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Clinical Application of <em>Sleeping Beauty</em> and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

The potency of clinical-grade T cells can be improved by combining gene therapy with immunotherapy to engineer  a biologic product with the potential for ...

U.T. MD Anderson Cancer Center

&#x8981;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x6D3B;&#x6027; adoptively &#x8F6C;&#x79FB;&#x3001; CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x5D4C;&#x5408;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x4F53; (CAR)-&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE; (Ctl)&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x5DE5;&#x7A0B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE; (T-&#x88C5;&#x7532;&#x8FD0;&#x5175;&#x8F66;) cotransfer restimulating CAR(+) Ctl &#x901A;&#x8FC7;&#x53D7;&#x5176;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6297;&#x539F;&#x4F53; (TcR) &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x6A21;&#x578B;&#x6297;&#x539F;&#x4F7F;&#x7528;&#x7532;&#x7C7B;&#x6D41;&#x884C;&#x6027;&#x611F;&#x5192;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D; 1 (MP1)&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x524D;&#x4F53;&#x5185;&#x6269;&#x5927; CD4(+) &#x548C; CD8(+) T Apc &#x8868;&#x793A;&#x6F6E;&#x9709;&#x7D20;&#x78F7;&#x9178;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176; MP1 &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (HyMP1) &#x8FC7;&#x7A0B;, &#x4E0E; MP1 &#x5411;&#x81EA;&#x4F53;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6297;&#x539F; (HLA)-&#x53D7;&#x9650;&#x3001; MP1 &#x7279;&#x5B9A;&#x7684; CD4(+) &#x548C; CD8(+) CTL &#x524D;&#x4F53;&#x3002;MP1 &#x7279;&#x5B9A; Ctl &#x9002;&#x5408;&#x8FDB;&#x884C;&#x968F;&#x540E;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6539;&#x9020;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8868;&#x8FBE; CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x8F66;&#xFF0C;&#x6307;&#x5B9A; CD19R&#xFF0C;&#x5E76;&#x540C;&#x65F6;&#x4FDD;&#x6301;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; HLA &#x9650;&#x5236; MP1 &#x83B7;&#x5F97;&#x65E0;&#x9650;&#x5236;&#x7684; HLA &#x53CD;&#x5E94;&#x6027;&#x671D; CD19(+) &#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x548C;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;&#x80BF;&#x7624;&#x6307;&#x6807;&#x3002;Restimulation &#x7684;&#x7531;&#x9886;&#x517B;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x7684;&#x8F90;&#x7167; HyMP1(+) T-Apc &#x7684; MP1xCD19 &#x53CC;&#x7279;&#x5B9A; Ctl &#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x5BFC;&#x81F4;&#x53CC;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6548;&#x5E94;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x589E;&#x5F3A; antilymphoma &#x6548;&#x4EF7;&#x6309;&#x65E2;&#x5B9A;&#x7684;&#x8424;&#x706B;&#x866B;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x8868;&#x8FBE;&#x4F2F;&#x57FA;&#x7279;&#x6C0F;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;&#x88F8;&#x9F20;&#x80A5;&#x80D6;&#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;/&#x4E25;&#x91CD;&#x8054;&#x5408;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677; (NOD/scid) &#x52A8;&#x7269;&#x4E0E; restimulated &#x7684; T Hy(+)MP1(neg)-&#x88C5;&#x7532;&#x8FD0;&#x5175;&#x8F66;&#x7684;&#x5BF9;&#x7167;&#x7EC4;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;biophotonic &#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x6D88;&#x9664;&#x3002;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x548C;&#x591A;&#x624D;&#x591A;&#x827A;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x4F20;&#x9012;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4EA7;&#x751F;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x8F66;&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x6548;&#x5E94;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x6548;&#x5E94;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x7684; T-&#x88C5;&#x7532;&#x8FD0;&#x5175;&#x8F66;&#x3002;

CD19 &#x5B9A;&#x5411;&#x6D41;&#x611F;&#x589E;&#x5F3A; antilymphoma &#x7597;&#x6548;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE; cotransfer MP1 &#x7279;&#x5B9A; Ctl &#x4FEE;&#x6539;&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D;&#x6D41;&#x611F; MP1&#x3002;

To enhance the in vivo antitumor activity of adoptively transferred, CD19-specific chimeric antigen receptor (CAR)-redirected cytotoxic T lymphocytes (CTLs), we studied the effect of restimulating CAR(+) CTLs through their endogenous virus-specific T-cell antigen receptor (TcR) by the cotransfer of engineered T-cell antigen-presenting cells (T-APCs). Using influenza A matrix protein 1 (MP1) as a model antigen, we show that ex vivo-expanded CD4(+) and CD8(+) T-APCs expressing a hygromycin phosphotransferase-MP1 fusion protein (HyMP1) process and present MP1 to autologous human leukocyte antigen (HLA)-restricted, MP1-specific CD4(+) and CD8(+) CTL precursors. The MP1-specific CTLs are amenable to subsequent genetic modification to express a CD19-specific CAR, designated CD19R, and acquire HLA-unrestricted reactivity toward CD19(+) leukemia and lymphoma tumor targets while maintaining HLA-restricted MP1 specificity. The restimulation of MP1xCD19 dual-specific CTLs in vivo by the adoptive transfer of irradiated HyMP1(+) T-APCs resulted in the enhanced antilymphoma potency of bispecific effector cells, as measured by elimination of the biophotonic signal of established firefly luciferase-expressing Burkitt lymphoma xenografts in nonobese diabetic/severe combined immunodeficiency (NOD/scid) animals compared with control groups restimulated by Hy(+)MP1(neg) T-APCs. Engineered T-APCs are a novel and versatile antigen-delivery system for generating antigen-specific T cells in vitro and enhancing the in vivo effector functioning of CAR-redirected antitumor effector cells.

Enhanced antilymphoma efficacy of CD19-redirected influenza MP1-specific CTLs by cotransfer of T cells modified to present influenza MP1.

Afin d&#39;am&eacute;liorer l&#39;activit&eacute; antitumorale in vivo du r&eacute;cepteur d&#39;antig&egrave;ne chim&eacute;rique Moutschen transf&eacute;r&eacute;es, CD19 sp&eacute;cifiques (voiture)-redirig&eacute; les lymphocytes T cytotoxiques (CTL), nous avons &eacute;tudi&eacute; l&#39;effet de restimulating CAR(+) CTL, par le biais de leur endog&egrave;ne r&eacute;cepteur d&#39;antig&egrave;ne de lymphocytes T sp&eacute;cifiques du virus (TcR) de la cotransfer des cellules modifi&eacute;es de pr&eacute;sentatrices d&#39;antig&egrave;ne des lymphocytes T (T-TTB). &Agrave; l&#39;aide de prot&eacute;ine de la matrice grippe A 1 (MP1) comme un antig&egrave;ne de mod&egrave;le, nous montrent qu&#39;ex vivo-&eacute;largi de CD4 + et CD8 T-TTB exprimant un processus de prot&eacute;ine (HyMP1) fusion hygromycine phosphotransf&eacute;rase-MP1 et pr&eacute;senter MP1 antig&egrave;ne autologue (HLA)-pr&eacute;curseurs de CD4 + et CD8 CTL restreints, MP1-sp&eacute;cifiques. Le CTLs MP1 sp&eacute;cifiques se pr&ecirc;tent &agrave; la modification g&eacute;n&eacute;tique ult&eacute;rieure d&#39;exprimer une voiture sp&eacute;cifique CD19, d&eacute;sign&eacute;e CD19R et d&#39;acqu&eacute;rir sans restriction HLA r&eacute;activit&eacute; vis-&agrave;-vis des cibles tumorales leuc&eacute;mie et lymphome CD19(+) tout en conservant la sp&eacute;cificit&eacute; de la restriction HLA MP1. La restimulation des MP1xCD19 sp&eacute;cifiques &agrave; double CTL in vivo par le transfert adoptif d&#39;irradi&eacute;s HyMP1(+) T-TTB a entra&icirc;n&eacute; l&#39;activit&eacute; renforc&eacute;e antilymphoma de cellules effectrices de bisp&eacute;cifiques, telle que mesur&eacute;e par l&#39;&eacute;limination du signal biophotonique des x&eacute;nogreffes de lymphome Burkitt de luciole &eacute;tablis, exprimant le lucif&eacute;rase, chez les animaux une immunod&eacute;ficience combin&eacute;e non ob&egrave;ses diab&eacute;tiques/grave (NOD/scid) par rapport aux groupes t&eacute;moins restimul&eacute;s par Hy(+)MP1(neg) T-TTB. T-TTB machin&eacute;s est un roman et un syst&egrave;me d&#39;alimentation en antig&egrave;ne polyvalent de production in vitro des cellules T sp&eacute;cifiques de l&#39;antig&egrave;ne et d&#39;am&eacute;liorer le fonctionnement d&#39;effecteur in vivo des cellules effectrices antitumorale redirig&eacute;s par voiture.

Efficacit&eacute; antilymphoma accrue de grippe redirig&eacute;s par CD19 CTL sp&eacute;cifiques MP1 par cotransfer des lymphocytes T modifi&eacute;s pour pr&eacute;senter la grippe MP1.

Zu verbessern, die in-vivo antitumor-Aktivit&auml;t adoptively &uuml;bertragenen Chim&auml;ren CD19-spezifische-Antigen-Rezeptor (Fahrzeug)-weitergeleitet cytotoxische T-Lymphozyten (CTLs), wir studierten den Effekt der restimulating CAR(+) CTLs durch ihre endogenen Virus-spezifische-T-Zell-Antigen-Rezeptor (TcR) durch die Cotransfer manipulierte T-Zellen Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen (T-APCs). Mit Influenza-A-Matrix-Protein 1 (MP1) als ein Modell-Antigen, wir zeigen, dass ex-Vivo-erweitert-CD4(+) und CD8(+) T-APCs einem Hygromycin Phosphotransferase-MP1 Schmelzverfahren Protein (HyMP1) zum Ausdruck zu bringen und pr&auml;sentieren MP1 autologe human Leukocyte Antigen (HLA)-eingeschr&auml;nkte, MP1-spezifische CD4(+) und CD8(+) CTL-Vorl&auml;ufer. Die MP1-spezifischen CTLs sind nachfolgende genetische Ver&auml;nderung, Kfz-CD19-spezifische, benannt CD19R, auszudr&uuml;cken und HLA-uneingeschr&auml;nkten Reaktivit&auml;t in Richtung CD19(+) Leuk&auml;mien und Lymphomen Tumor Ziele unter Beibehaltung MP1 HLA-eingeschr&auml;nkte Spezifit&auml;t zu erwerben. Der Restimulation MP1xCD19 Dual-spezifischen CTLs in-vivo durch den adoptiven Transfer von bestrahlten HyMP1(+) T-APCs f&uuml;hrte die verbesserte antilymphoma Potenz der Bispezifischer Effektorzellen, gemessen durch Eliminierung des Signals Biophotonische der etablierten Gl&uuml;hw&uuml;rmchen Luciferase-Ausdr&uuml;cken Burkitt-Lymphom Xenografts nonobese Diabetiker/schwere kombinierte Immundefizienz (NOD/scid) Tiere, die im Vergleich zu Kontrollgruppen, die restimulated von Hy(+)MP1(neg) T-APCs. Manipulierte T-APCs sind eine neuartige und vielseitige Antigen-Delivery-System zum Generieren von Antigen-spezifische T-Zellen in vitro und Verbesserung der in-vivo-Effektor-Funktionsweise des Auto-weitergeleitet antitumor-Effektorzellen.

Verbesserte antilymphoma Wirksamkeit der Influenza CD19-weitergeleitet ge&auml;ndert MP1-spezifischen CTLs von Cotransfer von T-Zellen, um Grippe MP1 pr&auml;sentieren.

Per migliorare l&#39;attivit&agrave; antitumorale in vivo del recettore adoptively trasferite, CD19-specifico antigene chimerico (auto)-Reindirizzamento linfociti T citotossici (CTL), abbiamo studiato l&#39;effetto di restimulating CTL CAR(+) attraverso loro endogeno recettore antigene virus-specifiche delle cellule T (TcR) con il cotransfer di ingegneria delle cellule T cellule presentanti l&#39;antigene (APC-T). Utilizzando proteine di matrice influenza A 1 (MP1) come un antigene modello, mostrano che ex vivo-espanso CD4(+) e cellule T-APC esprimendo un processo hygromycin fosfotransferasi-MP1 fusione proteina (HyMP1) e presento MP1 antigene leucocitario umano autologo (HLA)-limitati, MP1-specifici precursori CD4(+) e cellule CTL. Il CTL MP1-specifici sono suscettibili di successiva modificazione genetica per esprimere una vettura CD19-specifico, designata CD19R e di acquisire senza restrizione HLA reattivit&agrave; verso obiettivi di tumore leucemia e linfoma CD19(+) pur mantenendo la specificit&agrave; HLA-ristretto MP1. Il restimulation di MP1xCD19 dual-specifici CTL in vivo dal trasferimento adottivo di irradiati HyMP1(+) T-APC ha provocato la maggiore potenza antilymphoma di cellule effettrici bispecific, come misurato dalla eliminazione del segnale biophotonic di stabilito firefly luciferase esprimendo Burkitt linfoma xenotrapianti in animali nonobese diabetico/grave immunodeficienza combinata (NOD/scid) rispetto ai gruppi di controllo restimulated di Hy(+)MP1(neg) T-APC. APC-T ingegnerizzate sono un romanzo e antigene-consegna versatile sistema per la generazione di cellule T antigene-specifiche in vitro e migliorando il funzionamento effettrici in vivo di cellule effettrici antitumorale auto-Reindirizzamento.

Maggiore efficacia antilymphoma di reindirizzamento CD19 influenza MP1-specifici CTL di cotransfer delle cellule T modificate per presentare l&#39;influenza MP1.

&#x9069;&#x5FDC;&#x7684;&#x8EE2;&#x9001;&#x3001;CD19 &#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (&#x8ECA;) &#x306E; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;-&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027; T &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403; (Ctl) &#x3092;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x6211;&#x3005; &#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F; T &#x7D30;&#x80DE;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE; &#xFF08;T-Apc) &#x306E; cotransfer &#x3067;&#x8105;&#x5A01;&#x306E; CAR(+) Ctl &#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7279;&#x7570; T &#x7D30;&#x80DE;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;TcR&#xFF09; &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 1 (MP1) &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x6297;&#x539F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x5C55;&#x958B; CD4(+) &#x3068;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E; T &#x306E; Apc hygromycin &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; MP1 &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (HyMP1) &#x904E;&#x7A0B;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B; ex &#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3001;MP1 &#x81EA;&#x5BB6;&#x3072;&#x3068;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x6297;&#x539F; (HLA) &#x73FE;&#x5728;-&#x3001;MP1 &#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x5236;&#x9650; CD4(+) &#x3068;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E; CTL &#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3002;MP1 &#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E; Ctl &#x306F; CD19R&#x3001;&#x6307;&#x5B9A; CD19 &#x56FA;&#x6709;&#x8ECA;&#x3001;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30B9; &#x30FB;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x3057;&#x3001;MP1 HLA &#x62D8;&#x675F;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089; CD19(+) &#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#x816B;&#x760D;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B; HLA &#x7121;&#x5236;&#x9650;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DB;&#x30BF;&#x30EB; &#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30D0;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C3;&#x30C8; &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B; Hy(+)MP1(neg) T Apc &#x306B;&#x3088;&#x308B; restimulated &#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x975E;&#x80A5;&#x6E80;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x91CD;&#x75C7;&#x8907;&#x5408;&#x578B;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168; (NOD/scid) &#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x7570;&#x7A2E;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E; MP1xCD19 &#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x56FA;&#x6709; Ctl in vivo &#x3067;&#x990A;&#x5B50;&#x8EE2;&#x9001;&#x7167;&#x5C04; HyMP1(+) &#x306E; T-Apc &#x306E;&#x518D;&#x523A;&#x6FC0;&#x6027;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F37;&#x5316;&#x306E; antilymphoma &#x80FD;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3002;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F; T Apc &#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3068; in vitro &#x3067;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3068;&#x8ECA;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; in vivo &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5411;&#x4E0A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6C4E;&#x7528;&#x6297;&#x539F;&#x914D;&#x4FE1;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

CD19 &#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8; &#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x306E; antilymphoma &#x52B9;&#x679C; MP1 &#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E; Ctl cotransfer T &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; MP1 &#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3002;

Adoptively &#xC804;&#xC1A1;, CD19 &#xD2B9;&#xC815; chimeric &#xD56D; &#xC6D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (&#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;)&#xC758; in vivo antitumor &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD558;&#xAE30;-cytotoxic T &#xC138;&#xD3EC; (Ctl) &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158; &#xC124;&#xACC4; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC; (T-APCs) cotransfer&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC6A9; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC0DD; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAD00;&#xB828; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD56D; &#xC6D0; &#xCCB4; (TcR)&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; restimulating CAR(+) Ctl&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xACF5;&#xBD80;. &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 1 (MP1)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xB378; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC804; &#xBE44;&#xBCF4; &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; CD4(+)&#xC640; CD8(+) T-APCs hygromycin MP1 phosphotransferase &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (HyMP1) &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xD45C;&#xC2DC;&#xC640; &#xD5CC; &#xC778;&#xAC04; &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C; &#xD56D; &#xC6D0; (HLA) MP1 &#xD604;&#xC7AC;-&#xC81C;&#xD55C;, MP1 &#xD2B9;&#xC815; CD4(+)&#xC640; CD8(+) CTL &#xC120;&#xAD6C;&#xC790;. MP1 &#xD2B9;&#xC815; Ctl &#xC758;&#xBB34;&#xAC00; &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0; &#xC720;&#xC804; &#xC218;&#xC815; CD19R, &#xC9C0;&#xC815; CD19 &#xD2B9;&#xC815; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xD558; &#xACE0; HLA &#xC81C;&#xD55C; MP1 &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; CD19(+) &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; &#xBC0F; &#xB9BC;&#xD504; &#xC885; &#xC885;&#xC591; &#xBAA9;&#xD45C; &#xD5A5;&#xD574; HLA &#xBB34;&#xC81C;&#xD55C; &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xD655;&#xBCF4;. MP1xCD19 &#xB4C0;&#xC5BC; &#xD2B9;&#xC815; Ctl vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC0AC; HyMP1(+) T-Apcs&#xC758; &#xC785;&#xC591; &#xC804;&#xC1A1; restimulation bispecific effector &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; antilymphoma &#xD798; &#xC124;&#xB9BD;&#xB41C; &#xBC18;&#xB527;&#xBD88; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xD45C;&#xD604; Burkitt &#xB9BC;&#xD504; &#xC885; xenografts &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xADF8;&#xB8F9; restimulated Hy(+)MP1(neg) T Apcs&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; nonobese &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;/&#xC2EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; (&#xB044; &#xB355; &#xC784;/scid) &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; biophotonic &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; &#xACB0;&#xACFC;. &#xC124;&#xACC4; T Apcs&#xB294; &#xC18C;&#xC124; &#xCCB4; &#xC678; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC131; &#xBC0F; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC774;&#xB3D9; antitumor effector &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; in vivo effector &#xAE30;&#xB2A5; &#xAC15;&#xD654; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC804;&#xB2EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;.

CD19-&#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; antilymphoma &#xD6A8;&#xB2A5; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; cotransfer&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; MP1 &#xD2B9;&#xC815; Ctl &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; MP1 &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC218;&#xC815;.

Para mejorar la actividad antitumoral in vivo del receptor de ant&iacute;geno quim&eacute;rico eventualmente transferido, CD19-espec&iacute;fica (coche)-redirigido los linfocitos T citot&oacute;xicos (CTL), se estudi&oacute; el efecto de restimulating de CAR(+) de CTLs, a trav&eacute;s de su end&oacute;gena receptor virus espec&iacute;ficos de ant&iacute;geno de c&eacute;lulas T (TcR) por la cotransfer de c&eacute;lulas Ingenier&iacute;a de presentadoras de ant&iacute;geno de c&eacute;lulas T (T-CPA). Utilizando 1 (MP1) de la prote&iacute;na de la matriz de gripe como un ant&iacute;geno de modelo, mostramos que ex vivo llenados CD4 y CD8 T-APC expresando un proceso de (HyMP1) de la prote&iacute;na de fusi&oacute;n Higromicina fosfotransferasa-MP1 y presentar MP1 al ant&iacute;geno aut&oacute;logo del leucocito humano (HLA)-precursores de CD4 y CD8 CTL restringidos, MP1-espec&iacute;fica. Los CTLs MP1 espec&iacute;ficos son susceptibles de modificaci&oacute;n gen&eacute;tica posterior para expresar un coche CD19 espec&iacute;ficos, se&ntilde;alado CD19R y adquieran sin restricci&oacute;n HLA reactividad hacia objetivos de tumor de leucemia y el linfoma CD19(+) manteniendo la restricci&oacute;n HLA MP1 especificidad. El restimulation de MP1xCD19 doble espec&iacute;fico CTLs in vivo por la transferencia adoptiva de irradiados HyMP1(+) T-CPA dio lugar a la mayor potencia antilymphoma de c&eacute;lulas efectoras de tienen, seg&uacute;n lo medido por la eliminaci&oacute;n de la se&ntilde;al de la biofot&oacute;nica de xenoinjertos de linfoma luciferasa-expresi&oacute;n del Burkitt de luci&eacute;rnaga establecido en animales de inmunodeficiencia combinada grave diab&eacute;tico nonobese (NOD/scid) en comparaci&oacute;n con grupos de control restimulated de Hy(+)MP1(neg) T-CPA. T-CPA ingenier&iacute;a es un novedoso y vers&aacute;til ant&iacute;geno-sistema para generar c&eacute;lulas de T de antigen-specific in vitro y mejorar el funcionamiento del efector in vivo de c&eacute;lulas efectoras antitumorales coche-redirigido.

Mayor eficacia antilymphoma de gripe CD19-redirigido CTLs espec&iacute;ficos MP1 por cotransfer de c&eacute;lulas T modificaci&oacute;n para presentar gripe MP1.

Nous avons d&eacute;velopp&eacute; une analyse de luciferase biophotoniques hautement sensibles comme alternative au Cr (51)-version d&#39;&eacute;valuation de la cytotoxicit&eacute; &agrave; m&eacute;diation cellulaire. Le signal luminescent lucif&eacute;rine/ATP-d&eacute;pendante de la cible des cellules stablement ou transitoirement transfect&eacute;es avec un g&egrave;ne de rapporteur lucif&eacute;rase luciole (fLuc:Zeo) lin&eacute;airement est corr&eacute;l&eacute;e avec le nombre de cellules viables de cible. Lors de l&#39;incubation des cellules cibles fLuc:Zeo(+) avec CD8 CTL, une diminution rapide de la bioluminescence a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;e qu&#39;en corr&eacute;lation avec la lyse des cellules sp&eacute;cifiques de l&#39;antig&egrave;ne cible. Les niveaux de la lyse sp&eacute;cifique mesur&eacute; par des tests de Cr-lib&eacute;ration (51) en corr&eacute;lation avec l&#39;att&eacute;nuation du signal de cellule cible biophotonique, donc valider cette approche comme une m&eacute;thode sensible et pr&eacute;cise pour la mesure de la cytolyse. Nous montrons que cette analyse cytolytique luminescents-bas&eacute;e (LCA) est pr&ecirc;te pour le criblage &agrave; haut d&eacute;bit d&#39;activit&eacute; cytolytique des cellules effectrices, permet au taux de cytolyse &agrave; mesurer en une seule plaque de micro- et permet le multiplexage de meurtre cytolytique avec d&#39;autres tests fonctionnels de lymphocytes tels que la lib&eacute;ration de cytokines. Ce qui est important, cette m&eacute;thode mesure le cytolytique tuant des cellules cibles qui sont soit stable ou transitoirement transfect&eacute;es avec un g&egrave;ne rapporteur de fLuc avec pr&eacute;cision et est donc id&eacute;ale pour surveiller une cytolyse des deux lign&eacute;es de cellules primaires cibles autologues et immortalis&eacute;. La polyvalence du dosage cytolytique biophotoniques non radioactif, haut d&eacute;bit, devrait rendre cette m&eacute;thode une alternative int&eacute;ressante aux Chrome-sortie pour quantifier l&#39;activit&eacute; cytolytique des cellules effectrices.

Test de cytotoxicit&eacute; de biophotonique de criblage &agrave; haut d&eacute;bit de meurtre cytolytique.

