propiedades recaladas tumorales-relevantes del CNS y el mecanismo de su acci&oacute;n. C57BL/6 rat&oacute;n derivadas de m&eacute;dula &oacute;sea las c&eacute;lulas fueron cultivadas con factor de estimulante de colonias de granulocito/macr&oacute;fagos de rat&oacute;n (GM-CSF) durante 6 d&iacute;as, y posteriormente, CD11c(+) las c&eacute;lulas fueron cultivadas con GM-CSF, rmIFN-gamma, rmIFN-alfa, rmIL-4 y polyinosinic-polycytidylic &aacute;cido estabilizado por lisina y carboximetilcelulosa durante 24 horas para generar DC1s. En analog&iacute;a a sus hom&oacute;logos humanos, rat&oacute;n DC1s exhibe perfiles superficial del marcador de DCs maduros y produce altos niveles de IL-12 y CXCL10. Lo que es importante para su aplicaci&oacute;n como vacunas contra el c&aacute;ncer, tal DC1s estable conserv&oacute; su fenotipo del tipo 1, incluso cuando est&aacute; expuesto al tipo de c&eacute;lula de T 2-promover o reguladora (Treg)-promoci&oacute;n de entornos. Constantemente, rat&oacute;n DC1s inducida por tipo de ant&iacute;geno espec&iacute;fico 1 CTLs m&aacute;s eficientemente que no polarizados DCs in vitro. S.c. DC1s dado emigr&oacute; en los ganglios linf&aacute;ticos de drenaje, inducida por el ant&iacute;geno espec&iacute;fico CTLs y hab&iacute;a suprimido Treg acumulaci&oacute;n. Adem&aacute;s, la vacunaci&oacute;n s.c. DC1s cargado con glioma-ant&iacute;geno (GAA)-derivados CTL del ep&iacute;topo p&eacute;ptidos prolongan la supervivencia de ratones de CNS GL261 glioma-cojinete, que se asoci&oacute; con eficiente homing de glioma de CNS de inyecciones de CTLs. Intratumoral ant&iacute;geno-espec&iacute;fica de GAA DC1s cargados de p&eacute;ptido mejorado a&uacute;n m&aacute;s los efectos anti-CNS glioma de inmunizaci&oacute;n s.c. DC1-basado. Curiosamente, las funciones antitumorales fueron derogadas con CXCL10(-/-) derivados del rat&oacute;n DC1s. colectivamente, estos resultados demuestran los efectos anti-CNS glioma de terapia basada en DC1 y un nuevo papel de CXCL10 en la actividad inmunol&oacute;gica y terap&eacute;utica de vacunas contra el c&aacute;ncer basadas en DC.

Inmunoterapia eficaz contra murinos gliomas utilizando polarizaci&oacute;n c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas tipo 1--el importante papel de CXCL10.

&#x8113;&#x6BD2;&#x75C7;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x7531;&#x611F;&#x67D3;&#xFF0C;&#x5F15;&#x8D77;&#x5168;&#x8EAB;&#x708E;&#x75C7;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5668;&#x5B98;&#x529F;&#x80FD;&#x8870;&#x7AED;&#x548C;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x4ECE;&#x5FAA;&#x73AF;&#x8840;&#x6DB2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x7B49;&#x708E;&#x6027;&#x4ECB;&#x8D28;&#x6E05;&#x9664;&#x662F;&#x5F88;&#x6709;&#x5E0C;&#x671B;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E25;&#x91CD;&#x8113;&#x6BD2;&#x75C7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6B63;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4F53;&#x5916; hemoadsorption &#x8BBE;&#x5907;&#x5220;&#x9664;&#x4ECE;&#x8840;&#x6DB2;&#x4F7F;&#x7528;&#x751F;&#x7269;&#x76F8;&#x5BB9;&#x6027;&#xFF0C;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x5438;&#x9644;&#x5242;&#x73E0;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x5171;&#x7126;&#x6FC0;&#x5149;&#x626B;&#x63CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (CLSM) &#x6765;&#x76F4;&#x63A5;&#x68C0;&#x67E5;&#x5438;&#x9644;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684; hemoadsorption &#x73E0;&#x5185;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6&#xFF09;&#x3002;&#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x6709;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x5B75;&#x5316;&#x4E0E;&#x8131;&#x786B;&#x5242;&#x9897;&#x7C92;&#xFF0C;&#x548C;&#x7F29;&#x5199;&#x7528;&#x6765;&#x91CF;&#x5316;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x7684;&#x8131;&#x786B;&#x5242;&#x7684;&#x77E9;&#x9635;&#x5185;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x5438;&#x9644;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x3002;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x5438;&#x9644;&#x76F8;&#x5173;&#x4E34;&#x5E8A;&#x65F6;&#x95F4;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x662F;&#x9650;&#x4E8E;&#x8131;&#x786B;&#x5242;&#x7C92;&#x5B50;&#x7684;&#x5916; 15 microm &#x548C;&#x7A3B;&#x8349;&#x5438;&#x9644;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x4F7F;&#x7528;&#x7ECF;&#x5178;&#x5438;&#x9644;/&#x6269;&#x6563;&#x673A;&#x5236;&#x5EFA;&#x6A21;&#x3002;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x53C2;&#x6570;&#xFF0C;alpha = q(max) K/D&#x3001; &#x62DF;&#x5408; CLSM &#x5F3A;&#x5EA6;&#x5206;&#x5E03;&#x56FE;&#x7ED9;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x5B66;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5982; q(max) &#x548C; K &#x662F;&#x6717;&#x7F2A;&#x5C14;&#x5438;&#x9644;&#x7B49;&#x6E29;&#x7EBF;&#x53C2;&#x6570;&#xFF0C;&#x4E14; D &#x8131;&#x786B;&#x5242;&#x7684;&#x77E9;&#x9635;&#x5185;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x6269;&#x6563;&#x7CFB;&#x6570;&#x7684;&#x4F30;&#x8BA1;&#x3002;&#x9274;&#x4E8E;&#x6211;&#x4EEC;&#x8131;&#x786B;&#x5242;&#x73E0; (450 microm&#xFF09; &#x7684;&#x76F4;&#x5F84;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x5C11;&#x4E8E; 20%&#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x5438;&#x9644;&#x5242;&#x8868;&#x9762;&#x79EF;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x5438;&#x9644;&#x3002;&#x5C0F;&#x73E0;&#x5B50;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x52A0;&#x901F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x5438;&#x9644;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x5316;&#x53EF;&#x7528;&#x8868;&#x9762;&#x79EF;&#x6BCF;&#x73E0;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x6FC0;&#x5149;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7814;&#x7A76;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x5438;&#x9644;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66; hemoadsorption &#x73E0;&#x3002;

Sepsis is characterized by a systemic inflammatory response caused by infection, and can result in organ failure and death. Removal of inflammatory mediators such as cytokines from the circulating blood is a promising treatment for severe sepsis. We are developing an extracorporeal hemoadsorption device to remove cytokines from the blood using biocompatible, polymer sorbent beads. In this study, we used confocal laser scanning microscopy (CLSM) to directly examine adsorption dynamics of a cytokine (IL-6) within hemoadsorption beads. Fluorescently labeled IL-6 was incubated with sorbent particles, and CLSM was used to quantify spatial adsorption profiles of IL-6 within the sorbent matrix. IL-6 adsorption was limited to the outer 15 microm of the sorbent particle over a relevant clinical time period, and intraparticle adsorption dynamics was modeled using classical adsorption/diffusion mechanisms. A single model parameter, alpha = q(max) K/D, was estimated by fitting CLSM intensity profiles to our mathematical model, where q(max) and K are Langmuir adsorption isotherm parameters, and D is the effective diffusion coefficient of IL-6 within the sorbent matrix. Given the large diameter of our sorbent beads (450 microm), less than 20% of available sorbent surface area participates in cytokine adsorption. Development of smaller beads may accelerate cytokine adsorption by maximizing available surface area per bead mass.

IL-6 adsorption dynamics in hemoadsorption beads studied using confocal laser scanning microscopy.

Septic&eacute;mie se caract&eacute;rise par une r&eacute;ponse inflammatoire syst&eacute;mique caus&eacute;e par une infection et peut entra&icirc;ner la mort et de d&eacute;faillance multivisc&eacute;rale. Suppression de m&eacute;diateurs inflammatoires tels que les cytokines de la circulation sanguine est un traitement prometteur pour le sepsis s&eacute;v&egrave;re. Nous d&eacute;veloppons un dispositif extracorporel hemoadsorption visant &agrave; retirer le sang &agrave; l&#39;aide de biocompatible, perles sorbant polym&egrave;re de cytokines. Dans cette &eacute;tude, nous avons utilis&eacute; confocal laser scanning microscopy (CLSM) pour &eacute;tudier directement la dynamique de l&#39;adsorption d&#39;un cytokines (IL-6) au sein de perles hemoadsorption. Fluorescent &eacute;tiquet&eacute; IL-6 est incub&eacute; avec les particules sorbants et CLSM a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; pour quantifier les profils spatiaux adsorption d&#39;IL-6 dans la matrice de sorbant. Adsorption de l&#39;IL-6 se limite &agrave; l&#39;ext&eacute;rieur microm 15 de la particule d&#39;adsorbant sur une p&eacute;riode de temps clinique pertinente et dynamique d&#39;adsorption d&#39;intraparticle a &eacute;t&eacute; mod&eacute;lis&eacute;e &agrave; l&#39;aide de m&eacute;canismes d&#39;adsorption/diffusion classique. Un param&egrave;tre de mod&egrave;le unique, alpha = q(max) K/D, a &eacute;t&eacute; estim&eacute;e en ajustant les profils d&#39;intensit&eacute; CLSM &agrave; notre mod&egrave;le math&eacute;matique, o&ugrave; q(max) et K sont des param&egrave;tres isotherme de Langmuir adsorption, et D est le coefficient de diffusion efficace d&#39;IL-6 dans la matrice de sorbant. &Eacute;tant donn&eacute; le grand diam&egrave;tre de nos perles sorbants (450 microm), moins de 20 % de la surface disponible du sorbant participe dans l&#39;adsorption de cytokine. D&eacute;veloppement de petites perles peut acc&eacute;l&eacute;rer l&#39;adsorption de cytokine en maximisant la surface disponible par perle massive.

Dynamique de l&#39;adsorption de l&#39;IL-6 en hemoadsorption perles confocal laser scanning microscopy &eacute;tudi&eacute;.

Sepsis ist gekennzeichnet durch eine systemische Entz&uuml;ndungsreaktion, die durch Infektion verursacht und Organversagen und Tod f&uuml;hren kann. Entfernung von entz&uuml;ndlichen Mediatoren wie Zytokine aus dem zirkulierenden Blut ist eine vielversprechende Behandlung bei schwerer Sepsis. Wir entwickeln eine extrakorporale Hemoadsorption Ger&auml;t zum Entfernen von Zytokinen aus dem Blut mit biokompatiblen, Polymer Sorbens Perlen. In dieser Studie haben wir konfokalen Laser scanning Mikroskopie (CLSM) um Adsorption Dynamik von einem Cytokine (IL-6) in Hemoadsorption Perlen direkt zu untersuchen. Leuchtstoff mit der Bezeichnung IL-6 wurde mit Sorbens Teilchen inkubiert und CLSM wurde verwendet, um r&auml;umliche Adsorption Profile von IL-6 innerhalb der Sorbens Matrix quantifizieren. IL-6-Adsorption beschr&auml;nkte sich auf die &auml;u&szlig;eren 15 Microm des Sorbens Teilchen einen relevanten klinischen Zeitraum und Intraparticle Adsorption Dynamik war mit klassischen Adsorption/Verbreitung Mechanismen modelliert. Ein einzelnes Modell-Parameter, alpha = q(max) K/D, wurde durch den Einbau CLSM Intensit&auml;t Profile, um unser mathematisches Modell, wo q(max) und K Langmuir-Adsorptions-Isotherme-Parameter, und D ist die effektive Diffusionskoeffizient von IL-6 innerhalb der Sorbens Matrix gesch&auml;tzt. Angesichts den gro&szlig;en Durchmesser der unsere Sorbens Perlen (450 Microm), beteiligt weniger als 20 % der verf&uuml;gbaren Sorbens Fl&auml;che sich Cytokine Adsorption. Entwicklung von kleineren Perlen kann Cytokine Adsorption durch die Maximierung der verf&uuml;gbaren Fl&auml;che pro Perlen beschleunigen mass.

IL-6-Adsorption Dynamik im Hemoadsorption Perlen mit der konfokalen Laser scanning Mikroskopie untersucht.

Sepsi sono caratterizzata da una risposta infiammatoria sistemica causata da infezione e possono portare a morte e organo fallimento. Rimozione dei mediatori infiammatori quali citochine dal sangue circolante &egrave; un trattamento promettente per sepsi grave. Stiamo sviluppando un dispositivo hemoadsorption extracorporea per rimuovere citochine nel sangue usando biocompatibile, perle di polimero assorbente. In questo studio, abbiamo usato il laser confocale microscopia (CLSM) direttamente esaminare dinamiche di adsorbimento di una citochina (IL-6) all&#39;interno di perline hemoadsorption. Fluorescente etichettato IL-6 &egrave; stato incubato con particelle di sostanza adsorbente e CLSM &egrave; stato utilizzato per quantificare profili spaziali adsorbimento del-6 all&#39;interno della matrice assorbente. Adsorbimento del-6 &egrave; stato limitato all&#39;esterno microm 15 della particella assorbente per un periodo di tempo clinici rilevanti, e intraparticle dinamiche di adsorbimento &egrave; stato modellato utilizzando meccanismi di adsorbimento/diffusione classica. Un parametro di modello unico, alfa = q(max) K/D, &egrave; stato stimato di montaggio profili intensit&agrave; CLSM al nostro modello matematico, dove q(max) e K sono i parametri di isoterma di adsorbimento Langmuir, e D &egrave; il coefficiente di diffusione efficace di IL-6 all&#39;interno della matrice assorbente. Dato il grande diametro delle nostre perle mezzo adsorbente (450 microm), meno del 20% della superficie assorbente disponibile partecipa a cytokine adsorbimento. Lo sviluppo di piccole perline pu&ograve; accelerare la citochina adsorbimento massimizzando la superficie disponibile per tallone massa.

Dinamiche di adsorbimento del-6 in perline hemoadsorption studiato utilizzando laser confocale microscopia a scansione.

