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Visualization of Mitochondrial DNA Replication in Individual Cells by EdU Signal Amplification

Mitochondria are key regulators of cellular energy and mitochondrial biogenesis is an essential component of regulating mitochondria numbers in healthy ...

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Three-dimensional Imaging of Nociceptive Intraepidermal Nerve Fibers in Human Skin Biopsies

A punch biopsy of the skin is commonly used to quantify intraepidermal nerve fiber densities (IENFD) for the diagnosis of peripheral polyneuropathy 1,2. ...

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Three-dimensional Imaging and Analysis of Mitochondria within Human Intraepidermal Nerve Fibers

The goal of this protocol is to study mitochondria within intraepidermal nerve fibers. Therefore, 3D imaging and analysis techniques were developed to ...

University of Michigan

&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&#x6211; (&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&#x6211;) &#x4FDD;&#x62A4;&#x5468;&#x56F4;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#xFF0C;&#x4F46;&#x57FA;&#x7840;&#x4ECE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x8FD8;&#x4E0D;&#x592A;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x80CC;&#x6839;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282; (DRG) &#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x3002;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8868;&#x8FBE;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&#x6211;&#x53D7;&#x4F53; (&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-IR) &#x548C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&#x6211;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187;-3 &#x6FC0;&#x9176; (&#x808C;&#x9187;&#xFF09; / Akt &#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x9AD8;&#x7CD6;&#x66B4;&#x9732;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#xFF0C;&#x800C;&#x6291;&#x5236;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&#x6211;&#x901A;&#x8FC7;&#x808C;&#x9187;/Akt &#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&#x6211;&#x808C;&#x9187;/Akt &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0; phosphorylates &#x4E09;&#x4E2A;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684; Akt &#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#xFF1A; &#x751F;&#x5B58;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (CREB) &#x548C;&#x4FC3;&#x51CB;&#x4EA1;&#x6548;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D;&#x7CD6;&#x539F;&#x5408;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;-3beta (GSK 3beta) &#x548C; forkhead (FKHR)&#x3002;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&#x6211;&#x89C4;&#x5B9A;&#x4E86;&#x6838;&#x4E00;&#x7EA7;&#x901A;&#x8FC7;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x3001; &#x589E;&#x52A0;&#x7684; CREB &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x6838;&#x6392;&#x65A5; FKHR &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; Akt &#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x3002;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x589E;&#x52A0; pro &#x51CB;&#x4EA1; Bcl &#x86CB;&#x767D; Bim &#xFF08;FKHR &#x8F6C;&#x5F55;&#x76EE;&#x6807;&#xFF09; &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&#x6211;&#x6CA1;&#x6709;&#x89C4;&#x5B9A; Bim &#x6216;&#x6297;&#x51CB;&#x4EA1; Bcl-xl &#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&#x6211;&#x795E;&#x7ECF;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0D;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;&#x9AD8;&#x7CD6;&#x4E5F;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x542F;&#x52A8;&#x5668;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-9 &#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x7684;&#x4E73;&#x6C9F;&#x91CC;&#xFF0C;&#x5F71;&#x54CD;&#x53D7;&#x963B;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&#x6211;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&#x6211;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x51CB;&#x4EA1;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x808C;&#x9187;/Akt &#x901A;&#x8DEF;&#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x845B;&#x5170;&#x7D20;&#x53F2;&#x514B; 3beta&#x3001; CREB &#x548C; FKHR&#xFF0C;&#x5E76;&#x901A;&#x8FC7;&#x963B;&#x6B62;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;

&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187;-3 &#x6FC0;&#x9176;&#x548C; Akt &#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x8C03;&#x89E3;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&#x6211;&#x5728;&#x80CC;&#x6839;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Insulin-like growth factor-I (IGF-I) protects neurons of the peripheral nervous system from apoptosis, but the underlying signaling pathways are not well understood. We studied IGF-I mediated signaling in embryonic dorsal root ganglia (DRG) neurons. DRG neurons express IGF-I receptors (IGF-IR), and IGF-I activates the phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt pathway. High glucose exposure induces apoptosis, which is inhibited by IGF-I through the PI3K/Akt pathway. IGF-I stimulation of the PI3K/Akt pathway phosphorylates three known Akt effectors: the survival transcription factor cyclic AMP response element binding protein (CREB) and the pro-apoptotic effector proteins glycogen synthase kinase-3beta (GSK-3beta) and forkhead (FKHR). IGF-I regulates survival at the nuclear level through accumulation of phospho-Akt in DRG neuronal nuclei, increased CREB-mediated transcription, and nuclear exclusion of FKHR. High glucose increases expression of the pro-apoptotic Bcl protein Bim (a transcriptional target of FKHR). However, IGF-I does not regulate Bim or anti-apoptotic Bcl-xL protein expression levels, which suggests that IGF-I neuroprotection is not through regulation of their expression. High glucose also induces loss of the initiator caspase-9 and increases caspase-3 cleavage, effects blocked by IGF-I. These data suggest that IGF-I prevents apoptosis in DRG neurons by regulating PI3K/Akt pathway effectors, including GSK-3beta, CREB, and FKHR, and by blocking caspase activation.

Phosphatidylinositol 3-kinase and Akt effectors mediate insulin-like growth factor-I neuroprotection in dorsal root ganglia neurons.

Insulin-like growth factor-I (IGF-I) prot&#xE8;ge les neurones du syst&#xE8;me nerveux p&#xE9;riph&#xE9;rique de l&#x26;#39;apoptose, mais les voies de signalisation sous-jacentes ne sont pas bien comprises. Nous avons &#xE9;tudi&#xE9; l&#x26;#39;IGF-I dans la signalisation induite ganglions de la racine dorsale embryonnaire (DRG) neurones. DRG neurones expriment des r&#xE9;cepteurs d&#x26;#39;IGF-I (IGF-IR), et de l&#x26;#39;IGF-I active la phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) / Akt. L&#x26;#39;exposition de glucose &#xE0; haute induit l&#x26;#39;apoptose, qui est inhib&#xE9;e par l&#x26;#39;IGF-I par la voie PI3K/Akt. IGF-I stimulation de la voie PI3K/Akt phosphoryle trois effecteurs connus Akt: le facteur de transcription de survie de l&#x26;#39;AMP cyclique &#xE9;l&#xE9;ment de r&#xE9;ponse liant prot&#xE9;ines (CREB) et le pro-apoptotique synthase effecteur glycog&#xE8;ne prot&#xE9;ines kinases-3beta (GSK-3beta) et forkhead (FKHR ). IGF-I r&#xE9;gule la survie au niveau nucl&#xE9;aire par l&#x26;#39;accumulation de phospho-Akt dans DRG noyaux des neurones, augment&#xE9; CREB-m&#xE9;di&#xE9;e par la transcription, et l&#x26;#39;exclusion nucl&#xE9;aire de FKHR. L&#x26;#39;hyperglyc&#xE9;mie augmente l&#x26;#39;expression de la Bim pro-apoptotique Bcl prot&#xE9;ines (une cible transcriptionnelle de FKHR). Toutefois, l&#x26;#39;IGF-I ne r&#xE9;glemente pas Bim ou anti-apoptotique Bcl-xL niveaux d&#x26;#39;expression de prot&#xE9;ines, ce qui sugg&#xE8;re que l&#x26;#39;IGF-I neuroprotection n&#x26;#39;est pas par r&#xE9;gulation de leur expression. L&#x26;#39;hyperglyc&#xE9;mie induit &#xE9;galement la perte de l&#x26;#39;initiateur de la caspase-9 et augmente les effets de la caspase-3 clivage, bloqu&#xE9;s par l&#x26;#39;IGF-I. Ces donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que l&#x26;#39;IGF-I emp&#xEA;che l&#x26;#39;apoptose dans les neurones DRG en r&#xE9;glementant les effecteurs des voies PI3K/Akt, y compris GSK-3beta, CREB, et FKHR, et en bloquant l&#x26;#39;activation des caspases.

Phosphatidylinositol 3-kinase Akt et effecteurs m&#xE9;diation Insulin-like Growth Factor-I neuroprotection dans dorsaux neurones ganglions de la racine

Phosphatidylinositol 3-Kinase und Akt Effektoren vermitteln Insulin-like growth factor-I Neuroprotektion in Spinalganglien Neuronen.

Insulin-like growth factor-I (IGF-I) protegge i neuroni del sistema nervoso periferico da apoptosi, ma il sottostante signaling pathways non sono ben compresi. Abbiamo studiato IGF-mediata segnalazione in neuroni gangli (DRG) radice dorsale embrionale. Neuroni DRG express IGF-I recettori (IGF-IR) e IGF-attiva il fosfatidilinositolo 3-chinasi (PI3K) / Akt pathway. L&#39;esposizione alto glucosio induce l&#39;apoptosi, che sono inibita da IGF-I attraverso il pathway PI3K/Akt. IGF-I stimolazione della via PI3K/Akt fosforila tre noti Akt effettori: la sopravvivenza trascrizione fattore AMP ciclico risposta elemento binding protein (CREB) e i pro-apoptotic effettrici proteine glicogeno sintasi chinasi-3beta (GSK-3beta) e forkhead (FKHR). IGF-regola la sopravvivenza a livello nucleare attraverso accumulo di fosfo-Akt in nuclei neuronali, aumentata trascrizione CREB-mediata e nucleare esclusione di FKHR DRG. Alto glucosio aumenta l&#39;espressione della proteina pro-apoptotic Bcl Bim (un target trascrizionale di FKHR). Tuttavia, IGF-non regolamentare Bim o anti-apoptotic Bcl-xL livelli di espressione della proteina, che suggerisce che IGF-I neuroprotezione non &egrave; attraverso la regolazione della loro espressione. Glicemia alta anche induce perdita di iniziatore caspase-9 e aumenta la scissione di caspase-3, effetti bloccati da IGF-I. Questi dati suggeriscono che IGF-impedisce la apoptosis in neuroni DRG regolando effettori di pathway PI3K/Akt, GSK-3beta, CREB e FKHR e bloccando l&#39;attivazione di caspase.

Fosfatidilinositolo 3-chinasi e Akt effettori mediano insulin-like growth factor-I neuroprotezione nei neuroni dei gangli spinali.

&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x69D8;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;-I&#xFF08;IGF-I&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x672B;&#x68A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;IGF-I&#x306F;&#x3001;&#x80DA;&#x80CC;&#x6839;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#xFF08;DRG&#xFF09;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x52C9;&#x5F37;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; DRG&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x6025;&#x884C;IGF-I&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;IGF-IR&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;IGF-I&#x306F;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;3  - &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;PI3K&#xFF09;/ Akt&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x9AD8;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x66DD;&#x9732;&#x306F;PI3K/Akt&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;IGF-I&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x751F;&#x5B58;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;AMP&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;CREB&#xFF09;&#x3068;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;-3&#x3B2;&#xFF08;GSK-3&#x3B2;&#xFF09;&#x3068;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AF;&#x30D8;&#x30C3;&#x30C9;&#xFF08;FKHR&#xFF1A;IGF-I PI3K/AKT&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306F;3&#x3064;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;Akt&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#xFF09; IGF-I&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x6838;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;CREB&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x3057;&#x3001;FKHR&#x306E;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x9664;&#x5916;&#x3092;DRG&#x5185;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;Akt&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x6838;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x9AD8;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;Bcl&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;BIM&#xFF08;FKHR&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6A19;&#x7684;&#xFF09;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;IGF-I&#x306F;&#x3001;IGF-I&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4FDD;&#x8B77;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30D3;&#x30E0;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6297;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;Bcl-xL&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x9AD8;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30A4;&#x30CB;&#x30B7;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;9&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x3001;IGF-I&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;-3&#x5207;&#x65AD;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;IGF-I&#x306F;&#x3001;GSK-3&#x3B2;&#x3001;CREB&#x3001;&#x3068;FKHR&#x542B;&#x3080;PI3K/Akt&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x3001;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;DRG&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;3  - &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;Akt&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x5F8C;&#x6839;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x69D8;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;-I&#x795E;&#x7D4C;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;

&#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xAC19;&#xC740; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;-&#xB09C; (IGF-&#xB09C;) apoptosis, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB0B4;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9D0; &#xCD08; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4; &#xB274;&#xB7F0;&#xC744; &#xBCF4;&#xD638; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACF5;&#xBD80; IGF-&#xB09C; &#xBC30;&#xC544; &#xC9C0; &#xB8E8;&#xD2B8; (DRG) &#xC911;&#xCD94; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC;. DRG &#xB274;&#xB7F0; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; IGF-&#xB09C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (IGF-IR) &#xBC0F; IGF-phosphatidylinositol 3 &#xD0A4; (PI3K)&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; / Akt &#xACBD;&#xB85C;. &#xB192;&#xC740; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xB178;&#xCD9C; IGF&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; apoptosis &#xC720;&#xB3C4;-PI3K/Akt &#xACBD;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574;. IGF-&#xB09C; PI3K/Akt &#xACBD;&#xB85C;&#xC758; &#xC790;&#xADF9; phosphorylates 3 &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; Akt &#xC774;&#xD399;&#xD130;: &#xC0DD;&#xC874; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xC21C;&#xD658; &#xC570;&#xD504; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (CREB) &#xD504;&#xB85C; apoptotic effector &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; glycogen synthase, &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C;-3beta (GSK-3beta) &#xBC0F; forkhead (FKHR). IGF-&#xB09C; DRG &#xC2E0;&#xACBD; &#xD575;, &#xC99D;&#xAC00; CREB &#xC911;&#xC7AC; &#xC804;&#xC0AC; &#xBC0F; FKHR&#xC758; &#xD575; &#xC81C;&#xC678; &#xC778;-Akt&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD575; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB192;&#xC740; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC2DD; &#xD504;&#xB85C; apoptotic Bcl &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Bim (FKHR&#xC758; transcriptional &#xB300;&#xC0C1;)&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, IGF-Bim&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xB610;&#xB294; &#xC548;&#xD2F0;-apoptotic Bcl xL &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xADF8; IGF-&#xB09C; neuroprotection &#xADF8;&#xB4E4; &#xC2DD;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC544;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB192;&#xC740; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xB610;&#xD55C; &#xCD08;&#xAE30;&#xC790; caspase-9&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xBC0F; caspase 3 &#xBD84;&#xC5F4;, IGF&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC99D;&#xAC00;-&#xB098;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; IGF-PI3K/Akt &#xACBD;&#xB85C; &#xC774;&#xD399;&#xD130;, GSK-3beta, FKHR, CREB, &#xB4F1;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; caspase&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558; &#xC5EC; DRG &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; apoptosis&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Phosphatidylinositol 3-kinase&#xC640; Akt &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC911;&#xC7AC; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xAC19;&#xC740; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;-I neuroprotection &#xB290; &#xB8E8;&#xD2B8; &#xC911;&#xCD94; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294;.