&#x4F5C;&#x4E3A;&#x66FF;&#x4EE3;&#x65B9;&#x6CD5; (51) Cr &#x91CA;&#x653E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8BC4;&#x4F30;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x654F;&#x611F; biophotonic &#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; ATP &#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x53D1;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6216;&#x77AC;&#x6001;&#x67D3;&#x8424;&#x706B;&#x866B;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x62A5;&#x544A;&#x57FA;&#x56E0; (fLuc:Zeo) &#x7EBF;&#x6027;&#x76F8;&#x5173;&#x4E0E;&#x53EF;&#x884C;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6570;&#x76EE;&#x3002;&#x540E;&#x5B75;&#x5316;&#x7684; fLuc:Zeo(+) &#x4E0E; CD8(+) Ctl &#x7684;&#x9776;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x5149;&#x5FEB;&#x901F;&#x4E0B;&#x964D;&#xFF0C;&#x76F8;&#x5173;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x76EE;&#x6807;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88C2;&#x89E3;&#x3002;&#x4E0E; biophotonic &#x76EE;&#x6807;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x7075;&#x654F;&#x548C;&#x51C6;&#x786E;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x65B9;&#x6CD5;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5728;&#x8870;&#x51CF;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x6765;&#x8861;&#x91CF; (51) Cr &#x91CA;&#x653E;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x6B64;&#x57FA;&#x4E8E;&#x53D1;&#x5149;&#x7684;&#x6EB6;&#x8BD5;&#x9A8C; (LCA) &#x662F;&#x9002;&#x5408;&#x7684;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x836F;&#x7269;&#x7B5B;&#x9009;&#x7684;&#x6548;&#x5E94;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6EB6;&#x6D3B;&#x6027;&#x3001; &#x514D;&#x75AB;&#x7387;&#x5141;&#x8BB8;&#x5355;&#x4E2A;&#x5FAE;&#x677F;&#xFF0C;&#x7528;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x548C;&#x5141;&#x8BB8;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7B49;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x91CA;&#x653E;&#x6EB6;&#x6740;&#x5BB3;&#x591A;&#x8DEF;&#x590D;&#x7528;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x51C6;&#x786E;&#x5730;&#x6EB6;&#x6740;&#x5BB3;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6216;&#x8005;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6216;&#x6682;&#x6001;&#x8F6C;&#x67D3; fLuc &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x63AA;&#x65BD;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x662F;&#x76D1;&#x6D4B;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x81EA;&#x4F53;&#x548C;&#x6C38;&#x751F;&#x5316;&#x76EE;&#x6807;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x514D;&#x75AB;&#x7684;&#x7406;&#x60F3;&#x9009;&#x62E9;&#x3002;&#x591A;&#x7528;&#x9014;&#x7684;&#x975E;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x3001; &#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#xFF0C;biophotonic &#x6EB6;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x5E94;&#x4F7F;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x94EC;&#x91CA;&#x653E;&#x91CF;&#x5316;&#x6548;&#x5E94;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6EB6;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

Biophotonic &#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x6EB6;&#x6740;&#x5BB3;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x7B5B;&#x9009;&#x3002;

Hemos desarrollado un ensayo de luciferasa Biofot&oacute;nico altamente sensibles como alternativa a Cr-release (51) para evaluaci&oacute;n de citotoxicidad mediada por c&eacute;lulas. La se&ntilde;al luminiscente Luciferina/ATP-dependiente del destino c&eacute;lulas estable o transitorio transfectadas con un gen de reportero de luciferasa luci&eacute;rnaga (fLuc:Zeo) linealmente se correlaciona con el n&uacute;mero de c&eacute;lulas viables de destino. Sobre la incubaci&oacute;n de las c&eacute;lulas de blanco fLuc:Zeo(+) con listas CTL CD8, se detect&oacute; una disminuci&oacute;n r&aacute;pida de bioluminiscencia que correlacion&oacute; con lisis celular de destino espec&iacute;fica de ant&iacute;geno. Los niveles de lisis espec&iacute;fica midiendo (51) ensayos de liberaci&oacute;n Cr correlacionan con la atenuaci&oacute;n en biofot&oacute;nica celular se&ntilde;al, validando as&iacute; este enfoque como un m&eacute;todo sensible y exacto para la medici&oacute;n de cit&oacute;lisis. Demostramos que este ensayo citol&iacute;tica basadas en luminiscente (LCA) es sensible para la detecci&oacute;n de alto rendimiento de actividad citol&iacute;tica de las c&eacute;lulas efectoras, permite la tasa de cit&oacute;lisis para medirse en una sola placa micro y permite la multiplexaci&oacute;n de matanza citol&iacute;tica con otros an&aacute;lisis funcional de linfocitos como liberaci&oacute;n de citoquinas. Importante, este m&eacute;todo exactamente mide la citol&iacute;tica matanza de c&eacute;lulas diana que sean estable o transitorio transfected con un gen reportero de fLuc y por lo tanto es ideal para el monitoreo de cit&oacute;lisis de ambas l&iacute;neas celulares de objetivo principal aut&oacute;logo e inmortalizado. La versatilidad del ensayo citol&iacute;tica Biofot&oacute;nico no radiactivo, alto rendimiento, debe hacer este m&eacute;todo una alternativa atractiva a cromo-release para cuantificar la actividad citol&iacute;tica de las c&eacute;lulas efectoras.

Ensayos de citotoxicidad en biofot&oacute;nica para la detecci&oacute;n de alto rendimiento de matanza citol&iacute;tica.

We have developed a highly sensitive biophotonic luciferase assay as an alternative to (51)Cr-release for assessment of cell-mediated cytotoxicity. The luciferin/ATP-dependent luminescent signal of target cells stably or transiently transfected with a firefly luciferase reporter gene (fLuc:Zeo) linearly correlates with viable target cell number. Upon incubation of fLuc:Zeo(+) target cells with CD8(+) CTLs, a rapid decrease in bioluminescence was detected that correlated with antigen-specific target cell lysis. The levels of specific lysis measured by (51)Cr-release assays correlated with the attenuation in biophotonic target cell signal, thus validating this approach as a sensitive and accurate method for the measurement of cytolysis. We show that this luminescent-based cytolytic assay (LCA) is amenable for high-throughput screening of effector cell cytolytic activity, allows for the rate of cytolysis to be measured in a single micro-plate, and permits the multiplexing of cytolytic killing with other lymphocyte functional assays such as cytokine release. Importantly, this method accurately measures the cytolytic killing of target cells that are either stably or transiently transfected with a fLuc reporter gene, and thus is ideal for monitoring cytolysis of both primary autologous and immortalized target cell lines. The versatility of the non-radioactive, high-throughput, biophotonic cytolytic assay should make this method an attractive alternative to chromium-release for quantifying effector cell cytolytic activity.

Biophotonic cytotoxicity assay for high-throughput screening of cytolytic killing.

Wir haben einen hochempfindlichen Biophotonische Luciferase Assay als Alternative zum Cr-Release f&uuml;r die Beurteilung der zellvermittelte Zytotoxizit&auml;t (51) entwickelt. Das Luciferin/ATP-abh&auml;ngige leuchtende Signal des Ziels, das Zellen stabil oder vor&uuml;bergehend mit einem Gl&uuml;hw&uuml;rmchen Luciferase Reporter-gen (fLuc:Zeo) Linear transfected korreliert mit lebensf&auml;higen Zelle Zielnummer. Nach Inkubation von fLuc:Zeo(+) Zielzellen mit CD8(+) CTLs, ein rascher R&uuml;ckgang der Biolumineszenz wurde erkannt, die mit Antigen-spezifische Ziel Zellenzerst&ouml;rung korreliert. Die Ebenen der spezifische Lyse (51) Cr-Release-Assays gemessen korreliert mit der D&auml;mpfung im Biophotonische Ziel Zelle Signal, damit dieser Ansatz als sensibel und pr&auml;zise Methode zur Messung der Zytolyse &uuml;berpr&uuml;fen. Wir zeigen, dass dieses leuchtende-gegr&uuml;ndeten CYTOLYTISCHE Probe (LCA) f&uuml;r Hochdurchsatz-Screening von Keiko Effektor-Zellaktivit&auml;t einsehbar ist, erm&ouml;glicht, dass die Rate der Zytolyse in ein einzelnes Mikro-Platte gemessen werden und erlaubt das multiplexing von Keiko T&ouml;tung mit anderen Lymphozyten funktionelle Assays wie Cytokine Release. Wichtig ist, diese Methode genau misst die CYTOLYTISCHE t&ouml;ten von Zielzellen, die entweder stabil sind oder vor&uuml;bergehend transfizierte mit einem fLuc-Reporter-gen, und somit ist ideal zur &Uuml;berwachung der Zytolyse beide Zelllinien Prim&auml;rziel autologe und verewigt. Die Vielseitigkeit des nicht-radioaktive, Hochdurchsatz-Biophotonische CYTOLYTISCHE Assays sollte diese Methode eine attraktive Alternative zu Chrom-Release f&uuml;r die Quantifizierung der Effektor Zellaktivit&auml;t Man&ouml;ver machen.

Biophotonische Zytotoxizit&auml;t Assay f&uuml;r High-Throughput-Screening der CYTOLYTISCHE T&ouml;tung.

Abbiamo sviluppato un&#39;analisi di luciferase biophotonic altamente sensibili come alternativa al rilascio di Cr (51) per la valutazione della citotossicit&agrave; cellulo-mediata. Il segnale luminescente luciferina/ATP-dipendente di destinazione celle stabile o transitoriamente transfected con un gene del reporter luciferasi firefly (fLuc:Zeo) linearmente correla con il numero di cellule vitali di destinazione. Dopo incubazione delle cellule bersaglio fLuc:Zeo(+) con cellule CTL, &egrave; stata rilevata una diminuzione rapida della bioluminescenza che correlato con lisi delle cellule bersaglio antigene-specifiche. Lisi specifiche misurato dai dosaggi Cr-rilascio (51) correlato con l&#39;attenuazione nel segnale di cellula bersaglio biophotonic, convalidando cos&igrave; questo approccio come un metodo sensibile e preciso per la misurazione di citolisi. Vi mostriamo questo dosaggio citolitica luminescenti-based (LCA) &egrave; assoggettabile per high-throughput screening dell&#39;attivit&agrave; citolitica effettrici delle cellule, per il tasso di citolisi permette di essere misurato in un&#39;unica micro-placca che permette il multiplexing di uccisione citolitica con altri dosaggi funzionali dei linfociti come rilascio di citochine. Importante, questo metodo con precisione misure citolitica uccisione delle cellule bersaglio che sono sia stabile o transitoriamente transfected con un gene reporter fLuc e quindi &egrave; ideale per il monitoraggio di citolisi di entrambe le linee cellulari primaria destinazione autologhi e immortalata. La versatilit&agrave; del dosaggio citolitica biophotonic non radioattivo, high-throughput, dovrebbe rendere questo metodo un&#39;interessante alternativa al cromo-release per quantificare l&#39;attivit&agrave; citolitica delle cellule effettrici.

Biophotonic test di citotossicit&agrave; per high-throughput screening di uccisione citolitica.

&#x6211;&#x3005; &#x306F; &#xFF08;51&#xFF09; Cr &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30F3;/ATP &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x767A;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x30BB;&#x30EB;&#x5B89;&#x5B9A;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x3001;&#x30DB;&#x30BF;&#x30EB; &#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; (fLuc:Zeo) &#x3068;&#x7DDA;&#x5F62;&#x5C0E;&#x5165;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306E;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x6570;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;FLuc:Zeo(+) &#x3068;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E; Ctl &#x3068;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x767A;&#x5149;&#x306E;&#x6025;&#x6FC0;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30EB;&#x63DB;&#x6563;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x3067;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30EB;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870; (51) &#x306E; Cr &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x8A66;&#x91D1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x63DB;&#x6563;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3053;&#x306E;&#x767A;&#x5149;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;&#x8A66;&#x9A13; &#xFF08;LCA&#xFF09; &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x969C;&#x5BB3;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x5F93;&#x3046;&#x7FA9;&#x52D9;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x7387;&#x306F; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;&#x306E;&#x6BBA;&#x5BB3;&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x591A;&#x91CD;&#x5316;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3068;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x304C;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6BBA;&#x3059;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x6D41;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x4E21;&#x65B9;&#x3068;&#x4E0D;&#x6B7B;&#x5316;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x975E;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x3001;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8; &#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x6C4E;&#x7528;&#x6027;&#x306F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9; &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x969C;&#x5BB3;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;&#x6BBA;&#x5BB3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3002;

(51) Cr-&#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC140; &#xC911;&#xC7AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131;&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB300; &#xD55C; &#xB300; &#xC548;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; biophotonic &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC0C1; &#xC140; &#xACC4;&#xC18D;&#xC801; &#xB610;&#xB294; transiently &#xD398; &#xAC1C; &#xB625; &#xBC8C;&#xB808; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; (fLuc:Zeo)&#xC640; &#xC120;&#xD615;&#xC758; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB9B0;/ATP &#xC885;&#xC18D; &#xBC1C;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140; &#xBC88;&#xD638;&#xC640; &#xC5F0;&#xAD00; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xAD11;&#xC758; &#xAE09;&#xACA9; &#xD55C; &#xAC10;&#xC18C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; fLuc:Zeo(+) &#xB300;&#xC0C1; &#xC140; CD8(+) Ctl&#xC758; &#xBD80; &#xD654;, &#xB530;&#xB77C; &#xD558;&#xB294; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xB300;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6A9; &#xD574;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00;. &#xD2B9;&#xC815; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6A9; &#xD574; (51) Cr-&#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCE21;&#xC815;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC740; biophotonic &#xB300;&#xC0C1; &#xC140; &#xC2E0;&#xD638;, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; cytolysis &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xACE0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC1E0;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC774; &#xBC1C;&#xAD11; &#xAE30;&#xBC18; cytolytic &#xC2DC;&#xD5D8; (LCA) effector &#xC138;&#xD3EC; cytolytic &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xAC80;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC21C;&#xC885;&#xC740; cytolysis&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xCE21;&#xC815;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xAC8C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; cytokine &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xB9BC;&#xD504; &#xAD6C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC8FD;&#xC774; cytolytic&#xC758; &#xB2E4;&#xC911;&#xD654; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;,&#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140;&#xC758; &#xC0B4;&#xC778; cytolytic &#xB610;&#xB294; transiently transfected fLuc &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB85C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB450; &#xC8FC; &#xD5CC; &#xACE0; &#xBD88;&#xBA78; &#xD558; &#xAC8C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; cytolysis &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xC774;&#xC0C1;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC29;&#xC0AC;&#xC131; &#xBE44;, &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; biophotonic cytolytic &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC774;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xD06C;&#xB86C;-&#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; effector &#xC138;&#xD3EC; cytolytic &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xC548;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD55C;&#xB2E4;.

Biophotonic cytolytic &#xC0B4;&#xC778;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xAC80;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131; &#xC2DC;&#xD5D8;.

&#x6240;&#x91C7;&#x7528;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; (si) RNA &#x53CC;&#x5DE5;&#x548C;&#x77ED;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x53CC;&#x94FE; Rna &#x7684; de novo &#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x5408;&#x6210;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x540E;&#x6C34;&#x5E73;&#x6291;&#x5236;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5B9E;&#x73B0;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x662F;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684;&#x6210;&#x529F;&#x89E3;&#x6790;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x6027;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x969C;&#x788D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5F15;&#x8FDB;&#x77ED;&#x53D1;&#x5939; RNA (shRNA) &#x53EF;&#x4EE5;&#x663E;&#x8457;&#x63D0;&#x9AD8; RNA &#x5E72;&#x6270; (RNAi) &#x4EE5;&#x53CA;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x5B9E;&#x73B0;&#x6700;&#x5927;&#x76EE;&#x6807;&#x4E0B;&#x8C03;&#x65F6;&#x6700;&#x4F18; siRNA &#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x53D7;&#x5230;&#x9650;&#x5236;&#x6216;&#x5F53;&#x540C;&#x65F6;&#x9488;&#x5BF9;&#x591A;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C; siRNA &#x7684;&#x91CF;&#x53EA;&#x9650;&#x5236;&#x3002;&#x5242;&#x91CF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027; RNAi &#x6548;&#x5E94;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x5C06; shRNA &#x7684; Pol III U6 &#x5C0F;&#x6838; RNA &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0B;&#x7684;&#x526F;&#x672C;&#x653E;&#x5728;&#x4E32;&#x8054;&#x5728; DNA &#x8F7D;&#x4F53;&#x4E2D;&#x5B8C;&#x6210;&#x7684;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4E86;&#x540C;&#x65F6;&#x4E0B;&#x8C03;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7ECF;&#x5178;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6297;&#x539F; (HLA) &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x521D;&#x7EA7;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x9002;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E2E;&#x52A9;&#x89C4;&#x907F; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x548C;/&#x6216; HLA &#x5B8C;&#x5168;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x540C;&#x79CD;&#x5F02;&#x4F53;&#x79FB;&#x690D;&#x6392;&#x65A5;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x4E00;&#x7C7B;&#x3002;

Rnai &#x6280;&#x672F; &mdash; &mdash; &#x9488;&#x5BF9; HLA &#x57FA;&#x56E0;&#x6269;&#x589E;&#x6280;&#x672F;&#x3002;

Posttranscriptional suppression of gene expression can be achieved by introduction of sequence-specific small interfering (si) RNA duplexes and by de novo intracellular synthesis of short sequence-specific double-stranded RNAs. However, achieving desired levels of knockdown is a barrier to successful analytic and therapeutic application. We demonstrate that increasing expression of introduced short hairpin RNA (shRNA) can markedly enhance RNA interference (RNAi) and that this approach can be used to achieve maximal target down-regulation, when the choice of optimal siRNA-binding sites is restricted or when multiple genes are simultaneously targeted and the amount of siRNA is limiting. A dose-dependent RNAi effect was accomplished by placing copies of shRNA under control of the Pol III U6 small nuclear RNA promoter in tandem in a DNA vector. Using this system, we achieved simultaneous down-regulation of expression of classical human leukocyte antigen (HLA) class I genes in cultured and primary human T cells, which might be applied to help circumvent T-cell-mediated rejection of immunogenic and/or HLA-disparate allografts.

Amplification of RNAi--targeting HLA mRNAs.

Suppression de post-transcriptionnelle de l&#x26;#39;expression du g&#xE8;ne peut &#xEA;tre obtenu par introduction de s&#xE9;quences sp&#xE9;cifiques duplex ARN interf&#xE9;rents (sc) et par la synth&#xE8;se de novo de intracellulaire court sp&#xE9;cifiques d&#x26;#39;une s&#xE9;quence double brin ARN. Toutefois, la r&#xE9;alisation de niveaux d&#xE9;sir&#xE9;s de knockdown est un obstacle &#xE0; la r&#xE9;ussite et l&#x26;#39;application analytique th&#xE9;rapeutique. Nous d&#xE9;montrons que l&#x26;#39;expression de plus en plus introduit en &#xE9;pingle &#xE0; cheveux courts ARN (shRNA) peuvent sensiblement am&#xE9;liorer l&#x26;#39;interf&#xE9;rence ARN (ARNi) et que cette approche peut &#xEA;tre utilis&#xE9;e pour atteindre l&#x26;#39;objectif maximal r&#xE9;gulation &#xE0; la baisse, lorsque le choix des meilleures siARN sites de liaison est restreinte ou lorsque plusieurs g&#xE8;nes sont simultan&#xE9;ment cible et la quantit&#xE9; de siARN limite. Un effet dose-d&#xE9;pendante l&#x26;#39;ARNi a &#xE9;t&#xE9; accompli en pla&#xE7;ant des copies de shRNA sous le contr&#xF4;le du promoteur Pol III U6 ARN petite nucl&#xE9;aire en tandem dans un vecteur d&#x26;#39;ADN. Gr&#xE2;ce &#xE0; ce syst&#xE8;me, nous avons r&#xE9;alis&#xE9; simultan&#xE9;ment la r&#xE9;gulation n&#xE9;gative de l&#x26;#39;expression de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne des leucocytes classique humains (HLA) de classe I des g&#xE8;nes dans les cultures de cellules T et primaire de l&#x26;#39;homme, qui pourraient &#xEA;tre appliqu&#xE9;es pour aider les contourner T m&#xE9;di&#xE9;e par les cellules rejet de immunog&#xE8;ne et / ou HLA des allogreffes. disparates

Amplification de l&#x26;#39;ARNi - ciblage HLA ARNm

Amplifikation von RNAi - Targeting HLA mRNAs.

Posttranscriptional soppressione dell&#39;espressione del gene pu&ograve; essere ottenuto dall&#39;introduzione delle doppiette di (si) RNA interferenti piccole sequenza-specifici e da de novo la sintesi intracellulare di breve sequenza-specifico double-stranded RNA. Tuttavia, raggiungere i livelli desiderati di atterramento &egrave; un ostacolo alla riuscita applicazione analitica e terapeutica. Dimostriamo che crescente espressione di introdotto short hairpin RNA (shRNA) pu&ograve; notevolmente migliorare la interferenza del RNA (RNAi) e che questo approccio pu&ograve; essere utilizzato per ottenere massima destinazione down-regulation, quando la scelta dei siti di siRNA-associazione ottimale &egrave; limitata o quando geni multipli simultaneamente sono mirati e sta limitando la quantit&agrave; di siRNA. Un effetto di RNAi dose-dipendente &egrave; stato compiuto ponendo copie di shRNA sotto il controllo del promotore di RNA nucleare piccolo Pol III U6 in tandem in un vettore di DNA. Utilizzando questo sistema, abbiamo raggiunto simultanea down-regulation dell&#39;espressione del classico umani antigene del leucocita (HLA) di classe I geni in colture e primarie T cellule umane, che potrebbero essere applicate per aiutare aggirare T-cell-mediated rifiuto del allograft immunogenica e/o HLA-disparati.

Amplificazione di RNAi - targeting HLA mRNAs.

&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x6291;&#x5236;&#x306F;&#x3001;&#x914D;&#x5217;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;&#xFF08;SI&#xFF09;RNA&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x77ED;&#x3044;&#x914D;&#x5217;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;RNA&#x306E;de novo&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306E;&#x6240;&#x671B;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x3001;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x6CBB;&#x7642;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7528;&#x3078;&#x306E;&#x969C;&#x58C1;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x77ED;&#x9396;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;RNA&#xFF08;shRNA&#xFF09;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#xFF08;RNAi&#xFF09;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;siRNA&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x304C;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x304D;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8907;&#x6570;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3001;siRNA&#x306E;&#x91CF;&#x304C;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7528;&#x91CF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306A;RNAi&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;DNA&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x306E;Pol III U6&#x6838;&#x5185;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;RNA&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;&#x3067;shRNA&#x306E;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x3092;&#x7F6E;&#x304F;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;HLA&#x306E;T&#x7D30;&#x80DE;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6027;&#x62D2;&#x7D76;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30D2;&#x30C8;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x540C;&#x6642;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;&#x30D2;&#x30C8;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#xFF08;HLA&#xFF09;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;I&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#xB7;&#x7570;&#x7A2E;&#x79FB;&#x690D;&#x7247;&#x3002;

RNAi&#x306E;&#x5897;&#x5E45; -  HLA mRNA&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;

Posttranscriptional &#xC5B5;&#xC81C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xC21C;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; (si) RNA duplexes&#xC758; &#xC18C;&#xAC1C;&#xC640; &#xC9E7;&#xC740; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xAD00;&#xB828; &#xB354;&#xBE14;-&#xC88C;&#xCD08; Rnas&#xC758; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xB2EC;&#xC131; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC801; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC7A5;&#xBCBD;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3C4;&#xC785;&#xB41C; &#xB41C; &#xC9E7;&#xC740; &#xD5E4;&#xC5B4;&#xD540; RNA (shRNA)&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DD; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; RNA &#xAC04;&#xC12D; (RNAi)&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; siRNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC740; &#xC81C;&#xD55C; &#xB610;&#xB294; &#xB54C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xAC00; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; Sirna&#xC758; &#xC591;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558; &#xACE0; &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;, &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;-&#xC758;&#xC874; RNAi &#xD6A8;&#xACFC; DNA &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB3D9;&#xC5D0;&#xC11C; shRNA Pol III&#xC758; U6 &#xC791;&#xC740; &#xD575; RNA &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xD1B5;&#xC81C;&#xC758; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8;&#xC744; &#xBC30;&#xCE58; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2EC;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACE0;&#xC804; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2DD;&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xADDC;&#xC81C; &#xB2EC;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C; &#xD56D; &#xC6D0; (HLA) &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; I &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAD50;&#xC591; &#xBC0F; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; immunogenic &#xBC0F; HLA &#xC774;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; allografts&#xC758; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC911;&#xC7AC; &#xAC70;&#xBD80;&#xB97C; &#xC6B0;&#xD68C; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC801;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RNAi-HLA mRNAs &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xD655;&#xB300;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Supresi&#xF3;n postranscripcional de la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica puede lograrse mediante la introducci&#xF3;n de secuencias espec&#xED;ficas de peque&#xF1;os interferentes (SI) ARN d&#xFA;plex y por la s&#xED;ntesis de novo intracelular de cortas secuencias espec&#xED;ficas de ARN de doble cadena. Sin embargo, el logro de los niveles deseados de derribo es una barrera para la anal&#xED;tica de &#xE9;xito y aplicaci&#xF3;n terap&#xE9;utica. Nos demuestran que la expresi&#xF3;n creciente de presentaci&#xF3;n corto horquilla RNA (shRNA) puede mejorar considerablemente la interferencia de ARN (RNAi), y que este enfoque puede ser utilizado para alcanzar el objetivo m&#xE1;ximo de regulaci&#xF3;n a la baja, cuando la elecci&#xF3;n de la &#xF3;ptima uni&#xF3;n siRNA sitios est&#xE1; restringido o cuando m&#xFA;ltiples los genes son al mismo tiempo objetivo y la cantidad de siRNA se limita. Un efecto dependiente de la dosis ARNi se llev&#xF3; a cabo mediante la colocaci&#xF3;n de copias de ARNhc bajo el control del promotor Pol III U6 peque&#xF1;o ARN nuclear en t&#xE1;ndem en un vector de ADN. El uso de este sistema, hemos logrado simult&#xE1;nea baja regulaci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n del ant&#xED;geno cl&#xE1;sica leucocitario humano (HLA) de clase I genes en las c&#xE9;lulas T en cultivo primario y humanos, que pudieran aplicarse para ayudar a eludir las c&#xE9;lulas T mediada por el rechazo de inmun&#xF3;genos y / o HLA los aloinjertos dispares.

La amplificaci&#xF3;n de RNAi - HLA objetivo mRNAs

&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x65B0;&#x578B; biophotonic &#x68C0;&#x6D4B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x548C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x6D53;&#x5EA6;&#x68AF;&#x5EA6;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B9A;&#x5411;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x91C7;&#x7528;&#x8424;&#x706B;&#x866B;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176; (ffLuc)-&#x751F;&#x6210; biophotonic &#x4FE1;&#x53F7;&#x4EE5;&#x91CF;&#x5316;&#x5FAE;&#x5B54;&#x677F; 96 &#x4E95;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x6587;&#x4E66;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;&#x5F53;&#x76F8;&#x6BD4;&#x76F4;&#x63A5;&#x7535;&#x6C60;&#x679A;&#x4E3E;&#xFF0C;&#x4F18;&#x8D8A;&#x7684;&#x51C6;&#x786E;&#x6027;&#x3001; &#x53EF;&#x91CD;&#x590D;&#x6027;&#x548C;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6; biophotonic &#x8BB0;&#x8005;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x6982;&#x5FF5;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x91CF;&#x5316;&#x4F53;&#x5185;&#x6269;&#x5927;&#x7684; ffLuc(+) &#x9996;&#x8981;&#x4EBA;&#x6743;&#x8D8B;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50; RANTES&#x3001;&#x3001; MCP-1 &#x548C; IP 10&#x3002;&#x9002;&#x5408;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x548C;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E93;&#x6765;&#x6807;&#x8BC6;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x548C;&#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#xFF0C;&#x5206;&#x6790;&#x751F;&#x7269;&#x6DB2;&#x4F53;&#x7684;&#x8D8B;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x7814;&#x7A76;&#x591A;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027; 96 &#x5B54;&#x5FAE;&#x5B54;&#x677F;&#x683C;&#x5F0F;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x539F;&#x4F4D; biophotonic &#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x53D1;&#x5149;&#x8BB0;&#x8005;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;

Here we report on a novel biophotonic assay system for the detection and quantitation of chemotaxis, the directed movement of cells in response to chemokine concentration gradients. Our assay employs a firefly luciferase (ffLuc)-generated biophotonic signal to quantify cellular migration in 96-well microplate chemotaxis instruments. When compared to direct cell enumeration, the biophotonic reporter method is superior in accuracy, reproducibility, and sensitivity. As a proof-of-concept, we demonstrate the utility of this assay for quantifying the chemotactic response of ex vivo expanded ffLuc(+) primary human T-cells to recombinant human chemokines MCP-1, RANTES, and IP-10. The 96-well microplate format and in situ biophotonic detection of cells are amenable to high-throughput screening of peptides and small molecule libraries to identify agonists and antagonists of cellular chemotaxis, to analyze biological fluids for chemotactic activity, and to study chemotaxis in a variety of cell types.