&#x6557;&#x8840;&#x75C7;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5168;&#x8EAB;&#x6027;&#x708E;&#x75C7;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x81D3;&#x5668;&#x969C;&#x5BB3;&#x3084;&#x6B7B;&#x306B;&#x81F3;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5FAA;&#x74B0;&#x8840;&#x6DB2;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306F;&#x3001;&#x91CD;&#x75C7;&#x6557;&#x8840;&#x75C7;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x4F53;&#x9069;&#x5408;&#x6027;&#x3001;&#x4F7F;&#x7528;&#x8840;&#x6DB2;&#x304B;&#x3089;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x5438;&#x7740;&#x5264;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x4F53;&#x5916;&#x306E; hemoadsorption &#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x8D70;&#x67FB;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; (CLSM) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; &#xFF08;IL-6&#xFF09; &#x5185; hemoadsorption &#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x5438;&#x7740;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x76F4;&#x63A5;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58; IL 6 &#x53CE;&#x7740;&#x5264;&#x7C92;&#x5B50;&#x3092;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x3001;CLSM &#x53CE;&#x7740;&#x5264;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5185;&#x7A7A;&#x9593;&#x5438;&#x7740;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB; il-6 &#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;IL 6 &#x5438;&#x7740;&#x306F;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x81E8;&#x5E8A;&#x671F;&#x9593;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3001;&#x5438;&#x7740;&#x5264;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x306E; 15 microm &#x306B;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x7C92;&#x5B50;&#x5185;&#x5438;&#x7740;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306B;&#x53E4;&#x5178;&#x306E;&#x5438;&#x7740;&#x30FB;&#x62E1;&#x6563;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; q(max) K/D =, CLSM &#x306E;&#x5F37;&#x5EA6;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306B;&#x3069;&#x3053; q(max) &#x3068; K &#x306F; Langmuir &#x5438;&#x7740;&#x7B49;&#x6E29;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068; D &#x306F; il-6 &#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x62E1;&#x6563;&#x4FC2;&#x6570;&#x53CE;&#x7740;&#x5264;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5185;&#x3001;&#x6570;&#x7406;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x3042;&#x3066;&#x306F;&#x3081;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;(450 Microm&#xFF09; &#x306E;&#x5438;&#x7740;&#x6355;&#x96C6;&#x306E;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306F;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x76F4;&#x5F84;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3001;&#x53EF;&#x80FD;&#x53CE;&#x7740;&#x5264;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x9762;&#x7A4D;&#x306E; 20 &#xFF05; &#x672A;&#x6E80;&#x306F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x5438;&#x7740;&#x3092;&#x53C2;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x30D3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3042;&#x305F;&#x308A;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x8868;&#x9762;&#x7A4D;&#x3092;&#x6700;&#x5927;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x5438;&#x7740;&#x52A0;&#x901F;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x8CEA;&#x91CF;&#x3002;

&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; hemoadsorption &#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3067; IL 6 &#x5438;&#x7740;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#xD328; &#xD608; &#xC99D; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xC5FC;&#xC99D; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xBC0F; &#xAE30;&#xAD00; &#xC2E4;&#xD328;&#xC640; &#xC8FD;&#xC74C; &#xADC0; &#xCC29;&#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC21C;&#xD658; &#xD608;&#xC561; &#xC73C;&#xB85C;&#xBD80;&#xD130; cytokines &#xB4F1; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xB294; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xD328; &#xD608; &#xC99D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xB9DD; &#xCE58;&#xB8CC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD608;&#xC561; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38; sorbent &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; cytokines&#xB97C; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xB294; &#xACFC;&#xD559;&#xAE30;&#xC220;&#xCC98; hemoadsorption &#xC7A5;&#xCE58; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC9C1;&#xC811; cytokine (&#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-6) hemoadsorption &#xBE44;&#xC988; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD761;&#xCC29; &#xC5ED;&#xD559; &#xAC80;&#xC0AC; confocal &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; (CLSM)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Sorbent &#xC785;&#xC790;&#xC640; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-6&#xB294; incubated &#xB193;&#xC5EC;&#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xBD84;&#xB958; &#xBC0F; CLSM sorbent &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB0B4;&#xC758; IL-6 &#xACF5;&#xAC04; &#xD761;&#xCC29; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC744; &#xACC4;&#xB7C9; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C;. IL 6 &#xD761;&#xCC29; &#xAD00;&#xB828; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; sorbent &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xC678;&#xBD80; 15 microm&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; intraparticle &#xD761;&#xCC29; &#xC5ED;&#xD559; &#xD074;&#xB798;&#xC2DD; &#xD761;&#xCC29;/&#xD655;&#xC0B0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC54C;&#xD30C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBAA8;&#xB378; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; = q(max) K/D, CLSM &#xAC15;&#xB3C4; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC218;&#xD559;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378;, q(max) &#xBC0F; K&#xB294; Langmuir &#xD761;&#xCC29; &#xB4F1;&#xC628;&#xC120; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; D&#xB294; sorbent &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB0B4;&#xC758; IL 6&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xD655;&#xC0B0; &#xACC4;&#xC218;&#xB97C; &#xB9DE;&#xCD94;&#xC5B4; &#xCD94;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; sorbent &#xAD6C;&#xC2AC; (450 microm)&#xC758; &#xD070; &#xC9C1;&#xACBD;&#xC744; &#xAC10;&#xC548;&#xD560; &#xB54C;, &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; sorbent &#xD45C;&#xBA74;&#xC801;&#xC758; 20% &#xBBF8;&#xB9CC; cytokine &#xD761;&#xCC29;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC791;&#xC740; &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xAD6C;&#xC2AC; &#xB2F9; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD45C;&#xBA74;&#xC801;&#xC744; &#xADF9;&#xB300;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; cytokine &#xD761;&#xCC29;&#xC744; &#xAC00;&#xC18D;&#xD654;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB300;&#xB7C9;.

Hemoadsorption &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC758; IL 6 &#xD761;&#xCC29; &#xC5ED;&#xD559; &#xACF5;&#xBD80; confocal &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;.

Sepsis se caracteriza por una respuesta inflamatoria sist&eacute;mica causada por la infecci&oacute;n y puede resultar en muerte y falta del &oacute;rgano. Eliminaci&oacute;n de mediadores inflamatorios como las citoquinas de la sangre circulante es un tratamiento prometedor para la sepsis grave. Estamos desarrollando un dispositivo hemoadsorption extracorp&oacute;rea para quitar citoquinas de la sangre usando biocompatible, granos absorbente pol&iacute;mero. En este estudio, utilizamos l&aacute;ser confocal de microscop&iacute;a (CLSM) para examinar directamente la din&aacute;mica de la adsorci&oacute;n de una citoquina (IL-6) en granos de hemoadsorption. Etiquetado fluorescente IL-6 se incub&oacute; con part&iacute;culas absorbentes y CLSM fue utilizada para cuantificar perfiles de adsorci&oacute;n espacial de IL-6 dentro de la matriz absorbente. Adsorci&oacute;n de IL-6 se limitaba a la microm 15 exterior de la part&iacute;cula absorbente durante un per&iacute;odo de tiempo cl&iacute;nico relevante, y din&aacute;mica de adsorci&oacute;n de intraparticle fue modelado usando mecanismos de adsorci&oacute;n/difusi&oacute;n cl&aacute;sica. Un par&aacute;metro de modelo &uacute;nico, alfa = q(max) K/D, se estima ajustando los perfiles de intensidad CLSM a nuestro modelo matem&aacute;tico, donde q(max) y K son par&aacute;metros de isotermas de adsorci&oacute;n de Langmuir, y D es el coeficiente de difusi&oacute;n efectiva de IL-6 dentro de la matriz absorbente. Dado el gran di&aacute;metro de nuestros granos absorbentes (450 microm), menos del 20% de la superficie absorbente disponible participa en la adsorci&oacute;n de citoquinas. Desarrollo de granos m&aacute;s peque&ntilde;os puede acelerar cytokine adsorci&oacute;n maximizando la superficie disponible por grano de masa.

Din&aacute;mica de la adsorci&oacute;n de IL-6 en los granos hemoadsorption estudiada mediante microscop&iacute;a l&aacute;ser confocal de.

&#x6797;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;Lhx1&#xFF0C;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4E86;&#x65E9;&#x671F;&#x7684; gastrulation &#x7EC6;&#x80DE;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3001; &#x80BE;&#x810F;&#x5668;&#x5B98;&#x53D1;&#x751F;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x5728;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x5F0F;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x89C4;&#x5F8B;&#x3002;&#x8DDF;&#x968F;&#x8FD9;&#x6D3B;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684; lhx1a &#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x533A;&#x57DF;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0B;&#x521B;&#x5EFA;&#x8868;&#x793A;&#x589E;&#x5F3A;&#x578B;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (EGFP) &#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x3002;Tg(lhx1a:EGFP)(pt303) &#x7EAA;&#x8981;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; lhx1a &#x5F00;&#x59CB;&#x65E9;&#x671F;&#x539F;&#x80A0;&#x9636;&#x6BB5;&#x901A;&#x8FC7; 72 &#x5C0F;&#x65F6;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x4EC5;&#x6709;&#x5C11;&#x6570;&#x4F8B;&#x5916;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8282;&#x70B9;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#xFF0C;ndr1&#xFF0C;&#x8FC7;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x76F8;&#x5E94;&#x6269;&#x5927;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; lhx1a &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E0E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242; Nodal &#x4FE1;&#x53F7;&#x3001; SB-431542&#xFF0C;Tg(lhx1a:EGFP)(pt303) &#x80DA;&#x80CE;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; lhx1a &#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E; Tg(lhx1a:EGFP)(pt303) &#x76D1;&#x7BA1;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; lhx1a&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5229;&#x7528;&#x6B64;&#x8BB0;&#x8005;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x76D1;&#x6D4B; lhx1a &#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x5F88;&#x591A;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5316;&#x5B66;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x7B5B;&#x67E5;&#x3002;

Lhx1a &#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x4E2D;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8BB0;&#x8005;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

The LIM-domain containing transcription factor, Lhx1, is involved in the regulation of early gastrulation cell movements, kidney organogenesis and other processes in vertebrate model organisms. To follow the expression of this gene in live embryos, we created transgenic zebrafish expressing enhanced green fluorescent protein (EGFP) under the control of lhx1a regulatory regions. Tg(lhx1a:EGFP)(pt303) recapitulates the expression of endogenous lhx1a beginning at early gastrula stages through 72 hours of development with only few exceptions. In addition, over-expression of the Nodal ligand, ndr1, results in the concomitant expansion of the transgene and endogenous lhx1a expression. Treatment of Tg(lhx1a:EGFP)(pt303) embryos with the small molecule SB-431542, an inhibitor of Nodal signaling, results in the loss of both transgene and endogenous lhx1a expression. These experiments suggest that Tg(lhx1a:EGFP)(pt303) is regulated in a manner similar to endogenous lhx1a. Therefore, this reporter can be utilized not only for monitoring lhx1a expression, but also for numerous applications, including chemical genetics screening.

Characterization of an lhx1a transgenic reporter in zebrafish.

Le facteur de transcription LIM-domaine contenant, Lhx1, est impliqu&#xE9;e dans la r&#xE9;gulation des premiers mouvements cellulaires gastrulation, l&#x26;#39;organogen&#xE8;se r&#xE9;nale et d&#x26;#39;autres processus dans les organismes mod&#xE8;les vert&#xE9;br&#xE9;s. Pour suivre l&#x26;#39;expression de ce g&#xE8;ne dans les embryons vivants, nous avons cr&#xE9;&#xE9; le poisson-z&#xE8;bre transg&#xE9;nique exprimant la prot&#xE9;ine fluorescente verte am&#xE9;lior&#xE9;e (EGFP) sous le contr&#xF4;le des r&#xE9;gions lhx1a r&#xE9;glementaires. TG (lhx1a: EGFP) (pt303) r&#xE9;capitule l&#x26;#39;expression de d&#xE9;but lhx1a endog&#xE8;ne &#xE0; des stades gastrula par 72 heures de d&#xE9;veloppement avec quelques exceptions pr&#xE8;s. En outre, la surexpression du ligand Nodal, NDR1, les r&#xE9;sultats de l&#x26;#39;expansion concomitante du transg&#xE8;ne et l&#x26;#39;expression lhx1a endog&#xE8;ne. Traitement de Tg (lhx1a: EGFP) (pt303) embryons avec la petite mol&#xE9;cule SB-431542, un inhibiteur de la signalisation Nodal, entra&#xEE;ne la perte des deux transg&#xE8;ne et d&#x26;#39;expression lhx1a endog&#xE8;nes. Ces exp&#xE9;riences sugg&#xE8;rent que Tg (lhx1a: EGFP) (pt303) est r&#xE9;gl&#xE9;e d&#x26;#39;une mani&#xE8;re similaire &#xE0; lhx1a endog&#xE8;ne. Par cons&#xE9;quent, ce journaliste peut &#xEA;tre utilis&#xE9; non seulement pour la surveillance lhx1a expression, mais aussi pour de nombreuses applications, y compris le d&#xE9;pistage g&#xE9;n&#xE9;tique chimique.

Caract&#xE9;risation d&#x26;#39;un journaliste Lhx1a transg&#xE9;nique chez le poisson z&#xE8;bre

LIM-Dom&auml;ne enthaltenden Transkriptionsfaktors, Lhx1, ist die Regulierung der fr&uuml;hen Gastrulation Zelle Bewegungen, Niere Organogenese und andere Prozesse in vertebrate Modellorganismen beteiligt. Um den Ausdruck des Gens in live Embryonen zu folgen, haben wir unter der Kontrolle der lhx1a regelnde Regionen transgene Zebrafisch Ausdr&uuml;cken verbessertes gr&uuml;nes fluoreszierendes Protein (EGFP) erstellt. TG(lhx1a:EGFP)(pt303) rekapituliert den Ausdruck des endogenen lhx1a Anfang im Fr&uuml;hstadium der Gastrula bis 72 Stunden nach der Entwicklung mit nur wenigen Ausnahmen. Dar&uuml;ber hinaus f&uuml;hrt &Uuml;berexpression des Nodal Liganden, ndr1, die damit einhergehende Erweiterung des Transgens und endogene lhx1a Ausdruck. Behandlung von Tg(lhx1a:EGFP)(pt303) Embryonen mit dem kleinen Molek&uuml;l SB-431542, ein Inhibitor der Nodal Signalling, f&uuml;hrt zum Verlust des Transgens und endogene lhx1a Ausdruck. Diese Experimente deuten darauf hin, dass Tg(lhx1a:EGFP)(pt303) &auml;hnlich wie bei endogenen lhx1a geregelt ist. Daher kann diese Reporter nicht nur f&uuml;r die &Uuml;berwachung der lhx1a Ausdruck, sondern auch f&uuml;r zahlreiche Anwendungen, einschlie&szlig;lich Chemische Genetik Screening genutzt werden.

Charakterisierung eines transgenen lhx1a-Reporter im Zebrafisch.

Il fattore di trascrizione che contengono LIM-dominio, Lhx1, &egrave; coinvolto nella regolazione dei primi movimenti di cella di gastrulazione, organogenesi renale e altri processi in organismi modello vertebrati. Per seguire l&#39;espressione di questo gene in embrioni vivi, abbiamo creato zebrafish transgenici che esprimono la proteina fluorescente verde migliorata (EGFP) sotto il controllo delle regioni regolamentare lhx1a. TG(lhx1a:EGFP)(pt303) ricapitola l&#39;espressione di lhx1a endogeni inizio alle prime fasi di gastrula attraverso 72 ore di sviluppo con solo poche eccezioni. Inoltre, sovraespressione del legante nodale, ndr1, provoca la concomitante espansione del transgene ed espressione di lhx1a endogeni. Trattamento degli embrioni Tg(lhx1a:EGFP)(pt303) con la piccola molecola SB-431542, un inibitore di Nodal segnalazione, provoca la perdita del transgene sia endogeni lhx1a espressione. Questi esperimenti suggeriscono che Tg(lhx1a:EGFP)(pt303) &egrave; regolato in maniera simile a lhx1a endogena. Pertanto, questo reporter pu&ograve; essere utilizzato non solo per il monitoraggio lhx1a espressione, ma anche per numerose applicazioni, tra cui lo screening chimico genetica.