Insulina-como factor de crecimiento I (IGF-I) protege a las neuronas del sistema nervioso perif&#xE9;rico de la apoptosis, pero las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n subyacentes no son bien entendidos. Se estudi&#xF3; el IGF-I mediada la se&#xF1;alizaci&#xF3;n en los ganglios de la ra&#xED;z dorsal de embriones (GRD) neuronas. DRG neuronas expresan receptores de IGF-I (IGF-IR), y el IGF-I se activa la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) / Akt v&#xED;a. Exposici&#xF3;n glucosa alta induce la apoptosis, que es inhibida por el IGF-I a trav&#xE9;s de la v&#xED;a PI3K/Akt. IGF-I en la estimulaci&#xF3;n de la v&#xED;a PI3K/Akt fosforila tres conocidos efectores AKT: la transcripci&#xF3;n factor de supervivencia de AMP c&#xED;clico respuesta de elemento de uni&#xF3;n de prote&#xED;nas (CREB) y el pro-apopt&#xF3;ticos efector sintasa gluc&#xF3;geno prote&#xED;nas quinasa-3beta (GSK-3beta) y forkhead (FKHR ). IGF-I regula la supervivencia en el plano nuclear a trav&#xE9;s de la acumulaci&#xF3;n de fosfato Akt en DRG n&#xFA;cleos neuronales, el aumento de CREB mediada por la transcripci&#xF3;n, y la exclusi&#xF3;n nuclear de FKHR. La glucosa elevada aumenta la expresi&#xF3;n de la pro-apopt&#xF3;tica Bcl Bim prote&#xED;na (un blanco transcripcional de FKHR). Sin embargo, la IGF-I no regula Bim o anti-apopt&#xF3;tica Bcl-xL los niveles de expresi&#xF3;n de la prote&#xED;na, lo que sugiere que el IGF-I no es la neuroprotecci&#xF3;n mediante la regulaci&#xF3;n de su expresi&#xF3;n. Alto nivel de glucosa tambi&#xE9;n induce la p&#xE9;rdida del iniciador de la caspasa-9 y aumenta los efectos de la caspasa-3 divisi&#xF3;n, bloqueados por el IGF-I. Estos datos sugieren que el IGF-I previene la apoptosis en las neuronas DRG mediante la regulaci&#xF3;n de efectores de la v&#xED;a PI3K/Akt, incluyendo GSK-3beta, CREB, y FKHR, y mediante el bloqueo de la activaci&#xF3;n de caspasas.

Fosfatidilinositol 3-quinasa Akt y efectores Mediar insulina-like Growth Factor-I Neuroprotecci&#xF3;n en neuronas ganglio de la ra&#xED;z dorsal

Syntaxin1A&#xFF0C;&#x795E;&#x7ECF;&#x7279;&#x5B9A; N-ethylmaleimide-&#x654F;&#x611F;&#x56E0;&#x5B50;&#x9644;&#x7740;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x5BF9;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x9694;&#x79BB;&#x5F62;&#x5F0F; N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x963F;&#x5C14;&#x6CD5;&#x87BA;&#x65CB;&#x675F;&#x5C01;&#x95ED;&#x6784;&#x8C61;&#x6298;&#x53E0;&#x540E;&#x7F51;&#x7F57;&#x6BCD;&#x9898; (H3 &#x57DF;&#xFF09;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x9650;&#x5236;&#x4E0E;&#x540C;&#x6E90;&#x5708;&#x5957;&#x7684; H3 &#x57DF;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;Munc18-1&#xFF0C;&#x795E;&#x7ECF;&#x7279;&#x5B9A;&#x6210;&#x5458;&#x7684; Sec1/Munc18 &#x86CB;&#x767D;&#x5BB6;&#x65CF;&#xFF0C;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; syntaxin1A&#xFF0C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8FD9;&#x5C01;&#x95ED;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x5B8C;&#x6574;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; Munc18-1/syntaxin1A &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293-S3 &#x4E2D;&#x7684;&#x4F9B;&#x3001; &#x53D7;&#x4F53;&#x5BF9;&#x548C;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x4EBA;&#x589E;&#x5F3A;&#x84DD;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;-Munc18-1 &#x548C;&#x6C34;&#x6676; variant &#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x589E;&#x5F3A;&#x9EC4;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;-syntaxin1A &#x6216;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x660E;&#x663E;&#x8861;&#x91CF;&#x97F3;&#x54C1;&#x6548;&#x7387;&#x4E0E;&#x8865;&#x5145;&#x7ED3;&#x679C;&#x6BEB;&#x4E0D;&#x542B;&#x7CCA;&#x5730;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x97F3;&#x54C1;&#x548C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x97F3;&#x54C1;&#x6548;&#x7387;&#x7A7A;&#x95F4;&#x6620;&#x5C04;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E24;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x52A0;&#x5F3A;&#x4E86;&#x84DD;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;-Munc18-1 &#x548C;&#x6C34;&#x6676; variant &#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x589E;&#x5F3A;&#x9EC4;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; syntaxin1A colocalized &#x4E0E;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x6807;&#x8BB0;&#x548C;&#x5C55;&#x51FA;&#x97F3;&#x54C1;&#x65E9;&#x65F6;&#x5019;&#x8868;&#x8FBE;&#x65F6;&#xFF0C;&#x800C;&#x5F3A;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x5171;&#x5B9A;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x97F3;&#x54C1;&#x503C;&#xFF0C;&#x663E;&#x7136;&#x5728;&#x7A0D;&#x540E;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x8D29;&#x5356;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684; syntaxin1A &#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; Munc18-1 &#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;Syntaxin1A(L165A/E166A)&#x3001; &#x4E00;&#x6253;&#x5F00;&#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x79CD;&#x548C; syntaxin1A(I233A)&#xFF0C;H3 &#x57DF;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x97F3;&#x54C1;&#x6548;&#x7387;&#xFF0C;&#x662F;&#x4ECE;&#x63A7;&#x5236;&#x51CF;&#x5C11;&#x7EA6; 70%&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;H3 &#x57DF;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; syntaxin1A(I209A) &#x6709;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528; phosphomimetic &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684; Munc18-1&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x8BBE;&#x7ACB;&#x8BE5; Ser 313&#x3001; Munc18-1 &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7F51;&#x7AD9;&#x548C;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;-574&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176; 5 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3001; &#x89C4;&#x8303; Munc18-1/syntaxin1A &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293-S3 &#x548C;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x97F3;&#x54C1;&#x6210;&#x50CF;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x5141;&#x8BB8;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x89C4;&#x4F8B;&#x7684; Munc18-1/syntaxin1A &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5BF9; Ca(2+) &#x8C03;&#x8282;&#x5206;&#x6CCC;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;

&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x62A5;&#x544A;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684; syntaxin1a &#x4E0E; Munc18-1 &#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Syntaxin1A, a neural-specific N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor protein essential to neurotransmitter release, in isolation forms a closed conformation with an N-terminal alpha-helix bundle folded upon the SNARE motif (H3 domain), thereby limiting interaction of the H3 domain with cognate SNAREs. Munc18-1, a neural-specific member of the Sec1/Munc18 protein family, binds to syntaxin1A, stabilizing this closed conformation. We used fluorescence resonance energy transfer (FRET) to characterize the Munc18-1/syntaxin1A interaction in intact cells. Enhanced cyan fluorescent protein-Munc18-1 and a citrine variant of enhanced yellow fluorescent protein-syntaxin1A, or mutants of these proteins, were expressed as donor and acceptor pairs in human embryonic kidney HEK293-S3 and adrenal chromaffin cells. Apparent FRET efficiency was measured using two independent approaches with complementary results that unambiguously verified FRET and provided a spatial map of FRET efficiency. In addition, enhanced cyan fluorescent protein-Munc18-1 and a citrine variant of enhanced yellow fluorescent protein-syntaxin1A colocalized with a Golgi marker and exhibited FRET at early expression times, whereas a strong plasma membrane colocalization, with similar FRET values, was apparent at later times. Trafficking of syntaxin1A to the plasma membrane was dependent on the presence of Munc18-1. Both syntaxin1A(L165A/E166A), a constitutively open conformation mutant, and syntaxin1A(I233A), an H3 domain point mutant, demonstrated apparent FRET efficiency that was reduced approximately 70% from control. In contrast, the H3 domain mutant syntaxin1A(I209A) had no effect. By using phosphomimetic mutants of Munc18-1, we also established that Ser-313, a Munc18-1 protein kinase C phosphorylation site, and Thr-574, a cyclin-dependent kinase 5 phosphorylation site, regulate Munc18-1/syntaxin1A interaction in HEK293-S3 and chromaffin cells. We conclude that FRET imaging in living cells may allow correlated regulation of Munc18-1/syntaxin1A interactions to Ca(2+)-regulated secretory events.

Fluorescence resonance energy transfer reports properties of syntaxin1a interaction with Munc18-1 in vivo.

Syntaxin1A, une neuronal sp&#xE9;cifiques N-&#xE9;thylmal&#xE9;imide sensible &#xE0; l&#x26;#39;attachement du r&#xE9;cepteur du facteur prot&#xE9;ique prot&#xE9;ine essentielle &#xE0; la lib&#xE9;ration de neurotransmetteurs, de fa&#xE7;on isol&#xE9;e forme un conformation ferm&#xE9;e avec une N-terminale h&#xE9;lice alpha faisceau repli&#xE9; sur le motif SNARE (H3 domaine), limitant ainsi l&#x26;#39;interaction de le domaine H3 avec SNAREs apparent&#xE9;s. Munc18-1, un &#xE9;l&#xE9;ment neuronal-sp&#xE9;cifique de la famille des prot&#xE9;ines Sec1/Munc18, se lie &#xE0; syntaxin1A, stabiliser cette conformation ferm&#xE9;e. Nous avons utilis&#xE9; un transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie de fluorescence par r&#xE9;sonance (FRET) pour caract&#xE9;riser l&#x26;#39;interaction Munc18-1/syntaxin1A dans des cellules intactes. Am&#xE9;lioration fluorescente cyan prot&#xE9;ines Munc18-1 et une variante am&#xE9;lior&#xE9;e de citrine jaune prot&#xE9;ine fluorescente-syntaxin1A, ou des mutants de ces prot&#xE9;ines, ont &#xE9;t&#xE9; exprim&#xE9;es en tant que donneur et accepteur paires de rein embryonnaire humain HEK293-S3 et les cellules chromaffines surr&#xE9;nales. Apparente FRET efficacit&#xE9; a &#xE9;t&#xE9; mesur&#xE9;e en utilisant deux approches ind&#xE9;pendantes avec des r&#xE9;sultats compl&#xE9;mentaires qui sans ambigu&#xEF;t&#xE9; v&#xE9;rifi&#xE9;es FRET et a fourni une carte spatiale de FRET efficacit&#xE9;. En outre, l&#x26;#39;am&#xE9;lioration fluorescente cyan prot&#xE9;ines Munc18-1 et une variante am&#xE9;lior&#xE9;e de citrine jaune prot&#xE9;ine fluorescente-syntaxin1A colocalis&#xE9;s avec un marqueur de Golgi et expos&#xE9;es &#xE0; des moments d&#x26;#39;expression FRET d&#xE9;but, alors qu&#x26;#39;une colocalisation membrane plasmique forte, avec des valeurs similaires FRET, est apparu au Plus tard. La traite des syntaxin1A &#xE0; la membrane plasmique &#xE9;tait d&#xE9;pendante de la pr&#xE9;sence de Munc18-1. Les deux syntaxin1A (L165A/E166A), un mutant constitutivement la conformation ouverte, et syntaxin1A (I233A), un H3 de domaine point de mutant, ont d&#xE9;montr&#xE9; l&#x26;#39;efficacit&#xE9; apparente de FRET qui a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;duite d&#x26;#39;environ 70% du contr&#xF4;le. En revanche, le H3 de domaine mutant syntaxin1A (I209A) n&#x26;#39;a eu aucun effet. En utilisant les mutants phosphomimetic de Munc18-1, nous avons &#xE9;galement &#xE9;tabli que Ser-313, un site kinase Munc18-1 phosphorylation des prot&#xE9;ines C, et Thr-574, un site kinases cycline-d&#xE9;pendantes phosphorylation 5, r&#xE9;guler les interactions Munc18-1/syntaxin1A dans HEK293 -S3 et des cellules chromaffines. Nous concluons que l&#x26;#39;imagerie de FRET dans les cellules vivantes peuvent permettre une r&#xE9;gulation corr&#xE9;lation des interactions Munc18-1/syntaxin1A Ca &#xE9;v&#xE9;nements s&#xE9;cr&#xE9;toires (2 +)-r&#xE9;glement&#xE9;es.

Fluorescence Resonance Energy Transfer Rapports propri&#xE9;t&#xE9;s d&#x26;#39;interaction avec Syntaxin1a Munc18-1 in vivo

Fluorescence resonance energy transfer berichtet Eigenschaften syntaxin1a Wechselwirkung mit Munc18-1 in vivo.