A quantitative high-throughput chemotaxis assay using bioluminescent reporter cells.

Nous rapportons ici sur un syst&egrave;me d&#39;analyse de roman biophotoniques pour la d&eacute;tection et la quantification de la chimiotaxie, le mouvement dirig&eacute; des cellules en r&eacute;ponse aux gradients de concentration de chimiokine. Notre essai emploie une lucif&eacute;rase luciole (ffLuc)-g&eacute;n&eacute;r&eacute; biophotoniques signal pour quantifier la migration cellulaire dans les instruments de la chimiotaxie Microplaque 96 puits. Par rapport &agrave; la num&eacute;ration des lymphocytes directe, la m&eacute;thode de journaliste biophotonique est sup&eacute;rieure &agrave; la pr&eacute;cision, la reproductibilit&eacute; et sensibilit&eacute;. Comme un preuve de concept, nous d&eacute;montrent l&#39;utilit&eacute; de ce test pour quantifier la r&eacute;ponse chimiotactique des ex vivo ffLuc(+) &eacute;largi primaire homme T-cellules &agrave; des chimiokines humaines recombinantes MCP-1, RANTES et IP-10. Le format de microplaque 96 puits et d&eacute;tection in situ biophotoniques de cellules sont pr&ecirc;tent au criblage &agrave; haut d&eacute;bit des peptides et des banques de petites mol&eacute;cules pour identifier des agonistes et antagonistes de la chimiotaxie cellulaire, d&#39;analyser les liquides biologiques pour l&#39;activit&eacute; chimiotactique et pour &eacute;tudier la chimiotaxie dans une vari&eacute;t&eacute; de types de cellules.

Une analyse de chimiotactisme de haut d&eacute;bit quantitative utilisant des cellules bioluminescentes journaliste.

Hier berichten wir &uuml;ber eine neuartige Biophotonische Testsystem zum Nachweis und quantitative Bestimmung der Chemotaxis, die gerichtete Bewegung von Zellen als Reaktion auf Chemokine Konzentration Steigungen. Unsere Assay besch&auml;ftigt ein Gl&uuml;hw&uuml;rmchen Luciferase (FfLuc)-generiert Biophotonische Signal, zellul&auml;re Migration in 96-Well Microplatte Chemotaxis Instrumente zu quantifizieren. Im Vergleich zu direkten Zelle-Enumeration ist die Biophotonische Reporter Methode &uuml;berlegen in Genauigkeit, Reproduzierbarkeit und Empfindlichkeit. Als Proof-of-Concept, demonstrieren wir die N&uuml;tzlichkeit dieses Assays zur Quantifizierung der chemotaktischen Reaktion der ex Vivo erweiterten ffLuc(+) prim&auml;ren menschlichen T-Zellen zu rekombinantem menschlichen Chemokine MCP-1, RANTES und IP-10. Die 96-Well-Mikroplatten-Format und in-situ Biophotonische Detektion von Zellen sind empf&auml;nglich f&uuml;r High-Throughput-Screening von Peptiden und niedermolekularer Bibliotheken zur Identifizierung von Agonisten und Antagonisten der zellul&auml;ren Chemotaxis, biologische Fl&uuml;ssigkeiten f&uuml;r chemotaktische Aktivit&auml;t analysieren und Chemotaxis in einer Vielzahl von Zelltypen zu studieren.

Eine quantitative Hochdurchsatz-Chemotaxis-Assay mit phosphoreszierende Reporter Zellen.

Riportiamo su un sistema di dosaggio del romanzo biophotonic per il rilevamento e la quantificazione della chemiotassi, il movimento diretto delle cellule in risposta a gradienti di concentrazione delle chemochine. Il nostro test impiega una luciferasi di lucciola (ffLuc)-generato biophotonic segnale di quantificare la migrazione cellulare in strumenti di chemiotassi micropiastra 96 pozzetti. Rispetto all&#39;enumerazione diretta delle cellule, il metodo di reporter biophotonic &egrave; superiore in sensibilit&agrave;, accuratezza e riproducibilit&agrave;. Come un proof-of-concept, ci dimostrano l&#39;utilit&agrave; di questo test per quantificare la risposta chemiotattica delle ex vivo ffLuc(+) espanso primari umani T-cellule a ricombinante umano chemochine MCP-1, RANTES e IP-10. Micropiastra 96 pozzetti formato e rilevamento biophotonic in situ delle cellule sono suscettibili di high-throughput screening dei peptidi e librerie di piccole molecole per identificare agonisti e antagonisti della chemiotassi cellulare, per analizzare i liquidi biologici per l&#39;attivit&agrave; chemiotattica e studiare chemiotassi in una variet&agrave; di tipi di cellule.

Un&#39;analisi di chemiotassi di high-throughput quantitative utilizzando cellule bioluminescenti reporter.

&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x691C;&#x51FA;&#x3068;&#x5B9A;&#x91CF;&#x3001;&#x52D5;&#x304D;&#x30B1;&#x30E2;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x52FE;&#x914D;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DB;&#x30BF;&#x30EB;&#x306E;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; (ffLuc) &#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;-&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x884C; 96 &#x30A6;&#x30A7;&#x30EB; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5316;&#x5B66;&#x8D70;&#x6027;&#x5546;&#x54C1;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x76F4;&#x63A5;&#x30BB;&#x30EB;&#x5217;&#x6319;&#x6CD5;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x8A18;&#x8005;&#x6CD5;&#x306F;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3001;&#x518D;&#x73FE;&#x6027;&#x3001;&#x611F;&#x5EA6;&#x306B;&#x512A;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306E;&#x6982;&#x5FF5;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x5FDC;&#x7B54; ex vivo &#x62E1;&#x5F35; ffLuc(+) &#x4E3B;&#x306A;&#x4EBA;&#x9593;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30B1;&#x30E2;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; MCP 1&#x3001;RANTES&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; IP 10 T &#x7D30;&#x80DE;&#x3002;96 &#x30A6;&#x30A7;&#x30EB; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x5834;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x691C;&#x51FA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x3068;&#x904A;&#x8D70;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6D41;&#x4F53;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x306B;&#x5F93;&#x3046;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x767A;&#x5149;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x8A66;&#x91D1;&#x3002;

&#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC80;&#xCD9C; &#xBC0F; &#xC815;&#xB7C9; chemotaxis, chemokine &#xB18D;&#xB3C4; &#xAE30;&#xC6B8;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC140;&#xC758; &#xAC10;&#xB3C5;&#xB41C; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC758; &#xC18C;&#xC124; biophotonic &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xACE0;&#xC6A9; (ffLuc) &#xAC1C; &#xB625; &#xBC8C;&#xB808; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C;-96-&#xC798; &#xBBF8; &#xD310; chemotaxis &#xC545;&#xAE30; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xCC99;&#xB3C4;&#xB97C; biophotonic &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C1;&#xC811; &#xC140; &#xC5F4;&#xAC70;&#xD615;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; biophotonic &#xAE30;&#xC790; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xC815;&#xD655;&#xB3C4;, &#xC7AC;&#xD604;&#xC131;, &#xBC0F; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC6B0;&#xC218; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ex vivo &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; ffLuc(+) &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608; &#xBC18;&#xC751; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC704;&#xD55C;&#xC774; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xC99D;&#xBA85;-&#xC758;-&#xAC1C;&#xB150;, T-&#xC138;&#xD3EC; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC778;&#xAC04; chemokines MCP-1, RANTES, &#xBC0F; IP-10. 96-&#xC798; &#xBBF8; &#xD310; &#xD615;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xC140;&#xC758; &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; &#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; biophotonic &#xAC80;&#xCD9C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBC0F; agonists&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xAC80;&#xC5F4; &#xBC0F; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; chemotaxis antagonists &#xD608; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xCCB4;&#xC561;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC140; &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; chemotaxis &#xACF5;&#xBD80; &#xC758;&#xBB34;&#xAC00; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBD80; &#xAE30;&#xC790; &#xC140;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; chemotaxis &#xC591;&#xC801; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;.

Aqu&iacute; divulgamos sobre un sistema de an&aacute;lisis Biofot&oacute;nico novedoso para la detecci&oacute;n y cuantificaci&oacute;n de quimiotaxis, el movimiento dirigido de las c&eacute;lulas en respuesta a gradientes de concentraci&oacute;n de quimiocina. Nuestro an&aacute;lisis emplea una luciferasa de la luci&eacute;rnaga (ffLuc)-generado Biofot&oacute;nico se&ntilde;al para cuantificar la migraci&oacute;n celular en instrumentos de Quimiotaxis de microplacas de 96 pocillos. En comparaci&oacute;n con la enumeraci&oacute;n celular directo, el m&eacute;todo de reportero Biofot&oacute;nico es superior en precisi&oacute;n, reproducibilidad y sensibilidad. Como una prueba de concepto, demostramos la utilidad de este ensayo para cuantificar la respuesta quimiot&aacute;ctica de ex vivo ffLuc(+) ampliado primaria humanos t-c&eacute;lulas a recombinante humano quimioquinas MCP-1, RANTES e IP-10. El formato de la microplaca de 96 pocillos y detecci&oacute;n Biofot&oacute;nico in situ de c&eacute;lulas son susceptibles de investigaci&oacute;n de alto rendimiento de p&eacute;ptidos y bibliotecas de mol&eacute;cula peque&ntilde;a para identificar a los agonistas y antagonistas de quimiotaxis celular, fluidos biol&oacute;gicos de actividad quimiot&aacute;ctica de analizar y estudiar la quimiotaxis en una variedad de tipos de c&eacute;lulas.

Un ensayo de Quimiotaxis de alto rendimiento cuantitativo utilizando c&eacute;lulas bioluminiscente reportero.

&#x75BE;&#x75C5;&#x590D;&#x53D1;&#x662F;&#x65E0;&#x5173;&#x7684;&#x8110;&#x5E26;&#x8840;&#x79FB;&#x690D; (UCBT) B &#x7CFB;&#x6025;&#x6027;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5; &#xFF08;B-&#x5168;&#x90E8;&#xFF09; &#x540E;&#x5B9E;&#x73B0;&#x6CBB;&#x7597;&#x6210;&#x529F;&#x7684;&#x969C;&#x788D;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x6350;&#x52A9;&#x6E90;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7EE7;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6982;&#x5FF5;&#x4E0A;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6D88;&#x9664;&#x6B8B;&#x7559;&#x75C5;&#x5F02;&#x57FA;&#x56E0;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x672F;&#x540E;&#x7684;&#xFF0C;&#x8FC7;&#x7EE7;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x540E; UCBT &#x53D7;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#xFF0C;&#x5F88;&#x96BE;&#x4EA7;&#x751F;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x5929;&#x771F;&#x8110;&#x5E26;&#x8840; (UCB)-T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x82E5;&#x8981;&#x751F;&#x6210; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8BC6;&#x522B; B &#x6240;&#x6709;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5F00;&#x53D1;&#x5D4C;&#x5408; immunoreceptor &#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x4E3A; CD19&#xFF0C;B &#x6CBF;&#x88AD;&#x6297;&#x539F;&#xFF0C;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5E76;&#x8868;&#x793A;&#x6B64;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0; UCB &#x6D3E;&#x751F;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x524D;&#x4F53;&#x5185;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x7B26;&#x5408;&#x5F53;&#x524D;&#x826F;&#x597D;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x5B9E;&#x8DF5;&#x4E3A; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5BA1;&#x5224;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x6539;&#x548C;&#x6570;&#x63A7;&#x8FDB; CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x6548;&#x5E94;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6269;&#x5927; UCB &#x6D3E;&#x751F;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x90FD;&#x662F;&#x80FD;&#x591F; CD19 &#x9650;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8C03;&#x89E3;&#x56DE;&#x5F52; CD19 + &#x80BF;&#x7624;&#x548C;&#x88AB;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x6D88;&#x9664;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x514B;&#x9686;&#x7684;&#x5EF6;&#x65F6;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x900F;&#x9732;&#x5177;&#x4F53;&#x548C;&#x53CD;&#x590D;&#x6EB6;&#x8840; CD19 + &#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x4E3A; UCBT &#x4EE5;&#x51CF;&#x5C11; CD19 + B &#x6240;&#x6709;&#x590D;&#x53D1;&#x540E;&#x6CE8;&#x5165; UCB &#x6D3E;&#x751F; CD19 &#x7279;&#x5B9A; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7406;&#x7531;&#x3002;

&#x5E7C;&#x7A1A;&#x7684;&#x8110;&#x5E26;&#x8840; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A; CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x6EB6;&#x6548;&#x5E94;&#x5668; posttransplantation &#x8FC7;&#x7EE7;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x3002;

Disease relapse is a barrier to achieving therapeutic success after unrelated umbilical cord-blood transplantation (UCBT) for B-lineage acute lymphoblastic leukemia (B-ALL). While adoptive transfer of donor-derived tumor-specific T cells is a conceptually attractive approach to eliminating residual disease after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, adoptive immunotherapy after UCBT is constrained by the difficulty of generating antigen-specific T cells from functionally naive umbilical cord-blood (UCB)-derived T cells. Therefore, to generate T cells that recognize B-ALL, we have developed a chimeric immunoreceptor to redirect the specificity of T cells for CD19, a B-lineage antigen, and expressed this transgene in UCB-derived T cells. An ex vivo process, which is compliant with current good manufacturing practice for T-cell trials, has been developed to genetically modify and numerically expand UCB-derived T cells into CD19-specific effector cells. These are capable of CD19-restricted cytokine production and cytolysis in vitro, as well as mediating regression of CD19+ tumor and being selectively eliminated in vivo. Moreover, time-lapse microscopy of the genetically modified T-cell clones revealed an ability to lyse CD19+ tumor cells specifically and repetitively. These data provide the rationale for infusing UCB-derived CD19-specific T cells after UCBT to reduce the incidence of CD19+ B-ALL relapse.

Differentiation of naive cord-blood T cells into CD19-specific cytolytic effectors for posttransplantation adoptive immunotherapy.

Rechute de la maladie constitue un obstacle &agrave; la r&eacute;ussite th&eacute;rapeutique apr&egrave;s une transplantation ind&eacute;pendants de sang de cordon ombilical (UCBT) pour une leuc&eacute;mie lymphoblastique aigu&euml; (LLA-B) lign&eacute;e B. Transfert adoptif de d&eacute;riv&eacute; donneur de cellules de T sp&eacute;cifique est une approche attrayante sur le plan conceptuel pour &eacute;liminer la maladie r&eacute;siduelle apr&egrave;s allogreffe de cellules souches h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques, immunoth&eacute;rapie adoptive apr&egrave;s UCBT est limit&eacute;e par la difficult&eacute; de g&eacute;n&eacute;rer T antig&egrave;ne-sp&eacute;cifiques des cellules de sang de cordon ombilical na&iuml;f sur le plan fonctionnel (UCB)-d&eacute;riv&eacute; des cellules T. Par cons&eacute;quent, pour g&eacute;n&eacute;rer des lymphocytes T qui reconnaissent B-ALL, nous avons mis au point une chim&egrave;re immunoreceptor pour rediriger la sp&eacute;cificit&eacute; des lymphocytes T pour CD19, un antig&egrave;ne de la lign&eacute;e B et a exprim&eacute; ce transg&egrave;ne dans les cellules d&eacute;riv&eacute;es de UCB T. Un ex vivo des processus, qui est conforme &agrave; l&#39;actuelle bonnes pratiques de fabrication pour les essais de lymphocytes T, a &eacute;t&eacute; d&eacute;velopp&eacute; pour modifier g&eacute;n&eacute;tiquement et num&eacute;riquement d&eacute;veloppez cellules d&eacute;riv&eacute;es de UCB T en cellules effectrices CD19 sp&eacute;cifiques. Ceux-ci sont capables de la production de cytokines CD19 restreints et cytolyse in vitro, ainsi que m&eacute;diatrice de r&eacute;gression de la tumeur CD19 + et &ecirc;tre &eacute;limin&eacute;s s&eacute;lectivement in vivo. Par ailleurs, time-lapse microscopie des clones de lymphocytes T g&eacute;n&eacute;tiquement modifi&eacute;s a r&eacute;v&eacute;l&eacute; une capacit&eacute; &agrave; lyser les cellules tumorales CD19 + sp&eacute;cifiquement et de fa&ccedil;on r&eacute;p&eacute;titive. Ces donn&eacute;es fournissent la raison d&#39;&ecirc;tre pour insuffler d&eacute;riv&eacute; de UCB lymphocytes t sp&eacute;cifiques CD19 apr&egrave;s UCBT pour r&eacute;duire l&#39;incidence des rechutes CD19 + B-ALL.

Diff&eacute;renciation des cellules de T de sang de cordon na&iuml;ve en effecteurs cytotoxiques de CD19 sp&eacute;cifiques pour posttransplantation immunoth&eacute;rapie adoptive.

R&uuml;ckfall der Krankheit ist ein Hindernis f&uuml;r einen therapeutischen Erfolg nach unabh&auml;ngigen Nabelschnurblut-Transplantation (UCBT) bei B-Linie akute lymphoblastische Leuk&auml;mie (B-ALL). W&auml;hrend adoptiven Transfer Tumor-spezifischer T-Zellen Spender abgeleitet ein konzeptionell attraktive Ansatz zur Beseitigung r&eacute;siduelle nach allogener h&auml;matopoetischer Stammzelltransplantation ist, Adoptive Immuntherapie nach UCBT, durch die Schwierigkeit eingeschr&auml;nkt ist der Generierung von Antigen-spezifischen T Zellen aus funktional naiv Nabelschnur-Blut (UCB)-T-Zellen abgeleitet. Daher um T-Zellen zu generieren, die B-ALL zu erkennen, entwickeln ein Chim&auml;rer Aramburuzabala Umleitung von die Besonderheit der T-Zellen f&uuml;r CD19, ein Antigen B-Linie und wir diese Transgene in UCB abgeleiteten T-Zellen ausgedr&uuml;ckt. Eine ex Vivo Prozess, der kompatibel mit aktuellen guten Herstellungspraxis f&uuml;r T-Zell-Studien ist, genetisch ver&auml;ndern und erweitern numerisch UCB abgeleiteten T-Zellen in CD19-spezifischen Effektorzellen entwickelt wurde. Diese k&ouml;nnen CD19-eingeschr&auml;nkte Cytokine Produktion sowie Zytolyse in-vitro-und vermittelnde Regression CD19 + Tumor und selektiv in-vivo eliminiert wird. Dar&uuml;ber hinaus ergab Zeitraffer Mikroskopie der die genmanipulierten T-Zell-Klone eine F&auml;higkeit CD19 + Tumorzellen gezielt und wiederholt aufzul&ouml;sen. Diese Daten stellen die Begr&uuml;ndung f&uuml;r Infusion UCB abgeleitete CD19-spezifische T-Zellen nach UCBT zur Verringerung der H&auml;ufigkeit von CD19 + B-ALL-Rezidiv.

Differenzierung des naiven Nabelschnurblut T-Zellen in CD19-spezifische Enabran Effektoren f&uuml;r posttransplantation Adoptive Immuntherapie.

Ricaduta di malattia &egrave; una barriera per raggiungere il successo terapeutico dopo trapianto di sangue del cordone ombelicale indipendenti (UCBT) per la leucemia linfoblastica acuta (B-ALL) di B-lineage. Mentre il trasferimento adottivo di derivato da donatore cellule T tumorali specifici &egrave; un approccio concettualmente attraente per eliminare la malattia residua dopo trapianto di cellule staminali emopoietiche allogeniche, immunoterapia adoptive dopo UCBT &egrave; limitata dalla difficolt&agrave; di generare T antigene-specifiche celle da funzionalmente ingenuo sangue del cordone ombelicale-(UCB)-cellule T. Pertanto, per generare le cellule T che riconoscono la B-tutto, abbiamo sviluppato un chimerico immunoreceptor per reindirizzare la specificit&agrave; delle cellule T per CD19, un antigene di B-lineage e ha espresso questo transgene in cellule T UCB-derivato. Un ex vivo processo, che &egrave; conforme alle attuali buone prassi di fabbricazione per le prove delle cellule T, &egrave; stato sviluppato per modificare geneticamente ed espandersi numericamente cellule derivate da UCB T in cellule effettrici CD19-specifici. Queste sono in grado di produzione di cytokine CD19-limitato e citolisi in vitro, cos&igrave; come mediazione regressione del tumore CD19 + e venendo eliminato selettivamente in vivo. Inoltre, time-lapse microscopia dei cloni di cellule T geneticamente modificate hanno rivelato la capacit&agrave; di lisare cellule tumorali CD19 + specificamente e ripetutamente. Questi dati forniscono il razionale per l&#39;infusione di cellule derivate da UCB CD19-specifiche T dopo UCBT per ridurre l&#39;incidenza di ricaduta CD19 + B-ALL.

Differenziazione delle cellule T di ingenuo sangue cordonale in effettori citolitica CD19-specifico per miglioramenti adoptive immunoterapia.

&#x75C5;&#x6C17;&#x518D;&#x767A;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306A;&#x81CD;&#x5E2F;&#x8840;&#x79FB;&#x690D; (UCBT) B &#x7CFB;&#x7D71;&#x6025;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5; &#xFF08;B-&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#xFF09; &#x306E;&#x5F8C;&#x306B;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7531;&#x6765;&#x816B;&#x760D;&#x7279;&#x7570; T &#x7D30;&#x80DE;&#x7684;&#x540C;&#x7A2E;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x5F8C;&#x306E;&#x6B8B;&#x7559;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x6982;&#x5FF5;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x990A;&#x5B50;&#x306E; UCBT &#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684; T &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x96E3;&#x3057;&#x3055;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5F8C;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;&#x306A;&#x81CD;&#x5E2F;&#x8840;&#x304B;&#x3089; (UCB) &#x7D30;&#x80DE;-T &#x7D30;&#x80DE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;B &#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306F; B &#x7CFB;&#x7D71;&#x6297;&#x539F; CD19 &#x306E;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E; UCB &#x7531;&#x6765; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x524D;&#x306E;&#x30F4;&#x30A3;&#x30F4;&#x30A9; cgmp T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x306E;&#x6E96;&#x62E0;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x3001;&#x6570;&#x5024; UCB &#x7531;&#x6765; T &#x7D30;&#x80DE; CD19 &#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5C55;&#x958B;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;CD19 &#x5236;&#x9650;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x7523;&#x751F;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5D29;&#x58CA;&#x3092; in vitro &#x3067;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F; cd19 &#x816B;&#x760D;&#x3068;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x6392;&#x9664;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x56DE;&#x5E30;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x5FAE;&#x901F;&#x5EA6;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306F;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057; cd19 &#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;cd19 B &#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x518D;&#x767A;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x7387;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B; UCBT &#x5F8C; UCB &#x6D3E;&#x751F; CD19 &#x7279;&#x7570;&#x7684; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6CE8;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7406;&#x8AD6;&#x7684;&#x6839;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x969C;&#x5BB3;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x79FB;&#x690D;&#x306E;&#x990A;&#x5B50;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;&#x306A;&#x81CD;&#x5E2F;&#x8840; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;

&#xC9C8;&#xBCD1; &#xC7AC;&#xBC1C; &#xC5C6;&#xB294; &#xD0EF; &#xD608;&#xC561; &#xC774;&#xC2DD; (UCBT) B &#xD608;&#xD1B5; &#xAE09;&#xC131; &#xB9BC;&#xD504; &#xAD6C;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; (B &#xBAA8;&#xB450;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6C4; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC131;&#xACF5;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC7A5;&#xBCBD;&#xC774; &#xB2E4;. &#xC785;&#xC591; immunotherapy UCBT &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; T &#xC0DD;&#xC131;&#xC758; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C; &#xD6C4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C; &#xD0EF; &#xC904;-&#xD608;&#xC561; (UCB)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC720;&#xB798; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC785;&#xC591; &#xC804;&#xC1A1; allogeneic &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xC2DD; &#xD6C4; &#xC794;&#xC5EC; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xB294; &#xAC1C;&#xB150;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC; &#xC911;&#xC77C;-T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, B &#xBAA8;&#xB450;&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC1C;&#xBC1C; CD19, B-&#xB9AC;&#xB2C8;&#xC9C0; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158;&#xD560; chimeric immunoreceptor &#xD558; &#xACE0;&#xC774; transgene UCB &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604;. Ex vivo T &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD604;&#xC7AC; &#xC88B;&#xC740; &#xC81C;&#xC870; &#xAD00;&#xD589; &#xC900;&#xC218; &#xD558;&#xB294;, &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xC22B;&#xC790;&#xB85C; CD19 &#xD2B9;&#xC815; effector &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; UCB &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; CD19 &#xC81C;&#xD55C; cytokine &#xC0DD;&#xC0B0; &#xCCB4; &#xC678;, cytolysis &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD68C;&#xADC0; CD19 + &#xC885;&#xC591; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC81C;&#xAC70; &#xB418; &#xACE0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD074;&#xB860;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xACC4;&#xC2DC; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; CD19 + &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; lyse. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; CD19 + B &#xBAA8;&#xB450; &#xC7AC;&#xBC1C;&#xC758; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xB960;&#xC744; &#xC904;&#xC774;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; UCBT &#xD6C4; UCB &#xD30C;&#xC0DD; CD19 &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; &#xB300; &#xD55C; &#xADFC;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Posttransplantation &#xC785;&#xC591; immunotherapy &#xC704;&#xD55C; CD19 &#xD2B9;&#xC815; cytolytic &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xB85C; &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C; &#xCF54;&#xB4DC; &#xD608;&#xC561; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654;.