Caratterizzazione di un reporter transgenici lhx1a nello zebrafish.

LIM&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001;Lhx1&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x539F;&#x8178;&#x9665;&#x5165;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x3001;&#x814E;&#x81D3;&#x306E;&#x5668;&#x5B98;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;lhx1a&#x8ABF;&#x7BC0;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;&#x3067;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;EGFP&#xFF09;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; TG&#xFF08;lhx1a&#xFF1A;EGFP&#xFF09;&#xFF08;pt303&#xFF09;&#x53CD;&#x5FA9;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x5C11;&#x6570;&#x306E;&#x4F8B;&#x5916;&#x3092;&#x9664;&#x3044;&#x3066;&#x958B;&#x767A;&#x306E;72&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x539F;&#x8178;&#x80DA;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;lhx1a&#x958B;&#x59CB;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3002;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;NDR1&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;lhx1a&#x5F0F;&#x306E;&#x4F75;&#x7528;&#x62E1;&#x5927;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3002;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;SB-431542&#x3001;Nodal&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;lhx1a&#x5F0F;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#xFF08;pt303&#xFF09;&#x80DA;&#xFF1A;TG&#xFF08;EGFP lhx1a&#xFF09;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3002; &#xFF08;pt303&#xFF09;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;lhx1a&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#xFF1A;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306F;&#x3001;Tg&#xFF08;EGFP lhx1a&#xFF09;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;lhx1a&#x5F0F;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Lhx1a&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;

&#xC784; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD3EC;&#xD568; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790;, Lhx1, &#xADDC;&#xC81C; &#xCD08;&#xAE30; gastrulation &#xC140;&#xC758; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;, &#xC2E0;&#xC7A5; organogenesis &#xBC0F; &#xCC99;&#xCD94; &#xBAA8;&#xD615; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xC5EC;. &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xD0DC;&#xC544;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;, lhx1a &#xADDC;&#xC81C; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xAD00;&#xB9AC; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (EGFP)&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; zebrafish&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Tg(lhx1a:EGFP)(pt303) &#xC0DD; lhx1a &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC608;&#xC678;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; 72 &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC774;&#xB978; gastrula &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, ndr1, &#xAFB8;&#xBC85;&#xAFB8;&#xBC85; &#xC878; &#xAE30; ligand&#xC758; over-expression transgene &#xC0DD; lhx1a &#xC2DD; &#xC218; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; &#xD655;&#xC7A5; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638;, Nodal &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; SB 431542&#xC640; Tg(lhx1a:EGFP)(pt303) &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; transgene &#xBC0F; &#xC0DD; lhx1a &#xC2DD;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xACB0;&#xACFC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8; Tg(lhx1a:EGFP)(pt303) &#xC0DD; lhx1a &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;,&#xC774; &#xAE30;&#xC790; &#xD654;&#xD559; &#xC720;&#xC804;&#xD559; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; lhx1a &#xC2DD; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC774;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;.

Zebrafish&#xC5D0;&#xC11C; lhx1a &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El factor de transcripci&#xF3;n del dominio LIM-que contiene, Lhx1, est&#xE1; implicada en la regulaci&#xF3;n de los primeros movimientos de gastrulaci&#xF3;n celulares, organog&#xE9;nesis del ri&#xF1;&#xF3;n y otros procesos en organismos modelo de vertebrados. Para seguir la expresi&#xF3;n de este gen en los embriones vivos, hemos creado el pez cebra transg&#xE9;nico que expresa aumento de prote&#xED;na verde fluorescente (EGFP) bajo el control de regiones reguladoras lhx1a. Tg (lhx1a: EGFP) (pt303) recapitula la expresi&#xF3;n de los principios lhx1a end&#xF3;gena en las etapas g&#xE1;strula temprana a trav&#xE9;s de las 72 horas de desarrollo, con pocas excepciones. Adem&#xE1;s, la sobre-expresi&#xF3;n del ligando nodal, ndr1, da como resultado la expansi&#xF3;n concomitante del transg&#xE9;n y expresi&#xF3;n lhx1a end&#xF3;geno. Tratamiento de la Tg (lhx1a: EGFP) (pt303) los embriones con la mol&#xE9;cula peque&#xF1;a SB-431542, un inhibidor de Nodal de se&#xF1;alizaci&#xF3;n, se traduce en la p&#xE9;rdida de ambos y la expresi&#xF3;n del transgen lhx1a end&#xF3;gena. Estos experimentos sugieren que la Tg (lhx1a: EGFP) (pt303) es regulado de una manera similar a lhx1a end&#xF3;geno. Por lo tanto, este reportero puede utilizarse no s&#xF3;lo para vigilar expresi&#xF3;n lhx1a, sino tambi&#xE9;n para numerosas aplicaciones, incluyendo qu&#xED;mica de detecci&#xF3;n gen&#xE9;tica.

Caracterizaci&#xF3;n de un reportero en el pez cebra transg&#xE9;nico Lhx1a

&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x6709;&#x7275;&#x8FDE; (TJ) &#x7D27;&#x5BC6;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x5C01;&#x95ED;&#x86CB;&#x767D; (OCLN) &#x4E3A;&#x4E19;&#x578B;&#x809D;&#x708E;&#x75C5;&#x6BD2; (HCV) &#x8FDB;&#x5165;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x6DF1;&#x5165; OCLN &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4E19;&#x578B;&#x809D;&#x708E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6761;&#x76EE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x7EC4;&#xFF0C;OCLN &#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53D1;&#x73B0;&#x800C;&#x4E0D;&#x635F;&#x5BB3; OCLN &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#xFF0C;&#x53BB;&#x9664;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x73AF; 2 (EL2) OCLN &#x53D6;&#x6D88;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x80FD;&#x591F;&#x8C03;&#x89E3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;-&#x4E19;&#x578B;&#x809D;&#x708E;&#x75C5;&#x6BD2; pseudotypes (HCVpp) &#x7684;&#x6761;&#x76EE;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5176; coprecipitate &#x4E19;&#x578B;&#x809D;&#x708E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; E2 &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4; OCLN EL2&#xFF0C;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x65E0;&#x6CD5;&#x53EF;&#x9760;&#x5730;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; E2 &#xFF08;sE2&#xFF09; &#x5728;&#x4E0B;&#x62C9;&#x83DC;&#x5355;&#x5316;&#x9A8C;&#x3002;&#x968F;&#x540E;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x53D1;&#x73B0; OCLN &#x5F62;&#x6210;&#x590D;&#x6742; Dynamin II&#xFF0C;&#x91CD;&#x8981;&#x86CB;&#x767D;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x4E0E; EL2 &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;HCVpp&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6587;&#x5316;&#x6210;&#x957F;&#x4E19;&#x578B;&#x809D;&#x708E;&#x75C5;&#x6BD2; (HCVcc)&#xFF0C;&#x662F;&#x654F;&#x611F;&#x5230; Dynamin &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x6216;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA; OCLN EL2 &#x89C4;&#x5B9A;&#x7684;&#x4E19;&#x578B;&#x809D;&#x708E;&#x75C5;&#x6BD2; Dynamin &#x4F9D;&#x8D56;&#x9879;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;OCLN &#x53EF;&#x4EE5;&#x51FD;&#x6570;&#x6765;&#x5F25;&#x5408; Dynamin &#x4F9D;&#x8D56;&#x541E;&#x673A;&#x6784; virions&#x3002;

&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x80DE;&#x5916;&#x5FAA;&#x73AF;&#x6307;&#x793A; Occludin &#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E19;&#x578B;&#x809D;&#x708E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5165;&#x5883;&#x3002;

Recent findings have implicated tight junction (TJ) protein Occludin (OCLN) as an essential factor for hepatitis C virus (HCV) to enter human hepatocytes. To gain insights into OCLN-mediated HCV entry, we created a panel of OCLN deletion mutants and found that without impairing OCLN's cell surface localization, removal of the extracellular loop 2 (EL2) from OCLN abolished both its ability to mediate HIV-HCV pseudotypes' (HCVpp) entry as well as its ability to coprecipitate HCV glycoprotein E2. Recombinant OCLN EL2, however, failed to robustly bind soluble E2 (sE2) in pull-down assays. Subsequent studies revealed that OCLN formed complex with Dynamin II, an important GTPase for endocytosis, in an EL2-dependent fashion. HCVpp, as well as cell culture grown HCV (HCVcc), was sensitive to Dynamin knockdown or inhibition. We conclude that OCLN EL2 dictates the Dynamin-dependent HCV entry. Furthermore, OCLN could function to bridge virions to Dynamin-dependent endocytic machineries.

The second extracellular loop dictates Occludin-mediated HCV entry.

Des d&eacute;couvertes r&eacute;centes ont impliqu&eacute;s des prot&eacute;ines de jonction serr&eacute;e (TJ) Occludin (OCLN) comme un facteur essentiel pour l&#39;h&eacute;patite C (VHC) pour entrer dans les h&eacute;patocytes humains. Mieux comprendre entr&eacute;e OCLN-mediated VHC, nous a cr&eacute;&eacute; un groupe de mutants de d&eacute;l&eacute;tion OCLN et constat&eacute; que sans nuire &agrave; localisation surface de cellule de OCLN, soustraire de la boucle extracellulaire 2 (EL2) OCLN aboli les deux sa capacit&eacute; de provoquer des pseudotypes VIH-VHC (HCVpp) entr&eacute;e ainsi que sa capacit&eacute; &agrave; coprecipitate glycoprot&eacute;ine VHC E2. Recombinant OCLN EL2, cependant, n&#39;a pas pu lier solidement E2 soluble (sE2) dans des essais de pull-down. Des &eacute;tudes ult&eacute;rieures a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que OCLN form&eacute;e complexe avec la dynamine II, une GTPase important pour l&#39;endocytose, de fa&ccedil;on d&eacute;pendante EL2. HCVpp, ainsi que cell culture cultiv&eacute; VHC (HCVcc), est sensible &agrave; la dynamine knockdown ou d&#39;inhibition. Nous concluons que OCLN EL2 dicte &agrave; l&#39;entr&eacute;e du VHC de la dynamine-d&eacute;pendante. En outre, OCLN pourrait fonctionner pour combler des virions de machineries endocytose dynamine-d&eacute;pendante.

La deuxi&egrave;me boucle extracellulaire dicte entr&eacute;e VHC induite par le Occludin.

Neuere Befunde haben tight Junction (TJ) Protein verwickelt Occludin (OCLN) als einen wesentlichen Faktor f&uuml;r Hepatitis-C-Virus (HCV) menschliche Hepatozyten eingeben. Um tiefere Einblicke in OCLN-vermittelte HCV-Eintrag, wir erstellt ein Panel von OCLN L&ouml;schung Mutanten und festgestellt, dass ohne Beeintr&auml;chtigung OCLNs Zelle Oberfl&auml;che Lokalisierung, Entfernung der extrazellul&auml;re Schleife 2 (EL2) aus OCLN beide seine F&auml;higkeit zur HIV-HCV-Pseudotypes (HCVpp) vermitteln abgeschafft Einreise sowie seine F&auml;higkeit, HCV-Glykoprotein E2 coprecipitate. Rekombinante OCLN EL2, konnte jedoch robust binden l&ouml;sliche E2 (sE2) bei Pulldown-Assays. Sp&auml;tere Studien ergab, dass OCLN Komplex mit Dynamin II, eine wichtige GTPase f&uuml;r Endozytose, EL2-abh&auml;ngigen Weise gebildet. HCVpp sowie Zelle Kultur angebaut HCV (HCVcc), war empfindlich auf Dynamin Niederschlag oder Hemmung. Wir schlie&szlig;en, dass OCLN EL2 Dynamin-abh&auml;ngige HCV-Eintrag diktiert. Dar&uuml;ber hinaus konnte OCLN funktionieren, um Virionen zu Dynamin-abh&auml;ngige endocytic Maschinerien zu &uuml;berbr&uuml;cken.

Die zweite extrazellul&auml;re Schleife diktiert Occludin-vermittelte HCV-Eintrag.

Recenti scoperte hanno implicato proteina stretta giunzione (TJ) Occludin (OCLN) come un fattore essenziale per il virus dell&#39;epatite C (HCV) per entrare negli epatociti umani. Per acquisire conoscenze in entrata OCLN-mediata HCV, abbiamo creato un gruppo di mutanti di delezione di OCLN e trovato che senza compromettere la localizzazione superficiale di cellule di OCLN, rimozione del ciclo extracellulare 2 (EL2) da OCLN abolita sia la capacit&agrave; di mediare pseudotypes HIV-HCV&#39; (HCVpp) voce cos&igrave; come la sua capacit&agrave; di coprecipitate glicoproteina HCV E2. Ricombinante OCLN EL2, tuttavia, non &egrave; riuscito a bind robustamente E2 solubile (sE2) in saggi di pull-down. Studi successivi hanno rivelato che OCLN formano complessi con Dynamin II, un importante GTPase per endocitosi, in maniera EL2-dipendente. HCVpp, come pure delle cellule cultura cresciuta HCV (HCVcc), era sensibile alle Dynamin atterramento o inibizione. Concludiamo che OCLN EL2 impone la voce HCV Dynamin-dipendente. Inoltre, OCLN potrebbe funzionare per colmare i virioni per macchinari endocitico Dynamin-dipendente.

Nel secondo ciclo extracellulare detta voce HCV Occludin-mediata.