Syntaxin1A, un neurali specifici N-ethylmaleimide-sensibile fattore attaccamento proteina recettore proteina essenziale per il rilascio di neurotrasmettitore, in forme di isolamento una conformazione chiusa con un bundle di alfa-elica N-terminale piegata sul motivo SNARE (dominio H3), limitando cos&igrave; l&#39;interazione del dominio H3 con insidie affine. Munc18-1, membro della famiglia della proteina Munc18/Sec1, si lega a syntaxin1A, stabilizzare questo neurali specifiche chiuso conformazione. Abbiamo usato la fluorescenza resonance energy transfer (FRET) per caratterizzare l&#39;interazione Munc18-1/syntaxin1A in cellule intatte. Enhanced ciano fluorescent protein-Munc18-1 e una variante citrina di avanzata proteina fluorescente giallo-syntaxin1A, o mutanti di queste proteine, sono stati espressi come donatore e accettore coppie nel rene embrionale umano HEK293-S3 e cellule cromaffini surrenale. L&#39;efficienza FRET &egrave; stata misurata utilizzando due approcci indipendenti con risultati complementari che inequivocabilmente verificato FRET e fornito una mappa spaziale di FRET efficienza apparente. Inoltre, enhanced cyan fluorescent protein-Munc18-1 e una variante citrina giallo maggiore proteina fluorescente-syntaxin1A colocalized con un marcatore di Golgi ed esposto FRET presto volte espressione, considerando che una presenza forte membrana del plasma, con valori simili di FRET, era evidente in momenti successivi. Traffico di syntaxin1A a membrana del plasma &egrave; stato dipendente dalla presenza di Munc18-1. Sia syntaxin1A(L165A/E166A), un mutante costitutivamente aperto conformazione e syntaxin1A(I233A), un mutante di punto H3 dominio, dimostrato apparente efficienza FRET che era ridotto di circa il 70% dal controllo. Al contrario, l&#39;H3 dominio mutante syntaxin1A(I209A) ha avuto alcun effetto. Utilizzando phosphomimetic mutanti di Munc18-1, abbiamo anche stabilito che Ser-313, un sito di fosforilazione Munc18-1 proteina chinasi C e Thr-574, un sito di fosforilazione della chinasi ciclina-dipendente 5, regolare interazione Munc18-1/syntaxin1A in HEK293-S3 e cellule cromaffini. Concludiamo che FRET imaging in cellule viventi possono consentire correlato regolamento di interazioni Munc18-1/syntaxin1A regolamentati Ca(2+) secretorie eventi.

Il trasferimento di energia di risonanza di fluorescenza report propriet&agrave; di interazione syntaxin1a con Munc18-1 in vivo.

Syntaxin1A&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x795E;&#x7D4C;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;N-&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30DE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;&#x4ED8;&#x7740;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3057;&#x3001;SNARE&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#xFF08;H3&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF09;&#x306B;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307E;&#x308C;&#x305F;N&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x3B1;-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x675F;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x9589;&#x3058;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x540C;&#x65CF;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x3068;H3&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3002; Munc18-1&#x3001;Sec1/Munc18&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x9589;&#x3058;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3001;syntaxin1A&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;Munc18-1/syntaxin1A&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x8EE2;&#x79FB;&#xFF08;FRET&#xFF09;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30A2;&#x30F3;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-Munc18-1&#x3068;&#x30B7;&#x30C8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5F37;&#x5316;&#x9EC4;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;syntaxin1A&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x80CE;&#x5150;&#x814E;&#x81D3;HEK293-S3&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x526F;&#x814E;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x30DA;&#x30A2;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x4E0A;&#x306F;&#x52B9;&#x7387;&#x304C;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3064;2&#x3064;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;FRET&#x306E;FRET&#x3084;FRET&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30A2;&#x30F3;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-Munc18-1&#x3068;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9EC4;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-syntaxin1A&#x306E;&#x30B7;&#x30C8;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x4F53;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3068;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x305F;&#x5024;&#x3092;FRET&#x3067;&#x3001;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x65E9;&#x671F;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x6642;&#x9593;&#x3067;&#x306E;FRET&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x3067;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x5F8C;&#x306E;&#x6642;&#x4EE3;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;syntaxin1A&#x306E;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306F;Munc18-1&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002; syntaxin1A&#xFF08;L165A/E166A&#xFF09;&#x3001;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x958B;&#x3044;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;syntaxin1A&#xFF08;I233A&#xFF09;&#x3001;H3&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x70B9;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x7D04;70&#xFF05;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x4E0A;&#x306E;FRET&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;H3&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;syntaxin1A&#xFF08;I209A&#xFF09;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; Munc18-1&#x306E;phosphomimetic&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x306E;Ser-313&#x3001;Munc18-1&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Thr-574&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;5&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3001;HEK293&#x3067;Munc18-1/syntaxin1A&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x78BA;&#x7ACB;-S3&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002; Ca&#x306E;Munc18-1/syntaxin1A&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x898F;&#x5236;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x5206;&#x6CCC;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8A31;&#x3059;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;FRET&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;Munc18-1&#x3067;Syntaxin1a&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;

Syntaxin1A, N-ethylmaleimide-&#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAD00;&#xB828; &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC54C;&#xD30C;-&#xD5EC;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xBC88;&#xB4E4;&#xACFC; &#xB2EB;&#xD78C;&#xB41C; &#xB098; &#xB780; &#xB3D9;&#xC871; SNAREs H3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC81C;&#xD55C; &#xBB34; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; (H3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;)&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC811;&#xD600; &#xACA9;&#xB9AC; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC694;&#xC18C;. Munc18-1 Sec1/Munc18 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC774; &#xC548;&#xC815;&#xD654; syntaxin1A&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAD00;&#xB828; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; &#xD3D0;&#xC1C4; &#xB098; &#xB780;. &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; (FRET) &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC140;&#xC5D0; Munc18-1/syntaxin1A &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC2DC;&#xC548;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-Munc18-1&#xACFC;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB178;&#xB780;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-syntaxin1A, &#xD669; &#xBCC0;&#xD615; &#xB610;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC778;&#xAC04; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; HEK293 s3&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; &#xC30D;&#xACFC; &#xBD80; &#xC2E0; &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; FRET &#xD6A8;&#xC728; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xD655;&#xC778; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xD558; &#xACE0; FRET &#xD6A8;&#xC728;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xBCF4;&#xC644;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xC548;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-Munc18-1 &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; syntaxin1A Golgi &#xD45C;&#xC2DC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; colocalized &#xACE0; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC77C;&#xCC0D; &#xC2DD; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xC804;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB178;&#xB780;&#xC0C9;&#xC758; &#xD669; &#xC218;&#xC815; &#xBCC0;&#xD615; &#xBC18;&#xBA74; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xAC12;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; colocalization &#xB098;&#xC911; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xBD84;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. Syntaxin1A &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; Munc18-1&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB450; syntaxin1A(L165A/E166A), constitutively &#xC624;&#xD508; &#xB098; &#xB780; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC0F; syntaxin1A(I233A), H3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; FRET &#xD6A8;&#xC728; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D; 70% &#xAC10;&#xC18C; &#xC785;&#xC99D;. &#xBC18;&#xBA74;, H3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; syntaxin1A(I209A) &#xC544;&#xBB34; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xC5C6;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Munc18-1 phosphomimetic &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD574; &#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; &#xADF8; Ser-313, Munc18-1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;, &#xBC0F; Thr-574, &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 5 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC124;&#xB9BD;, HEK293 S3 &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; Munc18-1/syntaxin1A &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; Munc18-1/syntaxin1A Ca(2+) &#xADDC;&#xC81C; &#xBD84; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xACB0;&#xB860; &#xC9C0;&#xC5C8;&#xB2E4;.

&#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; syntaxin1a &#xC0C1;&#xD638; Munc18-1 in vivo&#xC758; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Syntaxin1A, una neural espec&#xED;fica de N-etilmaleimida sensible fijaci&#xF3;n factor proteico prote&#xED;na receptora esencial para la liberaci&#xF3;n de neurotransmisores, en el aislamiento forma una conformaci&#xF3;n cerrada con un N-terminal de la alfa-h&#xE9;lice paquete plegada sobre el motivo SNARE (H3 dominio), limitando as&#xED; la interacci&#xF3;n de el dominio H3 con trampas afines. Munc18-1, un miembro neural espec&#xED;fico de la familia de prote&#xED;nas Sec1/Munc18, se une a syntaxin1A, estabilizar esta conformaci&#xF3;n cerrada. Se utiliz&#xF3; la transferencia de energ&#xED;a de resonancia fluorescente (FRET) para caracterizar la interacci&#xF3;n Munc18-1/syntaxin1A en c&#xE9;lulas intactas. Mejorada fluorescente cian prote&#xED;na-Munc18-1 y una variante de citrino mejorada amarillo fluorescente prote&#xED;na-syntaxin1A, o mutantes de estas prote&#xED;nas, se expresaron como donante y aceptor pares en el ri&#xF1;&#xF3;n embrionario humano HEK293-S3 y c&#xE9;lulas adrenales cromafines. Aparente FRET eficiencia se mide mediante dos m&#xE9;todos independientes con resultados complementarios que inequ&#xED;vocamente verificado FRET y proporcion&#xF3; un mapa espacial de FRET eficiencia. Adem&#xE1;s, el aumento de fluorescencia cian prote&#xED;na-Munc18-1 y una variante de citrino mejorada amarillo fluorescente prote&#xED;na-syntaxin1A colocalized con un marcador de Golgi y exhibi&#xF3; FRET a veces expresi&#xF3;n temprana, mientras que una colocalizaci&#xF3;n membrana plasm&#xE1;tica fuerte, con valores similares FRET, era evidente a los &#xFA;ltimos tiempos. El tr&#xE1;fico de syntaxin1A a la membrana plasm&#xE1;tica era dependiente de la presencia de Munc18-1. Tanto syntaxin1A (L165A/E166A), un mutante conformaci&#xF3;n constitutivamente abierto, y syntaxin1A (I233A), un dominio H3 punto mutante, demostr&#xF3; aparente FRET eficiencia que se redujo aproximadamente 70% del control. En contraste, el H3 dominio mutante syntaxin1A (I209A) no tuvo ning&#xFA;n efecto. Mediante el uso de mutantes phosphomimetic de Munc18-1, tambi&#xE9;n establece que Ser-313, una quinasa Munc18-1 de prote&#xED;na C sitio de fosforilaci&#xF3;n, y Thr 574-, una quinasa dependiente de ciclina 5 sitio de fosforilaci&#xF3;n, reguladores de la interacci&#xF3;n Munc18-1/syntaxin1A en HEK293 -S3 y las c&#xE9;lulas cromafines. Se concluye que FRET im&#xE1;genes en las c&#xE9;lulas vivas pueden permitir la regulaci&#xF3;n de las interacciones correlacionada Munc18-1/syntaxin1A a Ca (2 +)-reguladas eventos secretoras.

Transferencia de energ&#xED;a de resonancia fluorescente Informes de Propiedades de la interacci&#xF3;n con Syntaxin1a Munc18-1 en Vivo

Tomosyn&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; Q &#x7F51;&#x7F57; syntaxin 1A&#xFF0C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F19;&#x4F34;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; R &#x7F51;&#x7F57;&#x86CB;&#x767D;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x4E3A; neurosecretion &#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x4E3B;&#x7BA1;&#x7F51;&#x7F57;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x4E00;&#x76F4;&#x6CA1;&#x6709;&#x76F4;&#x63A5;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x7684;&#x52A8;&#x6001; tomosyn &#x7F51;&#x7F57;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x901A;&#x8FC7;&#x54EA;&#x4E9B; tomosyn &#x8FC7;&#x5883;&#x6216;&#x54EA;&#x4E2A; tomosyn &#x7F51;&#x7F57;&#x5230;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x53D7;&#x5206;&#x6CCC;&#x9700;&#x6C42;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x7528;&#x751F;&#x5316;&#x548C;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x63CF;&#x8FF0; tomosyn syntaxin 1A &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x5C5E;&#x6027;&#x4F4F;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x4FC3;&#x6CCC;&#x523A;&#x6FC0;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x4ECE; tomosyn &#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x533A;&#x57DF;&#x5FEB;&#x901F;&#x79FB;&#x4F4D;&#x548C;&#x6B64;&#x6613;&#x4F4D;&#x662F;&#x4E0E; tomosyn syntaxin 1A &#x4E92;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x589E;&#x52A0;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684; tomosyn &#x5230; tomosyn &#x7F51;&#x7F57;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x4E2D;&#x589E;&#x52A0;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x4FC3;&#x6CCC;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5F3A;&#x70C8;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236; Rho &#x76F8;&#x5173;&#x5377;&#x7EBF;&#x5708;&#x6210;&#x578B;&#x6FC0;&#x9176;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; RhoA &#x4FC3;&#x6CCC;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x523A;&#x6FC0;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6EB6;&#x8840;&#x78F7;&#x8102;&#x9178;&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD; nonsecretory &#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#xFF0C;&#x5F3A;&#x70C8;&#x6FC0;&#x6D3B; RhoA&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5BF9; tomosyn &#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x4FC3;&#x6CCC;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x5728; PC 12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x8D85;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE; tomosyn&#xFF0C;&#x5B58;&#x5728;&#x6EB6;&#x8840;&#x78F7;&#x8102;&#x9178;&#x4FC3;&#x6CCC;&#x523A;&#x6FC0;&#x5BFC;&#x81F4;&#x51CF;&#x5C11;&#x8BF1;&#x53D1;&#x5206;&#x6CCC;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x88AB;&#x6DD8;&#x6C70;&#x51FA;&#x5C40;&#x540E;&#x7684; Rho &#x76F8;&#x5173;&#x5377;&#x7EBF;&#x5708;&#x6210;&#x578B;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6548;&#x679C;&#x9700;&#x8981; tomosyn &#x548C; syntaxin 1A &#x5B8C;&#x597D;&#x65E0;&#x635F;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;tomosyn syntaxin 1A &#x4E92;&#x52A8;&#x4FC3;&#x6CCC;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x54CD;&#x5E94;&#x8C03;&#x5236;&#x662F;&#x5141;&#x8BB8;&#x52A8;&#x6001;&#x8C03;&#x8282;&#x5206;&#x6CCC;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

Tomosyn syntaxin 1A &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x725B;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x55DC;&#x94EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

Tomosyn, a soluble R-SNARE protein identified as a binding partner of the Q-SNARE syntaxin 1A, is thought to be critical in setting the level of fusion-competent SNARE complexes for neurosecretion. To date, there has been no direct evaluation of the dynamics in which tomosyn transits through tomosyn-SNARE complexes or of the extent to which tomosyn-SNARE complexes are regulated by secretory demand. Here, we employed biochemical and optical approaches to characterize the dynamic properties of tomosyn-syntaxin 1A complexes in live adrenal chromaffin cells. We demonstrate that secretagogue stimulation results in the rapid translocation of tomosyn from the cytosol to plasma membrane regions and that this translocation is associated with an increase in the tomosyn-syntaxin 1A interaction, including increased cycling of tomosyn into tomosyn-SNARE complexes. The secretagogue-induced interaction was strongly reduced by pharmacological inhibition of the Rho-associated coiled-coil forming kinase, a result consistent with findings demonstrating secretagogue-induced activation of RhoA. Stimulation of chromaffin cells with lysophosphatidic acid, a nonsecretory stimulus that strongly activates RhoA, resulted in effects on tomosyn similar to that of application of the secretagogue. In PC-12 cells overexpressing tomosyn, secretagogue stimulation in the presence of lysophosphatidic acid resulted in reduced evoked secretory responses, an effect that was eliminated upon inhibition of Rho-associated coiled-coil forming kinase. Moreover, this effect required an intact interaction between tomosyn and syntaxin 1A. Thus, modulation of the tomosyn-syntaxin 1A interaction in response to secretagogue activation is an important mechanism allowing for dynamic regulation of the secretory response.