Reca&iacute;da de la enfermedad es una barrera para lograr el &eacute;xito terap&eacute;utico despu&eacute;s del trasplante sin relaci&oacute;n de sangre del cord&oacute;n umbilical (UCBT) para la leucemia linfobl&aacute;stica aguda de la B-linaje (B-ALL). Mientras que la transferencia adoptiva de tumor espec&iacute;ficos derivados de donantes de c&eacute;lulas T es un enfoque atractivo expresiones para eliminar la enfermedad residual despu&eacute;s del trasplante alog&eacute;nico de c&eacute;lulas madre hematopoy&eacute;ticas, inmunoterapia adoptiva despu&eacute;s de que UCBT est&aacute; limitado por la dificultad de generar ant&iacute;geno-espec&iacute;fica T c&eacute;lulas de funcionalmente ingenuo sangre del cord&oacute;n umbilical-(UCB)-derivado de las c&eacute;lulas T. Por lo tanto, para generar c&eacute;lulas T que reconocen todas, hemos desarrollado un quim&eacute;rico immunoreceptor para redirigir la especificidad de las c&eacute;lulas T para CD19, un ant&iacute;geno B-linaje y expres&oacute; este transg&eacute;n en las c&eacute;lulas T derivados de UCB. Un ex vivo el proceso, que es compatible con las actuales buenas pr&aacute;cticas de fabricaci&oacute;n para ensayos de c&eacute;lulas T, ha sido desarrollado para modificar gen&eacute;ticamente y expandirse num&eacute;ricamente linfocitos T derivados de UCB en c&eacute;lulas efectoras de CD19-espec&iacute;fica. Estos son capaces de la producci&oacute;n de citoquinas CD19 restringidos y cit&oacute;lisis in vitro, as&iacute; como mediador regresi&oacute;n de CD19 + tumor y ser eliminados selectivamente en vivo. Por otra parte, time-lapse microscopia de los clones de c&eacute;lulas T modificados gen&eacute;ticamente revel&oacute; una capacidad de lisar las c&eacute;lulas del tumor CD19 + espec&iacute;ficamente y repetitivamente. Estos datos proporcionan el fundamento para la infusi&oacute;n de las c&eacute;lulas de T de CD19 espec&iacute;ficos derivados de UCB despu&eacute;s de UCBT para reducir la incidencia de reca&iacute;das de CD19 + B-ALL.

Diferenciaci&oacute;n de las c&eacute;lulas de la sangre del cord&oacute;n T ingenuo en efectores citol&iacute;ticas CD19 espec&iacute;ficos del posttransplantation inmunoterapia adoptiva.

&#x5D4C;&#x5408;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x4F53; (&#x8F66;) &#x7ED3;&#x5408; CD3 zeta &#x4FE1;&#x53F7;&#x56FE;&#x6848;&#xFF0C;&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x5230;&#x4E34;&#x5E8A;&#x4E0A;&#x91CD;&#x8981;&#x76EE;&#x6807;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x539F;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4EE3;&#x7684;&#x6C7D;&#x8F66;&#xFF0C;&#x5982; CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x8F66; &#xFF08;&#x6307;&#x5B9A; CD19R&#xFF09;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x65E0;&#x6CD5;&#x5145;&#x5206;&#x8FDB;&#x884C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x7531;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x5D4C;&#x5408; CD3 zeta&#xFF0C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x8F85;&#x52A9;&#x5206;&#x5B50;&#x901A;&#x8FC7;&#x534F;&#x540C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x542F;&#x52A8;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x5F3A;&#x8FEB;&#x5168;&#x957F;&#x5171;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x5B50; CD28 CD8(+)CD19R(+)CD28(-) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8FD8;&#x539F;&#x5B8C;&#x5168;&#x80DC;&#x4EFB;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6297;&#x539F;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x5316;&#x540E;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE; CD80/CD86 &#x7684; CD19(+) &#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x534F;&#x540C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5230; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x8FC7; CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x8F66;&#xFF0C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; CD80/CD86&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4EE3;&#x8F66; &#xFF08;&#x6307;&#x5B9A; CD19RCD28&#xFF09;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x4FEE;&#x6539;&#x5D4C;&#x5408; CD28 &#x5D4C;&#x5408; CD3 zeta &#x4FE1;&#x53F7;&#x57DF;&#x878D;&#x5408;&#x3002;CD19R(+) &#x548C; CD19RCD28(+) CD8(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E13;&#x95E8;&#x81EA;&#x6EB6; CD19(+) &#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;CD19RCD28(+) CD8(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6269;&#x6563;&#x6CA1;&#x6709;&#x5916;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4EBA;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-2&#x3001; &#x4EA7;&#x751F;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-2&#x3001; &#x4F20;&#x64AD;&#xFF0C;&#x548C;&#x5411;&#x4E0A;-&#x8C03;&#x8282;&#x51CB;&#x4EA1; Bcl-X(L) CD19(+) &#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x523A;&#x6FC0;&#x540E;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x4F53;&#x5185;&#x8F6C;&#x79FB; adoptively CD19RCD28(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x663E;&#x793A;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#x548C;&#x76F8;&#x6BD4; CD19R(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x8F86;&#x8F66;&#x7684;&#x4FEE;&#x6539;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4; CD19 &#x7279;&#x5B9A; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x8FD9;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4EE3;&#x8F66;&#x6539;&#x8FDB;&#x6CBB;&#x7597;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;

CD28 &#x534F;&#x540C;&#x4FE1;&#x53F7; CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x5D4C;&#x5408;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x4F53;&#x901A;&#x8FC7;&#x63D0;&#x4F9B;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86;&#x4F53;&#x5185;&#x6301;&#x7EED;&#x5B58;&#x5728;&#x548C; adoptively &#x8F6C;&#x79FB; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Chimeric antigen receptors (CAR) combine an antigen-binding domain with a CD3-zeta signaling motif to redirect T-cell specificity to clinically important targets. First-generation CAR, such as the CD19-specific CAR (designated CD19R), may fail to fully engage genetically modified T cells because activation is initiated by antigen-dependent signaling through chimeric CD3-zeta, independent of costimulation through accessory molecules. We show that enforced expression of the full-length costimulatory molecule CD28 in CD8(+)CD19R(+)CD28(-) T cells can restore fully competent antigen-dependent T-cell activation upon binding CD19(+) targets expressing CD80/CD86. Thus, to provide costimulation to T cells through a CD19-specific CAR, independent of binding to CD80/CD86, we developed a second-generation CAR (designated CD19RCD28), which includes a modified chimeric CD28 signaling domain fused to chimeric CD3-zeta. CD19R(+) and CD19RCD28(+) CD8(+) T cells specifically lyse CD19(+) tumor cells. However, the CD19RCD28(+) CD8(+) T cells proliferate in absence of exogenous recombinant human interleukin-2, produce interleukin-2, propagate, and up-regulate antiapoptotic Bcl-X(L) after stimulation by CD19(+) tumor cells. For the first time, we show in vivo that adoptively transferred CD19RCD28(+) T cells show an improved persistence and antitumor effect compared with CD19R(+) T cells. These data imply that modifications to the CAR can result in improved therapeutic potential of CD19-specific T cells expressing this second-generation CAR.

CD28 costimulation provided through a CD19-specific chimeric antigen receptor enhances in vivo persistence and antitumor efficacy of adoptively transferred T cells.

R&eacute;cepteurs d&#39;antig&egrave;nes chim&eacute;rique (voiture) combinent un domaine de liaison &agrave; l&#39;antig&egrave;ne avec un motif de signalisation CD3-zeta pour rediriger la sp&eacute;cificit&eacute; des lymphocytes cibles cliniquement importants. VOITURE de premi&egrave;re g&eacute;n&eacute;ration, tels que la voiture de CD19 sp&eacute;cifiques (appel&eacute;e CD19R), peut-&ecirc;tre ne pas s&#39;engager pleinement les lymphocytes T g&eacute;n&eacute;tiquement modifi&eacute;s parce que l&#39;activation est initi&eacute;e par l&#39;antig&egrave;ne-d&eacute;pendante de signalisation &agrave; travers CD3-zeta chim&eacute;rique, ind&eacute;pendant de la costimulation par l&#39;interm&eacute;diaire de mol&eacute;cules accessoires. Nous montrons qu&#39;expression forc&eacute;e de la mol&eacute;cule de costimulation CD28 pleine longueur dans les cellules de T de CD8(+)CD19R(+)CD28(-) pouvez restaurer pleinement comp&eacute;tente activation des lymphocytes T antig&egrave;ne d&eacute;pendant sur des objectifs CD19(+) exprimant CD80/CD86 contraignants. Ainsi, pour fournir la costimulation aux cellules T &agrave; travers une voiture sp&eacute;cifique CD19, ind&eacute;pendante de la liaison &agrave; CD80/CD86, nous avons d&eacute;velopp&eacute; une voiture de deuxi&egrave;me g&eacute;n&eacute;ration (nomm&eacute;e CD19RCD28), qui comprend un CD28 chim&eacute;rique mis &agrave; jour le domaine signalisation fusionn&eacute; au CD3-zeta chim&eacute;rique. Cellules CD19R(+) et T CD8 CD19RCD28(+) lysent sp&eacute;cifiquement les cellules tumorales CD19(+). Cependant, les cellules T CD8 CD19RCD28(+) prolif&egrave;rent en absence d&#39;exog&egrave;ne recombinant human interleukin-2, produisent d&#39;interleukine-2, propagent et la r&eacute;gulation antiapoptotiques Bcl-X(L) apr&egrave;s stimulation par les cellules tumorales CD19(+). Pour la premi&egrave;re fois, nous montrons in vivo que Moutschen transf&eacute;r&eacute;s CD19RCD28(+) T cellules montrent une persistance am&eacute;lior&eacute;e et effet antitumoral compar&eacute;e aux cellules T CD19R(+). Ces donn&eacute;es sugg&egrave;rent que les modifications &agrave; la voiture peuvent provoquer am&eacute;lior&eacute;e potentiel th&eacute;rapeutique des cellules T sp&eacute;cifiques CD19 exprimant cette voiture de deuxi&egrave;me g&eacute;n&eacute;ration.

CD28 costimulation fournie par un r&eacute;cepteur d&#39;antig&egrave;ne chim&eacute;rique CD19 sp&eacute;cifique am&eacute;liore la persistence in vivo et efficacit&eacute; antitumorale des cellules de T Moutschen transf&eacute;r&eacute;s.

Chim&auml;ren Antigenrezeptoren (Auto) kombinieren eine Antigen-bindende Dom&auml;ne mit einem CD3-Zeta Signalling Motiv T-Zell-Spezifit&auml;t an klinisch relevanten Ziele umleiten. Ersten Generation Auto, wie die CD19-spezifische-Auto (als CD19R), m&ouml;glicherweise genetisch ver&auml;nderte T-Zellen voll zu engagieren, da die Aktivierung von Antigen-abh&auml;ngige Signalisierung durch Chim&auml;ren CD3-Zeta, unabh&auml;ngig von Costimulation durch Zubeh&ouml;r Molek&uuml;le initiiert wird. Wir zeigen, dass erzwungene Ausdruck des in kostimulatorischen Molek&uuml;ls CD28 in CD8(+)CD19R(+)CD28(-) T Zellen hochqualifizierte Antigen-abh&auml;ngige T-Zell-Aktivierung auf verbindliche CD19(+) Ziele auszudr&uuml;cken CD80/CD86 wiederherstellen kann. Daher entwickelt Costimulation auf T-Zellen durch Kfz CD19-spezifische, unabh&auml;ngig von der Bindung an CD80/CD86, wir zweiten Generation Kfz (benannt CD19RCD28), die eine modifizierte Chim&auml;ren CD28 enth&auml;lt Signalisierung Dom&auml;ne zu Chim&auml;ren CD3-Zeta verschmolzen. CD19R(+) und CD19RCD28(+) CD8(+) T-Zellen l&ouml;sen speziell CD19(+) Tumor-Zellen. Jedoch die CD19RCD28(+) CD8(+) T-Zellen vermehren ohne exogene rekombinanten menschlichen Interleukin-2, Interleukin-2 zu produzieren, propagieren und bis-Regeln Antiapoptotic Bcl-X(L) nach Stimulation von CD19(+) Tumorzellen. Zum ersten Mal zeigen wir in-vivo adoptively &uuml;bertragene CD19RCD28(+) T-Zellen eine verbesserte Ausdauer und antitumor-Effekt im Vergleich zu CD19R(+) T-Zellen zeigen. Diese Daten bedeuten, dass &Auml;nderungen an dem Auto verbesserte therapeutische Potenzial von CD19-spezifische T-Zellen, die zum Ausdruck dieser zweiten Generation Wagen f&uuml;hren k&ouml;nnen.

CD28 Costimulation &uuml;ber ein Chim&auml;rer Antigen-Rezeptor CD19-spezifische bereitgestellt verbessert in-vivo-Persistenz und antitumor-Wirksamkeit von adoptively &uuml;bertragenen T-Zellen.

Recettori chimerici antigene (auto) combinano un dominio di legame dell&#39;antigene con un motivo di segnalazione CD3-zeta per reindirizzare la specificit&agrave; delle cellule T a obiettivi clinicamente importanti. AUTO di prima generazione, come l&#39;auto di CD19-specifici (come CD19R), potrebbe non riuscire a coinvolgere completamente cellule T geneticamente modificate perch&eacute; attivazione &egrave; avviata da antigene-dipendente di segnalazione attraverso chimerico CD3-zeta, indipendente di costimulation attraverso molecole accessorie. Mostriamo che espressione forzata della full-length costimolazione molecola CD28 in cellule T CD8(+)CD19R(+)CD28(-) in grado di ripristinare pienamente competente attivazione di cellule T antigene-dipendente su obiettivi CD19(+) esprimendo CD80/CD86 vincolanti. Cos&igrave;, per fornire costimulation a cellule T attraverso una macchina specifica CD19, indipendente dell&#39;associazione a CD80/CD86, abbiamo sviluppato una seconda generazione auto (indicata CD19RCD28), che comprende un modificato CD28 chimerico segnalazione dominio fuso a CD3-zeta chimerico. CD19R(+) e CD19RCD28(+) cellule T cellule specificamente lisare cellule tumorali CD19(+). Tuttavia, le cellule CD19RCD28(+) cellule T proliferano in assenza di esogeno interleuchina-2 ricombinante umana, producono interleuchina-2, propagano e up-regolano antiapoptotici Bcl-X(L) dopo stimolazione di cellule tumorali CD19(+). Per la prima volta, vi mostriamo in vivo che adoptively trasferite le cellule T CD19RCD28(+) mostrano una maggiore persistenza ed effetto antitumorale confrontato con le cellule T CD19R(+). Questi dati implicano che possono comportare modifiche all&#39;auto miglioramento potenziale terapeutico delle cellule CD19-specifiche T che esprimono questa vettura di seconda generazione.

CD28 costimulation fornito attraverso un recettore chimerico antigene CD19 specifici migliora la persistenza in vivo ed efficacia antitumorale delle cellule T adoptively trasferite.

&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (&#x30D7;&#x30E9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;) &#x6297;&#x539F;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x76EE;&#x6A19;&#x306B; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;CD3 &#x30BC;&#x30FC;&#x30BF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x517C;&#x306D;&#x5099;&#x3048;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7B2C; 1 &#x4E16;&#x4EE3;&#x306E;&#x8ECA; &#xFF08;CD19R &#x6307;&#x5B9A;&#xFF09; CD19 &#x56FA;&#x6709;&#x8ECA;&#x306A;&#x3069;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x6297;&#x539F;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9; CD3 &#x30BC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3001;&#x5171;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B5;&#x30EA;&#x30FC;&#x5206;&#x5B50;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3092;&#x5408;&#x56F3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x958B;&#x59CB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x884C;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x9054;&#x306F; CD8(+)CD19R(+)CD28(-) T &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E;&#x5171;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x5B50; CD28 &#x767A;&#x73FE; CD80/CD86 &#x306E;&#x767A;&#x73FE; CD19(+) &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x6642;&#x306B;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x6709;&#x80FD;&#x306A;&#x6297;&#x539F;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027; T &#x7D30;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5171; T &#x7D30;&#x80DE; CD19 &#x56FA;&#x6709;&#x8ECA;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F; CD80/CD86 &#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#x30AD;&#x30E1;&#x30E9; CD3 &#x30BC;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x5909;&#x66F4;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9; CD28 &#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059; (CD19RCD28 &#x3092;&#x6307;&#x5B9A;)&#x3001;&#x7B2C; 2 &#x4E16;&#x4EE3;&#x8ECA;&#x958B;&#x767A;&#x3002;CD19R(+) &#x304A;&#x3088;&#x3073; CD19RCD28(+) &#x306E;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B; CD19(+) &#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;CD19RCD28(+) &#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x3072;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x66FF;&#x3048;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3;-2 &#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x306F;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3; 2 &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3001;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3092;&#x6297; Bcl-X(L) &#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; CD19(+) &#x5F8C;&#x8ABF;&#x6574;&#x3002;&#x6700;&#x521D;&#x306B;&#x79C1;&#x9054;&#x306F;&#x9069;&#x5FDC;&#x7684;&#x8EE2;&#x9001; CD19RCD28(+) T &#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6C38;&#x7D9A;&#x5316;&#x3068; CD19R(+) T &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3092; in vivo &#x3067;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x8ECA;&#x3078;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3053;&#x306E;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E16;&#x4EE3;&#x8ECA; CD19 &#x7279;&#x7570;&#x7684; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6539;&#x5584;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CD19 &#x56FA;&#x6709;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3055;&#x308C;&#x308B; CD28 &#x5171;&#x523A;&#x6FC0;&#x304C; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x6C38;&#x7D9A;&#x6027;&#x3068;&#x9069;&#x5FDC;&#x7684;&#x8EE2;&#x9001;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Chimeric &#xD56D; &#xC6D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (&#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;) &#xC784;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158;&#xD558;&#xB824;&#xBA74; CD3-&#xC81C;&#xD0C0; &#xC2E0;&#xD638; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB85C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xBB36;&#xB294; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xACB0;&#xD569;. CD19-&#xAD00;&#xB828; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; (CD19R &#xC9C0;&#xC815;) &#xB4F1; 1 &#xC138;&#xB300; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC885;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; chimeric CD3-&#xC81C;&#xD0C0;, &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; costimulation&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC885;&#xC18D; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC2E4;&#xD328;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; costimulatory &#xBD84;&#xC790; CD28 CD8(+)CD19R(+)CD28(-) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC758; &#xC801;&#xC6A9;&#xB41C; &#xC2DD; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; CD19(+) &#xB300;&#xC0C1; CD80/CD86 &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC720;&#xB2A5;&#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC885;&#xC18D; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF5;&#xC6D0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, CD19 &#xD2B9;&#xC815; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; costimulation&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; CD80/CD86, &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; chimeric CD28 &#xC2E0;&#xD638; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC735;&#xD569; chimeric CD3-&#xC81C;&#xD0C0;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; 2 &#xC138;&#xB300; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; (CD19RCD28 &#xC9C0;&#xC815;). CD19R(+) &#xBC0F; CD19RCD28(+) CD8(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xD2B9;&#xD788; CD19(+) &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; lyse. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, CD19RCD28(+) CD8(+) T &#xC138;&#xD3EC; exogenous &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC778;&#xAC04; interleukin-2&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xC2DD;, interleukin-2 &#xC0DD;&#xC131;, &#xC804;&#xD30C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; CD19(+) &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC790;&#xADF9; &#xD6C4; antiapoptotic Bcl-X(L) &#xC5C5;&#xC73C;&#xB85C; &#xADDC;&#xC81C;. &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; in vivo adoptively &#xC804;&#xC1A1; &#xB41C; CD19RCD28(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC9C0; &#xC18D;&#xC131; &#xBC0F; CD19R(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; antitumor &#xD6A8;&#xACFC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xC758;&#xBBF8; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xCC28; &#xC218;&#xC815;&#xC774; 2 &#xC138;&#xB300; &#xCC28; &#xD45C;&#xD604; CD19 &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

CD28 costimulation CD19 &#xD2B9;&#xC815; chimeric &#xD56D; &#xC6D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC81C;&#xACF5; &#xB418;&#xB294; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0; &#xC18D;&#xC131; &#xBC0F; adoptively &#xC804;&#xC1A1; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; antitumor &#xD6A8;&#xB2A5;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Receptores del ant&iacute;geno quim&eacute;rico (coche) combinan un dominio de uni&oacute;n a ant&iacute;geno con un motivo de se&ntilde;alizaci&oacute;n de CD3-zeta para redirigir la especificidad de la t-c&eacute;lula cl&iacute;nicamente importantes objetivos. COCHE de primera generaci&oacute;n, como el coche de CD19-espec&iacute;fica (CD19R se&ntilde;alado), puede fallar comprometerse totalmente modificadas gen&eacute;ticamente c&eacute;lulas T porque la activaci&oacute;n es iniciada por ant&iacute;geno dependiente se&ntilde;alizaci&oacute;n mediante quim&eacute;rica CD3-zeta, independiente de la coestimulaci&oacute;n a trav&eacute;s de mol&eacute;culas accesorias. Demostramos que la expresi&oacute;n forzada de la mol&eacute;cula coestimuladoras integral CD28 en c&eacute;lulas de T de CD8(+)CD19R(+)CD28(-) puede restaurar plenamente competente activaci&oacute;n de c&eacute;lulas T de ant&iacute;geno dependiente sobre objetivos CD19(+) expresando CD80/CD86 vinculantes. As&iacute;, para proporcionar la coestimulaci&oacute;n a las c&eacute;lulas T a trav&eacute;s de un coche de CD19-espec&iacute;fica, independiente de la Uni&oacute;n a CD80/CD86, desarrollamos un coche de segunda generaci&oacute;n (se&ntilde;alado CD19RCD28), que incluye un modificado CD28 quim&eacute;rica dominio se&ntilde;alizaci&oacute;n fusionado al quim&eacute;rico CD3-zeta. Las c&eacute;lulas CD19R(+) y CD19RCD28(+) CD8 T espec&iacute;ficamente Lisan las c&eacute;lulas del tumor CD19(+). Sin embargo, las c&eacute;lulas T CD8 de CD19RCD28(+) proliferan en ausencia de interleucina 2 humana recombinante ex&oacute;gena, producen interleucina-2, propagan y para arriba-regulan antiapopt&oacute;tico Bcl-X(L) estimuladas por las c&eacute;lulas del tumor CD19(+). Por primera vez, mostramos en vivo que eventualmente transferidas c&eacute;lulas T CD19RCD28(+) muestran una mayor persistencia y efecto antitumoral en comparaci&oacute;n con las c&eacute;lulas de T de CD19R(+). Estos datos implican que modificaciones al coche pueden resultar en mayor potencial terap&eacute;utico de c&eacute;lulas T espec&iacute;ficas CD19 expresando este coche de segunda generaci&oacute;n.

CD28 coestimulaci&oacute;n proporcionado a trav&eacute;s de un receptor de ant&iacute;geno quim&eacute;rico CD19 espec&iacute;ficos mejora la persistencia en vivo y eficacia antitumoral de las c&eacute;lulas eventualmente transferidas.

&#x76EE;&#x524D;&#xFF0C;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7279;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x5206;&#x5B50; CD19&#x3001; CD20 &#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x8BB8;&#x591A; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x6076;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x662F;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x6297;&#x4F53;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x8026;&#x5408;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E24;&#x79CD;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x5F0F;&#x9884;&#x8BA1;&#x5C06;&#x63D0;&#x9AD8;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x6548;&#x679C;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x5BF9;&#x80BF;&#x7624;&#x8010;&#x5355;&#x836F;&#x4E0D;&#x65AD;&#x3002;&#x8FD9;&#x53EF;&#x4EE5;&#x663E;&#x793A;&#x4F7F;&#x7528; immunocytokine&#xFF0C;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684; CD20 &#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x878D;&#x5408;&#x5230;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20; 2 (IL-2) &#x524D;&#x4F53;&#x5185;&#x7ED3;&#x5408;&#x6269;&#x5927;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8110;&#x5E26;&#x8840;&#x6E90;&#x6027; CD8(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x6539;&#x8981; CD19 &#x5177;&#x4F53;&#x3001; &#x5F02;&#x57FA;&#x56E0;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x672F;&#x540E;&#x7EE7;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x91CD;&#x7EC4;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-2 &#x7684; immunocytokine &#x5230; CD19(+)CD20(+) &#x80BF;&#x7624;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x5730;&#x5F00;&#x5C55;&#x7684;&#x4E00;&#x9879;&#x597D;&#x5904;&#x662F;&#x6539;&#x5584;&#x4F53;&#x5185;&#x6301;&#x7EED;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A; CD19 &#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x5C06;&#x5BFC;&#x81F4;&#x589E;&#x5F3A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E00;&#x9636;&#x6BB5;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x6B63;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528;&#x6297;-CD20-IL-2 immunocytokine &#x548C; CD19 &#x7279;&#x5B9A; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5355;&#x4E00;&#x836F;&#x7269;&#x7597;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x503C;&#x5F97;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EC4;&#x5408;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E24;&#x4E2A;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x3002;

&#x7ED3;&#x5408;&#x6536;&#x517B;&#x7684;&#x8702;&#x7A9D;&#x7535;&#x8BDD;&#x548C; immunocytokine &#x7597;&#x6CD5;&#x6539;&#x5584; B &#x6CBF;&#x88AD;&#x6076;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

Currently, the lineage-specific cell-surface molecules CD19 and CD20 present on many B-cell malignancies are targets for both antibody- and cell-based therapies. Coupling these two treatment modalities is predicted to improve the antitumor effect, particularly for tumors resistant to single-agent biotherapies. This can be shown using an immunocytokine, composed of a CD20-specific monoclonal antibody fused to biologically active interleukin 2 (IL-2), combined with ex vivo expanded human umbilical cord blood-derived CD8(+) T cells, that have been genetically modified to be CD19 specific, for adoptive transfer after allogeneic hematopoietic stem-cell transplantation. We show that a benefit of targeted delivery of recombinant IL-2 by the immunocytokine to the CD19(+)CD20(+) tumor microenvironment is improved in vivo persistence of the CD19-specific T cells, and this results in an augmented cell-mediated antitumor effect. Phase I trials are under way using anti-CD20-IL-2 immunocytokine and CD19-specific T cells as monotherapies, and our results warrant clinical trials using combination of these two immunotherapies.