&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; (TJ) &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x95A2;&#x4E0E;&#x30FB; &#x30AA;&#x30AF;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3; &#xFF08;OCLN&#xFF09; C &#x578B;&#x809D;&#x708E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#xFF08;HCV&#xFF09; &#x3072;&#x3068;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x8981;&#x7D20;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3002;OCLN &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F; HCV &#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x306B;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;OCLN &#x6B20;&#x5931;&#x5909;&#x7570;&#x682A;&#x306E;&#x30D1;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x3001;OCLN &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x304C; OCLN &#x304B;&#x3089;&#x9664;&#x53BB; &#xFF08;EL2&#xFF09; &#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; 2 &#x306E;&#x7591;&#x4F3C;&#x578B; HIV HCV (HCVpp) &#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x4E21;&#x65B9;&#x80FD;&#x529B;&#x5EC3;&#x6B62;&#x767A;&#x898B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3068;&#x3057;&#x3066; HCV &#x306E; E2 &#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x3092; coprecipitate &#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; OCLN EL2 &#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x305F;&#x9811;&#x5065;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; E2 &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B; (sE2) &#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x7814;&#x7A76; OCLN&#x3001;EL2 &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3; ii &#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306E; GTPase &#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B; HCVpp&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x3057;&#x305F; c &#x578B;&#x809D;&#x708E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (HCVcc) &#x6587;&#x5316;&#x3001;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3; &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3084;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;OCLN EL2 &#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x578B; HCV &#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;OCLN &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306B;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30B8;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; Occludin &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B; HCV &#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAE34;&#xBC00; &#xC811;&#xD569; (TJ) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5F0;&#xB8E8;&#xB294; Occludin (OCLN) C &#xD615; &#xAC04;&#xC5FC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (HCV) &#xC778;&#xAC04;&#xC758; hepatocytes &#xC785;&#xB825;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC218; &#xC694;&#xC18C;&#xB85C;. HCV OCLN &#xC911;&#xC7AC; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC5BB;&#xC73C;&#xB824;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; OCLN &#xC0AD;&#xC81C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD328;&#xB110;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; OCLN&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xC81C;&#xAC70; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB8E8;&#xD504; 2 (EL2) OCLN&#xC5D0;&#xC11C; HIV HCV pseudotypes&#39; (HCVpp)&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBAA8;&#xB450; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC73C;&#xB85C; HCV &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; E2 coprecipitate &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; OCLN EL2,, &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xC6A9; &#xD574; e 2&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; (sE2) &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xD6C4;&#xC18D; &#xC5F0;&#xAD6C; OCLN EL2 &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; Dynamin ii, endocytosis&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; GTPase &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; HCVpp, &#xC7AC;&#xBC30; HCV (HCVcc) &#xBB38;&#xD654;, &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; Dynamin &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xB610;&#xB294; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xB294;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; OCLN EL2 Dynamin &#xC885;&#xC18D; HCV &#xD56D;&#xBAA9; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xACB0;&#xB860;. &#xB610;&#xD55C;, OCLN virions Dynamin &#xC885;&#xC18D; endocytic &#xAE30;&#xACC4;&#xB97C; &#xB2E4;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC791;&#xB3D9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB8E8;&#xD504; HCV Occludin &#xC911;&#xC7AC; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC744; &#xC9C0;&#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Descubrimientos recientes han implicado prote&iacute;na apretada ensambladura (TJ) Occludin (OCLN) como un factor esencial para el virus de la hepatitis C (VHC) para entrar en hepatocitos humanos. Para hacerse una idea en la entrada de OCLN mediada por VHC, hemos creado un grupo de mutantes de deleci&oacute;n de OCLN y encontr&oacute; que sin alterar la localizaci&oacute;n superficial de la c&eacute;lula de OCLN, retiro del lazo extracelular 2 (EL2) de OCLN suprimido tanto su capacidad para mediar pseudotypes&#39; VIH-VHC (HCVpp) entrada, as&iacute; como su capacidad coprecipita glicoprote&iacute;na HCV E2. EL2 de OCLN recombinante, sin embargo, no enlazar robusta soluble E2 (sE2) en ensayos de pull-down. Estudios posteriores revelaron que OCLN forma complejo con Dinamina II, una GTPasa importante por endocitosis, en una forma dependiente del EL2. HCVpp, as&iacute; como c&eacute;lulas cultivada HCV (HCVcc) de la cultura, fue sensible a la ca&iacute;da de la Dinamina o inhibici&oacute;n. Concluimos que OCLN EL2 dicta la entrada HCV Dinamina-dependiente. Adem&aacute;s, OCLN podr&iacute;a funcionar para unir los viriones a maquinarias endoc&iacute;ticas Dinamina-dependiente.

El segundo bucle extracelular dicta entrada Occludin mediada por VHC.

The ubiquitous fungus Aspergillus fumigatus is associated with chronic diseases such as invasive pulmonary aspergillosis in immunosuppressed patients and allergic bronchopulmonary aspergillosis (ABPA) in patients with cystic fibrosis or severe asthma. Because of constant exposure to this fungus, it is critical for the host to exercise an immediate and decisive immune response to clear fungal spores to ward off disease. In this study, we observed that rapidly after infection by A. fumigatus, alveolar macrophages predominantly express Arginase 1 (Arg1), a key marker of alternatively activated macrophages (AAMs). The macrophages were also found to express Ym1 and CD206 that are also expressed by AAMs but not NOS2, which is expressed by classically activated macrophages. The expression of Arg1 was reduced in the absence of the known signaling axis, IL-4RÎ±/STAT6, for AAM development. While both Dectin-1 and TLR expressed on the cell surface have been shown to sense A. fumigatus, fungus-induced Arg1 expression in CD11c(+) alveolar macrophages was not dependent on either Dectin-1 or the adaptor MyD88 that mediates intracellular signaling by most TLRs. Alveolar macrophages from WT mice efficiently phagocytosed fungal conidia, but those from mice deficient in Dectin-1 showed impaired fungal uptake. Depletion of macrophages with clodronate-filled liposomes increased fungal burden in infected mice. Collectively, our studies suggest that alveolar macrophages, which predominantly acquire an AAM phenotype following A. fumigatus infection, have a protective role in defense against this fungus.

Rapid host defense against Aspergillus fumigatus involves alveolar macrophages with a predominance of alternatively activated phenotype.

L&#39;omnipr&eacute;sent champignon Aspergillus fumigatus est associ&eacute;e &agrave; des maladies chroniques telles que l&#39;aspergillose pulmonaire invasive chez les patients immunod&eacute;prim&eacute;s et Aspergillose bronchopulmonaire allergique (ABPA) chez les patients atteints de fibrose kystique ou l&#39;asthme s&eacute;v&egrave;re. En raison de l&#39;exposition constante &agrave; ce champignon, il est essentiel pour l&#39;h&ocirc;te &agrave; exercer une immunor&eacute;action imm&eacute;diate et d&eacute;cisive pour effacer les spores fongiques pour &eacute;loigner la maladie. Dans cette &eacute;tude, nous avons observ&eacute; que rapidement apr&egrave;s l&#39;infection par a. fumigatus, les macrophages alv&eacute;olaires surtout expriment Arginase 1 (Arg1), un marqueur des macrophages activ&eacute;s alternativement (AAMs). Les macrophages se retrouvent &eacute;galement &agrave; exprimer Ym1 et CD206 qui sont &eacute;galement exprim&eacute;es par AAMs mais pas NOS2, qui s&#39;exprime par les macrophages activ&eacute;s de fa&ccedil;on classique. L&#39;expression de Arg1 a &eacute;t&eacute; r&eacute;duite en l&#39;absence de l&#39;axe de signalisation connu, IL-4R&alpha;/STAT6, pour le d&eacute;veloppement de l&#39;AAM. Les Dectin-1 et TLR exprim&eacute;e &agrave; la surface de la cellule ont &eacute;t&eacute; montr&eacute; &agrave; sens a. fumigatus, induite par le champignon Arg1 expression dans CD11c(+) macrophages alv&eacute;olaires ne d&eacute;pendait pas Dectin-1 ou de l&#39;adaptateur MyD88 qui m&eacute;die signalisation intracellulaire par les macrophages alv&eacute;olaires pulmonaires TLR. la plupart des souris WT efficacement phagocyt&eacute;s conidies fongiques, mais ceux des souris d&eacute;ficientes en Dectin-1 a montr&eacute; l&#39;absorption fongique avec facult&eacute;s affaiblies. L&#39;appauvrissement des macrophages avec les liposomes remplis de clodronate augment&eacute; fardeau fongique chez les souris infect&eacute;es. Collectivement, nos &eacute;tudes sugg&egrave;rent que les macrophages alv&eacute;olaires, qui surtout acqui&egrave;rent un ph&eacute;notype AAM suite &agrave; une infection d&#39;a. fumigatus, ont un r&ocirc;le protecteur dans la d&eacute;fense contre ce champignon.

D&eacute;fense de l&#39;h&ocirc;te rapide contre Aspergillus fumigatus implique des macrophages alv&eacute;olaires avec une pr&eacute;dominance du ph&eacute;notype alternativement activ&eacute;.

L&#39;onnipresente Fungo Aspergillus fumigatus &egrave; associata a malattie croniche come l&#39;aspergillosi polmonare invasiva in pazienti immunodepressi e aspergillosi broncopolmonare allergica (ABPA) in pazienti con fibrosi cistica o asma grave. A causa della costante esposizione a questo fungo, &egrave; fondamentale per l&#39;host di esercitare una risposta immunitaria immediata e decisiva per eliminare le spore fungine per scongiurare la malattia. In questo studio, abbiamo osservato che rapidamente dopo l&#39;infezione da a. fumigatus, macrofagi alveolari prevalentemente express Arginase 1 (Arg1), un indicatore chiave di macrofagi attivati alternativamente (AAMs). I macrofagi sono stati trovati anche esprimere Ym1 e CD206 che vengono espresse anche da AAMs ma non NOS2, che &egrave; espressa dai macrofagi attivati classicamente. L&#39;espressione di Arg1 &egrave; stato ridotto in assenza dell&#39;asse segnalazione conosciuta, IL-4R&alpha;/STAT6, per lo sviluppo di AAM. Mentre entrambi Dectin-1 e TLR espressi sulla superficie delle cellule hanno dimostrato di senso a. fumigatus, indotta dal fungo Arg1 espressione nella CD11c(+), macrofagi alveolari non era dipendente da Dectin-1 o l&#39;adattatore MyD88 che media intracellulare segnalazione dalla maggior parte dei macrofagi alveolari TLR. da topi WT efficientemente phagocytosed conidi fungine, ma quelli da topi carenti di Dectin-1 ha mostrato ridotta captazione fungine. Deplezione dei macrofagi con liposomi clodronate-riempita aumentato onere fungine nei topi infetti. Collettivamente, i nostri studi suggeriscono che i macrofagi alveolari, che principalmente acquisiscono un fenotipo AAM seguito di infezione da a. fumigatus, hanno un ruolo protettivo nella difesa contro questo fungo.

Difesa ospite rapida contro Aspergillus fumigatus coinvolge macrofagi alveolari con una predominanza di fenotipo in alternativa attivato.

&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (Dc) &#x662F;&#x6700;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x88C5;&#x7532;&#x8FD0;&#x5175;&#x8F66;&#x3002;&#x800C;&#x672A;&#x6210;&#x719F;&#x6811;&#x7A81;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5411;&#x4E0B;&#x8C03;&#x8282; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x7EF4;&#x6301;&#x514D;&#x75AB;&#x8010;&#x53D7;&#xFF0C;&#x6210;&#x719F;&#x7684; DCs &#x4FC3;&#x8FDB;&#x514D;&#x75AB;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6765;&#x6269;&#x5927;&#x5176;&#x804C;&#x80FD;&#xFF0C;&#x533A;&#x8BAE;&#x4F1A;&#x6C9F;&#x901A;&#x4E0E;&#x76F8;&#x90BB;&#x533A;&#x8BAE;&#x4F1A;&#x901A;&#x8FC7;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x8C03;&#x89E3;&#x5458;&#x3001; &#x7535;&#x6C60;&#x4E0E;&#x7535;&#x6C60;&#x63A5;&#x89E6;&#x548C;&#x56CA;&#x6CE1;&#x4EA4;&#x6D41;&#x3002;&#x8F6C;&#x8BA9; nanovesicles &#xFF08;&lt; 100 nm&#xFF09; &#x6765;&#x81EA;&#x541E;&#x9014;&#x5F84; (&#x79F0;&#x4E3A;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;) &#x8868;&#x793A;&#x76F4;&#x6D41;-&#x76F4;&#x6D41;&#x901A;&#x4FE1;&#x7684;&#x65B0;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x5305;&#x542B; exosome &#x7A7F;&#x68AD; Mirna &#x548C; DC &#x529F;&#x80FD;&#x53EF;&#x4EE5;&#x53D7;&#x5916;&#x6E90; Mirna&#xFF0C;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x8868;&#x660E;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7; exosome &#x7A7F;&#x68AD; Mirna&#xFF0C;&#x4ECD;&#x6709;&#x5F85;&#x68C0;&#x9A8C;&#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#x4ECB;&#x5BFC; DC &#x5230; DC &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4ECE; exosome &#x8154; exosome &#x7A7F;&#x68AD; Mirna &#x5BF9;&#x9776;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5C55;&#x793A; DCs &#x91CA;&#x653E;&#x4E0E;&#x533A;&#x8BAE;&#x4F1A;&#x7684;&#x6210;&#x719F;&#x6839;&#x636E;&#x4E0D;&#x540C; Mirna &#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x5916;&#x6765;&#x4F53; Dc &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x81EA;&#x53D1;&#x8F6C;&#x79FB;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x4E0E;&#x533A;&#x8BAE;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x540E;&#x8005;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x878D;&#x5408;&#x8DDF; exosome &#x5185;&#x5BB9;&#x91CA;&#x653E;&#x5230;&#x76F4;&#x6D41;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;exosome &#x7A7F;&#x68AD; Mirna &#x90FD;&#x80FD;&#x8FD0;&#x884C;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x538B;&#x5236;&#x76EE;&#x6807; mRNAs &#x7684; DCs &#x627F;&#x5151;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x516C;&#x5E03; exosome &#x7A7F;&#x68AD; Mirna &#x4F5C;&#x4E3A;&#x901A;&#x4FE1;&#x548C; Dc &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x540E;&#x6C34;&#x5E73;&#x8C03;&#x63A7;&#x624B;&#x6BB5;&#x53CA;&#x5176;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C; DCs &#x4E4B;&#x95F4;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x529F;&#x80FD;&#x6027; Microrna &#x901A;&#x8FC7;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DCs)&#xC740; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; Apc. &#xBBF8; &#xC219; Dc &#xB2E4;&#xC6B4;-&#xADDC;&#xC81C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC751;&#xB2F5; &#xB0B4;&#xBD84;&#xBE44;&#xD559; &#xAD00;&#xC6A9; &#xC720;&#xB3C4;/&#xC720;&#xC9C0;, &#xBC18;&#xBA74; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; DCs &#xBA74;&#xC5ED;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC99D;&#xD3ED;, Dc Dc &#xC131; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;, &#xC140; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xBC0F; &#xC18C;&#xD3EC; &#xAD50;&#xD658; &#xD1B5;&#xD574; &#xC774;&#xC6C3;&#xC640; &#xD1B5;&#xC2E0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Endocytic &#xD1B5;&#xB85C; (exosomes &#xB418; &#xB098;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; nanovesicles (&lt; 100 nm)&#xC758; &#xC774;&#xC804; DC / DC &#xD1B5;&#xC2E0;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC2E4; exosomes &#xD3EC;&#xD568; exosome &#xC154;&#xD2C0; miRNAs DC &#xD568;&#xC218; exogenous Mirnas&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD1B5;&#xC81C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; DC / DC &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; exosome &#xC154;&#xD2C0; miRNAs, &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, exosome &#xB8E8;&#xBA58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140;&#xC758; cytosol exosome &#xC154;&#xD2C0; Mirnas&#xC758; &#xC804;&#xC1A1; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, Dc&#xB294; Dc&#xC758; &#xC131;&#xC219;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB978; Mirnas&#xC640; exosomes &#xCD9C;&#xC2DC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Dc &#xC0AC;&#xC774; exosomes&#xC758; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC778; &#xC774;&#xC804; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;, &#xC6B0;&#xB9AC; exosomes exosome &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xB4A4;&#xC5D0; DC cytosol&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xC0C1; dc&#xAC00; &#xD6C4;&#xC790;&#xC640; &#xC735;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB300;&#xC0C1; mRNAs &#xC218;&#xB77D;&#xC790; Dc&#xC758; &#xC8FC;&#xCCB4; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, exosome &#xC154;&#xD2C0; Mirnas&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; Dc &#xD1B5;&#xC2E0; &#xBC0F; Dc &#xC0AC;&#xC774; posttranscriptional &#xADDC;&#xC81C; &#xC218;&#xB2E8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xC0AC;&#xC774; exosome &#xC154;&#xD2C0; Mirnas&#xC758; &#xC804;&#xC1A1; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C;&#xD560; &#xC608;&#xC815;.