Receptor-mediated regulation of tomosyn-syntaxin 1A interactions in bovine adrenal chromaffin cells.

Tomosyn, une forme soluble R-SNARE prot&#xE9;ine identifi&#xE9;e comme un partenaire de liaison de l&#x26;#39;1A Q-SNARE syntaxine, est consid&#xE9;r&#xE9; comme critique pour fixer le niveau des complexes SNARE fusion comp&#xE9;tentes pour neuros&#xE9;cr&#xE9;tion. &#xC0; ce jour, il n&#x26;#39;y a pas eu d&#x26;#39;&#xE9;valuation directe de la dynamique dans laquelle transite &#xE0; travers tomosyn tomosyn-SNARE complexes ou de la mesure dans laquelle tomosyn-SNARE complexes sont r&#xE9;gis par la demande s&#xE9;cr&#xE9;toire. Ici, nous avons utilis&#xE9; des approches biochimiques et optiques pour caract&#xE9;riser les propri&#xE9;t&#xE9;s dynamiques de complexes 1A tomosyn-syntaxine en direct des cellules chromaffines surr&#xE9;nales. On d&#xE9;montrer que les r&#xE9;sultats de stimulation s&#xE9;cr&#xE9;tagogues de la translocation rapide de tomosyn du cytosol vers les r&#xE9;gions de membranes plasmatiques et que ce d&#xE9;placement est associ&#xE9; &#xE0; une augmentation de l&#x26;#39;interaction tomosyn-syntaxine 1A, notamment bicyclette augment&#xE9; de tomosyn en tomosyn-SNARE de complexes. L&#x26;#39;interaction s&#xE9;cr&#xE9;tagogue induite a &#xE9;t&#xE9; fortement r&#xE9;duite par l&#x26;#39;inhibition pharmacologique de la Rho-associ&#xE9; superh&#xE9;lice kinase formage, un r&#xE9;sultat conforme aux conclusions d&#xE9;montrant s&#xE9;cr&#xE9;tagogue induite par activation de la RhoA. Stimulation des cellules chromaffines avec l&#x26;#39;acide lysophosphatidique, un stimulus nonsecretory qui active fortement RhoA, entra&#xEE;n&#xE9; effets sur tomosyn similaire &#xE0; celle d&#x26;#39;application de la s&#xE9;cr&#xE9;tagogue. Dans PC-12 cellules surexprimant tomosyn, la stimulation s&#xE9;cr&#xE9;tagogue en pr&#xE9;sence d&#x26;#39;acide lysophosphatidique entra&#xEE;n&#xE9; r&#xE9;duits r&#xE9;ponses &#xE9;voqu&#xE9;es s&#xE9;cr&#xE9;toires, un effet qui a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;limin&#xE9;e sur l&#x26;#39;inhibition de la Rho-associ&#xE9; superh&#xE9;lice formant kinase. En outre, cet effet n&#xE9;cessaire une interaction entre intacte et la syntaxine 1A tomosyn. Ainsi, la modulation de l&#x26;#39;interaction tomosyn-syntaxine 1A en r&#xE9;ponse &#xE0; l&#x26;#39;activation s&#xE9;cr&#xE9;tagogue est un m&#xE9;canisme important permettant de r&#xE9;gulation dynamique de la r&#xE9;ponse s&#xE9;cr&#xE9;toire.

M&#xE9;di&#xE9;e par le r&#xE9;cepteur r&#xE8;glement des interactions 1A Tomosyn-syntaxine dans l&#x26;#39;esp&#xE8;ce bovine cellules chromaffines surr&#xE9;nales

Tomosyn, ein l&ouml;sliches R-SNARE-Protein identifiziert als verbindliche Partner Q-SNARE Syntaxin 1a, gilt als entscheidend f&uuml;r die Festsetzung des Fusion-zust&auml;ndigen SNARE-komplexe f&uuml;r Neurosecretion. Bis dato gab es keine direkte Auswertung der Dynamik in der Tomosyn-Transite durch Tomosyn-SNARE-komplexe oder das Ausma&szlig;, zu welchem Tomosyn-SNARE komplexe sekretorischen Nachfrage geregelt sind. Hier uns angewandte biochemische und optische Ans&auml;tze charakterisieren die dynamischen Eigenschaften der Tomosyn-Syntaxin-1A-komplexen in Leben Adrenale chromaffin Zellen. Wir zeigen, dass Secretagogue Stimulierung der rapid Translokation von Tomosyn aus dem Zytosol Plasmamembran Regionen f&uuml;hrt und dass diese Translokation mit einem Anstieg der Tomosyn-Syntaxin-1A-Aktivit&auml;t, einschlie&szlig;lich erh&ouml;hte Radfahren von Tomosyn in Tomosyn-SNARE-komplexe verbunden ist. Die Secretagogue-induzierte Interaktion wurde durch pharmakologische Hemmung der Rho-assoziierte aufgerollte Spule bilden Kinase, ein Ergebnis mit Ergebnisse demonstrieren Secretagogue-induzierte Aktivierung des RhoA stark reduziert. Stimulation der chromaffin Zellen mit Lysophosphatidic Acid, nonsecretory Impuls, der stark RhoA aktiviert, f&uuml;hrte zu Auswirkungen auf die Tomosyn &auml;hnlich der Anwendung der Secretagogue. In PC-12 Zellen ergab &uuml;berexprimierenden Tomosyn, Secretagogue Stimulierung in Anwesenheit von Lysophosphatidic S&auml;ure reduzierten evozierte sekretorischen Antworten, ein Effekt, der bei der Hemmung der Rho-assoziierte aufgerollte Spule bilden Kinase eliminiert wurde. Au&szlig;erdem ben&ouml;tigt dieser Effekt eine intakte Interaktion zwischen Tomosyn und Syntaxin 1A. Modulation der Tomosyn-Syntaxin-1A-Interaktion als Reaktion auf Secretagogue Aktivierung ist daher ein wichtiger Mechanismus erm&ouml;glicht dynamische Verordnung der sekretorische Antwort.

Rezeptor-vermittelte Regulation der Tomosyn-Syntaxin-1A-Interaktionen in bovine adrenal chromaffin Zellen.

Tomosyn, una proteina solubile R-SNARE identificata come un partner di associazione del Q-SNARE Sintaxina 1A, &egrave; pensato per essere critici in impostazione del livello dei complessi SNARE fusion-competente per neurosecretion. Ad oggi, c&#39; non &egrave; stata alcuna valutazione diretta delle dinamiche in cui tomosyn i transiti attraverso complessi tomosyn-rullante o della misura di cui tomosyn-rullante complessi sono regolati dalla domanda secretiva. Qui, abbiamo impiegato biochimica e approcci ottici per caratterizzare le propriet&agrave; dinamiche dei complessi 1A tomosyn-Sintaxina in vivono le cellule cromaffini surrenale. Dimostriamo che stimolo secretagogo provoca la rapida traslocazione di tomosyn dal citosol alla membrana plasmatica regioni e che questa traslocazione &egrave; associata con un aumento nell&#39;interazione tomosyn-Sintaxina 1A, tra cui ciclismo aumentato di tomosyn in complessi tomosyn-rullante. L&#39;interazione secretagogue-indotta era fortemente ridotto di inibizione farmacologica della Rho-associated coiled-coil forma chinasi di, un risultato coerenza con le risultanze dimostrando secretagogo indotta da attivazione di RhoA. Stimolazione delle cellule cromaffini con acido lysophosphatidic, uno stimolo nonsecretory che attiva fortemente RhoA, ha provocato effetti sulla tomosyn simile a quello di applicazione del secretagogo. In PC-12 celle con sovraesprimono relativa tomosyn, stimolazione secretagogue in presenza di acido lysophosphatidic portato ridotte risposte secretorie evocate, un effetto che &egrave; stato eliminato all&#39;inibizione della Rho-associated coiled-coil forma chinasi. Inoltre, questo effetto necessaria un&#39;interazione tra tomosyn e Sintaxina 1A intatta. Modulazione dell&#39;interazione 1A tomosyn-Sintaxina in risposta all&#39;attivazione secretagogo &egrave; quindi un importante meccanismo che consente per la regolazione dinamica della risposta secretoria.

Regolamento del recettore-mediata delle interazioni 1A tomosyn-Sintaxina nelle cellule cromaffini surrenale bovine.

Tomosyn&#x3001;Q-SNARE&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;1A&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x306E;R-SNARE&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x6709;&#x80FD;&#x306A;SNARE&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306B;&#x3001;tomosyn-SNARE&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;tomosyn-SNARE&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x304C;&#x5206;&#x6CCC;&#x9700;&#x8981;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3069;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306E;&#x3067;tomosyn&#x9077;&#x79FB;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x8A55;&#x4FA1;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306E;&#x526F;&#x814E;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;tomosyn-&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;1A&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;tomosyn&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x79FB;&#x884C;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x306F;tomosyn-SNARE&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;tomosyn&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306A;&#x3069;tomosyn-&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;1A&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5206;&#x6CCC;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x5F37;&#x304F;&#x306E;Rho&#x95A2;&#x9023;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C9;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x5F62;&#x6210;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x3001;RhoA&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6240;&#x898B;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x305F;&#x7D50;&#x679C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30EA;&#x30BE;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x9178;&#x3001;&#x5F37;&#x304F;&#x3042;&#x308B;RhoA&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x975E;&#x5206;&#x6CCC;&#x523A;&#x6FC0;&#x3001;&#x3068;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x4F3C;&#x305F;tomosyn&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002; PC-12&#x3067;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;tomosyn&#x3001;&#x30EA;&#x30BE;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x5206;&#x6CCC;&#x523A;&#x6FC0;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x8A98;&#x767A;&#x5206;&#x6CCC;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;Rho&#x95A2;&#x9023;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C9;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x6392;&#x9664;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;tomosyn&#x3068;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;1A&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5206;&#x6CCC;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;tomosyn-&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;1A&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306F;&#x5206;&#x6CCC;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30A6;&#x30B7;&#x526F;&#x814E;&#x9AC4;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Tomosyn-&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;1A&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x898F;&#x5236;

Tomosyn, Q-&#xC62C; &#xBB34; syntaxin 1a&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xC5F0;&#xAD6C;-&#xC62C; &#xBB34; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; neurosecretion&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD4E8;&#xC804; &#xC720;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC62C; &#xBB34; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xC218;&#xC900; &#xC124;&#xC815;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC0DD;&#xAC01;. &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0;, &#xC544;&#xB2C8; &#xC9C1;&#xC811; &#xD3C9;&#xAC00; &#xBC94;&#xC704;&#xB294; tomosyn &#xC62C; &#xBB34;&#xB97C; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xBD84;&#xC758; &#xC218;&#xC694;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB610;&#xB294; tomosyn-&#xC62C; &#xBB34; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; tomosyn &#xC774;&#xB3D9;&#xB85C; &#xC5ED;&#xD559;&#xC758; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xACE0;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xAD11;&#xD559; &#xC811;&#xADFC;&#xBC95;&#xC5D0;&#xC11C; tomosyn syntaxin 1A &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC18D;&#xC131;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC0B4; &#xBD80; &#xC2E0; &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC790;&#xADF9; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC601;&#xC5ED; &#xD558;&#xB294; cytosol&#xC5D0;&#xC11C; tomosyn&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xC804;&#xC5D0; &#xACB0;&#xACFC;&#xC774; &#xC804; tomosyn-&#xC62C; &#xBB34; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; tomosyn&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC21C;&#xD658; &#xB4F1; tomosyn syntaxin 1A &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xB3C4; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; Rho &#xAD00;&#xB828; &#xCF54;&#xC77C; &#xCF54;&#xC77C; &#xD615;&#xC131; kinase, Rhoa&#xC758; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xB3C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC800;&#xD574;&#xB85C; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. Lysophosphatidic &#xC0B0; &#xC131;, &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; RhoA, nonsecretory &#xC790;&#xADF9; &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC790;&#xADF9; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC751;&#xC6A9;&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; tomosyn&#xC5D0; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. PC-12 &#xC140;&#xC5D0; overexpressing tomosyn, lysophosphatidic &#xC0B0;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC790;&#xADF9; &#xAC10;&#xC18C; &#xAC16;&#xB294; &#xBD84; &#xC751;&#xB2F5;, &#xCF54;&#xC77C; &#xCF54;&#xC77C; &#xD615;&#xC131; &#xD0A4;&#xB85C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD0C8;&#xB77D; &#xD588;&#xB2E4; &#xD6A8;&#xACFC; &#xACB0;&#xACFC;. &#xB610;&#xD55C;,&#xC774; &#xD6A8;&#xACFC; tomosyn &#xBC0F; syntaxin 1A &#xC0AC;&#xC774; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC774; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; tomosyn syntaxin 1A &#xC0C1;&#xD638; &#xBCC0;&#xC870; &#xBD84; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xADDC;&#xCE59;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC774;&#xB2E4;.