Combining adoptive cellular and immunocytokine therapies to improve treatment of B-lineage malignancy.

Actuellement, les mol&eacute;cules de surface cellulaire sp&eacute;cifique lign&eacute;e CD19 et CD20 pr&eacute;sent sur nombreuses tumeurs malignes de cellules B sont des cibles pour les deux th&eacute;rapies ax&eacute;e sur les anticorps et les cellules. Les modalit&eacute;s de ces deux traitement de couplage est pr&eacute;dit pour am&eacute;liorer l&#39;effet antitumoral, particuli&egrave;rement pour les tumeurs r&eacute;sistantes &agrave; la monoth&eacute;rapie bioth&eacute;rapies. Cela peut &ecirc;tre illustr&eacute; &agrave; l&#39;aide d&#39;un immunocytokine, compos&eacute; d&#39;un anticorps monoclonal sp&eacute;cifique-CD20 fusionn&eacute; &agrave; biologiquement actives interleukine 2 (il-2), combin&eacute; avec ex vivo &eacute;largi humain cellules du cordon ombilical d&eacute;riv&eacute;s du sang T CD8, qui ont &eacute;t&eacute; g&eacute;n&eacute;tiquement modifi&eacute;es pour &ecirc;tre CD19 sp&eacute;cifiques, pour transfert adoptif apr&egrave;s une transplantation allog&eacute;nique de cellules souches h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques. Nous montrons qu&#39;une prestation d&#39;administration cibl&eacute;e de recombinant IL-2 par l&#39;immunocytokine pour le microenvironnement de tumeur CD19(+)CD20(+) est am&eacute;lior&eacute;e persistence in vivo des cellules T sp&eacute;cifiques CD19, et cela se traduit par un effet antitumoral &agrave; m&eacute;diation cellulaire augment&eacute;. La phase I des essais sont en cours en utilisant comme monoth&eacute;rapies anti-CD20-IL-2 immunocytokine et cellules T sp&eacute;cifiques CD19, et nos r&eacute;sultats des essais cliniques &agrave; l&#39;aide de la combinaison de ces deux immunoth&eacute;rapies le justifient.

Combinant des th&eacute;rapies cellulaires et immunocytokine adoptifs pour am&eacute;liorer le traitement du cancer de la lign&eacute;e B.

Die Herkunfts-spezifische Zelloberfl&auml;che Molek&uuml;le CD19 und CD20 auf viele B-Zell-Tumoren vorhanden sind, Ziele f&uuml;r beide Antik&ouml;rper und zellbasierte Therapien. Diese beiden Behandlungsmodalit&auml;ten Kupplung ist voraussichtlich um den antitumor-Effekt, besonders bei Tumoren resistent gegen Single-Agent-bioth&eacute;rapies zu verbessern. Dies kann mithilfe einer Immunocytokine gezeigt werden, setzt sich aus einem CD20-spezifischen monoklonalen Antik&ouml;rper verschmolzen zu biologisch aktiven Interleukin 2 (Il-2), kombiniert mit ex Vivo erweitert menschlichen Nabelschnur Blut abgeleitete CD8(+) T-Zellen, die genetisch ge&auml;ndert wurden CD19 f&uuml;r adoptiven Transfer nach allogener h&auml;matopoetischer Stammzelltransplantation spezifisch zu sein. Wir zeigen, dass ein Vorteil der gezielte Bereitstellung von rekombinantem Il von der Immunocytokine f&uuml;r die CD19(+)CD20(+) Tumor Mikromilieu verbesserter in-vivo Persistenz der CD19-spezifische T-Zellen, und dies f&uuml;hrt zu eines erweiterten zellvermittelte antitumor-Effekts. Phase-I-Studien sind im Gange mit Anti-CD20-IL-2 Immunocytokine und CD19-spezifische T-Zellen als Monotherapies, und unsere Ergebnisse garantieren klinische Studien mit Kombination aus diesen beiden Immuntherapien.

Kombinieren Adoptiv-Mobilfunk- und Immunocytokine Therapien zur Verbesserung der Behandlung von B-Linie B&ouml;sartigkeit.

Attualmente, le molecole di superficie cellulare specifico lignaggio CD19 e CD20 presente su molti tumori maligni delle cellule di B sono bersagli per entrambe le terapie cell-based e di anticorpo. Queste due modalit&agrave; di accoppiamento &egrave; previsto per migliorare l&#39;effetto antitumorale, particolarmente per i tumori resistenti a singolo agente Bioterapie. Questo pu&ograve; essere dimostrato usando un immunocytokine, composto di un anticorpo monoclonale specifico CD20 fuso a biologicamente attivo interleuchina 2 (IL-2), combinato con ex vivo espanso cordone ombelicale umano derivato da sangue cellule cellule T, che sono stati geneticamente modificate per essere specifico, per il trasferimento adottivo dopo trapianto di cellule staminali emopoietiche allogeniche CD19. Vi mostriamo un beneficio di consegna mirata del ricombinante IL-2 dalla immunocytokine per il microambiente del tumore CD19(+)CD20(+) &egrave; migliorata persistenza in vivo delle cellule T specifiche CD19, che questo si traduce in un&#39;aumentata effetto antitumorale cellulo-mediata. Fase I prove sono in corso utilizzando come monoterapie immunocytokine anti-CD20-IL-2 e cellule T CD19-specifiche, e i nostri risultati garantiscono studi clinici utilizzando la combinazione di questi due immunoterapie.

La combinazione di terapie cellulari e immunocytokine adottive per migliorare il trattamento di neoplasie B-lineage.

&#x73FE;&#x5728;&#x3001;&#x7CFB;&#x7D71;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x5206;&#x5B50; CD19 &#x3068; CD20 &#x591A;&#x304F;&#x306E; B &#x7D30;&#x80DE;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306F;&#x4E21;&#x6297;&#x4F53;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x5358;&#x5264; biotherapies &#x8010;&#x6027;&#x306E;&#x7279;&#x306B;&#x306E;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F; immunocytokine &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; CD20 &#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x524D;&#x306E;&#x30F4;&#x30A3;&#x30F4;&#x30A9;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x878D;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3; 2 (IL-2)&#x3001;CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x540C;&#x7A2E;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x5F8C;&#x306E;&#x990A;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3072;&#x3068;&#x81CD;&#x5E2F;&#x8840;&#x7531;&#x6765;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x62E1;&#x5927;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CD19(+)CD20(+) &#x816B;&#x760D;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x3078;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; IL-2 &#x306F; immunocytokine &#x3067;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x7D5E;&#x3063;&#x305F;&#x914D;&#x4FE1;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x306F; CD19 &#x7279;&#x7570;&#x7684; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6539;&#x826F; in vivo &#x3067;&#x6C38;&#x7D9A;&#x6027;&#x3067;&#x3001;&#x62E1;&#x5F35;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7B2C; I &#x76F8;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x304C;&#x9032;&#x884C;&#x4E2D;&#x6297; CD20 IL 2 immunocytokine &#x3068; CD19 &#x7279;&#x7570;&#x7684; T &#x7D30;&#x80DE; monotherapies &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 2 &#x3064;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x4FDD;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

B &#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x60AA;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x990A;&#x5B50;&#x306E;&#x643A;&#x5E2F; immunocytokine &#x7642;&#x6CD5;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3002;

&#xD604;&#xC7AC;, &#xB9AC;&#xB2C8;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB828; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xBD84;&#xC790; CD19 &#xBC0F; CD20 &#xB9CE;&#xC740; B-&#xC138;&#xD3EC; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0; &#xB450; &#xD56D; &#xCCB4; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC774; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB450; &#xCE58;&#xB8CC; modalities &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; biotherapies&#xC5D0; &#xAC15;&#xD55C; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xD788; antitumor &#xD6A8;&#xACFC; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC804;&#xB9DD; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; immunocytokine&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD45C;&#xC2DC;&#xD560; &#xC218;, CD20 &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC778;&#xD130; &#xB8E8;&#xB97C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131; &#xC735;&#xD569;&#xB41C; &#xD0A8; 2 (&#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2), ex vivo&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD0EF; &#xD608;&#xC561; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; CD8(+) T &#xC138;&#xD3EC;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; CD19 allogeneic &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xC2DD; &#xD6C4; &#xC785;&#xC591; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778; &#xC218; &#xC218;&#xC815; &#xB41C; &#xD655;&#xC7A5;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; CD19(+)CD20(+) &#xC885;&#xC591; microenvironment&#xC5D0;&#xB294; immunocytokine&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xB41C; &#xBC30;&#xB2EC; &#xD61C;&#xD0DD; CD19 &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC9C0; &#xC18D;&#xC131; &#xC774;&#xBA70; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC99D;&#xAC15;&#xB41C; &#xC140; &#xC911;&#xC7AC; antitumor &#xD6A8;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. 1 &#xB2E8;&#xACC4; &#xC2E4;&#xD5D8; monotherapies,&#xC73C;&#xB85C; &#xC548;&#xD2F0;-CD20-&#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2 immunocytokine&#xC640; CD19 &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C4;&#xD589; &#xB418; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC99D; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC774; &#xB450; immunotherapies&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;.

B-&#xD608;&#xD1B5; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC785;&#xC591; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xBC0F; immunocytokine &#xC694;&#xBC95;&#xC744; &#xACB0;&#xD569;.

Actualmente, las mol&eacute;culas de superficie celular de linaje espec&iacute;fico CD19 y CD20 presente en muchos tumores malignos de c&eacute;lulas B son blancos para ambas terapias basadas en anticuerpos y c&eacute;lulas. Acoplamiento de estas dos modalidades de tratamiento se predice para mejorar el efecto antitumoral, particularmente para los tumores resistentes al agente &uacute;nico bioterapias. Esto puede ser mostrado usando un immunocytokine, compuesta de un anticuerpo monoclonal espec&iacute;fico-CD20 fundida a biol&oacute;gicamente activo interleucina 2 (IL-2), combinado con ex vivo ampliado cord&oacute;n umbilical humano derivadas de sangre CD8 T cells, que han sido gen&eacute;ticamente modificados para ser espec&iacute;fico, para la transferencia adoptiva despu&eacute;s del trasplante alog&eacute;nico de c&eacute;lulas madre hematopoy&eacute;ticas CD19. Demostramos que un beneficio de entrega espec&iacute;fica de recombinante IL-2 por el immunocytokine el microentorno del tumor CD19(+)CD20(+) es mejor persistencia en vivo de las c&eacute;lulas T espec&iacute;ficas CD19, y esto da como resultado un efecto antitumoral mediada por c&eacute;lulas aumentado. Fase I ensayos se est&aacute;n realizando con anti-CD20-IL-2 immunocytokine y las c&eacute;lulas T espec&iacute;ficas CD19 como monoterapias, y nuestros resultados garantizan ensayos cl&iacute;nicos utilizando la combinaci&oacute;n de estas dos inmunoterapias.

Combinando adoptivas terapias celulares y immunocytokine para mejorar el tratamiento de la malignidad de la B-linaje.

&#x4E34;&#x5E8A;&#x7EA7; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x9057;&#x4F20;&#x4FEE;&#x9970;&#x662F;&#x5F00;&#x5C55;&#x4EE5;&#x589E;&#x5F3A;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x4EBA;&#x63A8;&#x51FA;&#x4E86;&#x5D4C;&#x5408;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x4F53; (CAR)&#xFF0C;&#x4F7F; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8BC6;&#x522B;&#x7279;&#x5B9A;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x6297;&#x539F;&#xFF0C;&#x5982; CD19&#xFF0C;&#x53CA;&#x65E9;&#x671F;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x4EBA;&#x4F53;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x76EE;&#x524D;&#x6B63;&#x5728;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x5B89;&#x5168;&#x6027;&#x548C;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#x4E0B;, &#x4E00;&#x4EE3;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x5927;&#x969C;&#x788D;&#x53D1;&#x5C55;&#x9002;&#x5408;&#x8F66;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F7D;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x6539;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x6548;&#x7387;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x9AD8;&#x4F46;&#x5B83;&#x9700;&#x8981;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684;&#x5236;&#x9020;&#x7684;&#x6602;&#x8D35;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5206;&#x7EA7;&#x91CD;&#x7EC4;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3002;&#x88F8; DNA &#x8D28;&#x7C92; Electrotransfer &#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x7ECF;&#x6D4E;&#x9AD8;&#x6548;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6548;&#x7387;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6574;&#x5408;&#x4EFB;&#x52A1; ex &#x4F53;&#x5185;&#x6267;&#x884C;&#x9009;&#x62E9;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4E34;&#x5E8A;&#x6709;&#x610F;&#x4E49;&#x7684;&#x6570;&#x5B57;&#xFF0C;CAR(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x6740;&#x706D;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5411;&#x9AD8;&#x6548;&#x5730;&#x751F;&#x6210;&#x4E0E;&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#xFF0C;&#x5F15;&#x5165; DNA &#x8D28;&#x7C92;&#x4ECE;&#x7761;&#x7F8E;&#x4EBA;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;/&#x8F6C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x76F4;&#x63A5;&#x8868;&#x8FBE; CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x8F66;&#x5728;&#x5185;&#x5B58;&#x4E2D;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; T &#x6548;&#x5E94;&#x7EC6;&#x80DE;&#x65E0;&#x836F;&#x7269;&#x9009;&#x62E9;&#x62A5;&#x544A;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5F53;&#x52A0;&#x4E0A; CD19(+) &#x4EBA;&#x5DE5;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6570;&#x503C;&#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7ED3;&#x679C;&#x5FEB;&#x901F;&#x4EA7;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684; CD4(+) &#x548C; CD8(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F66;&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411; CD19(+) &#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;

&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4EBA;&#x53E3;&#x4E3A; CD19 &#x4F7F;&#x7528;&#x7761;&#x7F8E;&#x4EBA;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;

Genetic modification of clinical-grade T cells is undertaken to augment function, including redirecting specificity for desired antigen. We and others have introduced a chimeric antigen receptor (CAR) to enable T cells to recognize lineage-specific tumor antigen, such as CD19, and early-phase human trials are currently assessing safety and feasibility. However, a significant barrier to next-generation clinical studies is developing a suitable CAR expression vector capable of genetically modifying a broad population of T cells. Transduction of T cells is relatively efficient but it requires specialized manufacture of expensive clinical grade recombinant virus. Electrotransfer of naked DNA plasmid offers a cost-effective alternative approach, but the inefficiency of transgene integration mandates ex vivo selection under cytocidal concentrations of drug to enforce expression of selection genes to achieve clinically meaningful numbers of CAR(+) T cells. We report a new approach to efficiently generating T cells with redirected specificity, introducing DNA plasmids from the Sleeping Beauty transposon/transposase system to directly express a CD19-specific CAR in memory and effector T cells without drug selection. When coupled with numerical expansion on CD19(+) artificial antigen-presenting cells, this gene transfer method results in rapid outgrowth of CD4(+) and CD8(+) T cells expressing CAR to redirect specificity for CD19(+) tumor cells.

Redirecting specificity of T-cell populations for CD19 using the Sleeping Beauty system.

Modification g&eacute;n&eacute;tique de cellules de T de cliniques de qualit&eacute; est engag&eacute;e &agrave; augmenter la fonction, y compris la redirection de sp&eacute;cificit&eacute; pour l&#39;antig&egrave;ne d&eacute;sir&eacute;e. Nous et autres avons introduit un r&eacute;cepteur d&#39;antig&egrave;ne chim&eacute;rique (voiture) pour activer les lymphocytes T &agrave; reconna&icirc;tre les antig&egrave;nes sp&eacute;cifiques lign&eacute;e tumorale, comme CD19, et les premiers essais humains &eacute;valuent actuellement la s&eacute;curit&eacute; et la faisabilit&eacute;. Cependant, un obstacle important aux &eacute;tudes cliniques de nouvelle g&eacute;n&eacute;ration d&eacute;veloppe un vecteur d&#39;expression adapt&eacute; voiture capable de modifier g&eacute;n&eacute;tiquement une large population de lymphocytes T. Transduction des cellules T est relativement efficace mais elle n&eacute;cessite une fabrication sp&eacute;cialis&eacute;e de virus recombinant qualit&eacute; clinique ch&egrave;re. ELECTROTRANSFERT de plasmides d&#39;ADN nu offre une approche alternative rentable, mais l&#39;inefficacit&eacute; de l&#39;int&eacute;gration du transg&egrave;ne mandats ex vivo s&eacute;lection sous cytocide concentrations du m&eacute;dicament &agrave; appliquer l&#39;expression des g&egrave;nes de s&eacute;lection pour obtenir les num&eacute;ros cliniquement significatives des cellules T CAR(+). Nous rapportons une nouvelle approche pour produire efficacement avec sp&eacute;cificit&eacute; redirig&eacute;e, introduisant des plasmides d&#39;ADN du syst&egrave;me de transposon/transposase de belle au bois dormant d&#39;exprimer directement une voiture CD19 sp&eacute;cifique dans la m&eacute;moire, les cellules T et cellules effectrices T sans s&eacute;lection de m&eacute;dicaments. Lorsqu&#39;il est coupl&eacute; avec une expansion num&eacute;rique sur CD19(+) les cellules pr&eacute;sentatrices d&#39;antig&egrave;ne artificiels, ce g&egrave;ne transfert m&eacute;thode provoque la croissance rapide des cellules CD4 + et CD8 T exprimant la voiture pour rediriger la sp&eacute;cificit&eacute; des cellules tumorales CD19(+).

Rediriger la sp&eacute;cificit&eacute; des populations de lymphocytes T pour CD19 utilisant le syst&egrave;me de la belle au bois dormant.

Genetische Ver&auml;nderung des klinischen-Klasse-T-Zellen ist verpflichtet, Funktion, einschlie&szlig;lich Umleiten Spezifit&auml;t f&uuml;r gew&uuml;nschte Antigen zu erweitern. Wir und andere haben einen Chim&auml;rer Antigen-Rezeptor (Auto), aktivieren Sie die T-Zellen erkennen Herkunfts-spezifischen Tumor Antigen, z. B. CD19, eingef&uuml;hrt und Fr&uuml;hphase menschliche Studien sind derzeit Beurteilung, Sicherheit und Durchf&uuml;hrbarkeit. Jedoch entwickelt sich ein ernsthaftes Hindernis f&uuml;r zuk&uuml;nftige klinische Studien einen geeigneten Auto Ausdruck Vektor f&auml;hig Breite Teile der Bev&ouml;lkerung von T-Zellen genetisch zu ver&auml;ndern. Transduktion von T-Zellen ist relativ effizient, aber es erfordert spezialisierte Herstellung von teuren klinischen Grad rekombinanten Virus. Electrotransfer nackte DNA Plasmid bietet einen kosteng&uuml;nstigen Alternativen Ansatz, aber die Ineffizienz des Transgens Integration Mandate ex Vivo-Auswahl unter Cytocidal Konzentrationen des Medikaments zur Durchsetzung der Expression von Genen der Auswahl klinisch sinnvolle Zahlen von CAR(+) T-Zellen zu erreichen. Wir berichten einen neuen Ansatz zur effizient Generieren von T-Zellen mit umgeleiteten Spezifit&auml;t, die Einf&uuml;hrung von DNA Plasmide aus dem Dornr&ouml;schen-Transposon/Transposase-System Kfz CD19-spezifische im Speicher direkt auszudr&uuml;cken und Effektorzellen T ohne Droge-Auswahl. Zusammen mit der numerische Erweiterung auf CD19(+) k&uuml;nstliche Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen dieses Gen &uuml;bertragen Methodenergebnisse in rapid Auswuchs der CD4(+) und CD8(+) T Zellen auszudr&uuml;cken Auto Spezifit&auml;t f&uuml;r CD19(+) Tumorzellen umzuleiten.

Besonderheit des T-Zell-Populationen f&uuml;r CD19 mit dem Dornr&ouml;schen-System umleiten.

Modificazione genetica delle cellule T uso clinico &egrave; impegnata ad aumentare la funzione, tra cui reindirizzando la specificit&agrave; per l&#39;antigene desiderata. Noi ed altri abbiamo introdotto un recettore chimerico antigene (auto) per attivare le cellule T di riconoscere l&#39;antigene tumorale specifico lignaggio, quali CD19, e presto-fase sperimentazione umana sono attualmente valutando sicurezza e fattibilit&agrave;. Tuttavia, un ostacolo significativo alla generazione di studi clinici &egrave; lo sviluppo di un vettore di espressione auto adatto in grado di modificare geneticamente una vasta popolazione di cellule T. Trasduzione di cellule T &egrave; relativamente efficiente ma richiede produzione specializzata di virus ricombinanti costoso grado clinico. Electrotransfer del plasmide DNA nudo offre un approccio alternativo redditizio, ma l&#39;inefficienza di integrazione del transgene mandati ex vivo selezione sotto citocida concentrazioni di farmaco per applicare l&#39;espressione dei geni di selezione per realizzare clinicamente significativo numero di cellule T CAR(+). Segnaliamo un nuovo approccio alla generazione efficiente di T con specificit&agrave; reindirizzato, introducendo i plasmidi di DNA dal sistema Sleeping Beauty trasposone/permettono di esprimere direttamente un&#39;auto CD19-specifiche nella memoria e cellule effettrici T senza selezione di droga. Quando accoppiato con espansione numerica su CD19(+) artificiale cellule presentanti l&#39;antigene, questo gene trasferire i risultati del metodo in rapida crescita delle cellule CD4(+) e cellule T che esprimono auto per reindirizzare la specificit&agrave; per le cellule tumorali CD19(+).

Riorientare la specificit&agrave; delle popolazioni di cellule T per CD19 utilizzando il sistema di Sleeping Beauty.

&#x81E8;&#x5E8A;&#x30B0;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x6539;&#x5909;&#x306F;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306E;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (CD19 &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x816B;&#x760D;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x8ECA;) &#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x3001;&#x65E9;&#x671F;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x306F;&#x73FE;&#x5728;&#x5B89;&#x5168;&#x6027;&#x3068;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x6B21;&#x4E16;&#x4EE3;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7814;&#x7A76;&#x3078;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x969C;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3092;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x8ECA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x9AD8;&#x4FA1;&#x306A;&#x81E8;&#x5E8A;&#x30B0;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x5C02;&#x9580;&#x30E1;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; DNA &#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x7CFB;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;ex vivo &#x9078;&#x629E; CAR(+) T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x306B;&#x610F;&#x5473;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x6570;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5F37;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x85AC;&#x5264;&#x306E;&#x6BBA;&#x7D30;&#x80DE;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x4E0B; transgene &#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x306E;&#x975E;&#x52B9;&#x7387;&#x6027;&#x3092;&#x7FA9;&#x52D9;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;T &#x7D30;&#x80DE; CD19 &#x56FA;&#x6709;&#x8ECA;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x3092;&#x76F4;&#x63A5;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7720;&#x308C;&#x308B;&#x68EE;&#x306E;&#x7F8E;&#x5973;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;/&#x8EE2;&#x79FB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x304B;&#x3089; DNA &#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3001;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3068;&#x85AC;&#x5264;&#x9078;&#x629E;&#x306A;&#x3057;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x5831;&#x544A;&#x3092;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CD19(+) &#x4EBA;&#x5DE5;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E0A;&#x306E;&#x6570;&#x5024;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F; CD19(+) &#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x8ECA;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B; CD4(+) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x4F38;&#x9577;&#x306B;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x8EE2;&#x9001;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CD19 &#x306E;&#x7720;&#x308C;&#x308B;&#x68EE;&#x306E;&#x7F8E;&#x5973;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; T &#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC784;&#xC0C1; &#xB4F1;&#xAE09; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791; &#xAE30;&#xB2A5;, &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158; &#xB4F1;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC640; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC744; &#xB3C4;&#xC785; chimeric &#xD56D; &#xC6D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (&#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;) CD19, &#xAC19;&#xC740; &#xD608;&#xD1B5; &#xD2B9;&#xC815; &#xC885;&#xC591; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC744; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC778;&#xCCB4; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC548;&#xC804; &#xBC0F; &#xD0C0;&#xB2F9;&#xC131; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD604;&#xC7AC;&#xB294;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xCC28;&#xAE30; &#xC784;&#xC0C1; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBC29; &#xBCBD;&#xC740; &#xC801;&#xB2F9; &#xD55C; &#xCC28; &#xC2DD; &#xBCA1;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC218;&#xC815;&#xD560;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC804;&#xB2EC; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBE44;&#xC2FC; &#xC784;&#xC0C1; &#xB4F1;&#xAE09; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC804;&#xBB38;&#xB41C; &#xC81C;&#xC870;&#xC5C5; &#xD544;&#xC694;. &#xBC8C; &#xAC70; &#xBC97;&#xC740; DNA &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC758; Electrotransfer &#xBE44;&#xC6A9; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xC548; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; transgene &#xD1B5;&#xD569;&#xC758; &#xBE44; &#xD6A8;&#xC728; ex vivo &#xC120;&#xD0DD; CAR(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC758;&#xBBF8; &#xC788;&#xB294; &#xC22B;&#xC790;&#xB97C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC120;&#xD0DD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; cytocidal &#xC758;&#xBB34;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; DNA &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; &#xC9C1;&#xC811; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC;&#xC5D0; CD19 &#xD2B9;&#xC815; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC7A0;&#xC790;&#xB294; &#xBBF8;&#xB140; transposon/transposase &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158;&#xB41C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC774; &#xC5C6;&#xC774; &#xC774;&#xD399;&#xD130; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. CD19(+) &#xC778;&#xACF5; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC22B;&#xC790; &#xD655;&#xC7A5; &#xD568;&#xAED8; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; CD4(+) &#xBC0F; CD8(+) T &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xD604; CD19(+) &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158;&#xD558;&#xB294; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xBC1C;&#xC804;&#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xACB0;&#xACFC; &#xC804;&#xC1A1;.

&#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC758; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C; CD19 &#xC7A0;&#xC790;&#xB294; &#xBBF8;&#xB140; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158;.