Exosomes &#xD1B5;&#xD574; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; Micrornas&#xC758; &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;.

Dendritic cells (DCs) are the most potent APCs. Whereas immature DCs down-regulate T-cell responses to induce/maintain immunologic tolerance, mature DCs promote immunity. To amplify their functions, DCs communicate with neighboring DCs through soluble mediators, cell-to-cell contact, and vesicle exchange. Transfer of nanovesicles (< 100 nm) derived from the endocytic pathway (termed exosomes) represents a novel mechanism of DC-to-DC communication. The facts that exosomes contain exosome-shuttle miRNAs and DC functions can be regulated by exogenous miRNAs, suggest that DC-to-DC interactions could be mediated through exosome-shuttle miRNAs, a hypothesis that remains to be tested. Importantly, the mechanism of transfer of exosome-shuttle miRNAs from the exosome lumen to the cytosol of target cells is unknown. Here, we demonstrate that DCs release exosomes with different miRNAs depending on the maturation of the DCs. By visualizing spontaneous transfer of exosomes between DCs, we demonstrate that exosomes fused with the target DCs, the latter followed by release of the exosome content into the DC cytosol. Importantly, exosome-shuttle miRNAs are functional, because they repress target mRNAs of acceptor DCs. Our findings unveil a mechanism of transfer of exosome-shuttle miRNAs between DCs and its role as a means of communication and posttranscriptional regulation between DCs.

Mechanism of transfer of functional microRNAs between mouse dendritic cells via exosomes.

Les cellules dendritiques (CD) sont les plus puissants TTB. Consid&eacute;rant que DCs immatures bas-r&eacute;glementent les r&eacute;ponses de cellules T pour induire et maintenir la tol&eacute;rance immunologique, DCs matures promouvoir l&#39;immunit&eacute;. Pour amplifier leurs fonctions, DCs communiquent avec les voisins de contr&ocirc;leurs de domaine par le biais de m&eacute;diateurs solubles, contact cellule-cellule et l&#39;&eacute;change de la v&eacute;sicule. Transfert de nanovesicles (&lt; 100 nm), d&eacute;riv&eacute;e de la voie d&#39;endocytose (appel&eacute;e les exosomes) repr&eacute;sente un nouveau m&eacute;canisme de communication de DC-DC. Les faits que les exosomes contiennent des miARN exosome-navette et fonctions DC peuvent &ecirc;tre r&eacute;glement&eacute;es par les miARN exog&egrave;nes, sugg&egrave;rent que les interactions de DC-DC pourraient &ecirc;tre m&eacute;di&eacute;es par exosome-navette miARN, une hypoth&egrave;se qui reste &agrave; &ecirc;tre test&eacute;. Surtout, le m&eacute;canisme de transfert des miARN exosome-navette spatiale de la lumi&egrave;re de l&#39;exosome dans le cytosol des cellules cibles est inconnu. Ici, nous d&eacute;montrons que DCs lib&egrave;rent des exosomes avec diff&eacute;rents miARN selon la maturation de la DCs. En visualisant un transfert spontan&eacute; des exosomes entre contr&ocirc;leurs de domaine, nous d&eacute;montrons qu&#39;exosomes fusionn&eacute;s avec l&#39;objectif de contr&ocirc;leurs de domaine, ce dernier suivie par la lib&eacute;ration de la teneur de l&#39;exosome dans le cytosol DC. Ce qui est important, exosome-navette miARN est fonctionnels, car ils r&eacute;priment ARNm cible d&#39;accepteur DCs. Nos r&eacute;sultats d&eacute;voilent un m&eacute;canisme de transfert des miARN exosome-navette entre contr&ocirc;leurs de domaine et son r&ocirc;le comme moyen de communication et de la r&eacute;gulation post-transcriptionnelle entre contr&ocirc;leurs de domaine.

M&eacute;canisme de transfert de micro-ARN fonctionnelle entre les cellules dendritiques souris via les exosomes.

Dendritische Zellen (DCs) sind die potentesten APCs. W&auml;hrend unreife DCs-ab-T-Zell-Antworten regulieren so induzieren/Pflege der immunologischen Toleranz, F&ouml;rderung Reife DCs Immunit&auml;t. Um ihre Funktionen zu verst&auml;rken, kommunizieren DCs mit benachbarten DCs durch l&ouml;sliche Mediatoren, Zell-Zell-Kontakt und Vesikel Exchange. &Uuml;bertragung von Nanovesicles (&lt; 100 nm), abgeleitet von der endocytic Weg (genannt Exosomes) stellt einen neuen Mechanismus der DC-DC-Kommunikation. Die Tatsache, dass Exosomes Exosome-Shuttle MiRNAs enthalten und DC-Funktionen durch exogene MiRNAs geregelt k&ouml;nnen, schlagen vor, da&szlig; DC / DC-Interaktionen durch Exosome-Shuttle MiRNAs, eine Hypothese vermittelt werden k&ouml;nnten, die noch getestet werden. Wichtig ist, ist der Mechanismus der Transfer von Exosome-Shuttle MiRNAs aus der Exosome-Lumen in das Zytosol der Zielzellen unbekannt. Hier zeigen wir, dass DCs Exosomes mit verschiedenen MiRNAs je nach der Reifung der DCS freigeben. Durch die Visualisierung spontane &Uuml;bertragung von Exosomes zwischen DCs, zeigen wir, dass Exosomes mit den Ziel-DCs, Letzteres verschmolzen, gefolgt von Freigabe des Exosome Inhalts in das Zytosol DC. Exosome-Shuttle MiRNAs sind funktionell, weil sie deiner mRNAs der Akzeptor DCs unterdr&uuml;cken. Unsere Erkenntnisse enth&uuml;llen einen Mechanismus der &Uuml;bertragung von Exosome-Shuttle MiRNAs zwischen DCs und seine Rolle als Mittel der Kommunikation und Posttranscriptionale Regulation zwischen DCs.

Mechanismus der &Uuml;bertragung von funktionalen MicroRNAs zwischen Maus dendritische Zellen &uuml;ber Exosomes.

Le cellule dendritiche (DCs) sono i pi&ugrave; potenti APC. Considerando che immaturi DCs down-regolare le risposte delle cellule T per indurre/mantenere la tolleranza immunologica, DCs maturo promuovere l&#39;immunit&agrave;. Per amplificare le loro funzioni, DCs comunicare con i vicini DCs attraverso mediatori solubili, contatto cellula-cellula e lo scambio della vescicola. Trasferimento di nanovesicles (&lt; 100 nm) derivato dal pathway endocitico (definito fatto) rappresenta un nuovo meccanismo di comunicazione DC-DC. I fatti che fatto contenga miRNAs exosome-shuttle e funzioni DC possono essere regolamentate da miRNAs esogeno, suggeriscono che le interazioni DC-DC potrebbero essere mediate attraverso exosome-navetta miRNAs, un&#39;ipotesi che rimane per essere testato. Soprattutto, il meccanismo di trasferimento di miRNAs exosome-navetta dal lume exosome nel citosol delle cellule bersaglio &egrave; sconosciuto. Qui, ci dimostrano che DCs rilasciare fatto con miRNAs differenti a seconda della maturazione dei controller di dominio. Visualizzando trasferimento spontaneo di fatto tra il DCs, dimostreremo che fatto fusa con l&#39;obiettivo di DCs, quest&#39;ultima seguita dal rilascio del contenuto exosome nel cytosol DC. Importante, exosome-navetta miRNAs sono funzionali, perch&eacute; essi reprimere mRNA bersaglio dell&#39;accettore DCs. I nostri risultati svelano un meccanismo di trasferimento di miRNAs exosome-navetta tra controller di dominio e il suo ruolo come un mezzo di comunicazione e di posttranscriptional regolamento tra controller di dominio.

Meccanismo di trasferimento di microRNA funzionale tra cellule dendritiche del mouse via fatto.

&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE; (Dc) &#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x5F37;&#x529B;&#x306A; Apc &#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672A;&#x719F;&#x306A; DCs &#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;-&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3068;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B; T &#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F; DCs &#x514D;&#x75AB;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;DCs &#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;, &#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x63A5;&#x89E6;&#x3068;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x306E; DCs &#x306E;&#x96A3;&#x63A5;&#x3068;&#x901A;&#x4FE1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8EE2;&#x9001; (&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#xFF09; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F; nanovesicles (&lt; 100 nm) &#x306E; DC-DC &#x901A;&#x4FE1;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB; miRNAs &#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3057;&#x3001;DC &#x95A2;&#x6570;&#x306F;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E; miRNAs &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x307E;&#x307E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB; miRNAs &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3067;&#x3057;&#x305F; DC-DC &#x3059;&#x308B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5185;&#x8154;&#x304B;&#x3089;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB; miRNAs &#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DCs &#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E; Dc &#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308B; Mirna &#x3092;&#x89E3;&#x653E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DCs &#x9593;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x8EE2;&#x9001;&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BE;&#x30FC;&#x30E0;&#x95A2;&#x9023;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; DC &#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3001;&#x5F8C;&#x8005;&#x306E; Dc &#x3092;&#x878D;&#x5408;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF; DCs &#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; mrna &#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB; miRNAs &#x306F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB; miRNAs &#x306E; DCs &#x901A;&#x4FE1;&#x3068;&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x8ABF;&#x7BC0; Dc &#x9593;&#x306E;&#x624B;&#x6BB5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x9593;&#x8EE2;&#x9001;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x767A;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; Rna &#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x79FB;&#x52D5;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3002;

Las c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas (DCs) son los m&aacute;s potentes veh&iacute;culos blindados. Mientras que DCs inmaduros abajo-regulan las respuestas de c&eacute;lulas T para inducir/mantener tolerancia inmunol&oacute;gica, DCs maduros promoci&oacute;n inmunidad. Para ampliar sus funciones, DCs comunican con los vecinos DCs a trav&eacute;s de mediadores solubles, contacto de c&eacute;lula a c&eacute;lula y el intercambio de la ves&iacute;cula. Transferencia de Nanoves&iacute;culas (&lt; 100 nm) derivada de la v&iacute;a endoc&iacute;ticas (llamada exosomas) representa un nuevo mecanismo de comunicaci&oacute;n de DC-DC. Los hechos que exosomas contienen miRNAs exosomas-transporte y funciones de DC pueden ser reguladas por miRNAs ex&oacute;geno, sugieren que las interacciones de DC-DC podr&iacute;an estar mediadas a trav&eacute;s de miRNAs exosomas-shuttle, una hip&oacute;tesis que queda por probarse. Lo importante, desconoce el mecanismo de transferencia de miRNAs exosomas-traslado desde el lumen exosomas en el citosol de las c&eacute;lulas diana. Aqu&iacute;, demostramos que DCs liberan exosomas con miRNAs diferentes dependiendo de la maduraci&oacute;n de los controladores de dominio. Visualizando la transferencia espont&aacute;nea de exosomas entre DCs, demostramos que exosomas fusionan con el objetivo de DCs, este &uacute;ltimo seguida por el contenido de los exosomas en el citosol de DC. Lo importante, exosomas-shuttle miRNAs son funcionales, porque reprimen destino mRNAs de aceptador DCs. Nuestros resultados revelan un mecanismo de transferencia de miRNAs exosomas-lanzadera entre DCs y su papel como un medio de comunicaci&oacute;n y regulaci&oacute;n postranscripcional entre DCs.

Mecanismo de transferencia de microRNAs funcionales entre las c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas del rat&oacute;n mediante exosomas.

Tomografia Cryo-elettrone (cryoET) permette la visualizzazione 3D di strutture cellulari con risoluzione molecolare in uno stato vicino al codice nativo e quindi ha il potenziale per contribuire a delucidare eventi precoce dell&#39;infezione da HIV-1 in cellule ospiti. Tuttavia, dettagli strutturali dell&#39;infezione HIV-1 non sono state osservate, a causa di sfide tecnologiche nella lavorazione con rare e dinamici particelle di HIV-1 nelle cellule umane. Riportiamo l&#39;analisi strutturale delle interazioni dell&#39;HIV-1 e cellula ospite mediante un correlativo ad alta velocit&agrave; 3D live-cella-imaging e cryoET Metodo. Utilizzando questo metodo, vi abbiamo mostrato in condizioni quasi nativa che hyperstable intatta mutante nuclei di HIV-1 sono rilasciati nel citoplasma delle cellule ospiti. Abbiamo ottenuto ulteriori prove dirette a suggerire che un hyperstable mutante capside, E45A, ha mostrato lo smontaggio del capside ritardato rispetto al capside del selvaggio-tipo. Insieme, questi risultati dimostrano i vantaggi del nostro vivere-cella correlativo e cryoET approccio per processi dinamici, quali infezioni virali di imaging.

Visualizzazione diretta di HIV-1 con correlativa Tomografia di microscopia e cryo-elettrone live-cella.

&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF; (cryoET) &#x5728;&#x5173;&#x95ED;&#x5230;&#x672C;&#x673A;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x5141;&#x8BB8;&#x7684;&#x8702;&#x7A9D;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684; 3D &#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x5177;&#x6709;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x5E2E;&#x52A9;&#x6F84;&#x6E05;&#x5728;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; hiv-1 &#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x7ED3;&#x6784;&#x7EC6;&#x8282;&#x5E76;&#x672A;&#x5F97;&#x5230;&#x9075;&#x5B88;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x73CD;&#x7A00;&#x52A8;&#x6001;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x7C92;&#x5B50;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x4E0E;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x4E2D;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x96BE;&#x9898;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x9AD8;&#x901F; 3D &#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x548C; cryoET &#x65B9;&#x6CD5;&#x62A5;&#x544A;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x4E0E;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x672C;&#x673A;&#x9644;&#x8FD1;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x53D8;&#x7684;&#x8D85;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7A81;&#x53D8;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x82AF;&#x88AB;&#x91CA;&#x653E;&#x5230;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x83B7;&#x5F97;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x8D85;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x8863;&#x58F3;&#xFF0C;E45A&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x7684;&#x8863;&#x58F3;&#x53CD;&#x6C47;&#x7F16;&#x76F8;&#x6BD4;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x8863;&#x58F3;&#x3002;&#x5171;&#x540C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6210;&#x50CF;&#x52A8;&#x6001;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5982;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x611F;&#x67D3; cryoET &#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x4F18;&#x70B9;&#x3002;

&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x3002;

Cryo-electron tomography (cryoET) allows 3D visualization of cellular structures at molecular resolution in a close-to-native state and therefore has the potential to help elucidate early events of HIV-1 infection in host cells. However, structural details of infecting HIV-1 have not been observed, due to technological challenges in working with rare and dynamic HIV-1 particles in human cells. Here, we report structural analysis of HIV-1 and host-cell interactions by means of a correlative high-speed 3D live-cell-imaging and cryoET method. Using this method, we showed under near-native conditions that intact hyperstable mutant HIV-1 cores are released into the cytoplasm of host cells. We further obtained direct evidence to suggest that a hyperstable mutant capsid, E45A, showed delayed capsid disassembly compared to the wild-type capsid. Together, these results demonstrate the advantages of our correlative live-cell and cryoET approach for imaging dynamic processes, such as viral infection.