Tomosyn syntaxin 1A &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC18C; &#xBD80; &#xC2E0; &#xD06C;&#xB86C; &#xCE5C;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;-&#xC911;&#xC7AC; &#xADDC;&#xC815;.

Tomosyn, soluble en un R-SNARE prote&#xED;na identificada como una pareja de uni&#xF3;n de la 1A Q-SNARE syntaxin, se cree que es fundamental para establecer el nivel de los complejos SNARE fusi&#xF3;n competentes para neurosecreci&#xF3;n. Hasta la fecha, no ha habido una evaluaci&#xF3;n directa de la din&#xE1;mica en la que transita a trav&#xE9;s de complejos tomosyn tomosyn-SNARE o de la medida en que tomosyn-SNARE complejos est&#xE1;n regulados por la demanda de secreci&#xF3;n. Aqu&#xED;, se emplearon m&#xE9;todos bioqu&#xED;micos y &#xF3;pticos para caracterizar las propiedades din&#xE1;micas de tomosyn-syntaxin complejos 1A en vivo c&#xE9;lulas cromafines adrenales. Se demuestra que los resultados de la estimulaci&#xF3;n secretagogo en la translocaci&#xF3;n r&#xE1;pida de tomosyn desde el citosol a las regiones la membrana plasm&#xE1;tica y que esta translocaci&#xF3;n se asocia con un aumento en la interacci&#xF3;n tomosyn-syntaxin 1A, incluyendo ciclos de aumento de tomosyn en tomosyn-SNARE complejos. La interacci&#xF3;n secretagogo inducido se redujo fuertemente por la inhibici&#xF3;n farmacol&#xF3;gica de la Rho-asociado espiral de la bobina quinasa de formaci&#xF3;n, un resultado consistente con los hallazgos que demuestran secretagogo inducida por la activaci&#xF3;n de RhoA. La estimulaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas cromafines con &#xE1;cido lisofosfat&#xED;dico, un est&#xED;mulo no secretor que activa fuertemente RhoA, dio lugar a efectos sobre tomosyn similar a la de aplicaci&#xF3;n de la secretagogo. En 12 de PC-c&#xE9;lulas que sobreexpresan tomosyn, la estimulaci&#xF3;n secretagogo en presencia de &#xE1;cido lisofosfat&#xED;dico result&#xF3; en la reducci&#xF3;n de las respuestas secretorias evocados, un efecto que se elimin&#xF3; la inhibici&#xF3;n de Rho asociada espiral de la bobina formando quinasa. Adem&#xE1;s, este efecto se requiere una interacci&#xF3;n entre tomosyn intacta y 1A syntaxin. Por lo tanto, la modulaci&#xF3;n de la interacci&#xF3;n tomosyn-syntaxin 1A en respuesta a la activaci&#xF3;n secretagogo es un mecanismo importante para permitir la regulaci&#xF3;n din&#xE1;mica de la respuesta secretora.

Mediada por el receptor del Reglamento de la Tomosyn-syntaxin 1A Interacciones de la especie bovina c&#xE9;lulas cromafines suprarrenales

&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x795E;&#x7ECF;&#x75C5;&#x53D8; (DN) &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x524A;&#x5F31; 1 &#x578B;&#x548C; 2 &#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x7684;&#x5E76;&#x53D1;&#x75C7;&#x3002;DN &#x7684;&#x556E;&#x9F7F;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x590D;&#x5236;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x60A3;&#x8005;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x75C5;&#x7406;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ED4;&#x7EC6;&#x7814;&#x7A76; DN &#x83CC;&#x7D20; (STZ)-&#x8BF1;&#x5BFC; [B6] &#x548C;&#x81EA;&#x53D1;&#x7684; 1 &#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5; [B6Ins2(Akita)] &#x548C; [B6-db/db&#x3001; BKS-db/db] &#x81EA;&#x53D1;&#x6027; 2 &#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6301;&#x7EED;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#xFF0C;&#x6CBB;&#x7597; STZ B6 &#x548C; B6Ins2(Akita) &#x5C0F;&#x9F20;&#x4EBA;&#x60F3;&#x53BB; DN &#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;DN &#x5236;&#x5B9A;&#x4E24;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B; 2 &#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x6A21;&#x578B;&#xFF1A; B6-db/db &#x548C; BKS-db/db &#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x6301;&#x7EED;&#x7684;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x548C; B6-db/db &#x5C0F;&#x9F20; DN &#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x9700;&#x8981;&#x589E;&#x52A0;&#x9AD8;&#x8102;&#x996E;&#x98DF;&#x867D;&#x7136; BKS-db/db &#x5C0F;&#x9F20;&#x53D1;&#x8FBE;&#x56FD;&#x5BB6;&#x4E25;&#x91CD; DN &#x548C;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x6807;&#x51C6;&#x9F20;&#x6807;&#x5468;&#x6881;&#x6DD1;&#x6021;&#x8BAE;&#x5458;&#x5BF9;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x80CC;&#x666F;&#x548C;&#x996E;&#x98DF;&#x5F71;&#x54CD; DN &#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x548C;&#x53D1;&#x5C55;&#x65B0;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684; DN &#x65F6;&#x5E94;&#x8003;&#x8651;&#x7684;&#x5047;&#x8BBE;&#x3002;

&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x795E;&#x7ECF;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

Diabetic neuropathy (DN) is a debilitating complication of type 1 and type 2 diabetes. Rodent models of DN do not fully replicate the pathology observed in human patients. We examined DN in streptozotocin (STZ)-induced [B6] and spontaneous type 1 diabetes [B6Ins2(Akita)] and spontaneous type 2 diabetes [B6-db/db, BKS-db/db]. Despite persistent hyperglycemia, the STZ-treated B6 and B6Ins2(Akita) mice were resistant to the development of DN. In contrast, DN developed in both type 2 diabetes models: the B6-db/db and BKS-db/db mice. The persistence of hyperglycemia and development of DN in the B6-db/db mice required an increased fat diet while the BKS-db/db mice developed severe DN and remained hyperglycemic on standard mouse chow. Our data support the hypothesis that genetic background and diet influence the development of DN and should be considered when developing new models of DN.

Mouse models of diabetic neuropathy.

La neuropathie diab&#xE9;tique (DN) est une complication invalidante de type 1 et diab&#xE8;te de type 2. Des mod&#xE8;les de rongeurs de DN ne sont pas pleinement reproduire la pathologie observ&#xE9;e chez des patients humains. Nous avons examin&#xE9; DN par streptozotocine (STZ) induite [B6] et spontan&#xE9;e diab&#xE8;te de type 1 [B6Ins2 (Akita)] et spontan&#xE9;e diab&#xE8;te de type 2 [B6-db/db, BKS-db/db]. Malgr&#xE9; une hyperglyc&#xE9;mie persistante, les STZ-trait&#xE9;s B6 et B6Ins2 (Akita) souris &#xE9;taient r&#xE9;sistantes &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;laboration de DN. En revanche, DN d&#xE9;velopp&#xE9;s dans les mod&#xE8;les de type 2: les deux diab&#xE8;te des souris B6-db/db et BKS-db/db. La persistance de l&#x26;#39;hyperglyc&#xE9;mie et le d&#xE9;veloppement de DN chez les souris B6-db/db n&#xE9;cessaire un r&#xE9;gime augmentation de la graisse tandis que les souris BKS-db/db d&#xE9;velopp&#xE9; DN graves et est rest&#xE9;e sur la norme de la souris hyperglyc&#xE9;miques chow. Nos donn&#xE9;es soutiennent l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que le patrimoine g&#xE9;n&#xE9;tique et l&#x26;#39;alimentation influencent le d&#xE9;veloppement de DN et doivent &#xEA;tre consid&#xE9;r&#xE9;s lors de l&#x26;#39;&#xE9;laboration de nouveaux mod&#xE8;les de DN.

Les mod&#xE8;les murins de neuropathie diab&#xE9;tique

Diabetische Neuropathie (DN) ist eine schw&auml;chende Komplikation von Typ 1 und Typ 2 Diabetes. Nagetier-Modelle von DN Replizieren nicht vollst&auml;ndig die Pathologie in menschlichen Patienten beobachtet. Wir untersuchten DN Streptozocin (STZ)-induzierte [B6] und spontaner Typ 1-Diabetes [B6Ins2(Akita)] und spontaner Typ 2 Diabetes [B6-Db/Db, BKS-Db/Db]. Die STZ-behandelten M&auml;usen B6 und B6Ins2(Akita) waren trotz persistenten Hyperglyk&auml;mie resistent gegen die Entwicklung von DN. Dagegen DN entwickelt in beiden Typ 2 Diabetes-Modelle: die B6-Db/Db und BKS-Db/Db-M&auml;use. Anhaltende Hyperglyk&auml;mie und Entwicklung der DN der B6-Db/Db-M&auml;usen ben&ouml;tigt eine erh&ouml;hte fettarme Ern&auml;hrung, w&auml;hrend die BKS-Db/Db-M&auml;use schwere DN entwickelt und blieb auf Standardmaus Chow hyperglyk&auml;mischen. Unsere Daten unterst&uuml;tzen die Hypothese, dass der genetische Hintergrund und Ern&auml;hrung die Entwicklung von DN beeinflussen und ber&uuml;cksichtigt werden, sollte bei der Entwicklung von neuer Models von DN.

Mausmodelle von Diabetische Neuropathie.

Neuropatia diabetica (DN) &egrave; una complicanza debilitante di tipo 1 e diabete di tipo 2. Modelli roditore di DN non completamente replicare la patologia osservata in pazienti umani. Abbiamo esaminato DN in streptozotocin (STZ)-indotta [B6] e diabete di tipo 1 spontaneo [B6Ins2(Akita)] e spontanea tipo 2 diabete [B6-db/db, BKS-db/db]. Nonostante la persistente iperglicemia, topi trattati STZ B6 e B6Ins2(Akita) erano resistenti allo sviluppo di DN. Al contrario, DN sviluppato sia in tipo 2 modelli di diabete: i topi B6-db/db e BKS-db/db. La persistenza di iperglicemia e lo sviluppo di DN in topi db/db B6 necessaria una dieta grassa aumentata mentre i topi BKS-db/db sviluppato gravi DN e rimasero iperglicemici su chow mouse standard. I nostri dati supportano l&#39;ipotesi che dieta e background genetico influenzano lo sviluppo di DN e dovrebbero essere considerati quando lo sviluppo di nuovi modelli di DN.

Modelli murini di neuropatia diabetica.

&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x6027;&#x795E;&#x7D4C;&#x969C;&#x5BB3;&#xFF08;DN&#xFF09;&#x306F;&#x3001;1&#x578B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;2&#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x306E;&#x8870;&#x5F31;&#x5408;&#x4F75;&#x75C7;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; DN&#x306E;&#x9F67;&#x6B6F;&#x985E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x3092;&#x8907;&#x88FD;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30D7;&#x30C8;&#x30BE;&#x30C8;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;STZ&#xFF09;&#x8A98;&#x767A;&#x306E;DN&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;[B6]&#x3068;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306A;1&#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;[B6Ins2&#xFF08;&#x79CB;&#x7530;&#x770C;&#xFF09;]&#x3068;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306A;2&#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;[B6-db/db&#x3001;BKS-db/db]&#x3002;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;STZ&#x51E6;&#x7406;B6&#x3068;B6Ins2&#xFF08;&#x79CB;&#x7530;&#x770C;&#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;DN&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x8010;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;2&#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;DN&#xFF1A;B6-db/db&#x3068;BKS-db/db&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3002; BKS-db/db&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x91CD;&#x5EA6;&#x306E;DN&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3001;&#x6A19;&#x6E96;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x990C;&#x306B;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x3068;B6-db/db&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;DN&#x306E;&#x767A;&#x5C55;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x6027;&#x306F;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x8102;&#x80AA;&#x98DF;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x80CC;&#x666F;&#x3084;&#x98DF;&#x4E8B;&#x306F;&#x3001;DN&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3068;DN&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x969B;&#x306B;&#x8003;&#x616E;&#x3059;&#x3079;&#x304D;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x652F;&#x6301;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x6027;&#x795E;&#x7D4C;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;

&#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBCD1; (DN) &#xD0C0;&#xC785; 1&#xACFC; &#xD0C0;&#xC785;-2 &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC1E0; &#xC57D; &#xD569;&#xBCD1;&#xC99D; &#xC774;&#xB2E4;. DN&#xC758; &#xC124;&#xCE58;&#xB958; &#xBAA8;&#xB378;&#xC740; &#xC778;&#xAC04; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xB294; &#xBCD1; &#xB9AC;&#xB97C; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; streptozotocin (STZ)&#xC5D0;&#xC11C; DN&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC;-&#xC720;&#xB3C4; [B6] &#xBC0F; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC778; &#xD0C0;&#xC785;-1 &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; [B6Ins2(Akita)] &#xBC0F; [b 6-db/db, BKS-db/db] &#xC790;&#xC5F0; &#xD0C0;&#xC785; 2 &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;. &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xACE0; &#xD608;&#xB2F9;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; STZ &#xCDE8;&#xAE09; &#xD558;&#xB294; b 6&#xC640; B6Ins2(Akita) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; DN&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB458; &#xB2E4; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; DN &#xC785;&#xB825; 2 &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xBAA8;&#xB378;: b 6-db/db &#xBC0F; BKS-db/db &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;. &#xD608;&#xB2F9;&#xC758; &#xC9C0; &#xC18D;&#xC131; &#xBC0F; B6-db/db &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; DN&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; BKS-db/db &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC2EC;&#xD55C; DN &#xAC1C;&#xBC1C; hyperglycemic &#xD45C;&#xC900; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC6B0;&#xC5D0; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC99D;&#xAC00; &#xC9C0;&#xBC29; &#xB2E4;&#xC774;&#xC5B4;&#xD2B8;&#xAC00; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xAC00;&#xC124; &#xC720;&#xC804; &#xBC30;&#xACBD;&#xACFC; &#xB2E4;&#xC774;&#xC5B4;&#xD2B8; DN&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xBC0F; DN&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xACE0;&#xB824; &#xB418;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBCD1;&#xC758; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La neuropat&#xED;a diab&#xE9;tica (ND) es una complicaci&#xF3;n debilitante de la diabetes tipo 1 y tipo 2. Modelos de roedores de DN no replicar totalmente la patolog&#xED;a observada en pacientes humanos. Hemos examinado DN en estreptozotocina (STZ) inducida [B6] y espont&#xE1;nea la diabetes tipo 1 [B6Ins2 (Akita)] y el tipo 2 diabetes espont&#xE1;nea [B6-db/db, BKS-db/db]. A pesar de la hiperglucemia persistente, los tratados con STZ B6 y B6Ins2 (Akita) los ratones eran resistentes al desarrollo de la DN. Por el contrario, DN desarrolladas en los dos modelos de diabetes tipo 2: los ratones B6-db/db y BKS-db/db. La persistencia de la hiperglucemia y el desarrollo de DN en los ratones B6-db/db requiere una dieta rica en grasas aumento mientras que los ratones desarrollaron BKS-db/db DN graves y se mantuvo hipergluc&#xE9;mico en el est&#xE1;ndar de rat&#xF3;n chow. Nuestros datos apoyan la hip&#xF3;tesis de que los antecedentes gen&#xE9;ticos y la dieta influyen en el desarrollo de DN y se debe considerar en el desarrollo de nuevos modelos de DN.