La modificaci&oacute;n gen&eacute;tica de c&eacute;lulas T de tipo cl&iacute;nico se lleva a cabo para aumentar la funci&oacute;n, incluyendo redirigiendo la especificidad para el ant&iacute;geno deseado. Nosotros y otros hemos introducido un receptor de ant&iacute;geno quim&eacute;rico (coche) para permitir que las c&eacute;lulas T reconocen el ant&iacute;geno tumor espec&iacute;fico de linaje, como CD19, y la fase inicial de ensayos humanos est&aacute;n evaluando seguridad y factibilidad. Sin embargo, un obst&aacute;culo importante para los estudios cl&iacute;nicos de &uacute;ltima generaci&oacute;n est&aacute; desarrollando un vector de expresi&oacute;n de coche adecuado capaz de modificar gen&eacute;ticamente una amplia poblaci&oacute;n de c&eacute;lulas T. Transducci&oacute;n de c&eacute;lulas T es relativamente eficiente, pero requiere la fabricaci&oacute;n especializada de virus recombinantes caro grado cl&iacute;nico. I del pl&aacute;smido de ADN desnudo ofrece una alternativa rentable, pero la ineficiencia de la integraci&oacute;n del transgen mandatos ex vivo selecci&oacute;n bajo concentraciones cytocidal de droga para hacer cumplir la expresi&oacute;n de los genes de la selecci&oacute;n para lograr cl&iacute;nicamente significativos n&uacute;meros de c&eacute;lulas T CAR(+). Divulgamos un nuevo enfoque para generar eficientemente las c&eacute;lulas T con especificidad redireccionado, introducci&oacute;n de pl&aacute;smidos de ADN desde el sistema de transposones/transposasa durmiente para expresar directamente un coche CD19-espec&iacute;fica en la memoria y c&eacute;lulas efectoras T sin selecci&oacute;n de drogas. Cuando se combina con la expansi&oacute;n num&eacute;rica en c&eacute;lulas presentadoras de ant&iacute;geno artificiales de CD19(+), este gen transferir resultados de m&eacute;todo en consecuencia r&aacute;pida de c&eacute;lulas CD4 y CD8 T expresando su coche para redirigir la especificidad para las c&eacute;lulas del tumor CD19(+).

Redirigir la especificidad de las poblaciones de c&eacute;lulas T para CD19 usando el sistema de la bella durmiente.

Nonviral integrating vectors can be used for expression of therapeutic genes. piggyBac (PB), a transposon/transposase system, has been used to efficiently generate induced pluripotent stems cells from somatic cells, without genetic alteration. In this paper, we apply PB transposition to express a chimeric antigen receptor (CAR) in primary human T cells. We demonstrate that T cells electroporated to introduce the PB transposon and transposase stably express CD19-specific CAR and when cultured on CD19(+) artificial antigen-presenting cells, numerically expand in a CAR-dependent manner, display a phenotype associated with both memory and effector T cell populations, and exhibit CD19-dependent killing of tumor targets. Integration of the PB transposon expressing CAR was not associated with genotoxicity, based on chromosome analysis. PB transposition for generating human T cells with redirected specificity to a desired target such as CD19 is a new genetic approach with therapeutic implications.

piggyBac transposon/transposase system to generate CD19-specific T cells for the treatment of B-lineage malignancies.

&#x6574;&#x5408;&#x578B;&#x8F7D;&#x4F53;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x6CBB;&#x7597;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;(PB) piggyBac &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;/&#x8F6C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x4ECE;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x53D8;&#x5316;&#x4E0D;&#x751F;&#x6210;&#x830E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5E94;&#x7528;&#x94C5;&#x79FB;&#x4F4D;&#x8868;&#x793A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5D4C;&#x5408;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x4F53; (&#x8F66;)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#xFF0C;T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x4ECB;&#x7ECD; PB &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x8F6C;&#x7A33;&#x5B9A; CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x8F66;&#x548C;&#x9AD8;&#x901F;&#x65F6; CD19(+) &#x4EBA;&#x5DE5;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x57F9;&#x517B;&#x6570;&#x63A7;&#x8F66;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6269;&#x5927;&#x3001; &#x663E;&#x793A;&#x5185;&#x5B58;&#x548C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7FA4;&#x4F53;&#x6548;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5C55;&#x54C1; CD19 &#x4F9D;&#x8D56;&#x6740;&#x5BB3;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x6307;&#x6807;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x8868;&#x793A;&#x6C7D;&#x8F66;&#x7684; PB &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x7684;&#x4E00;&#x4F53;&#x5316;&#x4E0D;&#x662F;&#x9057;&#x4F20;&#x6BD2;&#x6027;&#xFF0C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x3002;PB &#x79FB;&#x4F4D;&#x672F;&#x5982; CD19 &#x662F;&#x6CBB;&#x7597;&#x6240;&#x6D89;&#x95EE;&#x9898;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x65B9;&#x6CD5;&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x5230;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x5177;&#x4F53;&#x5730;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

piggyBac &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;/&#x8F6C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x751F;&#x6210; CD19 &#x7279;&#x5B9A; T &#x7EC6;&#x80DE; B &#x6CBF;&#x88AD;&#x6076;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

Non viraux vecteurs int&#xE9;gratifs peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour l&#x26;#39;expression de g&#xE8;nes th&#xE9;rapeutiques. piggyBac (PB), un syst&#xE8;me transposon / transposase, a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour g&#xE9;n&#xE9;rer efficacement des cellules pluripotentes induites d&#xE9;coule &#xE0; partir de cellules somatiques, sans alt&#xE9;ration g&#xE9;n&#xE9;tique. Dans cet article, nous appliquons la transposition PB &#xE0; exprimer un r&#xE9;cepteur d&#x26;#39;antig&#xE8;ne chim&#xE9;rique (CAR) dans le primaire des cellules T humaines. On d&#xE9;montrer que les cellules T &#xE9;lectroporation pour introduire le transposon PB et la transposase de mani&#xE8;re stable expriment CD19-sp&#xE9;cifique RAC et lorsqu&#x26;#39;elles sont cultiv&#xE9;es sur CD19 (+) artificielles cellules pr&#xE9;sentatrices d&#x26;#39;antig&#xE8;ne, num&#xE9;riquement &#xE9;largir de mani&#xE8;re RAC-d&#xE9;pendante, pr&#xE9;sentent un ph&#xE9;notype associ&#xE9; &#xE0; la m&#xE9;moire et populations de lymphocytes T effecteurs, et pr&#xE9;sentent CD19-d&#xE9;pendante assassinat de cibles tumorales. Int&#xE9;gration de la RCA PB transposon exprimer n&#x26;#39;&#xE9;tait pas associ&#xE9;e &#xE0; la g&#xE9;notoxicit&#xE9;, bas&#xE9;e sur l&#x26;#39;analyse des chromosomes. Transposition PB pour g&#xE9;n&#xE9;rer des cellules T avec une sp&#xE9;cificit&#xE9; redirig&#xE9; vers une cible souhait&#xE9;e tels que CD19 est une nouvelle approche g&#xE9;n&#xE9;tique avec des implications th&#xE9;rapeutiques.

PiggyBac transposon / transposase syst&#xE8;me pour g&#xE9;n&#xE9;rer CD19 des lymphocytes T sp&#xE9;cifiques pour le traitement des tumeurs malignes de la lign&#xE9;e B

Nonviral Integration von Vektoren k&ouml;nnen f&uuml;r Ausdruck der therapeutischen Gene verwendet werden. PiggyBac (PB), ein Transposon/Transposase-System, wurde verwendet, induzierte pluripotente St&auml;mme Zellen effizient aus somatischen Zellen, ohne genetische Ver&auml;nderung zu generieren. In diesem Papier wenden wir PB Umsetzung um einen Chim&auml;rer Antigen-Rezeptor (CAR) in prim&auml;ren humanen T-Zellen auszudr&uuml;cken. Wir zeigen, dass T-Zellen-Electroporated PB einzuf&uuml;hren Transposon und Transposase stabil CD19-spezifische Auto express und wenn auf CD19(+) k&uuml;nstliche Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen, kultiviert numerisch in Auto-abh&auml;ngigen Weise zu erweitern, zeigen einen Ph&auml;notyp zugeordneten Speicher und Effektor-T-Zell-Populationen sowohl Ausstellung CD19-abh&auml;ngige T&ouml;tung von Tumor-Ziele. Integration von der PB-Transposon Ausdr&uuml;cken Auto war nicht Genotoxizit&auml;t, basierend auf Chromosomenanalyse zugeordnet. PB-Umsetzung f&uuml;r die Generierung von menschlicher T-Zellen mit umgeleiteten Spezifit&auml;t zu dem gew&uuml;nschten Ziel z. B. CD19 ist ein neuer genetischer Ansatz mit therapeutischen Implikationen.

PiggyBac Transposon/Transposase System CD19-spezifische T-Zellen f&uuml;r die Behandlung von B-Linie Malignome generiert.

Vettori virali integrazione possono essere utilizzati per l&#39;espressione di geni terapeutici. piggyBac (PB), un sistema di trasposone/ha, &egrave; stato utilizzato in modo efficiente generare cellule gambi pluripotenti indotte da cellule somatiche, senza alterazione genetica. In questa carta, applichiamo la trasposizione di PB per esprimere un recettore chimerico antigene (auto) nelle cellule T umane primarie. Dimostriamo che electroporated di cellule T per introdurre il PB trasposone e permettono stabilmente express auto CD19-specifiche e quando coltivate su CD19(+) cellule presentanti l&#39;antigene artificiale, numericamente espandere in modo auto-dipendente, visualizzare un fenotipo associato sia memoria e popolazioni di cellule T effettrici e l&#39;uccisione di esposizione-CD19-dipendente dei bersagli tumorali. Integrazione del trasposone PB esprimendo la vettura non &egrave; stata associata con genotossicit&agrave;, basata su analisi cromosomica. Trasposizione di PB per la generazione di cellule T umane con specificit&agrave; reindirizzato a una destinazione desiderata come CD19 &egrave; un nuovo approccio genetico con implicazioni terapeutiche.

piggyBac sistema Trasposone/permettono di generare le cellule T CD19-specifici per il trattamento di neoplasie B-lineage.

&#x975E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x6CBB;&#x7642;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002; piggyBac&#xFF08;PB&#xFF09;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;/&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30B6;&#x30FC;&#x30BC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x830E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30D2;&#x30C8;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;CAR&#xFF09;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;PB&#x306E;&#x8EE2;&#x7F6E;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;PB&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B9;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;CD19&#x56FA;&#x6709;&#x306E;CAR&#x304A;&#x3088;&#x3073;CD19&#xFF08;+&#xFF09;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x7684;&#x306A;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E0A;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x6570;&#x5024;&#x3001;CAR-&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x5C55;&#x958B;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;T&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x6A19;&#x7684;&#x306E;CD19&#x4F9D;&#x5B58;&#x6BBA;&#x5BB3;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002; PB&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;CAR&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x6BD2;&#x6027;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;CD19&#x3001;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x30D2;&#x30C8;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;PB&#x306E;&#x8EE2;&#x7F6E;&#x306F;&#x3001;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x610F;&#x5473;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

B&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x60AA;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;CD19&#x7279;&#x7570;&#x7684;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;PiggyBac&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;/&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;

Nonviral &#xD1B5;&#xD569; &#xBCA1;&#xD130; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. piggyBac (PB)&#xB294; transposon/transposase &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC5C6;&#xC774; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC2E0;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; chimeric &#xD56D; &#xC6D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (&#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;)&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; PB &#xC804;&#xC704; &#xC801;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0CC;&#xB4DC;&#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; T &#xC138;&#xD3EC; electroporated &#xBCF4;&#xC5EC; transposon &#xBC0F; transposase &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; CD19 &#xD2B9;&#xC815; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; CD19(+) &#xC778;&#xACF5; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xAD50;&#xC591; &#xC22B;&#xC790;&#xB85C; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC7A5;, &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; &#xC774;&#xD399;&#xD130; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC885;&#xC591; &#xBAA9;&#xD45C;&#xC758; &#xC804;&#xC2DC; CD19-&#xC885;&#xC18D; &#xC0B4;&#xC778;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; PB transposon&#xC758; &#xD1B5;&#xD569; genotoxicity, &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158;&#xB41C; CD19 &#xAC19;&#xC740; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; PB &#xC804;&#xC704;&#xB294; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC801; &#xC758;&#xBBF8;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC720;&#xC804; &#xC811;&#xADFC; &#xC774;&#xB2E4;.

piggyBac transposon/transposase &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; B &#xD608;&#xD1B5; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; CD19 &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC131;.

No virales vectores de integraci&#xF3;n se puede utilizar para la expresi&#xF3;n de genes terap&#xE9;uticos. piggyBac (PB), un sistema transpos&#xF3;n / transposasa, se ha utilizado para generar eficientemente pluripotentes inducidas se deriva a partir de c&#xE9;lulas som&#xE1;ticas, sin alteraci&#xF3;n gen&#xE9;tica. En este trabajo, aplicamos la transposici&#xF3;n PB para expresar un receptor de ant&#xED;geno quim&#xE9;rico (CAR) en c&#xE9;lulas T humanas primarias. Se demuestra que las c&#xE9;lulas T a electroporaci&#xF3;n para introducir el transpos&#xF3;n PB y transposasa estable expresa CD19-espec&#xED;fica CAR y cuando se cultivan en el CD19 (+) artificiales que presentan el ant&#xED;geno de c&#xE9;lulas, num&#xE9;ricamente ampliar de una forma dependiente del autom&#xF3;vil, presentan un fenotipo asociado con la memoria y la poblaciones de c&#xE9;lulas T efectoras, y exhiben CD19-dependiente matanza de dianas tumorales. Integraci&#xF3;n de la CAR PB transpos&#xF3;n expresa no se asoci&#xF3; con la genotoxicidad, basado en el an&#xE1;lisis cromos&#xF3;mico. Transposici&#xF3;n PB para la generaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T humanas con una especificidad redirigidos a un objetivo deseado, tal como CD19 es un nuevo enfoque gen&#xE9;tico con implicaciones terap&#xE9;uticas.

PiggyBac Transpos&#xF3;n / transposasa sistema para generar CD19 de c&#xE9;lulas T espec&#xED;ficas para el tratamiento de neoplasias malignas de linaje B-

&#x5B83;&#x8868;&#x660E;&#x5D4C;&#x5408;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x4F53; (&#x8F66;) &#x53EF;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5;&#x627F;&#x8BA4;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x76F8;&#x5BB9;&#x6027;&#x590D;&#x5408; (MHC) &#x7684; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x6076;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE; CD19 &#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x4F7F;&#x7528; CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x8F66;&#x80BF;&#x7624;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7597;&#x6CD5;&#x5F88;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x4F7F;&#x7528;&#x8F66;&#x5E73;&#x7A33;&#x878D;&#x5165; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x907F;&#x5F00;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6574;&#x5408;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6F5C;&#x5728;&#x9057;&#x4F20;&#x6BD2;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x793A;&#x4ECE;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF; microelectroporation &#x8BBE;&#x5907;&#x7684; mRNA CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x8F66;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x5B8C;&#x6210;&#x4F7F;&#x7528; microelectroporator &#x6765;&#x5B9E;&#x73B0;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x548C;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x975E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x6210;&#x6269;&#x589E;&#x6570;&#x503C;&#x6269;&#x5927;&#x4E86;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5F55; mRNA &#x8F66;&#x3002;&#x7535;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684; mRNA &#x53EF;&#x4EE5;&#x907F;&#x514D;&#x4E0E;&#x5411;&#x91CF;&#x548C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E00;&#x4F53;&#x5316;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x9057;&#x4F20;&#x6BD2;&#x6027;&#x548C;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x80FD;&#x529B;&#x514B;&#x670D;&#x4E86;&#x9884;&#x671F;&#x77AC;&#x6001;&#x8F66;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x5982;&#x53CD;&#x590D;&#x7684;&#x8F6E;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x53EF;&#x4EE5;&#x66FF;&#x6362;&#x5931;&#x53BB;&#x4E86;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x634F;&#x9020;&#x548C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x53EF;&#x4EE5; electroporate 2 x 10(8) &#x4E3B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5728; 10 &#x5206;&#x949F;&#x5185;&#x6D41;&#x7684;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF; microelectroporator&#x3002;&#x540E;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#xFF0C;&#x8FBE; 80%&#x7684;&#x4F20;&#x4EE3;&#x57F9;&#x517B;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE; CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x8F66;&#x3002;&#x89C6;&#x9891;&#x5EF6;&#x65F6;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (VTLM) &#x8868;&#x660E;&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x6548;&#x5E94;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x64CD;&#x7EB5;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x81EA;&#x6EB6; CD19 + &#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6211;&#x56FD;&#x751F;&#x7269;&#x533B;&#x5B66; microdevice &#x4E2D;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x77ED;&#x6682;&#x548C;&#x5B89;&#x5168;&#x5730;&#x4FEE;&#x6539;&#x4EE5;&#x80BF;&#x7624;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x53EF;&#x4EE5;&#x662F; re-infused&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7528;&#x4E8E;&#x5C06;&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x5BF9;&#x8FC7;&#x7EE7;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E00;&#x79CD;&#x5D4C;&#x5408;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x4F53;&#x8981;&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x541E;&#x5410;&#x91CF; microelectroporation &#x8BBE;&#x5907;&#x3002;

It has been demonstrated that a chimeric antigen receptor (CAR) can directly recognize the CD19 molecule expressed on the cell surface of B-cell malignancies independent of major histocompatibility complex (MHC). Although T-cell therapy of tumors using CD19-specific CAR is promising, this approach relies on using expression vectors that stably integrate the CAR into T-cell chromosomes. To circumvent the potential genotoxicity that may occur from expressing integrating transgenes, we have expressed the CD19-specific CAR transgene from mRNA using a high throughput microelectroporation device. This research was accomplished using a microelectroporator to achieve efficient and high throughput non-viral gene transfer of in vitro transcribed CAR mRNA into human T cells that had been numerically expanded ex vivo. Electro-transfer of mRNA avoids the potential genotoxicity associated with vector and transgene integration and the high throughput capacity overcomes the expected transient CAR expression, as repeated rounds of electroporation can replace T cells that have lost transgene expression. We fabricated and tested a high throughput microelectroporator that can electroporate a stream of 2 x 10(8) primary T cells within 10 min. After electroporation, up to 80% of the passaged T cells expressed the CD19-specific CAR. Video time-lapse microscopy (VTLM) demonstrated the redirected effector function of the genetically manipulated T cells to specifically lyse CD19+ tumor cells. Our biomedical microdevice, in which T cells are transiently and safely modified to be tumor-specific and then can be re-infused, offers a method for redirecting T-cell specificity, that has implications for the development of adoptive immunotherapy.

A high throughput microelectroporation device to introduce a chimeric antigen receptor to redirect the specificity of human T cells.

Il a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9; qu&#x26;#39;un r&#xE9;cepteur de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne chim&#xE9;rique (RCA) peut reconna&#xEE;tre directement la mol&#xE9;cule CD19 exprim&#xE9;e sur la surface de la cellule de cellules B malignes ind&#xE9;pendantes du complexe majeur d&#x26;#39;histocompatibilit&#xE9; (CMH). Bien que T-th&#xE9;rapie cellulaire des tumeurs en utilisant CD19 sp&#xE9;cifique RCA est prometteuse, cette approche repose sur l&#x26;#39;utilisation de vecteurs d&#x26;#39;expression qui int&#xE8;grent de mani&#xE8;re stable la voiture dans des cellules T chromosomes. Pour contourner la g&#xE9;notoxicit&#xE9; potentielle qui peut se produire &#xE0; partir expression de transg&#xE8;nes d&#x26;#39;int&#xE9;gration, nous avons exprim&#xE9; le transg&#xE8;ne CAR CD19-sp&#xE9;cifique de l&#x26;#39;ARNm en utilisant un dispositif &#xE0; haut d&#xE9;bit microelectroporation. Cette recherche a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9;e en utilisant un microelectroporator pour atteindre efficaces et de haute d&#xE9;bit de transfert de g&#xE8;ne non viral de l&#x26;#39;ARNm in vitro CAR transcrit dans les cellules T humaines qui avaient &#xE9;t&#xE9; num&#xE9;riquement, amplifi&#xE9;es ex vivo. Electro-transfert de l&#x26;#39;ARNm &#xE9;vite la g&#xE9;notoxicit&#xE9; potentielle associ&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;int&#xE9;gration du vecteur et transg&#xE8;ne et la capacit&#xE9; de d&#xE9;bit haute surmonte l&#x26;#39;expression transitoire RAC pr&#xE9;vu, comme tours r&#xE9;p&#xE9;t&#xE9;s de &#xE9;lectroporation peut remplacer les cellules T qui ont perdu l&#x26;#39;expression du transg&#xE8;ne. Nous avons fabriqu&#xE9; et test&#xE9; un microelectroporator haut d&#xE9;bit qui peut &#xE9;lectroporer un flux de 2 x 10 (8) des cellules primaires de T dans les 10 min. Apr&#xE8;s &#xE9;lectroporation, jusqu&#x26;#39;&#xE0; 80% des cellules T passages exprim&#xE9; le CAR-CD19 sp&#xE9;cifique. Vid&#xE9;o time-lapse microscopie (VTLM) a d&#xE9;montr&#xE9; la fonction redirig&#xE9; effecteur des cellules g&#xE9;n&#xE9;tiquement manipul&#xE9;es T &#xE0; lyser sp&#xE9;cifiquement les cellules tumorales CD19 +. Notre microdispositif biom&#xE9;dicale, dans lequel les cellules T sont transitoirement et en toute s&#xE9;curit&#xE9; modifi&#xE9;e pour &#xEA;tre sp&#xE9;cifique &#xE0; la tumeur et peuvent ensuite &#xEA;tre r&#xE9;inject&#xE9;s, propose une m&#xE9;thode pour rediriger la sp&#xE9;cificit&#xE9; des cellules T, qui a des implications pour le d&#xE9;veloppement de l&#x26;#39;immunoth&#xE9;rapie adoptive.

Un appareil &#xE0; haut d&#xE9;bit &#xE0; Microelectroporation Introduire un r&#xE9;cepteur d&#x26;#39;antig&#xE8;ne chim&#xE9;rique pour rediriger la sp&#xE9;cificit&#xE9; des cellules T humaines

Es ist nachgewiesen, dass ein Chim&auml;rer Antigen-Rezeptor (Auto) direkt, das CD19-Molek&uuml;l auf der Zelloberfl&auml;che von B-Zell-Tumoren unabh&auml;ngig vom Haupthistokompatibilit&auml;tskomplex (MHC) ausgedr&uuml;ckt erkennen kann. Obwohl T-Zell-Therapie von Tumoren CD19-spezifische Auto vielversprechend ist, st&uuml;tzt sich dieser Ansatz auf mit Ausdruck-Vektoren, die das Auto stabil in T-Zell-Chromosomen zu integrieren. Um die potenzielle Genotoxizit&auml;t zu umgehen, die auftreten k&ouml;nnen, Integration von transgenen zum Ausdruck zu bringen, haben wir die CD19-spezifische Auto-Transgene von mRNA mit einem hohen Durchsatz-Microelectroporation-Ger&auml;t zum Ausdruck gebracht. Diese Forschung erreicht wurde, mit einem Microelectroporator effizient zu erreichen und hohen Durchsatz nicht-viralen Gentransfer von in-vitro-transkribiert Auto mRNA in menschlichen T-Zellen, die numerisch ex Vivo ausgebaut worden. Elektro-&Uuml;bertragung von mRNA vermeidet die potenzielle Genotoxizit&auml;t, Vektor- und Transgene Integration zugeordnet und die hohe Durchsatzleistung &uuml;berwindet den Transienten Auto Ausdruck erwarteten, wie wiederholte Runden der Elektroporation T-Zellen ersetzen k&ouml;nnen, die Transgenexpression verloren haben. Wir hergestellt und einen hohen Durchsatz-Microelectroporator, die Electroporate einen Strom von 2 x 10 prim&auml;re T-Zellen innerhalb von 10 min k&ouml;nnen getestet. Nach Elektroporation &auml;u&szlig;erte bis zu 80 % der passaged T-Zellen CD19-spezifische Auto. Video Zeitraffer-Mikroskopie (VTLM) demonstrierte die umgeleiteten Effektor-Funktion der genetisch manipulierten T Zellen CD19 + Tumorzellen gezielt aufzul&ouml;sen. Unsere biomedizinischen Microdevice, in welcher T Zellen vor&uuml;bergehend und sicher ge&auml;ndert sind, um tumorspezifische und dann k&ouml;nnen re-infused, bietet eine Methode zum Umleiten von T-Zell-Spezifit&auml;t, die Implikationen f&uuml;r die Entwicklung der Adoptive Immuntherapie hat.

Ein hoher Durchsatz Microelectroporation Ger&auml;t einen Chim&auml;rer Antigen-Rezeptor um die Besonderheit des menschlichen T-Zellen umzuleiten einzuf&uuml;hren.

&Egrave; stato dimostrato che un recettore chimerico antigene (auto) direttamente in grado di riconoscere la molecola CD19 espressa sulla superficie delle cellule dei tumori maligni delle cellule B indipendente del complesso maggiore di istocompatibilit&agrave; (MHC). Anche se T-cellula la terapia dei tumori mediante specifici CD19 auto &egrave; promettente, questo approccio si basa sull&#39;utilizzo di vettori di espressione che integrano stabilmente l&#39;auto nei cromosomi delle cellule T. Per aggirare il potenziale genotossicit&agrave; che pu&ograve; verificarsi da esprimere transgeni integratrice, abbiamo espresso il transgene CD19-specifiche auto da mRNA usando un dispositivo di microelectroporation ad alto rendimento. Questa ricerca &egrave; stata compiuta utilizzando una microelectroporator per realizzare efficienti e trasferimento del gene non-virale elevato throughput di in vitro trascritto mRNA auto in cellule T umane che erano state ampliate numericamente ex vivo. Electro-trasferimento del mRNA evita la potenziale genotossicit&agrave; associata con integrazione vettoriale e transgene e la capacit&agrave; di throughput elevato supera l&#39;espressione di auto transitoria prevista, come ripetuti colpi di elettroporazione possono sostituire le cellule T che hanno perso l&#39;espressione del transgene. Abbiamo fabbricato e testato un throughput elevato microelectroporator che pu&ograve; electroporate un flusso di 2 x 10, paragrafo 8 cellule T primarie entro 10 min. Dopo elettroporazione, fino all&#39;80% delle cellule T lo ha espresso l&#39;auto CD19-specifici. Video time-lapse microscopy (VTLM) ha dimostrato la funzione di reindirizzamento effettrici delle cellule T geneticamente manipolate per lisare specificamente le cellule tumorali CD19 +. Nostro microdevice biomedica, nella quale T cellule sono transitoriamente e tranquillamente modificate per essere specifici del tumore e quindi possono essere re-infused, offre un metodo per riorientare la specificit&agrave; delle cellule T, che ha implicazioni per lo sviluppo di adoptive immunoterapia.