Direct visualization of HIV-1 with correlative live-cell microscopy and cryo-electron tomography.

Cryo-tomographie &#xE9;lectronique (cryoET) permet la visualisation 3D des structures cellulaires &#xE0; la r&#xE9;solution mol&#xE9;culaire dans un &#xE9;tat proche de l&#x26;#39;origine et a donc le potentiel pour aider &#xE0; &#xE9;lucider les &#xE9;v&#xE9;nements pr&#xE9;coces de l&#x26;#39;infection VIH-1 dans les cellules h&#xF4;tes. Cependant, les d&#xE9;tails structurels de l&#x26;#39;infection VIH-1 n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;es, en raison de probl&#xE8;mes technologiques dans le travail avec de rares et dynamique du VIH-1 particules dans les cellules humaines. Ici, nous rapportons l&#x26;#39;analyse structurale du VIH-1 et la cellule h&#xF4;te interactions au moyen d&#x26;#39;un corr&#xE9;lative &#xE0; haute vitesse 3D des cellules vivantes d&#x26;#39;imagerie et de la m&#xE9;thode cryoET. En utilisant cette m&#xE9;thode, nous avons montr&#xE9; dans des conditions proches des conditions qui indig&#xE8;nes intactes hyperstable mutantes du VIH-1 sont des noyaux lib&#xE9;r&#xE9; dans le cytoplasme des cellules h&#xF4;tes. Nous avons en outre obtenu des preuves directes permettant de penser qu&#x26;#39;une capside hyperstable mutant, E45A, a montr&#xE9; le d&#xE9;montage retard&#xE9; capside par rapport &#xE0; la capside de type sauvage. Ensemble, ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent les avantages de notre approche des cellules vivantes et cryoET corr&#xE9;lative des processus dynamiques d&#x26;#39;imagerie, telles que l&#x26;#39;infection virale.

Visualisation directe du VIH-1 avec corr&#xE9;lative des cellules vivantes en microscopie et microscopie cryo-&#xE9;lectronique

Cryo-Elektron Tomographie (CryoET) erm&ouml;glicht die 3D Visualisierung von Zellstrukturen Molekulare Aufl&ouml;sung in einem Ende-zu-nativ-Zustand und hat somit das Potenzial, zur fr&uuml;hen Ereignisse von HIV-1 Infektion in Wirtszellen zu erhellen. Jedoch wurden strukturelle Details f&uuml;r die HIV-1 Infektion nicht, aufgrund der technologischen Herausforderungen im Umgang mit seltenen und dynamische HIV-1-Partikel in den menschlichen Zellen beobachtet. Hier berichten wir Strukturanalyse von HIV-1 und Host-Zell-Interaktionen durch eine Korrelative Hochgeschwindigkeits-3D live-Cell-Imaging und CryoET Methode. Mit dieser Methode, unter fast Native Bedingungen zeigten wir, dass intakte Hyperstable werden mutant HIV-1-Kerne in das Zytoplasma der Wirtszellen abgegeben. Wir erhielten weitere direkte Hinweise darauf, dass ein Hyperstable mutant Kapsid, E45A, zeigte im Vergleich zu Wildtyp-Kapsid verz&ouml;gerte Kapsid-Demontage. Diese Ergebnisse werden gemeinsam die Vorteile unserer Korrelative Leben-Zelle und CryoET Ansatz f&uuml;r imaging-dynamische Prozesse, wie virale Infektion.

Direkte Visualisierung der HIV-1 mit Korrelative Mikroskopie und Cryo-Elektron Tomographie von Leben-Zelle.

&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C64;&#x64AE;&#x5F71;&#x6CD5;&#xFF08;cryoET&#xFF09;&#x304C;&#x8FD1;&#x3044;&#x304B;&#x3089;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;3&#x6B21;&#x5143;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x79D8;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x7A00;&#x306A;&#x3001;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;HIV-1&#x7C92;&#x5B50;&#x3092;&#x6271;&#x3046;&#x969B;&#x306B;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x306A;&#x8AB2;&#x984C;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x76F8;&#x95A2;&#x306E;&#x9AD8;&#x901F;3D&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30BB;&#x30EB;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;cryoET&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;HIV-1&#x3068;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;hyperstable&#x5909;&#x7570;HIV-1&#x30B3;&#x30A2;&#x304C;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306B;&#x653E;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;hyperstable&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x3001;E45A&#x306F;&#x3001;&#x9045;&#x5EF6;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x5206;&#x89E3;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x5F97;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;cryoET&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; (cryoET) &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC790; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; 3D &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xBA85;&#xB8CC; &#xD558; &#xAC8C; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xC138;&#xBD80; &#xAD6C;&#xC870; &#xD558;&#xC9C0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xC785;&#xC790; &#xD76C;&#xADC0; &#xD558; &#xACE0; &#xB3D9;&#xC801; &#xC791;&#xC5C5;&#xC758; &#xAE30;&#xC220; &#xACFC;&#xC81C; &#xB54C;&#xBB38;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xACE0;&#xC18D; 3D &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC0F; cryoET &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD6C;&#xC870; &#xD574;&#xC11D; &#xBC0F; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xBCF4;&#xACE0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; hyperstable &#xADFC;&#xCC98;-&#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF8; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; HIV 1 &#xCF54;&#xC5B4; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xD574;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB354; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; hyperstable &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; capsid, E45A, &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; capsid&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC9C0;&#xC5F0;&#xB41C; capsid &#xB514;&#xC2A4;&#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC5BB;&#xC744;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB4F1;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; cryoET &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC7A5;&#xC810;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0C1;&#xD638; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xBC0F; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xACFC; V 1&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;.

Cryo-tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica (cryoET) permite la visualizaci&#xF3;n en 3D de las estructuras celulares con resoluci&#xF3;n molecular en un estado cercano al nativo y por lo tanto, tiene el potencial para ayudar a esclarecer los acontecimientos iniciales de la infecci&#xF3;n VIH-1 en las c&#xE9;lulas hu&#xE9;sped. Sin embargo, los detalles estructurales de infectar el VIH-1 no se han observado, debido a problemas tecnol&#xF3;gicos en el trabajo con raras y din&#xE1;mica del VIH-1 part&#xED;culas en las c&#xE9;lulas humanas. Aqu&#xED;, se presenta el an&#xE1;lisis estructural del VIH-1 y las interacciones c&#xE9;lula hu&#xE9;sped por medio de un correlativo de alta velocidad 3D en vivo de c&#xE9;lulas de im&#xE1;genes y m&#xE9;todo cryoET. El uso de este m&#xE9;todo, se mostr&#xF3; en condiciones pr&#xF3;ximas a las condiciones que nativos intactos hiperestable mutantes del VIH-1 n&#xFA;cleos son liberados en el citoplasma de las c&#xE9;lulas hu&#xE9;sped. Hemos obtenido m&#xE1;s evidencia directa que sugiera que un hiperestable c&#xE1;pside mutante, E45A, mostr&#xF3; retrasa el desmontaje c&#xE1;pside en comparaci&#xF3;n con la c&#xE1;pside de tipo salvaje. En conjunto, estos resultados ponen de manifiesto las ventajas de nuestro enfoque correlato en vivo de las c&#xE9;lulas y cryoET de im&#xE1;genes de procesos din&#xE1;micos, como la infecci&#xF3;n viral.

La visualizaci&#xF3;n directa del VIH-1 con el correlativo en vivo de c&#xE9;lulas de Microscop&#xED;a y tomograf&#xED;a crio-electr&#xF3;nica

Gradual collagen recruitment has been hypothesized as the underlying mechanism for the mechanical stiffening with increasing stress in arteries. In this work, we investigated this hypothesis in eight rabbit carotid arteries by directly measuring the distribution of collagen recruitment stretch under increasing circumferential loading using a custom uniaxial (UA) extension device combined with a multi-photon microscope (MPM). This approach allowed simultaneous mechanical testing and imaging of collagen fibers without traditional destructive fixation methods. Fiber recruitment was quantified from 3D rendered MPM images, and fiber orientation was measured in projected stacks of images. Collagen recruitment was observed to initiate at a finite strain, corresponding to a sharp increase in the measured mechanical stiffness, confirming the previous hypothesis and motivating the development of a new constitutive model to capture this response. Previous constitutive equations for the arterial wall have modeled the collagen contribution with either abrupt recruitment at zero strain, abrupt recruitment at finite strain or as gradual recruitment beginning at infinitesimal strain. Based on our experimental data, a new combined constitutive model was presented in which fiber recruitment begins at a finite strain with activation stretch represented by a probability distribution function. By directly including this recruitment data, the collagen contribution was modeled using a simple Neo-Hookean equation. As a result, only two phenomenological material constants were required from the fit to the stress stretch data. Three other models for the arterial wall were then compared with these results. The approach taken here was successful in combining stress-strain analysis with simultaneous microstructural imaging of collagen recruitment and orientation, providing a new approach by which underlying fiber architecture may be quantified and included in constitutive equations.

A theoretical and non-destructive experimental approach for direct inclusion of measured collagen orientation and recruitment into mechanical models of the artery wall.

Recrutement de collag&egrave;ne progressif a &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se que le m&eacute;canisme sous-jacent pour le renfort m&eacute;canique avec l&#39;accroissement de la contrainte dans les art&egrave;res. Dans ce travail, nous avons examin&eacute; cette hypoth&egrave;se dans les art&egrave;res carotides de huit lapin en mesurant directement la distribution de collag&egrave;ne recrutement stretch en plus circonf&eacute;rentielle chargement en utilisant un dispositif extension uniaxial personnalis&eacute; de (UA) combin&eacute; avec un microscope multiphotonique (MPM). Cette approche a permis simultan&eacute;e des essais m&eacute;caniques et l&#39;imagerie des fibres de collag&egrave;ne sans les m&eacute;thodes de fixation destructrice traditionnelle. Recrutement de fibre a &eacute;t&eacute; quantifi&eacute;e de 3D rendu images MPM, et orientation des fibres a &eacute;t&eacute; mesur&eacute;e en piles projet&eacute;es des images. Recrutement de collag&egrave;ne a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e pour initier &agrave; une d&eacute;formation finie, correspondant &agrave; une forte augmentation de la rigidit&eacute; m&eacute;canique mesur&eacute;e, confirmant l&#39;hypoth&egrave;se pr&eacute;c&eacute;dente et motivant l&#39;&eacute;laboration d&#39;un nouveau mod&egrave;le de comportement pour capturer cette r&eacute;ponse. Pr&eacute;c&eacute;dentes &eacute;quations constitutives de la paroi art&eacute;rielle ont mod&eacute;lis&eacute; la contribution de collag&egrave;ne avec un recrutement soit brusque &agrave; d&eacute;formation z&eacute;ro, recrutement brusque &agrave; d&eacute;formation finie ou comme d&eacute;but de recrutement progressif &agrave; d&eacute;formation infinit&eacute;simale. Selon nos donn&eacute;es exp&eacute;rimentales, un nouveau mod&egrave;le de comportement combin&eacute; a &eacute;t&eacute; pr&eacute;sent&eacute; dans laquelle fibre recrutement commence &agrave; une d&eacute;formation finie avec activation de bout droit repr&eacute;sent&eacute;e par une fonction de distribution de probabilit&eacute;. Par directement, y compris ces donn&eacute;es de recrutement, l&#39;apport de collag&egrave;ne a &eacute;t&eacute; mod&eacute;lis&eacute; &agrave; l&#39;aide d&#39;une simple &eacute;quation de Neo-Hookean. Ainsi, deux seules constantes mat&eacute;rielles ph&eacute;nom&eacute;nologiques &eacute;taient tenus de l&#39;ajustement aux donn&eacute;es extensibles stress. Trois autres mod&egrave;les de la paroi art&eacute;rielle ont ensuite compar&eacute;s ces r&eacute;sultats. L&#39;approche adopt&eacute;e ici a r&eacute;ussi &agrave; combiner analyse de contrainte-d&eacute;formation &agrave; l&#39;imagerie simultan&eacute;e microstructure du recrutement de collag&egrave;ne et de l&#39;orientation, offrant une nouvelle approche par laquelle fibre architecture sous-jacente peut &ecirc;tre quantifi&eacute; et inclus dans les &eacute;quations constitutives.

Une th&eacute;orique et non destructive approche exp&eacute;rimentale pour l&#39;inclusion directe de collag&egrave;ne mesur&eacute;e orientation et recrutement dans les mod&egrave;les m&eacute;caniques de la paroi art&eacute;rielle.

Assunzione graduale di collagene &egrave; stato ipotizzato come il meccanismo sottostante per l&#39;irrigidimento meccanico con l&#39;aumento dello stress nelle arterie. In questo lavoro, abbiamo studiato questa ipotesi nelle arterie carotidee otto coniglio misurando direttamente la distribuzione del collagene reclutamento tratto sotto aumento circonferenziale caricamento utilizzando un dispositivo di estensione (UA) monoassiale personalizzato, combinato con un microscopio multi-photon (MPM). Questo approccio ha permesso simultanea di test meccanici e imaging delle fibre di collagene senza metodi tradizionali fissazione distruttivo. Assunzione di fibra &egrave; stato quantificato dal 3D rendering immagini MPM e orientamento della fibra &egrave; stata misurata in pile proiettate delle immagini. Assunzione di collagene &egrave; stata osservata per avviare a un ceppo finito, corrispondente a un forte aumento nella rigidit&agrave; meccanica misurata, confermando l&#39;ipotesi precedente e motivare lo sviluppo di un nuovo modello costitutivo per catturare questa risposta. Precedenti equazioni costitutive per la parete arteriosa hanno modellato il contributo di collagene con entrambi assunzione brusca a zero sforzo, brusca assunzione al ceppo finito o come inizio di assunzione graduale al ceppo infinitesimal. Basato sui nostri dati sperimentali, &egrave; stato presentato un nuovo modello costitutivo combinato in cui fibra Reclutamento comincia a un ceppo finito con attivazione tratto rappresentato da una funzione di distribuzione di probabilit&agrave;. Inserendo direttamente questa data di assunzione, il contributo di collagene &egrave; stato modellato utilizzando una semplice equazione di Neo-Hookean. Come risultato, solo due costanti di materiale fenomenologico sono stati richiesti da fit ai dati estensibile lo stress. Tre altri modelli per la parete arteriosa sono stati poi confrontati con questi risultati. L&#39;approccio adottato qui riusciva a coniugare analisi di sforzo-tensione con il simultaneo imaging microstrutturale di assunzione di collagene e di orientamento, fornendo un nuovo approccio che sottostante architettura fibra pu&ograve; essere quantificata e incluso nelle equazioni costitutive.