Modelos de rat&#xF3;n de la neuropat&#xED;a diab&#xE9;tica

&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x795E;&#x7ECF;&#x75C5;&#x53D8; (DN) &#x662F;&#x4E25;&#x91CD;&#x548C;&#x4F7F;&#x4EBA;&#x865A;&#x5F31;&#x7684;&#x5E76;&#x53D1;&#x75C7;&#xFF0C;&#x4E24;&#x8005;&#x7684; 1 &#x578B;&#x548C; 2 &#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x7D27;&#x5BC6;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x52AA;&#x529B;&#x5230;&#x591A;&#x4E2A;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5E76;&#x53D1;&#x75C7;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8840;&#x7BA1;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7D0A;&#x4E71;&#xFF0C;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F; euglycemia &#x7684;&#x7EF4;&#x4FEE;&#x3002;&#x8D1F;&#x8D23; DN &#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x4F7F;&#x7528;&#x6700;&#x5408;&#x9002;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x64CD;&#x7EB5;&#x7684;&#x5230;&#x6765;&#x5DF2;&#x79FB;&#x52A8;&#x5230;&#x6700;&#x524D;&#x6CBF;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75BE;&#x75C5;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x63D2;&#x5165;&#x6216;&#x5220;&#x9664;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x60A3;&#x8005;&#x4E2D;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x72EC;&#x5230;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#xFF0C;&#x7EB3;&#x5165;&#x75BE;&#x75C5;&#x8FDB;&#x7A0B; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4ECD;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5728;&#x89E3;&#x91CA;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x52A8;&#x7269;&#x4ECE;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x4ECD;&#x6709;&#x56F0;&#x96BE;&#x3002;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x800C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6240;&#x8FF0; DN &#x4F46;&#x5F88;&#x96BE;&#x6765;&#x6BD4;&#x8F83;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x4E0E;&#x5BF9;&#x65B9;&#x6216;&#x4EBA;&#x7C7B; DN &#x7531;&#x4E8E;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5305;&#x62EC;&#x80CC;&#x666F;&#x5E94;&#x53D8;&#x3001; &#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x7684;&#x7C7B;&#x578B;&#x3001; &#x611F;&#x5E94;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x6301;&#x7EED;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x3001; &#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x5E74;&#x9F84;&#x548C;&#x6027;&#x522B;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x68C0;&#x8BA8;&#x63CF;&#x8FF0;&#x5F53;&#x524D;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684; DN &#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9075;&#x5FAA;&#x6807;&#x51C6;&#x5316;&#x7684;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x611F;&#x5E94;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x548C;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x6267;&#x884C;&#x4E00;&#x5957;&#x9707;&#x64BC;&#x53C2;&#x6570;&#x8FDB;&#x884C;&#x5206;&#x7C7B;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x4E25;&#x91CD;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684; DN&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5E94;&#x7528;&#x6807;&#x51C6;&#x7684;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5E0C;&#x671B;&#x4EE5;&#x65B9;&#x4FBF;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x548C; DN &#x8DE8;&#x4E0D;&#x540C;&#x80CC;&#x666F;&#x83CC;&#x682A;&#xFF0C;&#x5E0C;&#x671B;&#x53D1;&#x73B0;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x50CF;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x7528;&#x6765;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x6F5C;&#x5728;&#x7597;&#x6CD5;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

&#x7528;&#x4E8E;&#x521B;&#x5EFA;&#x548C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x795E;&#x7ECF;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684;&#x6807;&#x51C6;&#x3002;

Diabetic neuropathy (DN) is a serious and debilitating complication of both type 1 and type 2 diabetes. Despite intense research efforts into multiple aspects of this complication, including both vascular and neuronal metabolic derangements, the only treatment remains maintenance of euglycemia. Basic research into the mechanisms responsible for DN relies on using the most appropriate animal model. The advent of genetic manipulation has moved mouse models of human disease to the forefront. The ability to insert or delete genes affected in human patients offers unique insight into disease processes; however, mice are still not humans and difficulties remain in interpreting data derived from these animals. A number of studies have investigated and described DN in mice but it is difficult to compare these studies with each other or with human DN due to experimental differences including background strain, type of diabetes, method of induction and duration of diabetes, animal age and gender. This review describes currently used DN animal models. We followed a standardized diabetes induction protocol and designed and implemented a set of phenotyping parameters to classify the development and severity of DN. By applying standard protocols, we hope to facilitate the comparison and characterization of DN across different background strains in the hope of discovering the most human like model in which to test potential therapies.

Criteria for creating and assessing mouse models of diabetic neuropathy.

La neuropathie diab&#xE9;tique (DN) est une complication grave et d&#xE9;bilitante &#xE0; la fois de type 1 et diab&#xE8;te de type 2. Malgr&#xE9; les efforts de recherche intenses dans de multiples aspects de cette complication, y compris &#xE0; la fois vasculaires et neuronales troubles m&#xE9;taboliques, le seul traitement reste l&#x26;#39;entretien des euglyc&#xE9;mie. La recherche fondamentale sur les m&#xE9;canismes responsables de la DN repose sur l&#x26;#39;utilisation du mod&#xE8;le animal le plus appropri&#xE9;. L&#x26;#39;av&#xE8;nement de la manipulation g&#xE9;n&#xE9;tique a d&#xE9;plac&#xE9; des mod&#xE8;les murins de maladies humaines &#xE0; l&#x26;#39;avant-garde. La possibilit&#xE9; d&#x26;#39;ins&#xE9;rer ou de supprimer des g&#xE8;nes affect&#xE9;s chez les patients humains offre une perspective unique sur les processus pathologiques, mais les souris ne sont pas encore les humains et les difficult&#xE9;s demeurent dans l&#x26;#39;interpr&#xE9;tation de donn&#xE9;es issues de ces animaux. Un certain nombre d&#x26;#39;&#xE9;tudes ont &#xE9;tudi&#xE9; et d&#xE9;crit DN chez les souris, mais il est difficile de comparer ces &#xE9;tudes avec l&#x26;#39;autre ou avec DN de l&#x26;#39;homme en raison de diff&#xE9;rences exp&#xE9;rimentales, y compris la souche de fond, le type de diab&#xE8;te, de la m&#xE9;thode de l&#x26;#39;induction et la dur&#xE9;e du diab&#xE8;te, l&#x26;#39;&#xE2;ge et le sexe des animaux . Cette revue d&#xE9;crit actuellement utilis&#xE9; des mod&#xE8;les animaux DN. Nous avons suivi un protocole normalis&#xE9; d&#x26;#39;induction et le diab&#xE8;te con&#xE7;u et mis en &#x153;uvre un ensemble de param&#xE8;tres pour classer ph&#xE9;notypage le d&#xE9;veloppement et la gravit&#xE9; des DN. En appliquant des protocoles standard, nous esp&#xE9;rons faciliter la comparaison et la caract&#xE9;risation des souches de fond DN travers diff&#xE9;rents dans l&#x26;#39;espoir de d&#xE9;couvrir le mod&#xE8;le le plus humain comme permettant de tester des th&#xE9;rapies potentielles.

Crit&#xE8;res pour &#xE9;tablir et &#xE9;valuer les mod&#xE8;les murins de neuropathie diab&#xE9;tique

Diabetische Neuropathie (DN) ist eine schwerwiegende und schw&auml;chende Komplikation sowohl Typ 1 und Typ 2 Diabetes. Trotz intensiver Forschungsbem&uuml;hungen in mehrere Aspekte dieser Komplikation, darunter sowohl Gef&auml;&szlig;- und neuronale metabolischen Derangements bleibt die einzige Behandlung Wartung von Euglycemia. Grundlagenforschung in die Mechanismen verantwortlich f&uuml;r DN beruht auf verwenden am besten geeigneten Tiermodell. Das Aufkommen der Genmanipulation hat Mausmodelle menschlicher Erkrankungen in den Vordergrund verschoben. Die F&auml;higkeit, einf&uuml;gen oder L&ouml;schen von Genen, die in menschlichen Patienten betroffen bietet einzigartige Einblicke in die Krankheitsprozesse; Allerdings M&auml;use sind noch nicht Menschen und Schwierigkeiten bei der Interpretation von Daten, die von diesen Tieren bleiben. Eine Reihe von Studien untersucht und beschrieben von DN bei M&auml;usen haben, aber es ist schwierig, diese Studien miteinander oder mit menschlichen DN aufgrund von experimentellen unterschieden einschlie&szlig;lich Hintergrund Sorte, Art von Diabetes, die Methode der Induktion und Dauer des Diabetes, tierischen Alter und Geschlecht zu vergleichen. Diesen Bericht beschreibt aktuell verwendeten DN Tiermodelle. Wir folgten eine standardisierte Diabetes-Induktion-Protokoll und konzipiert und implementiert eine Reihe von pathologies Parametern, die Entwicklung zu klassifizieren und Schwere der DN. Wir hoffen durch die Anwendung von Standardprotokollen, zur Erleichterung der Vergleich und die Charakterisierung von DN &uuml;ber verschiedene Hintergrund-St&auml;mme in der Hoffnung, entdecken die meisten menschlichen wie Modell, in dem m&ouml;gliche Therapien zu testen.

Kriterien zur Erstellung und Bewertung Mausmodelle von Diabetische Neuropathie.

Neuropatia diabetica (DN) &egrave; una complicanza grave e debilitante di sia di tipo 1 e diabete di tipo 2. Nonostante gli sforzi di ricerca intensa in molteplici aspetti di questa complicazione, tra cui disordini metabolici vascolari e neuronali, l&#39;unico trattamento rimane manutenzione di euglycemia. Ricerca di base sui meccanismi responsabili di DN si basa sull&#39;utilizzo del modello animale pi&ugrave; appropriato. L&#39;avvento della manipolazione genetica ha spostato i modelli del mouse della malattia umana alla ribalta. La possibilit&agrave; di inserire o eliminare i geni colpiti in pazienti umani offre comprensione unica nei processi di malattia; Tuttavia, topi non sono ancora gli esseri umani e Difficolt&agrave; rimangono nell&#39;interpretazione dei dati ottenuti da questi animali. Numerosi studi hanno indagato e descritto DN nei topi, ma &egrave; difficile da confrontare questi studi con l&#39;altro o con DN umana a causa delle differenze sperimentali tra cui ceppo di sfondo, tipo di diabete, metodo di induzione e durata del diabete, et&agrave; degli animali e il sesso. Questa recensione descrive attualmente usati modelli animali DN. Abbiamo seguito un protocollo di induzione diabete standardizzato e progettato e implementato una serie di fenotipi parametri per classificare lo sviluppo e la gravit&agrave; di DN. Mediante l&#39;applicazione di protocolli standard, ci auguriamo di facilitare il confronto e la caratterizzazione di DN tra ceppi diversi background nella speranza di scoprire il pi&ugrave; umano come modello in cui testare possibili terapie.

Criteri per la creazione e valutazione di modelli murini di neuropatia diabetica.

&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x6027;&#x795E;&#x7D4C;&#x969C;&#x5BB3;&#xFF08;DN&#xFF09;&#x306F;&#x3001;1&#x578B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;2&#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x8870;&#x5F31;&#x5408;&#x4F75;&#x75C7;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x8840;&#x7BA1;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7570;&#x5E38;&#x3092;&#x542B;&#x3081;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5408;&#x4F75;&#x75C7;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x306B;&#x96C6;&#x4E2D;&#x7684;&#x306A;&#x7814;&#x7A76;&#x52AA;&#x529B;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x7CD6;&#x5024;&#x306E;&#x7DAD;&#x6301;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3059;&#x3002; DN&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306E;&#x51FA;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x524D;&#x7DDA;&#x306B;&#x30D2;&#x30C8;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x79FB;&#x52D5;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x633F;&#x5165;&#x3057;&#x305F;&#x308A;&#x524A;&#x9664;&#x3057;&#x305F;&#x308A;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x75BE;&#x60A3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x4EBA;&#x9593;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x56F0;&#x96E3;&#x304C;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x89E3;&#x91C8;&#x306B;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x304C;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x3001;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;DN&#x3092;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x4E92;&#x3044;&#x306B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x682A;&#x3001;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3001;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3084;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;DN&#x3001;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x5E74;&#x9F62;&#x3084;&#x6027;&#x5225;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306F;&#x73FE;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;DN&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6A19;&#x6E96;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x5F93;&#x3044;&#x3001;DN&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x91CD;&#x75C7;&#x5EA6;&#x3092;&#x5206;&#x985E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x3001;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3092;&#x671F;&#x5F85;&#x3057;&#x3066;&#x5225;&#x306E;&#x80CC;&#x666F;&#x7CFB;&#x7D71;&#x5168;&#x4F53;&#x3067;DN&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3068;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9858;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x6027;&#x795E;&#x7D4C;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x6E96;

&#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBCD1; (DN)&#xC740; &#xBAA8;&#xB450; &#xC2EC;&#xAC01; &#xD558; &#xACE0; &#xC1E0; &#xC57D; &#xD569;&#xBCD1;&#xC99D; 1&#xC744; &#xC785;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xD0C0;&#xC785; 2 &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;. &#xD608;&#xAD00; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xB300;&#xC0AC; &#xD63C;&#xB780; &#xB4F1;&#xC774; &#xD569;&#xBCD1;&#xC99D;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0; &#xAC15;&#xB82C;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB178;&#xB825;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xCE58;&#xB8CC; euglycemia&#xC758; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. DN&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791;&#xC758; &#xCD9C;&#xD604; &#xCD5C;&#xC804;&#xC120;&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC774;&#xB3D9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C8;&#xBCD1; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC0BD;&#xC785; &#xB610;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC778;&#xAC04; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC0AD;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xB294; &#xC544;&#xC9C1;&#xB3C4; &#xC778;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0;&#xC774;&#xC774; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD574;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB0A8;&#xC544;. &#xB9CE;&#xC740; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; DN&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC30;&#xACBD; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778;, &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC885;&#xB958;, &#xC720;&#xB3C4;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95; &#xBC0F; &#xAE30;&#xAC04; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;, &#xB3D9;&#xBB3C; &#xB098;&#xC774; &#xBC0F; &#xC131;&#xBCC4; &#xB4F1;&#xC758; &#xCC28;&#xC774;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; DN &#xB610;&#xB294; &#xC11C;&#xB85C;&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC5B4;&#xB835;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC80;&#xD1A0; &#xD604;&#xC7AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB41C; DN &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC124;&#xBA85;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC900;&#xD654; &#xB41C; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xC720;&#xB3C4; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xC124;&#xACC4; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xD604; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBD84;&#xB958; &#xD615;&#xC9C8; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; &#xC9D1;&#xD569; &#xBC0F; DN&#xC758; &#xC2EC;&#xAC01;&#xB3C4;. &#xD45C;&#xC900; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBE44;&#xAD50; &#xBC0F; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB378; &#xCC98;&#xB7FC; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC778;&#xAC04;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC758; &#xD76C;&#xB9DD;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC30;&#xACBD; &#xBCC0;&#xC885;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; DN&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xACA0;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9CC;&#xB4E4;&#xACE0; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBCD1;&#xC758; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xAE30;&#xC900;.