Un dispositivo di microelectroporation ad alto rendimento per introdurre un recettore chimerico antigene per reindirizzare la specificit&agrave; delle cellule T umane.

&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;CAR&#xFF09;&#x304C;&#x76F4;&#x63A5;&#x4E3B;&#x8981;&#x7D44;&#x7E54;&#x9069;&#x5408;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#xFF08;MHC&#xFF09;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;B&#x7D30;&#x80DE;&#x60AA;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;CD19&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; CD19&#x56FA;&#x6709;&#x306E;CAR&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x816B;&#x760D;&#x306E;T&#x7D30;&#x80DE;&#x7642;&#x6CD5;&#x304C;&#x6709;&#x671B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x7684;&#x306B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306B;CAR&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x767A;&#x73FE;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D71;&#x5408;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3089;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;microelectroporation&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;mRNA&#x304B;&#x3089;CD19&#x56FA;&#x6709;&#x306E;CAR&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6570;&#x5024;&#x7684;&#x306B;ex vivo&#x3067;&#x62E1;&#x5927;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D2;&#x30C8;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;in vitro&#x8EE2;&#x5199;CAR mRNA&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x975E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5C0E;&#x5165;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;microelectroporator&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; mRNA&#x306E;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x306B;&#x4F34;&#x3046;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3057;&#x3001;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x306F;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5931;&#x3063;&#x305F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x4E88;&#x60F3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;CAR&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x514B;&#x670D;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;10&#x5206;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;2&#xD7;10&#xFF08;8&#xFF09;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;microelectroporator&#x3092;&#x4F5C;&#x88FD;&#x3057;&#x3001;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x7D99;&#x4EE3;&#x3057;&#x305F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6700;&#x5927;80&#xFF05;&#x304C;CD19&#x56FA;&#x6709;&#x306E;CAR&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D3;&#x30C7;&#x30AA;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30E9;&#x30D7;&#x30B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;VTLM&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;CD19 +&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002; T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306B;&#x304B;&#x3064;&#x5B89;&#x5168;&#x306B;&#x816B;&#x760D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x518D;&#x6CE8;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x533B;&#x5B66;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x990A;&#x5B50;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x610F;&#x5473;&#x3092;&#x6301;&#x3064;T&#x7D30;&#x80DE;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D2;&#x30C8;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;Microelectroporation&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;

Chimeric &#xD56D; &#xC6D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (&#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;) &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xC9C1; &#xC8FC;&#xC694; &#xC801;&#xD569;&#xC131; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C; (MHC)&#xC758; B-&#xC138;&#xD3EC; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; CD19 &#xBD84;&#xC790; &#xC778;&#xC2DD; &#xC9C1;&#xC811; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC785;&#xC99D; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. CD19-&#xD2B9;&#xC815; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC885;&#xC591;&#xC758; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC720;&#xB9DD; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC28; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xC2DD;&#xC744; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xD1B5;&#xD569; transgenes &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; genotoxicity&#xB97C; &#xD68C;&#xD53C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; microelectroporation &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; Mrna&#xC5D0;&#xC11C; CD19 &#xD2B9;&#xC815; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; transgene&#xB97C; &#xD45C;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; microelectroporator&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xBE44; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC774;&#xB3D9;&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; ex vivo &#xC22B;&#xC790;&#xB85C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD588;&#xB2E4; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; mRNA &#xBCC0;&#xD558;&#xAC8C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Mrna&#xC758; &#xC804;&#xAE30; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC29;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB828; &#xBCA1;&#xD130; &#xBC0F; transgene &#xD1B5;&#xD569; &#xB41C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; genotoxicity &#xBC0F; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xADF9;&#xBCF5; &#xC608;&#xC0C1;&#xB41C; &#xACFC;&#xB3C4; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC2DD; electroporation &#xBC18;&#xBCF5;&#xB41C; &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC; transgene &#xC2DD;&#xC744; &#xC783;&#xC740; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xB300;&#xCCB4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAC00;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; electroporate 10(8) &#xAE30;&#xBCF8; T &#xC138;&#xD3EC; 10 &#xBD84; &#xC774;&#xB0B4; x 2&#xC758; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC218; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; microelectroporator &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;. Electroporation, &#xD6C4; passaged T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; 80%&#xAE4C;&#xC9C0; CD19 &#xD2B9;&#xC815; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;&#xB97C; &#xD45C;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xB514;&#xC624; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; (VTLM)&#xB97C; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; CD19 + &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; lyse &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791;&#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158;&#xB41C; effector &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC0DD;&#xBA85; microdevice&#xB294; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; &#xC218; transiently &#xD558; &#xACE0; &#xC548;&#xC804; &#xD558; &#xAC8C; &#xC218;&#xC815; &#xB418; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;-infused, &#xC785;&#xC591; immunotherapy &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC758;&#xBBF8; &#xC788;&#xB294; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158;&#xD560; chimeric &#xD56D; &#xC6D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; microelectroporation &#xC7A5;&#xCE58;.

Se ha demostrado que un receptor de ant&#xED;geno quim&#xE9;rico (CAR) directamente puede reconocer la mol&#xE9;cula CD19 expresado en la superficie celular de c&#xE9;lulas B malignas independientes del complejo principal de histocompatibilidad (MHC). A pesar de la terapia de c&#xE9;lulas T de los tumores con CD19-espec&#xED;fica CAR es prometedor, este enfoque se basa en el uso de vectores de expresi&#xF3;n que integran de manera estable de la CAR en los cromosomas de las c&#xE9;lulas T. Para evitar la genotoxicidad potencial que puede ocurrir de expresar transgenes de integraci&#xF3;n, hemos expresado el transg&#xE9;n CAR CD19-espec&#xED;fica de ARNm utilizando un dispositivo de alto rendimiento microelectroporation. Esta investigaci&#xF3;n se llev&#xF3; a cabo utilizando un microelectroporator para conseguir un rendimiento eficiente y alta no viral de transferencia de genes en el ARNm in vitro CAR transcrito en c&#xE9;lulas T humanas que hab&#xED;an sido num&#xE9;ricamente expandidas ex vivo. Electro-transferencia de ARNm evita la genotoxicidad potencial asociado con la integraci&#xF3;n del vector y transg&#xE9;n y la alta capacidad de rendimiento supera la expresi&#xF3;n transitoria esperada CAR, como repetidas rondas de electroporaci&#xF3;n puede reemplazar las c&#xE9;lulas T que han perdido la expresi&#xF3;n del transg&#xE9;n. Se han fabricado y probado un microelectroporator de alto rendimiento que puede electroporar una corriente de 2 x 10 (8) principales c&#xE9;lulas T dentro de los 10 min. Despu&#xE9;s de la electroporaci&#xF3;n, con hasta un 80% de los pases en c&#xE9;lulas T expresado CAR CD19-espec&#xED;fica. V&#xED;deo time-lapse microscop&#xED;a (VTLM) demostraron la funci&#xF3;n de redirigir efectora de las c&#xE9;lulas T gen&#xE9;ticamente manipulados para lisar espec&#xED;ficamente CD19 + en las c&#xE9;lulas tumorales. Nuestro microdispositivo biom&#xE9;dica, en el que las c&#xE9;lulas T est&#xE1;n transitoriamente y de forma segura modificado para que sea espec&#xED;fico de tumor y luego se puede volver a infundir, ofrece un m&#xE9;todo para redireccionar la especificidad de c&#xE9;lulas T, que tiene implicaciones para el desarrollo de la inmunoterapia adoptiva.

Un dispositivo de alto rendimiento Microelectroporation introducir un receptor de ant&#xED;geno quim&#xE9;rico Redirecci&#xF3;n de la especificidad de las c&#xE9;lulas T humanas

(&#x8F66;) &#x63D0;&#x9AD8;&#x7597;&#x6548;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E00;&#x79CD;&#x5D4C;&#x5408;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x52AA;&#x529B;&#x63A7;&#x5236; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x6076;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x4E2D;&#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x5DF2;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E00;&#x9879;&#x56FA;&#x6709;&#x6218;&#x7565;&#x4FEE;&#x6539;&#x6C7D;&#x8F66;&#x672C;&#x8EAB;&#xFF0C;&#x6539;&#x5584; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x4E00;&#x79CD;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6539;&#x53D8;&#x6587;&#x5316;&#x73AF;&#x5883;&#xFF0C;&#x624D;&#x80FD;&#x6309;&#x6570;&#x5B57;&#x987A;&#x5E8F;&#x5C55;&#x5F00; CAR(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20; (IL) &#x4E0B;&#x8DCC;&#x767E;&#x5206;&#x4E4B;&#x4E8C;&#x5341;&#x4E00;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x57F9;&#x517B;&#x4E2D;&#x6DFB;&#x52A0;&#x6240;&#x9700;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x5916;&#x5728;&#x65B9;&#x6CD5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x6C7D;&#x8F66;&#x4F9D;&#x8D56; T-&#x7EC6;&#x80DE;&#x6548;&#x5E94;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; electrotransfer &#x7684;&#x7761;&#x7F8E;&#x4EBA;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x8F66;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x548C;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x5730;&#x4F20;&#x64AD; CAR(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9; CD19(+) &#x4EBA;&#x5DE5;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x8F86;)&#x3002;IL 21 &#x5728;&#x573A;&#xFF0C;&#x5F53;&#x65F6; CD19 &#x7279;&#x5B9A; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x751F;&#x88C2;&#x89E3;&#xFF0C;&#x4EA7;&#x751F;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; CD19 &#x56DE;&#x5E94;&#x4F18;&#x60E0;&#x6570;&#x503C;&#x6269;&#x5927;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x503C;&#x6269;&#x5927; CAR(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7FA4;&#x4F53;&#x663E;&#x793A;&#x65E9;&#x671F;&#x5185;&#x5B58;&#x8868;&#x9762;&#x578B;&#x5B9A;&#x6027;&#x4E3A; CD62L(+)CD28(+) &#x548C;&#x5E7C;&#x7A1A;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F20;&#x64AD;&#x4E0E;&#x53EA;&#x6709;&#x5916;&#x6E90;&#x6027; IL-2 &#x5F80;&#x5F80;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8FC7;&#x5EA6; CD19 &#x7279;&#x5B9A; CD4(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;CAR(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; IL 21 &#x9886;&#x517B;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x5C55;&#x51FA;&#x5C0F;&#x9F20; CD19(+) B &#x7EC6;&#x80DE;&#x6076;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x63D0;&#x4F9B;&#x534F;&#x8C03;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x64AD; CAR(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1; IL 21 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x8F86;&#x66FF;&#x6362;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-21 &#x4E16;&#x7EAA;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x65B0;&#x578B; mutein&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20; 21 &#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5916;&#x5728;&#x7684;&#x7F16;&#x7A0B;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210;&#x6240;&#x9700;&#x7684; CAR(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x6709;&#x6548;&#x3002;

&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B; CD19 &#x7279;&#x5B9A; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; IL 21 &#x4FE1;&#x53F7;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8; B-&#x6CBF;&#x88AD;&#x80BF;&#x7624;&#x8FC7;&#x7EE7;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

Improving the therapeutic efficacy of T cells expressing a chimeric antigen receptor (CAR) represents an important goal in efforts to control B-cell malignancies. Recently an intrinsic strategy has been developed to modify the CAR itself to improve T-cell signaling. Here we report a second extrinsic approach based on altering the culture milieu to numerically expand CAR(+) T cells with a desired phenotype, for the addition of interleukin (IL)-21 to tissue culture improves CAR-dependent T-cell effector functions. We used electrotransfer of Sleeping Beauty system to introduce a CAR transposon and selectively propagate CAR(+) T cells on CD19(+) artificial antigen-presenting cells (aAPC). When IL-21 was present, there was preferential numeric expansion of CD19-specific T cells which lysed and produced IFN-Î³ in response to CD19. Populations of these numerically expanded CAR(+) T cells displayed an early memory surface phenotype characterized as CD62L(+)CD28(+) and a transcriptional profile of naÃ¯ve T cells. In contrast, T cells propagated with only exogenous IL-2 tended to result in an overgrowth of CD19-specific CD4(+) T cells. Furthermore, adoptive transfer of CAR(+) T cells cultured with IL-21 exhibited improved control of CD19(+) B-cell malignancy in mice. To provide coordinated signaling to propagate CAR(+) T cells, we developed a novel mutein of IL-21 bound to the cell surface of aAPC that replaced the need for soluble IL-21. Our findings show that IL-21 can provide an extrinsic reprogramming signal to generate desired CAR(+) T cells for effective immunotherapy.

Reprogramming CD19-specific T cells with IL-21 signaling can improve adoptive immunotherapy of B-lineage malignancies.

Am&#xE9;liorer l&#x26;#39;efficacit&#xE9; th&#xE9;rapeutique des cellules T exprimant un r&#xE9;cepteur d&#x26;#39;antig&#xE8;ne chim&#xE9;rique (CAR) repr&#xE9;sente un objectif important dans les efforts pour contr&#xF4;ler h&#xE9;mopathies &#xE0; cellules B. R&#xE9;cemment, une strat&#xE9;gie intrins&#xE8;que a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;velopp&#xE9; pour modifier la voiture elle-m&#xEA;me pour am&#xE9;liorer la signalisation des cellules T. Nous rapportons ici une seconde approche bas&#xE9;e sur la modification extrins&#xE8;que du milieu de culture &#xE0; d&#xE9;velopper num&#xE9;riquement CAR (+) des cellules T avec un ph&#xE9;notype d&#xE9;sir&#xE9;, pour l&#x26;#39;ajout de l&#x26;#39;interleukine (IL) -21 &#xE0; la culture de tissus am&#xE9;liore CAR-d&#xE9;pendante des cellules T fonctions effectrices. Nous avons utilis&#xE9; &#xE9;lectrotransfert du syst&#xE8;me Belle au Bois Dormant &#xE0; introduire un transposon RCA et s&#xE9;lective propager CAR (+) des cellules T CD19 sur (+) artificiels cellules pr&#xE9;sentatrices d&#x26;#39;antig&#xE8;ne (VAMP). Lorsque l&#x26;#39;IL-21 &#xE9;tait pr&#xE9;sent, il n&#x26;#39;y avait pr&#xE9;f&#xE9;rentiel d&#x26;#39;expansion num&#xE9;rique des cellules T CD19-sp&#xE9;cifiques qui lys&#xE9;es et l&#x26;#39;IFN-&#x3B3; produit en r&#xE9;ponse &#xE0; CD19. Populations de ces RAC num&#xE9;riquement &#xE9;largi (+) des cellules T affich&#xE9;e une m&#xE9;moire ph&#xE9;notype d&#xE9;but de surface caract&#xE9;ris&#xE9; en CD62L (+) CD28 (+) et un profil de transcription des cellules T na&#xEF;fs. En revanche, les cellules T se propage avec seulement IL-2 exog&#xE8;ne ont tendance &#xE0; se traduire par une prolif&#xE9;ration de CD19-sp&#xE9;cifiques CD4 (+) des cellules T. En outre, le transfert adoptif de la RCA (+) des cellules T cultiv&#xE9;es avec IL-21 pr&#xE9;sentait un contr&#xF4;le am&#xE9;lior&#xE9; de CD19 (+) &#xE0; cellules B malignes chez la souris. Pour fournir des coordonn&#xE9;es de signalisation pour propager la RCA (+) des cellules T, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une mut&#xE9;ine roman de l&#x26;#39;IL-21 li&#xE9;e &#xE0; la surface de la cellule de aAPC qui a remplac&#xE9; la n&#xE9;cessit&#xE9; d&#x26;#39;soluble IL-21. Nos r&#xE9;sultats montrent que l&#x26;#39;IL-21 peut fournir un signal extrins&#xE8;que reprogrammation de g&#xE9;n&#xE9;rer voiture d&#xE9;sir&#xE9;e (+) des cellules T pour l&#x26;#39;immunoth&#xE9;rapie efficace.

Reprogrammation CD19 des lymphocytes T sp&#xE9;cifiques de l&#x26;#39;IL-21 de signalisation peut am&#xE9;liorer immunoth&#xE9;rapie adoptive de la lign&#xE9;e B malignes

Verbesserung der therapeutischen Wirksamkeit von T-Zellen, die Ausdruck eines Chim&auml;ren Antigen-Rezeptors stellt (Auto) ein wichtiges Ziel in Bem&uuml;hungen zur Kontrolle von B-Zell-Tumoren. Vor kurzem wurde eine systeminterne Strategie entwickelt, um das Auto selbst zur Verbesserung der T-Zell-Signalisierung zu &auml;ndern. Hier berichten wir, dass ein zweiter extrinsischer Ansatz basierend auf Ver&auml;nderung des Kultur-Milieus um numerisch CAR(+) T-Zellen mit einem gew&uuml;nschten Ph&auml;notyp, f&uuml;r den Zusatz von Interleukin (IL)-21 zu Gewebekultur erweitern Auto-abh&auml;ngige T-Zell-Effektor-Funktionen verbessert. Wir fr&uuml;her Electrotransfer Sleeping Beauty Systems einzuf&uuml;hren, eine Auto-Transposon und CAR(+) T-Zellen auf CD19(+) k&uuml;nstliche Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen (aAPC) selektiv zu verbreiten. Als IL-21 anwesend war, gab es bevorzugte numerische Erweiterung der CD19-spezifische T-Zellen, die Tauwetterprotokoll aufgel&ouml;st und IFN-&gamma; in Reaktion auf CD19 produziert. Populationen dieser numerisch erweiterten CAR(+) T-Zellen angezeigt eine fr&uuml;he Speicher Oberfl&auml;che Ph&auml;notyp als CD62L(+)CD28(+) und ein transkriptionelle Profil von naiven T-Zellen charakterisiert. Im Gegensatz dazu propagiert T-Zellen mit nur exogene Il tendenziell ein &uuml;berm&auml;&szlig;iges Wachstum von CD19-spezifische CD4(+) T-Zellen f&uuml;hren. Dar&uuml;ber hinaus stellte adoptiven Transfer CAR(+) T-Zellen kultiviert mit IL-21 verbesserte Kontrolle der CD19(+) B-Zell-Tumoren bei M&auml;usen. Um bieten koordinierte Signalisierung CAR(+) T-Zellen zu propagieren, entwickelten wir eine neuartige Mutein IL-21 gebunden an der Zelloberfl&auml;che von aAPC, die die Notwendigkeit der l&ouml;slichen IL-21 ersetzt. Unsere Ergebnisse zeigen, dass IL-21 eine extrinsische Neuprogrammierung Signal zum gew&uuml;nschte CAR(+) T-Zellen f&uuml;r wirksame Immuntherapie generieren bieten kann.

Neuprogrammierung CD19-spezifische T-Zellen mit IL-21 signalisieren kann Adoptive Immuntherapie f&uuml;r B-Linie Krebserkrankungen verbessern.

Migliorare l&#39;efficacia terapeutica di cellule T che esprimono un recettore chimerico antigene (auto) rappresentano un obiettivo importante negli sforzi per controllare i tumori maligni delle cellule di B. Recentemente una strategia intrinseca &egrave; stata sviluppata per modificare la macchina stessa per migliorare la segnalazione delle cellule T. Qui riportiamo un secondo approccio estrinseco basato su alterando il milieu di cultura per espandere numericamente CAR(+) T cellule con un fenotipo desiderato, per l&#39;aggiunta di interleuchina (IL) -21 per coltura tissutale migliora le funzioni effettrici delle cellule T auto-dipendente. Abbiamo utilizzato electrotransfer di sistema Sleeping Beauty per introdurre una trasposone auto e propagare selettivamente le cellule T CAR(+) su CD19(+) artificiale presentanti l&#39;antigene cellule (aAPC). Quando IL 21 era presente, ci fu espansione numerica preferenziale delle cellule CD19-specifiche T lisati e prodotto IFN-&gamma; in risposta a CD19. Popolazioni di queste cellule T CAR(+) numericamente espanse visualizzato un fenotipo di superficie memoria precoce caratterizzato come CD62L(+)CD28(+) e un profilo trascrizionale delle cellule T na&iuml;ve. Al contrario, le cellule T propagano con solo esogeni IL-2 tendono a causare una crescita eccessiva di cellule CD19-specifiche CD4(+) T. Inoltre, trasferimento adottivo di CAR(+) T cellule coltivate con IL 21 esposto migliorato controllo di malignit&agrave; delle cellule di B CD19(+) nei topi. Per fornire la segnalazione coordinato propagare le cellule T CAR(+), abbiamo sviluppato un romanzo mutein IL-21 legato alla superficie delle cellule di aAPC che ha sostituito la necessit&agrave; per IL solubile-21. I nostri risultati mostrano che IL 21 pu&ograve; fornire un segnale di riprogrammazione estrinseco per generare le cellule T CAR(+) desiderate per l&#39;immunoterapia efficacia.

Riprogrammazione di cellule CD19-specifiche T con IL 21 di segnalazione pu&ograve; migliorare adoptive immunoterapia dei tumori maligni B-lineage.

&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;CAR&#xFF09;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;B&#x7D30;&#x80DE;&#x60AA;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52AA;&#x529B;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x76EE;&#x6A19;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;CAR&#x81EA;&#x4F53;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CAR-&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x6570;&#x5024;&#x7D44;&#x7E54;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#xFF08;IL&#xFF09;-21&#x306F;&#x3001;&#x6240;&#x671B;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3068;&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;CAR&#x3092;&#x5C55;&#x958B;&#x3059;&#x308B;&#x6587;&#x5316;&#x74B0;&#x5883;&#x3092;&#x5909;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;CD19&#x306E;T&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;+&#xFF09;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x7684;&#x306A;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;AAPC&#xFF09;&#xFF08;+&#xFF09;CAR&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;CAR&#x3092;&#x4F1D;&#x64AD;&#x3059;&#x308B;&#x7720;&#x308C;&#x308B;&#x68EE;&#x306E;&#x7F8E;&#x5973;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;electrotransfer&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; IL-21&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x6642;&#x3001;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3057;&#x3001;CD19&#x306B;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3057;&#x3066;IFN-&#x3B3;&#x3092;&#x751F;&#x7523;CD19-&#x7279;&#x7570;&#x7684;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306A;&#x6570;&#x5024;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6570;&#x5024;&#x306B;&#x62E1;&#x5927;CAR&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;CD62L&#xFF08;+&#xFF09;CD28&#xFF08;+&#xFF09;&#x3068;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;IL-2&#x306F;&#x3001;CD19-&#x7279;&#x7570;&#x7684;CD4&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x50BE;&#x5411;&#x306B;&#x4F1D;&#x64AD;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;IL-21&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x990A;&#x5B50;CAR&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;CD19&#x306E;&#x6539;&#x5584;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF08;+&#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;B&#x7D30;&#x80DE;&#x60AA;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B3;&#x30FC;&#x200B;&#x200B;&#x30C7;&#x30A3;&#x30CD;&#x30FC;&#x30C8;&#xFF08;+&#xFF09;CAR&#x3092;&#x4F1D;&#x64AD;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;IL-21&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x308B;AAPC&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;IL-21&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x5909;&#x7570;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4ECA;&#x56DE;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;IL-21&#x304C;&#x6709;&#x52B9;&#x3067;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;CAR&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

IL-21&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3068;CD19&#x7279;&#x7570;&#x7684;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x518D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;B-&#x7CFB;&#x5217;&#x306E;&#x60AA;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x990A;&#x5B50;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;

Chimeric &#xD56D; &#xC6D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6A8;&#xB2A5;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; (&#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;) B-&#xC138;&#xD3EC; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xB178;&#xB825;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC804;&#xB7B5; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC790;&#xCCB4;&#xB97C; &#xC218;&#xC815; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBB38;&#xD654; milieu &#xC22B;&#xC790; CAR(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC778;&#xD130; &#xB8E8; &#xD0A8; (IL)-21 &#xC870;&#xC9C1; &#xBB38;&#xD654;&#xB97C; &#xCD94;&#xAC00; &#xB300; &#xD55C; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC678;&#xBD80; &#xC811;&#xADFC; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC885;&#xC18D; T &#xC138;&#xD3EC; effector &#xAE30;&#xB2A5; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xBCF4;&#xACE0;. &#xC18C;&#xAC1C; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; transposon &#xBC0F; CD19(+) &#xC778;&#xACF5; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC; (aAPC)&#xC5D0;&#xC11C; CAR(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xD30C; &#xC7A0;&#xC790;&#xB294; &#xBBF8;&#xB140; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; electrotransfer&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. IL 21 &#xC874;&#xC7AC; &#xD55C; &#xACBD;&#xC6B0;, CD19 &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; lysed cd19&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; IFN-&gamma;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xD2B9;&#xD61C; &#xC22B;&#xC790; &#xD655;&#xC7A5;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC22B;&#xC790; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C; CAR(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC778;&#xAD6C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xCD08;&#xAE30; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; &#xD45C;&#xBA74; &#xD615; CD62L(+)CD28(+)&#xC640; &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; transcriptional &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xBC18;&#xBA74;, T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-&#xB9CC; &#xC138; 2 CD19 &#xD2B9;&#xC815; CD4(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC790;&#xB77C; &#xB09C; &#xADC0; &#xCC29;&#xB420; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC774; &#xC804;&#xD30C;. &#xB610;&#xD55C;, IL 21 &#xAD50;&#xC591; CAR(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC785;&#xC591; &#xC804;&#xC1A1; CD19(+) B-&#xC138;&#xD3EC; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC804;&#xC2DC;. CAR(+) T &#xC138;&#xD3EC; &#xC804;&#xD30C; &#xC870;&#xC815; &#xC2E0;&#xD638; &#xC81C;&#xACF5;, IL-21 &#xC131; IL-21&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xB300;&#xCCB4; Aapc&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; mutein &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC5EC; IL 21 &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; immunotherapy&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; CAR(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC678;&#xBD80; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

IL 21 &#xC2E0;&#xD638; CD19 &#xD2B9;&#xC815; T &#xC140; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; B &#xD608;&#xD1B5; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xC785;&#xC591; immunotherapy &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La mejora de la eficacia terap&#xE9;utica de las c&#xE9;lulas T que expresan un receptor de ant&#xED;geno quim&#xE9;rico (CAR) representa un objetivo importante en los esfuerzos para controlar las c&#xE9;lulas B malignas. Recientemente una estrategia intr&#xED;nseca ha sido desarrollada para modificar el propio veh&#xED;culo para mejorar las c&#xE9;lulas T de se&#xF1;alizaci&#xF3;n. Aqu&#xED; se presenta un segundo enfoque extr&#xED;nseca basada en alterar el medio para expandir la cultura num&#xE9;ricamente CAR (+) las c&#xE9;lulas T con un fenotipo deseado, por la adici&#xF3;n de interleucina (IL) -21 al cultivo de tejidos mejora CAR-dependiente de c&#xE9;lulas T funciones efectoras. Se utiliz&#xF3; el sistema de electrotransfer de la Bella Durmiente para introducir un transpos&#xF3;n CAR y propagan selectivamente CAR (+) las c&#xE9;lulas T de CD19 (+) la presentaci&#xF3;n de ant&#xED;geno artificiales, las c&#xE9;lulas (AAPC). Cuando la IL-21 estaba presente, hubo expansi&#xF3;n preferencial num&#xE9;rico de las c&#xE9;lulas T CD19-espec&#xED;ficos que se lisaron y produjo IFN-&#x3B3; en respuesta a CD19. Las poblaciones de estos CAR num&#xE9;ricamente ampliado (+) las c&#xE9;lulas T muestran un fenotipo memoria superficie temprano caracterizado como CD62L (+) CD28 (+) y un perfil transcripcional de c&#xE9;lulas T naive. En contraste, las c&#xE9;lulas T propagan con s&#xF3;lo IL-2 ex&#xF3;gena tiende a resultar en un crecimiento excesivo de CD19 espec&#xED;ficos CD4 (+) las c&#xE9;lulas T. Adem&#xE1;s, la transferencia adoptiva de CAR (+) c&#xE9;lulas T cultivadas con IL-21 mostraron un mejor control de CD19 (+) de c&#xE9;lulas B en ratones malignidad. Para proporcionar coordinado de se&#xF1;alizaci&#xF3;n para propagar CAR (+) las c&#xE9;lulas T, hemos desarrollado una nueva mute&#xED;na de IL-21 unido a la superficie celular de AAPC que sustituye la necesidad de soluble de IL-21. Nuestros hallazgos muestran que la IL-21 puede proporcionar una se&#xF1;al extr&#xED;nseca reprogramaci&#xF3;n para generar el veh&#xED;culo que desea (+) las c&#xE9;lulas T para la inmunoterapia eficaz.