Un teorico e non-distruttivo approccio sperimentale per l&#39;inclusione diretta di orientamento del collagene misurato e reclutamento in modelli meccanici della parete dell&#39;arteria.

ATM &#x662F;&#x542F;&#x52A8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x7535;&#x79BB;&#x8F90;&#x5C04; (IR) &#x4EBA;&#x4EEC;&#x719F;&#x77E5;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7EA7;&#x8054;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;ATM &#x534F;&#x8C03;&#x5173;&#x952E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x53CD;&#x5E94; &#xFF08;DDR&#xFF09; &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x5185;&#x53CC;&#x65B9;&#x968F;&#x540E;&#x7684;&#x4EA4;&#x6D41;&#x4E2D;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7ED3;&#x5408;&#x57FA;&#x4E8E; SILAC &#x7684;&#x4E32;&#x8054;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x548C;&#x5BA1;&#x95EE;&#x7684;&#x8F90;&#x7167;&#x7EC6;&#x80DE;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x998F;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x6CBB;&#x7597;&#x6709;&#x65E0; ATM &#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242; KU55933&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E00;&#x4F53;&#x5316;&#x7F51;&#x7EDC;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x548C;&#x4F18;&#x5148;&#x4E8B;&#x9879;&#x7684;&#x56DE;&#x5E94; KU55933&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x5728;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x4E30;&#x5BCC;&#x4E3A;&#x7269;&#x7406;&#x4E0E;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86; 53BP1 &#x548C;&#x819C;&#x8054;&#x86CB;&#x767D; A1 &#xFF08;ANXA1&#xFF09; &#x4F5C;&#x4E3A;&#x5F3A;&#x6709;&#x529B;&#x7684;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x3002;&#x5149;&#x6F02;&#x767D;&#x540E;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x6062;&#x590D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; DDR &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0; 53BP1 &#x7684;&#x4EA4;&#x6D41;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; KU55933&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; ANXA1 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x81F4;&#x654F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9;&#x7EA2;&#x5916;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x7531; KU55933 &#x4E0D;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86; ATM &#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x590D;&#x5458;&#x65B9;&#x6848;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x4EA4;&#x6362;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6807;&#x8BC6;&#x4E3A; ANXA1 &#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x5728;&#x8702;&#x7A9D;&#x9632;&#x62A4;&#x3002;

&#x5B9A;&#x91CF;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x63ED;&#x793A; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x53CD;&#x5E94;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684; ATM &#x6FC0;&#x9176;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5916;&#x6C47;&#x3002;

ATM is a protein kinase that initiates a well-characterized signaling cascade in cells exposed to ionizing radiation (IR). However, the role for ATM in coordinating critical protein interactions and subsequent exchanges within DNA damage response (DDR) complexes is unknown. We combined SILAC-based tandem mass spectrometry and a subcellular fractionation protocol to interrogate the proteome of irradiated cells treated with or without the ATM kinase inhibitor KU55933. We developed an integrative network analysis to identify and prioritize proteins that were responsive to KU55933, specifically in chromatin, and that were also enriched for physical interactions with known DNA repair proteins. This analysis identified 53BP1 and annexin A1 (ANXA1) as strong candidates. Using fluorescence recovery after photobleaching, we found that the exchange of GFP-53BP1 in DDR complexes decreased with KU55933. Further, we found that ANXA1 knockdown sensitized cells to IR via a mechanism that was not potentiated by KU55933. Our study reveals a role for ATM kinase activity in the dynamic exchange of proteins in DDR complexes and identifies a role for ANXA1 in cellular radioprotection.

Quantitative Proteomics Reveal ATM Kinase-dependent Exchange in DNA Damage Response Complexes.

ATM est une prot&eacute;ine kinase qui d&eacute;clenche une cascade de signalisation bien caract&eacute;ris&eacute;e dans les cellules expos&eacute;es &agrave; des rayonnements ionisants (IR). Cependant, le r&ocirc;le des ATM dans la coordination des interactions prot&eacute;ine critique et les &eacute;changes ult&eacute;rieurs au sein de complexes de r&eacute;ponse (DDR) des dommages ADN est inconnu. Nous avons combin&eacute; SILAC bas&eacute;e sur la spectrom&eacute;trie de masse en tandem et un protocole de fractionnement subcellulaire d&#39;interroger le prot&eacute;ome de cellules irradi&eacute;es trait&eacute;s avec ou sans inhibiteur de la kinase ATM KU55933. Nous avons d&eacute;velopp&eacute; une analyse r&eacute;seau int&eacute;grative pour d&eacute;terminer et prioriser les prot&eacute;ines qui r&eacute;pondaient &agrave; le KU55933, plus pr&eacute;cis&eacute;ment dans la chromatine, et qui ont &eacute;t&eacute; &eacute;galement enrichi pour des interactions physiques avec des prot&eacute;ines de r&eacute;paration de l&#39;ADN connues. Cette analyse a identifi&eacute; 53BP1 et annexine A1 (ANXA1) comme des candidats. &Agrave; l&#39;aide de r&eacute;cup&eacute;ration de fluorescence apr&egrave;s photoblanchiment, nous avons constat&eacute; que l&#39;&eacute;change de GFP-53BP1 dans les complexes DDR a diminu&eacute; avec le KU55933. En outre, nous avons constat&eacute; que ANXA1 knockdown sensibilis&eacute;s cellules IR, via un m&eacute;canisme qui n&#39;&eacute;tait pas potentialis&eacute; par KU55933. Notre &eacute;tude r&eacute;v&egrave;le un r&ocirc;le pour l&#39;activit&eacute; de la kinase ATM dans l&#39;&eacute;change dynamique des prot&eacute;ines dans les complexes DDR et identifie un r&ocirc;le pour ANXA1 en radioprotection cellulaire.

Prot&eacute;omique quantitative r&eacute;v&egrave;le ATM Kinase d&eacute;pendante Exchange dans l&#39;ADN des dommages r&eacute;ponse Complexes.

ATM ist eine Proteinkinase, die eine gut charakterisierten signalisierende Kaskade in Zellen, die ionisierende Strahlung (IR) initiiert. Die Rolle f&uuml;r ATM bei der Koordinierung der kritischen Proteininteraktionen und nachtr&auml;glicher Umtausch innerhalb von DNA-Sch&auml;den-Reaktion (DDR)-komplexe ist jedoch unbekannt. Wir kombinierten SILAC-basierten tandem Massenspektrometrie und ein Subzellulare Fraktionierung-Protokoll, das Proteom der bestrahlten Zellen zu verh&ouml;ren behandelt, mit oder ohne der ATM-Kinase-Hemmer KU55933. Wir entwickelten eine integratives Netzwerk-Analyse zu identifizieren und priorisieren Proteine, waren empf&auml;nglich f&uuml;r KU55933, speziell im Chromatin und, die auch f&uuml;r k&ouml;rperliche Interaktionen mit bekannten DNA-Reparatur-Proteinen bereichert wurden. Diese Analyse identifiziert, 53BP1 und annexin A1 (ANXA1) als starke Kandidaten. Einsatz von Fluoreszenz Recovery after Photobleaching, fanden wir, dass der Austausch von GFP-53BP1 in DDR-komplexen mit KU55933 abgenommen. Dar&uuml;ber hinaus fanden wir, dass ANXA1 Niederschlag &uuml;ber einen Mechanismus zu IR Zellen sensibilisiert, die nicht durch KU55933 potenzierte war. Unsere Studie zeigt eine Rolle f&uuml;r ATM-Kinase-Aktivit&auml;t in den dynamischen Austausch von Proteinen im DDR-komplexe und identifiziert eine Rolle f&uuml;r ANXA1 in zellul&auml;ren Strahlenschutz.

Quantitative Proteomik offenbaren ATM Kinase-abh&auml;ngigen Exchange in DNA-Sch&auml;den-Response-komplexen.

ATM &egrave; una proteina chinasi che avvia una cascata di segnalazione ben caratterizzata in cellule esposte alle radiazioni ionizzanti (IR). Tuttavia, il ruolo di ATM nel coordinare le interazioni della proteina critico e successivi scambi all&#39;interno di complessi di DNA danni risposta (DDR) &egrave; sconosciuto. Abbiamo combinato la spettrometria di massa tandem SILAC-based e un protocollo di frazionamento subcellulare di interrogare il proteoma delle cellule irradiate trattati con o senza l&#39;inibitore delle chinasi ATM KU55933. Abbiamo sviluppato un&#39;analisi di rete integrativa per identificare e definire le priorit&agrave; di proteine che erano sensibili ai KU55933, in particolare nella cromatina, e che sono stati anche arricchiti per interazioni fisiche con proteine conosciute di riparazione del DNA. Questa analisi identificato 53BP1 e Annexina A1 (ANXA1) come candidati forti. Tramite fluorescenza recovery dopo photobleaching, abbiamo scoperto che lo scambio di GFP-53BP1 in complessi DDR &egrave; diminuito con KU55933. Inoltre, abbiamo trovato che ANXA1 atterramento sensibilizzati cellule IR attraverso un meccanismo che non &egrave; stato potenziato da KU55933. Il nostro studio rivela un ruolo per l&#39;attivit&agrave; della chinasi ATM nello scambio dinamico di proteine in complessi di DDR e identifica un ruolo per ANXA1 in radioprotezione cellulare.

Quantitativa Proteomics Reveal ATM chinasi-dipendente Exchange in complessi di DNA danno risposta.

ATM &#x96FB;&#x96E2;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA; &#xFF08;IR&#xFF09; &#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3088;&#x304F;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068; DNA &#x640D;&#x50B7;&#x5FDC;&#x7B54; (DDR) &#x932F;&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x4EA4;&#x6D41;&#x9023;&#x643A;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306E; ATM &#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; SILAC &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9; &#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x3001;&#x7167;&#x5C04;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x5BE9;&#x5C0B;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x4E0B;&#x306E;&#x5206;&#x5225;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;ATM &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; KU55933 &#x306E;&#x6709;&#x7121;&#x306B;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x6271;&#x308F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E; KU55933 &#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; DNA &#x4FEE;&#x7406;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x512A;&#x5148;&#x3059;&#x308B;&#x7D71;&#x5408;&#x7684;&#x306A;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5206;&#x6790; 53BP1 &#x3068; A1 &#x30A2;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x8B58;&#x5225; (ANXA1)&#x3001;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x5019;&#x88DC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x56DE;&#x5FA9;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30D6;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0;&#x5F8C;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;exchange &#x306F;&#x3001;DDR &#x932F;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; GFP 53BP1 KU55933 &#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;ANXA1 &#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; IR KU55933 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5897;&#x5F37;&#x3057;&#x305F;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x306A;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x611F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7814;&#x7A76; ATM &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; DDR &#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3067;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#x30BB;&#x30EB;&#x30E9;&#x30FC;&#x5730;&#x7403;&#x3067;&#x306E; ANXA1 &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x91CF;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B; ATM &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x4F9D;&#x5B58; Exchange DNA &#x640D;&#x50B7;&#x5FDC;&#x7B54;&#x932F;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x3002;

ATM&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (IR) &#xC804;&#xB9AC; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0; well-characterized &#xC2E0;&#xD638; &#xBAA8;&#xB450;&#xB97C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F; DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xBC18;&#xC751; (DDR) &#xB2E8;&#xC9C0; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6C4;&#xC18D; &#xAD50;&#xD658;&#xC744; &#xC870;&#xC815;&#xC5D0; ATM &#xC704;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD150; &#xB364; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xB2E8;&#xAE30; &#xAE30;&#xBC18; &#xBC0F; &#xC2EC;&#xBB38; &#xC870;&#xC0AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC634; subcellular &#xBD84;&#xB958; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC720;&#xBB34;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; ATM kinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; KU55933. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD1B5;&#xD569; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xC120; &#xC21C;&#xC704; chromatin&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; KU55933, &#xBC18;&#xC751;&#xC774; &#xC788;&#xC5C8;&#xACE0; &#xADF8; &#xB610;&#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; DNA &#xC218;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB18D;&#xCD95; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC774; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DD;&#xBCC4; annexin a 1&#xACFC; 53BP1 (ANXA1) &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xB85C;. &#xD615;&#xAD11; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; photobleaching &#xD6C4;, DDR &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0; GFP 53BP1 &#xAD50;&#xD658; ku55933&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; ANXA1 ku55933&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; potentiated &#xD558;&#xC9C0;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; ir &#xC140; sensitized &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; DDR &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xAD50;&#xD658;&#xC5D0;&#xC11C; ATM &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xACC4;&#xC2DC; &#xD55C;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; radioprotection&#xC5D0; anxa1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xC751;&#xB2F5; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; ATM &#xD0A4; &#xC885;&#xC18D; Exchange &#xACF5;&#xAC1C;.

ATM es una prote&iacute;na quinasa que inicia una cascada de se&ntilde;alizaci&oacute;n bien caracterizada en las c&eacute;lulas expuestas a la radiaci&oacute;n ionizante (IR). Sin embargo, el papel de ATM en la coordinaci&oacute;n de las interacciones prote&iacute;na cr&iacute;tica y posteriores intercambios de complejos de respuesta (DDR) de da&ntilde;o de ADN se desconoce. Combinamos basadas en el est&aacute;ndar t&aacute;ndem espectrometr&iacute;a de masas y un protocolo de fraccionamiento subcelular para interrogar el proteoma de las c&eacute;lulas irradiadas tratados con o sin el inhibidor de la cinasa de ATM KU55933. Hemos desarrollado un an&aacute;lisis integral de la red para identificar y priorizar las prote&iacute;nas que fueron sensibles a KU55933, espec&iacute;ficamente en la cromatina, y que tambi&eacute;n fueron enriquecidos para interacciones f&iacute;sicas con las prote&iacute;nas de reparaci&oacute;n de ADN conocidas. Este an&aacute;lisis identific&oacute; 53BP1 y anexina A1 (ANXA1) como candidatos fuertes. Usando recuperaci&oacute;n de fluorescencia tras fotoblanqueo, encontramos que el intercambio de GFP-53BP1 en complejos DDR disminuy&oacute; con KU55933. Adem&aacute;s, encontramos que la ANXA1 ca&iacute;da sensible c&eacute;lulas a IR mediante un mecanismo que no fue potenciada por KU55933. Nuestro estudio revela un papel para la actividad de la quinasa de ATM en el din&aacute;mico intercambio de prote&iacute;nas en complejos DDR e identifica una funci&oacute;n para ANXA1 en radioprotecci&oacute;n celular.

Prote&oacute;mica cuantitativa revela ATM cinasa dependiente intercambio en complejos de respuesta de da&ntilde;o de ADN.