La neuropat&#xED;a diab&#xE9;tica (ND) es una complicaci&#xF3;n grave y debilitante tanto de tipo 1 y diabetes tipo 2. A pesar de intensos esfuerzos de investigaci&#xF3;n en m&#xFA;ltiples aspectos de esta complicaci&#xF3;n, como trastornos metab&#xF3;licos, tanto vasculares y neuronales, el &#xFA;nico tratamiento que sigue siendo el mantenimiento de euglucemia. La investigaci&#xF3;n b&#xE1;sica sobre los mecanismos responsables de la DN se basa en utilizar el modelo animal m&#xE1;s adecuado. El advenimiento de la manipulaci&#xF3;n gen&#xE9;tica se ha movido modelos de rat&#xF3;n de la enfermedad humana a la vanguardia. La capacidad de insertar o eliminar genes afectados en pacientes humanos ofrece una visi&#xF3;n &#xFA;nica de los procesos de enfermedad, sin embargo, los ratones no son seres humanos y todav&#xED;a sigue habiendo dificultades en la interpretaci&#xF3;n de los datos derivados de estos animales. Un n&#xFA;mero de estudios han investigado y descrito DN en ratones, pero es dif&#xED;cil comparar estos estudios con otros o con DN humanos debido a las diferencias experimentales, incluyendo la cepa de fondo, tipo de diabetes, el m&#xE9;todo de inducci&#xF3;n y duraci&#xF3;n de la diabetes, edad del animal y de g&#xE9;nero . Esta revisi&#xF3;n describe que actualmente se utilizan modelos animales DN. Se sigui&#xF3; un protocolo estandarizado y la inducci&#xF3;n de la diabetes dise&#xF1;ado e implementado un conjunto de par&#xE1;metros fenot&#xED;picos para clasificar el desarrollo y la severidad de la DN. Mediante la aplicaci&#xF3;n de protocolos est&#xE1;ndar, se espera facilitar la comparaci&#xF3;n y la caracterizaci&#xF3;n de DN en todas las cepas de fondo diferentes, con la esperanza de descubrir el modelo como el m&#xE1;s humano en el que poner a prueba terapias potenciales.

Criterios para la creaci&#xF3;n y evaluaci&#xF3;n de modelos de rat&#xF3;n de la neuropat&#xED;a diab&#xE9;tica

&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x7269;&#x79CD;&#x5982;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x6C22; (H(2)O(2)) &#x53C2;&#x4E0E;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547D;&#x8FD0;&#x7684;&#x79EF;&#x6781;&#x548C;&#x6D88;&#x6781;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;H(2)O(2)&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4FE1;&#x4F7F;&#xFF0C;&#x5C06;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187;-3 &#x6FC0;&#x9176; (&#x808C;&#x9187;&#xFF09; &#x548C;&#x5176;&#x4E0B;&#x6E38;&#x7684;&#x76EE;&#x6807; Akt&#xFF0C;&#x5E76;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x6D3B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x4E86;&#x89E3;&#x8FD9;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#x901A;&#x8FC7;&#x54EA;&#x4E9B;&#x808C;&#x9187;/Akt &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4FC3;&#x8FDB; SH SY5Y &#x795E;&#x7ECF;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x808C;&#x9187;/Akt &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4FC3;&#x51CB;&#x4EA1; Bcl-2 &#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458; Bax &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x6D3B;&#x3002;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x9762;&#x524D; H(2)O(2) &#x7531;&#x4E8E; LY294002&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x808C;&#x9187;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x800C;&#x53D7;&#x963B;&#x3002;LY294002 &#x963B;&#x6B62; Bax &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C; Bax &#x6613;&#x4F4D;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c &#x91CA;&#x653E;&#x3001; &#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x6D3B;&#x5316;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x673A;&#x5236;&#x7531;&#x54EA;&#x4E9B; H (2) O (2)-&#x808C;&#x9187;/Akt &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x5F71;&#x54CD; Bax &#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x4FEE;&#x9970;&#x548C;&#x53EF;&#x706D;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;

&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x6C22;&#x8BF1;&#x5BFC; Akt &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x8C03;&#x8282; Bax &#x6D3B;&#x5316;&#x3002;

Reactive oxygen species such as hydrogen peroxide (H(2)O(2)) are involved in many cellular processes that positively and negatively regulate cell fate. H(2)O(2), acting as an intracellular messenger, activates phosphatidylinositol-3 kinase (PI3K) and its downstream target Akt, and promotes cell survival. The aim of the current study was to understand the mechanism by which PI3K/Akt signaling promotes survival in SH-SY5Y neuroblastoma cells. We demonstrate that PI3K/Akt mediates phosphorylation of the pro-apoptotic Bcl-2 family member Bax. This phosphorylation suppresses apoptosis and promotes cell survival. Increased survival in the presence of H(2)O(2) was blocked by LY294002, an inhibitor of PI3K activation. LY294002 prevented Bax phosphorylation and resulted in Bax translocation to the mitochondria, cytochrome c release, caspase-3 activation, and cell death. Collectively, these findings reveal a mechanism by which H(2)O(2)-induced activation of PI3K/Akt influences post-translational modification of Bax and inactivates a key component of the cell death machinery.

Hydrogen peroxide-induced Akt phosphorylation regulates Bax activation.

Esp&#xE8;ces r&#xE9;actives de l&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne tels que le peroxyde d&#x26;#39;hydrog&#xE8;ne (H (2) O (2)) sont impliqu&#xE9;s dans de nombreux processus cellulaires qui positivement et n&#xE9;gativement r&#xE9;guler le destin des cellules. H (2) O (2), agissant comme un messager intracellulaire, active la phosphatidylinositol-3 kinase (PI3K) et sa cible en aval d&#x26;#39;Akt, et favorise la survie cellulaire. Le but de cette &#xE9;tude &#xE9;tait de comprendre le m&#xE9;canisme par lequel PI3K/Akt signalisation favorise la survie de cellules de neuroblastome SH-SY5Y. Nous d&#xE9;montrons que la phosphorylation PI3K/Akt m&#xE9;diateur de la pro-apoptotique Bcl-2 membre de la famille Bax. Cette phosphorylation supprime l&#x26;#39;apoptose et favorise la survie cellulaire. Augmentation de la survie en pr&#xE9;sence de H (2) O (2) a &#xE9;t&#xE9; bloqu&#xE9;e par le LY294002, un inhibiteur de l&#x26;#39;activation de PI3K. LY294002 emp&#xEA;ch&#xE9; la phosphorylation Bax et a abouti &#xE0; la translocation de Bax &#xE0; la mitochondrie, la lib&#xE9;ration du cytochrome c, l&#x26;#39;activation de caspase-3, et la mort cellulaire. Collectivement, ces r&#xE9;sultats r&#xE9;v&#xE8;lent un m&#xE9;canisme par lequel H (2) O (2) induite par l&#x26;#39;activation de PI3K/Akt influence modification post-traductionnelle de Bax et inactive une composante cl&#xE9; de la machinerie de mort cellulaire.

Peroxyde d&#x26;#39;hydrog&#xE8;ne induite par phosphorylation de l&#x26;#39;Akt r&#xE9;gule l&#x26;#39;activation de Bax

Reaktive Sauerstoffspezies wie Wasserstoffperoxid (H(2)O(2)) engagieren sich viele zellul&auml;re Prozesse, die positiv und negativ regulieren Zelle Schicksal. H(2)O(2), als ein intrazellul&auml;rer Messenger Phosphatidylinositol-3-Kinase (PI3K) und das nachgeschaltete Ziel Akt aktiviert und f&ouml;rdert Zelle &uuml;berleben. Ziel der aktuellen Studie war es, den Mechanismus zu verstehen, durch welche PI3K/Akt signaling &Uuml;berleben in SH-SY5Y Neuroblastoma Zellen f&ouml;rdert. Wir zeigen, dass PI3K/Akt Phosphorylierung des Pro-apoptotischen Bcl-2 Familienmitglieds Bax vermittelt. Diese Phosphorylierung unterdr&uuml;ckt Apoptosis und Zelle &uuml;berleben f&ouml;rdert. Erh&ouml;hte &Uuml;berleben in Anwesenheit von H(2)O(2) wurde durch LY294002, ein Inhibitor der PI3K Aktivierung blockiert. LY294002 verhindert Bax Phosphorylierung und Bax Translokation und der Mitochondrien, Cytochrom-C-Freisetzung, Aktivierung der Caspase-3 und Zelltod f&uuml;hrte. Diese Ergebnisse zeigen gemeinsam einen Mechanismus, durch welchen H (2) O (2)-induzierte Aktivierung des PI3K/Akt beeinflusst post-translationale Modifikation von Bax und inaktiviert eine Schl&uuml;sselkomponente der Zelle Tod Maschine.

Wasserstoffperoxid-induzierte Akt Phosphorylierung reguliert Bax-Aktivierung.

Specie reattive dell&#39;ossigeno come il perossido di idrogeno (H(2)O(2)) sono coinvolti in molti processi cellulari che regolano positivamente e negativamente il destino delle cellule. H(2)O(2), che agisce come un messaggero intracellulare, attiva fosfatidilinositolo 3 chinasi (PI3K) e il suo bersaglio a valle Akt e promuove la sopravvivenza delle cellule. Lo scopo di questo studio era di capire il meccanismo da cui PI3K/Akt signaling promuove la sopravvivenza nelle cellule di neuroblastoma SH-SY5Y. Dimostriamo che PI3K/Akt da intermediario fosforilazione del pro-apoptotic Bcl-2 membro della famiglia Bax. Questa fosforilazione sopprime l&#39;apoptosi e promuove la sopravvivenza delle cellule. Aumentata sopravvivenza in presenza di H(2)O(2) &egrave; stato bloccato da LY294002, un inibitore dell&#39;attivazione di PI3K. LY294002 ha impedito la fosforilazione Bax e portato di Bax per i mitocondri, versione del citocromo c, attivazione di caspase-3 e morte cellulare. Collettivamente, questi risultati rivelano un meccanismo da cui H (2) O (2)-attivazione indotta di PI3K/Akt influenze modifica alberino-di traduzione di Bax e inattiva una componente chiave della macchina di morte delle cellule.

Perossido di idrogeno-indotta della fosforilazione di Akt regola la attivazione di Bax.

&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x904E;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20;&#xFF08;H&#xFF08;2&#xFF09;O&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E;&#x306F;&#x3001;&#x6B63;&#x3068;&#x8CA0;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; H&#xFF08;2&#xFF09;O&#xFF08;2&#xFF09;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;3&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;PI3K&#xFF09;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;Akt&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;PI3K/AKT&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;SH-SY5Y&#x795E;&#x7D4C;&#x82BD;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;Bcl-2&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;Bax&#x306E;&#x305D;&#x306E;PI3K/AKT&#x4EF2;&#x4ECB;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3002; H&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306F;&#xFF08;2&#xFF09;O&#xFF08;2&#xFF09;&#x306F;&#x3001;LY294002&#x3001;PI3K&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; LY294002&#x306F;&#x3001;Bax&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3057;&#x3001;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x3001;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;c&#x653E;&#x51FA;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;-3&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x306B;Bax&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;PI3K/AKT&#x306E;H&#xFF08;2&#xFF09;O&#xFF08;2&#xFF09;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;Bax&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x904E;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x306E;Akt&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;Bax&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;

&#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xC218;&#xC18C; (H(2)O(2)) &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC; &#xC6B4;&#xBA85; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C;&#xB2E4;. H(2)O(2), &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800; &#xC5ED;&#xD560; phosphatidylinositol 3 &#xD0A4; (PI3K) &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xB300;&#xC0C1; Akt, &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xC5B4;&#xB5A4; PI3K/Akt&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; SH SY5Y &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC874; &#xCD09;&#xC9C4; &#xC2E0;&#xD638; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD588;&#xB2E4;. PI3K/Akt &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xD504;&#xB85C; apoptotic bcl-2 &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; Bax&#xC758; &#xC911;&#xC7AC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; apoptosis&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4;. H(2)O(2)&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC99D;&#xAC00; &#xC0DD;&#xC874; LY294002, PI3K &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. LY294002 Bax &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xBC29;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;, &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c &#xCD9C;&#xC2DC;, caspase 3 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC5D0; Bax &#xC804; &#xC88C; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC0E8; &#xB2E4;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; h (2) O (2) &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xACF5;&#xAC1C;-PI3K/Akt&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Bax&#xC758; &#xD3EC;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC0C1; &#xC218;&#xC815;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE69;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C; &#xAE30;&#xACC4;&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC0DD;&#xAE34;&#xB2E4;.