Reprogramaci&#xF3;n de CD19 de c&#xE9;lulas T espec&#xED;ficas con la IL-21 puede mejorar la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de la inmunoterapia adoptiva de tumores malignos del linaje B-

&#x5373;&#x4F7F;&#x5176;&#x4ED6; &gamma;&delta; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E9A;&#x7FA4;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x9886;&#x517B;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x7684; &gamma;&delta; Tcells &#x662F;&#x76EE;&#x524D;&#x4EC5;&#x9650;&#x4E8E;&#x7531;&#x4E8E;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4F20;&#x64AD; &gamma;&delta; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53EA;&#x6709;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x8BD5;&#x5242; aminobisphosphonates &#xFF08;&#x8868;&#x793A; V&gamma;9V&delta;2 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53; (TCR)) &#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x8BA2;&#x529E;&#x6CD5;&#x6765;&#x4F20;&#x64AD;&#x591A;&#x514B;&#x9686; &gamma;&delta; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5448;&#x73B0;&#x5B83;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x8868;&#x8FBE; CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x5D4C;&#x5408;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x4F53; (&#x8F66;) &#x7684;&#x53CC;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x5355;&#x4E2A;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE; (PBMC) &#x662F;&#x8F66;&#x7684;&#x4E0E;&#x7761;&#x7F8E;&#x4EBA; (SB) &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x548C;&#x5F3A;&#x5236;&#x6267;&#x884C;&#x5728;&#x591A;&#x4E2A; &gamma;&delta; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E9A;&#x7FA4;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x8F6C;&#x3002;CD19(+) &#x4EBA;&#x5DE5;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x8F86;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6269;&#x5927;&#x4E86;&#x6C7D;&#x8F66; (+) &gamma;&delta; T &#x7EC6;&#x80DE; &gt; 10(9) &#x8F66; (+) &gamma;&delta; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE; &lt; 10(6) &#x603B;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6570;&#x5B57;&#x591A;&#x8DEF;&#x68C0;&#x6D4B;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230; TCR mRNA &#x7F16;&#x7801;&#x4E3A; V&delta;1&#x3001; V&delta;2&#x3001; V&delta;3&#x3001; V&gamma;2&#x3001; V&gamma;7&#x3001; V&gamma;8&#x3001; V&gamma;9 &#x548C; V&gamma;10 &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;TCR&gamma;&delta; &#x548C;&#x8F66;&#x88AB;&#x523A;&#x6FC0;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x6740;&#x5BB3; CD19(+) &#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x76F8;&#x6BD4;&#x6C7D;&#x8F66; (neg) &gamma;&delta; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x65F6;&#xFF0C;&#x529F;&#x80FD;&#x591A;&#x514B;&#x9686;&#x6C7D;&#x8F66; (+) &gamma;&delta; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x540C;&#x8F66; (+) &gamma;&delta; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x5BF9;&#x7167;&#x7EC4;&#x5C0F;&#x9F20;&#x76F8;&#x6BD4;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; CD19(+) &#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x5C0F;&#x9F20;&#x79FB;&#x690D;&#x7624;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x6C7D;&#x8F66;&#x3001; &#x9511;&#x3001; &#x8F86;&#x5DF2;&#x88AB;&#x6539;&#x7F16;&#x4E3A;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5E94;&#x7528;&#xFF0C;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x73B0;&#x5728;&#x96C6;&#x4E2D;&#x7CBE;&#x529B;&#x591A;&#x514B;&#x9686; &gamma;&delta; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7597; (2013 &#x5E74;) &#xFF1B;doi:10.1038/mt.2012.267&#x3002;

&#x53CC;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; &gamma;&delta; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E0E;&#x5F15;&#x8FDB;&#x7684; CD19 &#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x5D4C;&#x5408;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x4F53;&#x591A;&#x514B;&#x9686;&#x6C47;&#x8F91; &#x300B;&#x3002;

Even though other Î³Î´ T-cell subsets exhibit antitumor activity, adoptive transfer of Î³Î´ Tcells is currently limited to one subset (expressing VÎ³9VÎ´2 T-cell receptor (TCR)) due to dependence on aminobisphosphonates as the only clinically appealing reagent for propagating Î³Î´ T cells. Therefore, we developed an approach to propagate polyclonal Î³Î´ T cells and rendered them bispecific through expression of a CD19-specific chimeric antigen receptor (CAR). Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were electroporated with Sleeping Beauty (SB) transposon and transposase to enforce expression of CAR in multiple Î³Î´ T-cell subsets. CAR(+)Î³Î´ T cells were expanded on CD19(+) artificial antigen-presenting cells (aAPC), which resulted in >10(9) CAR(+)Î³Î´ T cells from <10(6) total cells. Digital multiplex assay detected TCR mRNA coding for VÎ´1, VÎ´2, and VÎ´3 with VÎ³2, VÎ³7, VÎ³8, VÎ³9, and VÎ³10 alleles. Polyclonal CAR(+)Î³Î´ T cells were functional when TCRÎ³Î´ and CAR were stimulated and displayed enhanced killing of CD19(+) tumor cell lines compared with CAR(neg)Î³Î´ T cells. CD19(+) leukemia xenografts in mice were reduced with CAR(+)Î³Î´ T cells compared with control mice. Since CAR, SB, and aAPC have been adapted for human application, clinical trials can now focus on the therapeutic potential of polyclonal Î³Î´ T cells.Molecular Therapy (2013); doi:10.1038/mt.2012.267.

Bispecific T-cells Expressing Polyclonal Repertoire of Endogenous Î³Î´ T-cell Receptors and Introduced CD19-specific Chimeric Antigen Receptor.

M&ecirc;me si les autres sous-ensembles de lymphocytes T &gamma;&delta; pr&eacute;sentent une activit&eacute; antitumorale, transfert adoptif de &gamma;&delta; Tcells est actuellement limit&eacute;e &agrave; un sous-ensemble (exprimant V&gamma;9V&delta;2 T-cell receptor (TCR)) en raison de la d&eacute;pendance sur aminobisphosphonates comme r&eacute;actif pour la propagation de cellules de T de &gamma;&delta; seulement cliniquement attrayant. Par cons&eacute;quent, nous mis au point une m&eacute;thode pour propager les lymphocytes T &gamma;&delta; polyclonaux et rendus bisp&eacute;cifiques gr&acirc;ce &agrave; l&#39;expression d&#39;un r&eacute;cepteur d&#39;antig&egrave;ne chim&eacute;rique sp&eacute;cifique CD19 (voiture). Les cellules mononucl&eacute;aires de sang p&eacute;riph&eacute;rique (PBMC) &eacute;taient &eacute;lectroporation avec transposon Sleeping Beauty (SB) et de la transposase de faire respecter l&#39;expression de la voiture en plusieurs sous-ensembles de lymphocytes T &gamma;&delta;. Les cellules de T de &gamma;&delta; voiture (+) ont &eacute;t&eacute; &eacute;largis sur CD19(+) artificiels cellules pr&eacute;sentatrices d&#39;antig&egrave;ne (VAMP), qui a abouti &agrave; &gt; cellules &gamma;&delta; de voiture (+) 10 9 T &lt; 10 6 cellules total. Essai multiplex num&eacute;rique d&eacute;tect&eacute; TCR ARNm codant pour V&delta;1, V&delta;2 et V&delta;3 avec des all&egrave;les, V&gamma;2, V&gamma;7, V&gamma;8, V&gamma;9 et V&gamma;10. Les lymphocytes T &gamma;&delta; voiture (+) polyclonales fonctionnaient quand TCR&gamma;&delta; et voiture sont stimul&eacute;es et affich&eacute;e meurtre am&eacute;lior&eacute;e de lign&eacute;es de cellules tumorales CD19(+) compar&eacute; avec voiture (neg) des cellules de T de &gamma;&delta;. CD19(+) x&eacute;nogreffes de leuc&eacute;mie chez la souris ont &eacute;t&eacute; r&eacute;duits avec des cellules de T de &gamma;&delta; voiture (+) par rapport aux souris t&eacute;moins. Puisque la voiture, SB et vamp ont &eacute;t&eacute; adapt&eacute;s pour des applications humaines, essais cliniques peuvent maintenant se concentrer sur le potentiel th&eacute;rapeutique des cellules de T de &gamma;&delta; polyclonaux.Th&eacute;rapie mol&eacute;culaire (2013) ; DOI:10.1038/Mt.2012.267.

Bisp&eacute;cifiques T-cellules exprimant polyclonaux r&eacute;pertoire de r&eacute;cepteurs de lymphocytes T &gamma;&delta; endog&egrave;ne et introduit l&#39;antig&egrave;ne chim&eacute;rique CD19 sp&eacute;cifique du r&eacute;cepteur.

Obwohl andere &gamma;&delta;-T-Zell-Teilmengen antitumor-Aktivit&auml;t, adoptiven Transfer Ausstellen von &gamma;&delta; t beschr&auml;nkt sich derzeit auf einer Teilmenge (V&gamma;9V&delta;2 T-Zell-Rezeptor (TCR) auszudr&uuml;cken) aufgrund der Abh&auml;ngigkeit von Aminobisphosphonates als nur klinisch ansprechend Reagenz f&uuml;r die Weitergabe von &gamma;&delta; T-Zellen. Daher wir entwickelt ein Konzept f&uuml;r die polyklonale &gamma;&delta; T-Zellen zu propagieren und Rendern sie Bispezifischer durch Ausdruck einer CD19-spezifische Chim&auml;ren-Antigen-Rezeptor (Auto). Peripheren mononukle&auml;ren Blutzellen (PBMC) waren Electroporated mit Sleeping Beauty (SB) Transposon und Transposase Ausdruck Autos in mehreren &gamma;&delta;-T-Zell-Teilmengen zu erzwingen. Auto (+) &gamma;&delta; T-Zellen wurden erweitert auf CD19(+) k&uuml;nstliche Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen (aAPC), die f&uuml;hrten &gt; Neubewerber Auto (+) &gamma;&delta; T-Zellen aus &lt; Unterst&uuml;tzungsaufgaben Gesamt Zellen. Digitalen multiplex Assay erkannt TCR mRNA codiert f&uuml;r V&delta;1 V&delta;2 und V&delta;3 mit V&gamma;2, V&gamma;7, V&gamma;8, V&gamma;9 und V&gamma;10 Allele. Polyklonale Auto (+) &gamma;&delta; T-Zellen waren funktional, wenn TCR&gamma;&delta; und Autos angeregt wurden und angezeigten erweiterten T&ouml;tung CD19(+) Tumor-Zelllinien im Vergleich mit dem Auto (Neg) &gamma;&delta; T-Zellen. CD19(+) Leuk&auml;mie Xenografts an M&auml;usen wurden mit Auto (+) &gamma;&delta; T-Zellen gegen&uuml;ber Steuerelement M&auml;usen reduziert. Da Auto, SB und aAPC f&uuml;r menschliche Anwendung angepasst wurden, k&ouml;nnen klinische Studien auf das therapeutische Potenzial von polyklonalen &gamma;&delta; T-Zellen sich konzentrieren.Molekulare Therapie (2013); doi:10.1038/Mt.2012.267.

Bispezifischer T-Zellen auszudr&uuml;cken polyklonale Repertoire des endogenen &gamma;&delta; T-Zell Rezeptoren und eingef&uuml;hrten Chim&auml;ren CD19-spezifische-Antigen-Rezeptor.

Anche se altri sottoinsiemi di cellule T &gamma;&delta; esibiscono attivit&agrave; antitumorale, trasferimento adottivo di &gamma;&delta; Tcells &egrave; attualmente limitata a un sottoinsieme (che esprimono recettore V&gamma;9V&delta;2 T-cellula (TCR)) a causa della dipendenza da aminobisphosphonates come il reagente solo clinicamente supplichevole per la moltiplicazione delle cellule T &gamma;&delta;. Pertanto, abbiamo sviluppato un approccio per propagare le cellule T &gamma;&delta; policlonale e li ha resi bispecific attraverso l&#39;espressione di un recettore chimerico antigene CD19-specifici (auto). Cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) sono stati electroporated con trasposone Sleeping Beauty (SB) e permettono di applicare l&#39;espressione di auto in pi&ugrave; sottoinsiemi di cellule T &gamma;&delta;. Cellule T &gamma;&delta; auto (+) sono state ampliate su CD19(+) artificiale cellule presentanti l&#39;antigene (aAPC), che ha portato in &amp;gt; arrecavano auto (+) &gamma;&delta; T cellule da &lt; 10 cellule totali. Dosaggio multiplex digitale rilevato TCR mRNA codificante per V&delta;1, V&delta;2 e V&delta;3 con gli alleli, V&gamma;2, V&gamma;7, V&gamma;8, V&gamma;9 e V&gamma;10. Policlonale delle cellule T del &gamma;&delta; auto (+) sono stati funzionali quando TCR&gamma;&delta; e auto sono stati stimolati e visualizzato enhanced uccisione di linee di cellule tumorali CD19(+) confrontato con auto (neg) cellule T &gamma;&delta;. CD19(+) xenotrapianti di leucemia nei topi sono stati ridotti con le cellule T &gamma;&delta; auto (+) rispetto ai topi di controllo. Poich&eacute; aAPC, SB e auto sono stati adattati per applicazione sull&#39;uomo, studi clinici ora possono concentrarsi sul potenziale terapeutico delle cellule T &gamma;&delta; policlonali.Terapia molecolare (2013); DOI:10.1038/mt.2012.267.

Bispecific T-cellule esprimendo policlonale repertorio dei recettori delle cellule T &gamma;&delta; endogeni e recettore introdotta antigene CD19-specifico chimerico.

&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x6D3B;&#x6027;&#x3001;&#x990A;&#x5B50;&#x8EE2;&#x9001;&#x4ED6; &gamma;&delta; T &#x7D30;&#x80DE;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x306E; &gamma;&delta; t &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x73FE;&#x5728; &#xFF08;V&gamma;9V&delta;2 T &#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;TCR&#xFF09; &gamma;&delta; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4F1D;&#x64AD;&#x306E;&#x307F;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x306B;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x8A66;&#x85AC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E; aminobisphosphonates &#x4F9D;&#x5B58;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;) 1 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB; &gamma;&delta; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CD;&#x7279;&#x7570;&#x6027; CD19 &#x56FA;&#x6709;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (&#x8ECA;) &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672B;&#x68A2;&#x8840;&#x5358;&#x6838;&#x7403; (PBMC) &#x8ECA;&#x306E;&#x5F0F;&#x3067;&#x8907;&#x6570;&#x306E; &gamma;&delta; T &#x7D30;&#x80DE;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x5F37;&#x5236;&#x8EE2;&#x79FB;&#x3068;&#x7761;&#x7720;&#x306E;&#x7F8E;&#x3057;&#x3055; (SB) &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3; electroporated.&#x8ECA; (+) &gamma;&delta; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D50;&#x679C; CD19(+) &#x4EBA;&#x5DE5;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE; (aAPC) &#x306B;&#x5C55;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x76EE; 10 (9) &#x8ECA; (+) &gamma;&delta; T &#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089; &lt; &#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x7DCF;&#x6570;&#x304C; 10 (6)&#x3002;&#x30C7;&#x30B8;&#x30BF;&#x30EB;&#x591A;&#x91CD;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; TCR mRNA V&delta;1&#x3001;V&delta;2&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; V&delta;3 &#x7B26;&#x53F7;&#x5316; V&gamma;2&#x3001;V&gamma;7&#x3001;V&gamma;8&#x3001;V&gamma;9&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; V&gamma;10 &#x306E;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x8ECA; (+) &gamma;&delta; T &#x7D30;&#x80DE; TCR&gamma;&delta; &#x3068;&#x8ECA;&#x306B;&#x523A;&#x6FC0;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x8868;&#x793A;&#x306E;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6BBA;&#x5BB3; CD19(+) &#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306E;&#x8ECA; (neg) &#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066; &gamma;&delta; T &#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CD19(+) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7D99;&#x8ECA; (+) &gamma;&delta; T &#x7D30;&#x80DE;&#x5236;&#x5FA1;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8ECA;&#x3001;SB&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; aAPC &#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x306F;&#x4ECA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB; &gamma;&delta; T &#x7D30;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306B;&#x96C6;&#x4E2D;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x7642;&#x6CD5; (2013)&#x3002;doi:10.1038/mt.2012.267&#x3002;

&#x4E8C;&#x91CD;&#x7279;&#x7570;&#x6027; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB; &#x30EC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F; CD19 &#x56FA;&#x6709;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; &gamma;&delta; T &#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&Gamma;&delta; T-&#xC140; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC774; &#xB2E4;&#xB978; &#xC804;&#xC2DC; antitumor &#xD65C;&#xB3D9;, &#xC785;&#xC591; &#xC804;&#xC1A1; &#xD558;&#xB354;&#xB77C;&#xB3C4; &gamma;&delta;&#xC758; Tcells&#xB294; &#xD604;&#xC7AC; (V&gamma;9V&delta;2 T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (TCR) &#xD45C;&#xD604;) &#xC804;&#xD30C; &gamma;&delta; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB9CC; &#xC784;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC73C;&#xB85C; aminobisphosphonates&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC758;&#xC874;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778; &#xD55C; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC; polyclonal &gamma;&delta; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC804;&#xD30C; &#xD558;&#xB294; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; bispecific CD19 &#xD2B9;&#xC815; chimeric &#xD56D; &#xC6D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (&#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;)&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xB80C;&#xB354;&#xB9C1;. &#xB9D0; &#xCD08; &#xD608;&#xC561; &#xB2E8; &#xC138;&#xD3EC; (PBMC) &#xC790; &#xC544;&#xB984;&#xB2E4;&#xC6C0; (SB) transposon &#xBC0F; transposase &gamma;&delta; T-&#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;&#xC758; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; electroporated &#xD588;&#xB2E4;. &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; (+) &gamma;&delta; T &#xC138;&#xD3EC; CD19(+) &#xC778;&#xACF5; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC; (aAPC) &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0; &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; &amp;gt; 10(9) &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; (+) &gamma;&delta; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &lt; &#xC2DC;&#xBBFC;&#xAD8C;&#xC774; &#xCD1D; &#xC140;. &#xB514;&#xC9C0;&#xD138; &#xBA40;&#xD2F0;&#xD50C;&#xB809;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; TCR Mrna&#xB294; V&gamma;2, V&gamma;7, V&gamma;8, V&gamma;9, &#xBC0F; V&gamma;10 &#xB300;&#xB9BD;&#xC73C;&#xB85C; V&delta;1, V&delta;2, &#xBC0F; v&delta;3&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCF54;&#xB529; &#xBC1C;&#xACAC;. TCR&gamma;&delta; &#xBC0F; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC790;&#xADF9; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; (neg) &gamma;&delta; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; CD19(+) &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC0B4;&#xC778; polyclonal &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; (+) &gamma;&delta; T &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; xenografts CD19(+) &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; (+) &gamma;&delta; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. SB, &#xCC28;&#xC640; aAPC &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xAC8C; &#xB418;&#xC5B4;, &#xC774;&#xD6C4; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xC774;&#xC81C; polyclonal &gamma;&delta; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC801; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.&#xBD84;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC; (2013 &#xB144;); doi:10.1038/mt.2012.267&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Bispecific T-&#xC138;&#xD3EC; Polyclonal &#xB808; &#xD37C; &#xD1A0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC0DD; &gamma;&delta; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xB3C4;&#xC785;&#xB41C; CD19-&#xD2B9;&#xC815; Chimeric &#xD56D; &#xC6D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604;.

Aunque otros subconjuntos de c&eacute;lulas T &gamma;&delta; exhiben actividad antitumoral, transferencia adoptiva de &gamma;&delta; se limita actualmente a un subconjunto (receptor de V&gamma;9V&delta;2 c&eacute;lulas T (TCR) expresando) debido a la dependencia de aminobisfosfonatos como el reactivo s&oacute;lo cl&iacute;nicamente atractiva para propagar las c&eacute;lulas T&gamma;&delta; T Tcells. Por lo tanto, hemos desarrollado un enfoque para propagar las c&eacute;lulas de T &gamma;&delta; policlonales y ellos prestados tienen a trav&eacute;s de la expresi&oacute;n de un receptor de ant&iacute;geno quim&eacute;rico CD19-espec&iacute;fica (coche). Las c&eacute;lulas mononucleares de sangre perif&eacute;rica (PBMC) fueron electroporated con transposon Sleeping Beauty (SB) y la transposasa aplicar la expresi&oacute;n de coche en varios subconjuntos de c&eacute;lulas T &gamma;&delta;. Las c&eacute;lulas T&gamma;&delta; T de coche (+) se ampliaron en CD19(+) artificiales c&eacute;lulas presentadoras de ant&iacute;genos (aAPC), resultando en &gt; c&eacute;lulas T&gamma;&delta; de coche (+) 10 (9) T de &lt; c&eacute;lulas totales 10 (6). An&aacute;lisis m&uacute;ltiplex digital detect&oacute; TCR mRNA codifica V&delta;1 V&delta;2 y V&delta;3 con alelos, V&gamma;2, V&gamma;7, V&gamma;8, V&gamma;9 y V&gamma;10. Las de c&eacute;lulas T &gamma;&delta; de policlonales coche (+) eran funcionales cuando TCR&gamma;&delta; y coche fueron estimuladas y muestra mayor matanza de CD19(+) l&iacute;neas de c&eacute;lulas tumorales en comparaci&oacute;n con el coche (neg) c&eacute;lulas T&gamma;&delta; T. CD19(+) xenoinjertos de leucemia en ratones fueron reducidos con c&eacute;lulas de T &gamma;&delta; coche (+) en comparaci&oacute;n con los ratones de control. Desde veh&iacute;culos, SB y aAPC han sido adaptados para el uso humano, ensayos cl&iacute;nicos pueden concentrarse ahora en el potencial terap&eacute;utico de las c&eacute;lulas de T &gamma;&delta; policlonal.Terapia molecular (2013); doi:10.1038/MT.2012.267.

Tienen T-c&eacute;lulas que expresaban policlonal repertorio de receptores de c&eacute;lulas T &gamma;&delta; end&oacute;geno y Receptor introducidas CD19-espec&iacute;fica del ant&iacute;geno quim&eacute;rico.

Article	Year
Enhanced antilymphoma efficacy of CD19-redirected influenza MP1-specific CTLs by cotransfer of T cells modified to present influenza MP1. Blood\| PubMed ID: 15507526	2005
Biophotonic cytotoxicity assay for high-throughput screening of cytolytic killing. Journal of immunological methods\| PubMed ID: 15777929	2005
Amplification of RNAi--targeting HLA mRNAs. Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy\| PubMed ID: 15851019	2005
A quantitative high-throughput chemotaxis assay using bioluminescent reporter cells. Journal of immunological methods\| PubMed ID: 15987642	2005
Differentiation of naive cord-blood T cells into CD19-specific cytolytic effectors for posttransplantation adoptive immunotherapy. Blood\| PubMed ID: 16352804	2006
CD28 costimulation provided through a CD19-specific chimeric antigen receptor enhances in vivo persistence and antitumor efficacy of adoptively transferred T cells. Cancer research\| PubMed ID: 17108138	2006
Combining adoptive cellular and immunocytokine therapies to improve treatment of B-lineage malignancy. Cancer research\| PubMed ID: 17363611	2007
Redirecting specificity of T-cell populations for CD19 using the Sleeping Beauty system. Cancer research\| PubMed ID: 18413766	2008
piggyBac transposon/transposase system to generate CD19-specific T cells for the treatment of B-lineage malignancies. Human gene therapy\| PubMed ID: 19905893	2010
A high throughput microelectroporation device to introduce a chimeric antigen receptor to redirect the specificity of human T cells. Biomedical microdevices\| PubMed ID: 20574820	2010
Reprogramming CD19-specific T cells with IL-21 signaling can improve adoptive immunotherapy of B-lineage malignancies. Cancer research\| PubMed ID: 21558388	2011
Bispecific T-cells Expressing Polyclonal Repertoire of Endogenous Î³Î´ T-cell Receptors and Introduced CD19-specific Chimeric Antigen Receptor. Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy\| PubMed ID: 23295945	2013

Simon Olivares

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