&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x88C2;&#x53D8;&#x548C;&#x805A;&#x53D8;&#x5468;&#x671F;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x96C6;&#x6210;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6291;&#x5236;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x5206;&#x88C2;&#x86CB;&#x767D; Drp1 &#x5728; G2/M &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x548C;&#x975E;&#x6574;&#x500D;&#x4F53;&#x5BFC;&#x81F4;&#x610F;&#x5916;&#x7684;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x3002;&#x5728;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6291;&#x5236; Drp1 &#x89E6;&#x53D1;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x538B;&#x529B;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4ECB;&#x5BFC; hyperfused &#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x53CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; E G2 &#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x8BA1;&#x5212;&#x5916;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x538B;&#x529B;&#x6301;&#x7EED;&#x590D;&#x5236;&#x7136;&#x540E;&#x8BF1;&#x4F7F; ATM &#x4F9D;&#x8D56;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; G2 &#x5230; M &#x8FC7;&#x6E21;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x68C0;&#x67E5;&#x70B9;&#x3002;&#x2477; ATR&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62;&#x590D;&#x5236;&#x5E94;&#x529B;&#x57FA;&#x672C;&#x6FC0;&#x9176;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x5F3A; Drp1 deficienct &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; hyperfusion &#x4E5F;&#x8BF1;&#x4F7F; centrosomal overamplification &#x548C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x800C;&#x975E;&#x6574;&#x500D;&#x4F53;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; DNA &#x7684;&#x8D2B;&#x5316;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x4E0D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E2D;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; ATP &#x751F;&#x4EA7;&#x548C; ros &#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x529F;&#x80FD;&#x5931;&#x8C03;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x5206;&#x88C2;&#x76F4;&#x63A5;&#x590D;&#x5236;&#x5E94;&#x529B;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x542F;&#x52A8; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#x548C;&#x6539;&#x53D8;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;

&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; hyperfusion &#x8BF1;&#x53D1;&#x88C2;&#x53D8;&#x5F84;&#x8FF9;&#x86CB;&#x767D; Drp1 &#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; ATM &#x7684; G2/M &#x902E;&#x6355;&#x548C;&#x975E;&#x6574;&#x500D;&#x4F53;&#x901A;&#x8FC7; DNA &#x590D;&#x5236;&#x5E94;&#x529B;&#x3002;

Mitochondrial fission and fusion cycles are integrated with cell cycle progression. Here we have identified that inhibition of mitochondrial fission protein Drp1 causes an unexpected delay in G2/M cell cycle progression and aneuploidy. In investigating the underlying molecular mechanism, we revealed that inhibiting Drp1 triggers replication stress, which is mediated by hyperfused mitochondrial structure and unscheduled expression of cyclin E in G2 phase. This persistent replication stress then induces an ATM-dependent activation of G2 to M transition cell cycle checkpoint. Knockdown of ATR, an essential kinase in preventing replication stress, significantly enhanced DNA damage and cell death of Drp1-deficienct cells. Persistent mitochondrial hyperfusion also induces centrosomal overamplification and chromosomal instability, which are the causes of aneuploidy. Analysis using cells depleted of mitochondrial DNA revealed that these events are not mediated by the defects in mitochondrial ATP production and ROS generation. Thus dysfunctional mitochondrial fission directly induces genome instability by replication stress, which then initiates DNA damage response. Our findings provide a novel mechanism that contributes to the cellular dysfunction and diseases associated with altered mitochondrial dynamics.

Mitochondrial hyperfusion induced by loss of fission protein Drp1 causes ATM-dependent G2/M arrest and aneuploidy through DNA replication stress.

Fusion et fission mitochondriale cycles sont int&eacute;gr&eacute;s &agrave; la progression du cycle cellulaire. Ici, nous avons identifi&eacute; que l&#39;inhibition de la prot&eacute;ine Drp1 de fission mitochondriale provoque un retard impr&eacute;vu dans l&#39;aneuplo&iuml;die et la progression du cycle cellulaire G2/M. En enqu&ecirc;tant sur les m&eacute;canismes mol&eacute;culaires sous-jacents, nous a r&eacute;v&eacute;l&eacute; qu&#39;inhibant Drp1 d&eacute;clenche le stress de r&eacute;plication, qui est un hyperfused structure mitochondriale et des impr&eacute;vus expression de cycline E en phase G2. Ce stress persistant de r&eacute;plication induit alors une activation de l&#39;ATM d&eacute;pendant du G2 au poste de contr&ocirc;le du cycle cellulaire de transition des M. Pr&eacute;cipitation d&#39;ATR, une kinase essentielle en pr&eacute;venant le stress r&eacute;plication, a consid&eacute;rablement accru l&#39;ADN des dommages et la mort cellulaire des cellules Drp1-deficienct. Hyperfusion mitochondriale persistante induit &eacute;galement la suramplification centrosomes et instabilit&eacute; chromosomique, qui sont les causes de l&#39;aneuplo&iuml;die. Analyse &agrave; l&#39;aide de cellules &eacute;puis&eacute;es de l&#39;ADN mitochondrial a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que ces &eacute;v&eacute;nements ne sont pas v&eacute;hicul&eacute;es par les d&eacute;fauts dans la production d&#39;ATP mitochondriale et la production de ROS. Ainsi dysfonctionnelle fission mitochondriale induit directement l&#39;instabilit&eacute; du g&eacute;nome par le stress de r&eacute;plication, qui initie alors la r&eacute;ponse aux dommages de l&#39;ADN. Nos r&eacute;sultats fournissent un nouveau m&eacute;canisme qui contribue au dysfonctionnement cellulaire et les maladies associ&eacute;es &agrave; la dynamique mitochondriale modifi&eacute;e.

Hyperfusion mitochondriale induite par la perte de la prot&eacute;ine Drp1 de fission provoque arrestation ATM-d&eacute;pendante G2/M et aneuplo&iuml;die par contrainte de la r&eacute;plication de l&#39;ADN.

Mitochondriale Spalt- und Zyklen mit Zellzyklusprogression integriert sind. Hier haben wir festgestellt, dass die Hemmung der mitochondrialen Kernspaltung Protein Drp1 G2/M Zellzyklusprogression und Aneuploidie eine unerwartete Verz&ouml;gerung verursacht. Bei der Untersuchung der zugrunde liegenden molekularen Mechanismen, ergeben wir, dass die Hemmung Drp1 Replikation Stress, l&ouml;st die durch mitochondriale Hyperfused-Struktur und ungeplante Ausdruck von cyclin E in G2 Phase vermittelt wird. Dieser anhaltende Replikation Stress induziert dann eine ATM-abh&auml;ngige Aktivierung von G2 M &Uuml;bergang Zellzyklus Checkpoint. Niederschlag von ATR, eine wesentliche Kinase verhindern Replikation Stress, verbessert erheblich DNA-Sch&auml;den und Zelle Tod Drp1-Deficienct-Zellen. Persistente mitochondriale Hyperfusion induziert auch centrosomal Overamplification und chromosomalen Instabilit&auml;t, die die Ursachen der Aneuploidie sind. Mit Zellen ersch&ouml;pft der mitochondrialen DNA Analyse ergab, dass diese Ereignisse nicht von den M&auml;ngeln in mitochondriale ATP-Produktion und ROS-Generation vermittelt werden. So induziert gest&ouml;rte mitochondriale Kernspaltung direkt Genom Instabilit&auml;t durch Replikation Stress, der dann DNA Sch&auml;den Reaktion initiiert. Unsere Ergebnisse stellen einen neuen Mechanismus, der zur zellul&auml;ren Dysfunktion und Krankheiten im Zusammenhang mit ver&auml;nderten mitochondriale Dynamik beitr&auml;gt.

Mitochondriale Hyperfusion induziert durch Verlust von Kernspaltung Protein Drp1 verursacht ATM-abh&auml;ngige G2/M-Verhaftung und Aneuploidie durch DNA-Replikation-Stress.

Fissione mitocondriale e fusione cicli sono integrati con la progressione del ciclo cellulare. Qui abbiamo individuato che l&#39;inibizione della proteina fissione mitocondriale Drp1 provoca un ritardo imprevisto aneuploidia e progressione del ciclo cellulare G2/M. Nell&#39;indagare il meccanismo molecolare sottostante, abbiamo rivelato che inibendo la Drp1 innesca lo stress di replica, che &egrave; mediato da hyperfused struttura mitocondriale e non programmata espressione di cyclin E in fase G2. Questo stress persistente replica quindi induce un&#39;attivazione ATM-dipendente del G2 a M checkpoint di transizione ciclo cellulare. Atterramento di ATR, una chinasi essenziale nella prevenzione dello stress replica, significativamente migliorata DNA danni e cellule morte delle cellule Drp1-deficienct. Persistente hyperfusion mitocondriale induce anche overamplification centrosomal e instabilit&agrave; cromosomica, quali sono le cause di aneuploidia. Analisi usando cellule impoverite del DNA mitocondriale hanno rivelato che questi eventi non sono mediati da difetti nella produzione di ATP mitocondriale e la generazione di ROS. Cos&igrave; disfunzionale fissione mitocondriale induce direttamente instabilit&agrave; del genoma da stress di replica, che avvia quindi la risposta di danni del DNA. I nostri risultati forniscono un nuovo meccanismo che contribuisce alla disfunzione cellulare e malattie associate all&#39;alterata dinamica mitocondriale.

Hyperfusion mitocondriale indotta dalla perdita della proteina fissione Drp1 provoca arresto ATM-dipendente G2/M e aneuploidia attraverso lo stress di replicazione del DNA.

&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x5206;&#x88C2;&#x30FB;&#x878D;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3068;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x306F; G2/M &#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3068;&#x7570;&#x6570;&#x6027;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x5206;&#x88C2;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Drp1 &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3001;&#x4E88;&#x60F3;&#x5916;&#x306E;&#x9045;&#x5EF6;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Drp1 &#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3068; hyperfused &#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2; dna &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3; E G2 &#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x3067;&#x4E88;&#x5B9A;&#x5916;&#x306E;&#x5F0F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x304C;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5727;&#x529B;&#x306F;&#x3001;G2 &#x306E; ATM &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; M &#x9077;&#x79FB;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;ATR&#x3001;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F; Drp1 deficienct &#x7D30;&#x80DE;&#x306E; DNA &#x640D;&#x50B7;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x9AD8;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x904E;&#x5270;&#x704C;&#x6D41;&#x3082;&#x7570;&#x6570;&#x6027;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x306F; centrosomal overamplification &#x3068;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2; DNA &#x67AF;&#x6E07;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2; ATP &#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x304A;&#x3088;&#x3073; ros &#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x793E;&#x4F1A;&#x79E9;&#x5E8F;&#x3092;&#x4E71;&#x3059;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x5206;&#x88C2;&#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5; DNA &#x640D;&#x50B7;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x5909;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x75BE;&#x60A3;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x969C;&#x5BB3;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Drp1 &#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x904E;&#x5270;&#x704C;&#x6D41; ATM &#x4F9D;&#x5B58; G2/M &#x902E;&#x6355;&#x3068;&#x7570;&#x6570;&#x6027;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; DNA &#x8907;&#x88FD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xBD84;&#xC5F4; &#xBC0F; &#xC735;&#xD569; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC9C4;&#xD589;&#xC640; &#xD1B5;&#xD569; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xD575;&#xBD84;&#xC5F4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; drp1&#xC758; &#xC800;&#xD574; G2/M &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC9C4;&#xD589; &#xC774;&#xC218;&#xC131;&#xC5D0; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xC740; &#xC9C0;&#xC5F0;&#xC758; &#xC6D0;&#xC778; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB0B4;&#xBD80; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC911;&#xC7AC; hyperfused &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; g 2 &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; cyclin E&#xC758; &#xC608;&#xC57D; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC2DD; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC720;&#xBC1C; &#xC5B5;&#xC81C; Drp1 &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC601;&#xAD6C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; g 2&#xC758; M &#xC804;&#xD658; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xCCB4;&#xD06C; &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8;&#xC758; &#xD604;&#xAE08; &#xC885;&#xC18D; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;. ATR, &#xBCF5;&#xC81C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xBC29;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218; &#xB2C8; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xD06C;&#xAC8C; Drp1 deficienct &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xC601;&#xAD6C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; hyperfusion centrosomal overamplification&#xC640; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xBD88;&#xC548;&#xC815;, &#xC774;&#xC218;&#xC131;&#xC758; &#xC6D0;&#xC778;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC11D; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; DNA&#xC758; &#xACE0;&#xAC08; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB294; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; ATP &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8; &#xC138;&#xB300;&#xC758; &#xACB0;&#xD568;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xC9C0; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC7A5;&#xC560; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC9C1;&#xC811; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC8C;&#xB188; &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5ED; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xC5ED;&#xD559;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;.

&#xD575;&#xBD84;&#xC5F4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; drp1&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; hyperfusion ATM &#xC885;&#xC18D; G2/M &#xCCB4;&#xD3EC;&#xC640; &#xC774;&#xC218;&#xC131; DNA &#xBCF5;&#xC81C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Mitocondrial fisi&oacute;n y fusi&oacute;n ciclos se integran con la progresi&oacute;n del ciclo celular. Aqu&iacute; hemos identificado que la inhibici&oacute;n de la prote&iacute;na mitocondrial fisi&oacute;n Drp1 causa un retraso inesperado en aneuploid&iacute;a y progresi&oacute;n de G2/M del ciclo celular. En la investigaci&oacute;n sobre el mecanismo molecular subyacente, revelamos que inhibir Drp1 provoca estr&eacute;s de replicaci&oacute;n, que es mediado por la estructura mitocondrial hyperfused y no programada expresi&oacute;n de ciclina E en la fase G2. Esta tensi&oacute;n persistente replicaci&oacute;n entonces induce una activaci&oacute;n de la ATM-dependiente de G2 a M control de ciclo celular de transici&oacute;n. Ca&iacute;da de ATR, una quinasa esencial en la prevenci&oacute;n del estr&eacute;s de la replicaci&oacute;n, mejorado significativamente ADN da&ntilde;o y muerte celular de las c&eacute;lulas Drp1-deficienct. Hyperfusion mitocondrial persistente induce tambi&eacute;n se overamplification y la inestabilidad cromos&oacute;mica, que son las causas de aneuploid&iacute;a. El an&aacute;lisis usando c&eacute;lulas agotadas del ADN mitocondrial revel&oacute; que estos eventos no son mediados por los defectos en la producci&oacute;n de ATP mitocondrial y la generaci&oacute;n de ROS. As&iacute; disfuncional fisi&oacute;n mitocondrial directamente induce inestabilidad gen&oacute;mica por el estr&eacute;s de la replicaci&oacute;n, que inicia luego la respuesta de da&ntilde;o del ADN. Nuestros resultados proporcionan un mecanismo novedoso que contribuye a la disfunci&oacute;n celular y enfermedades asociadas con la din&aacute;mica mitocondrial alterada.

Hyperfusion mitocondrial inducida por la p&eacute;rdida de prote&iacute;na de fisi&oacute;n Drp1 causa detenci&oacute;n dependientes ATM G2/M y aneuploid&iacute;a por estr&eacute;s de replicaci&oacute;n del ADN.

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Mitochondrial hyperfusion induced by loss of fission protein Drp1 causes ATM-dependent G2/M arrest and aneuploidy through DNA replication stress. Journal of cell science\| PubMed ID: 23015593	2012

Gregory A. Gibson

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