Akt &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC218;&#xC18C; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xC720;&#xBC1C; Bax &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC870;&#xC808;.

Las especies reactivas del ox&#xED;geno como el per&#xF3;xido de hidr&#xF3;geno (H (2) O (2)) est&#xE1;n involucrados en muchos procesos celulares que regulan positiva y negativamente el destino celular. H (2) O (2), que act&#xFA;a como mensajero intracelular, activa la fosfatidilinositol-3 quinasa (PI3K) y su posterior destino de Akt, y promueve la supervivencia celular. El objetivo del estudio fue comprender el mecanismo por el cual promueve la supervivencia PI3K/Akt se&#xF1;alizaci&#xF3;n en c&#xE9;lulas de neuroblastoma SH-SY5Y. Nosotros demostramos que la fosforilaci&#xF3;n de la media PI3K/Akt pro-apopt&#xF3;tica Bcl-2 miembro de la familia Bax. Esta fosforilaci&#xF3;n suprime la apoptosis y promueve la supervivencia celular. El aumento de la supervivencia en la presencia de H (2) O (2) fue bloqueado por LY294002, un inhibidor de la activaci&#xF3;n de PI3K. LY294002 prevenir la fosforilaci&#xF3;n de Bax y dio lugar a la translocaci&#xF3;n de Bax a la mitocondria de la liberaci&#xF3;n, el citocromo c, activaci&#xF3;n de la caspasa-3, y la muerte celular. En conjunto, estos resultados revelan un mecanismo por el cual H (2) O (2)-inducida por la activaci&#xF3;n de PI3K/Akt influye modificaci&#xF3;n post-traduccional de Bax y la inactiva un componente clave de la maquinaria de la muerte celular.

Per&#xF3;xido de hidr&#xF3;geno inducida por la fosforilaci&#xF3;n de Akt regula la activaci&#xF3;n de Bax

&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80FD;&#x91CF;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#xFF0C;&#x4E00;&#x5927;&#x6279;&#x5BA1;&#x67E5;&#x8C03;&#x8282;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x5065;&#x5EB7;&#x548C;&#x60A3;&#x75C5;&#x60C5;&#x51B5;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x91CD;&#x70B9;&#x3002;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x5B66;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; DNA (mtDNA) &#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x8FDB;&#x884C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x654F;&#x611F;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F66;&#x53A2;&#x5185;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x65B0;&#x5408;&#x6210;&#x7684; mtDNA &#x4E2D;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6280;&#x672F;&#x7ED3;&#x5408; BrdU &#x548C;/&#x6216;&#x6559;&#x80B2;&#x5C06;&#x7EB3;&#x5165; mtDNA tyramide &#x4FE1;&#x53F7;&#x653E;&#x5927;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66; &#x300B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x548C;&#x6D4B;&#x91CF; mtDNA &#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;EdU &#x7684;&#x8D34;&#x6807;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x5141;&#x8BB8;&#x901A;&#x8FC7;&#x5141;&#x8BB8;&#x6210;&#x7ACB;&#x4E3A;&#x6CD5;&#x56E2;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x6807;&#x8BB0;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x82DB;&#x523B;&#x9178;&#x6216;&#x9176;&#x6D88;&#x5316;&#x6062;&#x590D; BrdU &#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x9700;&#x66F4;&#x5168;&#x9762;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528; BrdU &#x548C; EdU &#x5141;&#x8BB8;&#x8FDE;&#x7EED;&#x8109;&#x51B2;&#x5927;&#x901A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8981;&#x9075;&#x5FAA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x590D;&#x5236;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;&#x91CF;&#x5316;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x5B66;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x5305;&#x62EC;&#x795E;&#x7ECF;&#x708E;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x4E2D;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x4E2D;&#x8C03;&#x67E5;&#x6539;&#x5EFA;&#x4E3A;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; DNA (mtDNA) &#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#xFF1A; &#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x548C; BrdU &#x51B3;&#x6597;&#x7EB3;&#x5165;&#x548C; EdU &#x5230;&#x65B0;&#x5408;&#x6210;&#x7684; mtDNA &#x4F53;&#x5916;&#x3002;

Mitochondria are key regulators of cellular energy and are the focus of a large number of studies examining the regulation of mitochondrial dynamics and biogenesis in healthy and diseased conditions. One approach for monitoring mitochondrial biogenesis is to measure the rate of mitochondrial DNA (mtDNA) replication. We developed a sensitive technique to visualize newly synthesized mtDNA in individual cells in order to study mtDNA replication within subcellular compartments of neurons. The technique combines the incorporation of BrdU and/or EdU into mtDNA together with a tyramide signal amplification protocol. Employing this technique, we visualized and measured mtDNA biogenesis in individual cells. The labeling procedure for EdU allows for more comprehensive results by allowing the comparison of its incorporation with other intracellular markers because it does not require harsh acid or enzyme digests necessary to recover the BrdU epitope. In addition, the utilization of both BrdU and EdU permits sequential pulse-chase experiments to follow the intracellular localization of mtDNA replication. The ability to quantify mitochondrial biogenesis provides an essential tool for investigating alterations in mitochondrial dynamics involved in the pathogenesis of multiple cellular disorders including neuropathies and neurodegenerative diseases.

Mitochondrial DNA (mtDNA) Biogenesis: Visualization and Duel Incorporation of BrdU and EdU Into Newly Synthesized mtDNA In Vitro.

Les mitochondries sont des r&#xE9;gulateurs cl&#xE9;s de l&#x26;#39;&#xE9;nergie cellulaire et font l&#x26;#39;objet d&#x26;#39;un grand nombre d&#x26;#39;&#xE9;tudes portant sur la r&#xE9;gulation de la dynamique mitochondriale et la biogen&#xE8;se dans des conditions saines et malades. Une approche pour la surveillance biogen&#xE8;se mitochondriale est de mesurer le taux de l&#x26;#39;ADN mitochondrial (ADNmt) de r&#xE9;plication. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une technique sensible pour visualiser l&#x26;#39;ADN mitochondrial nouvellement synth&#xE9;tis&#xE9; dans des cellules individuelles dans le but d&#x26;#39;&#xE9;tudier la r&#xE9;plication au sein de l&#x26;#39;ADNmt compartiments subcellulaires de neurones. La technique combine l&#x26;#39;incorporation de BrdU et / ou EdU en ADNmt avec un protocole d&#x26;#39;amplification de signal tyramide. En employant cette technique, nous avons visualis&#xE9; et mesur&#xE9; la biogen&#xE8;se ADNmt dans des cellules individuelles. La proc&#xE9;dure d&#x26;#39;&#xE9;tiquetage pour les EdU permet des r&#xE9;sultats plus complets, en permettant la comparaison de sa constitution avec d&#x26;#39;autres marqueurs intracellulaires, car il ne n&#xE9;cessite pas d&#x26;#39;acide dur ou enzyme dig&#xE8;re n&#xE9;cessaires pour r&#xE9;cup&#xE9;rer l&#x26;#39;&#xE9;pitope BrdU. En outre, l&#x26;#39;utilisation de deux BrdU et Edu permet s&#xE9;quentielles pulse-chase exp&#xE9;riences de suivre la localisation intracellulaire de la r&#xE9;plication ADNmt. La capacit&#xE9; de quantifier la biogen&#xE8;se mitochondriale constitue un outil essentiel pour l&#x26;#39;&#xE9;tude des alt&#xE9;rations de la dynamique mitochondriale impliqu&#xE9;e dans la pathogen&#xE8;se de plusieurs troubles cellulaires, dont les neuropathies et les maladies neurod&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ratives.

ADN mitochondrial (ADNmt) Biogen&#xE8;se: Visualisation et constitution Duel de BrdU et Edu Into nouvellement synth&#xE9;tis&#xE9; in vitro ADNmt

Mitochondrien sind wichtige Regulatoren der zellularen Energie und stehen im Mittelpunkt einer gro&szlig;en Anzahl von Studien, die die Regulierung der mitochondrialen Dynamik und Biogenese in gesunden und Kranken Bedingungen zu untersuchen. Ein Ansatz zur &Uuml;berwachung der mitochondrialen Biogenese ist die Rate der mitochondriale DNA (MtDNA) zu messen. Wir entwickelten eine sensible Technik um eben synthetisierten MtDNA in einzelne Zellen zu visualisieren, um MtDNA-Replikation innerhalb subzellulare Depots von Neuronen zu studieren. Die Technik kombiniert die Einbeziehung von BrdU und/oder EdU in MtDNA gemeinsam mit einem Tyramide Signal-Verst&auml;rkung-Protokoll. Mit dieser Technik, wir visualisiert und MtDNA Biogenese in einzelnen Zellen gemessen. Das Kennzeichenrecht Verfahren f&uuml;r EdU erlaubt umfassendere Ergebnisse dadurch, dass des Vergleichs der Gr&uuml;ndung mit anderen intrazellul&auml;ren Markern weil es keine harten S&auml;ure erfordert oder Enzym verdaut der BrdU-Epitope Wiederherstellung erforderlich. Dar&uuml;ber hinaus gestattet die Nutzung von BrdU und EdU sequenzielle Puls-Chase-Experimente, die intrazellul&auml;re Lokalisation der MtDNA-Replikation zu folgen. Die F&auml;higkeit, mitochondriale Biogenese quantifizieren stellt ein wesentliches Instrument f&uuml;r ermittelnden-&Auml;nderungen in der mitochondrialen Dynamik an der Pathogenese beteiligt mehrere zellul&auml;ren St&ouml;rungen einschlie&szlig;lich Neuropathien und Neurodegenerative Krankheiten.

Mitochondriale DNA (MtDNA) Biogenese: Visualisierung und Duell Einbeziehung von BrdU und EdU in neu synthetisiert MtDNA In Vitro.

I mitocondri sono regolatori chiave di energia cellulare e la messa a fuoco di un gran numero di studi hanno esaminato il regolamento delle dinamiche mitocondriali e biogenesi in condizioni sane e malate. Un approccio di monitoraggio biogenesi mitocondriale &egrave; misurare il tasso di replicazione mitocondriale (mtDNA). Abbiamo sviluppato una tecnica sensibile per visualizzare mtDNA recentemente sintetizzato nelle cellule individuali al fine di studiare la replica del DNA mitocondriale all&#39;interno di compartimenti subcellulari dei neuroni. La tecnica combina l&#39;incorporazione di BrdU e/o EdU mtDNA insieme ad un protocollo di amplificazione del segnale tyramide. Utilizzando questa tecnica, abbiamo visualizzato e misurato biogenesi di mtDNA nelle cellule individuali. La procedura di etichettatura per EdU consente risultati pi&ugrave; completi consentendo il confronto della sua incorporazione con altri marcatori intracellulari perch&eacute; non necessita di acido duro o enzima digerisce necessarie per recuperare l&#39;epitopo BrdU. Inoltre, l&#39;utilizzo di BrdU e di EdU consente esperimenti impulso sequenziale-inseguimento a seguire la localizzazione intracellulare della replica del DNA mitocondriale. La possibilit&agrave; di quantificare la biogenesi mitocondriale fornisce uno strumento essenziale per inquirenti alterazioni nella dinamica mitocondriale coinvolto nella patogenesi di molteplici disturbi cellulari tra cui neuropatie e malattie neurodegenerative.

DNA mitocondriale (mtDNA) biogenesi: mtDNA visualizzazione e duello incorporazione di BrdU ed EdU in appena sintetizzato In Vitro.

&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x5065;&#x5EB7;&#x3068;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x7126;&#x70B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;DNA&#xFF08;mtDNA&#xFF09;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x5185;&#x306B;mtDNA&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;DNA&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x30C1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5897;&#x5E45;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;DNA&#x306B;BrdU&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;EDU&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3092;&#x517C;&#x306D;&#x5099;&#x3048;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; EDU&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x624B;&#x9806;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x904E;&#x9177;&#x306A;&#x9178;&#x3084;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;BrdU&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30C0;&#x30A4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;BrdU&#x3068;EDU&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x7387;&#x306F;&#x3001;mtDNA&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x30C1;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;DNA&#xFF08;mtDNA&#xFF09;&#x751F;&#x5408;&#x6210;in vitro&#x3067;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;DNA&#x306B;BrdU&#x3068;EDU&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3068;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A8;&#x30EB;&#x5B9A;&#x6B3E;

&#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xBA70; &#xB9CE;&#xC740; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xC5ED;&#xD559;&#xACFC; &#xAC74;&#xAC15; &#xD558; &#xACE0; &#xBCD1;&#xC5D0; &#xAC78;&#xB9B0; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18D;&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xC744; &#xAC80;&#xD1A0; &#xD558;&#xB294; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xCD08;&#xC810;. &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xC18D; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD55C; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; DNA (mtDNA) &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; subcellular &#xAD6C;&#xD68D; &#xB0B4; mtDNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;&#xC11C;&#xB294; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C8;&#xB85C; &#xD569;&#xC131; &#xB41C; Mtdna&#xB97C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; BrdU &#xBC0F;&#xC5D0; &#xB4C0; &#xC5C6;&#xC774; tyramide &#xC2E0;&#xD638; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xD568;&#xAED8; Mtdna&#xC5D0; &#xACB0;&#xD569;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xCC44;&#xC6A9;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC140;&#xC5D0; mtDNA &#xC18D; &#xCE21;&#xC815;. &#xC5D0; &#xB4C0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB77C;&#xBCA8;&#xB9C1; &#xC808;&#xCC28; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xACFC; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8; &#xBC95;&#xC778;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD45C;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC70;&#xCE5C; &#xC0B0;&#xC744; &#xC694;&#xAD6C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xC18C; &#xB2E4;&#xC774;&#xC81C;&#xC2A4;&#xD2B8; BrdU epitope&#xB97C; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, BrdU &#xBC0F;&#xC5D0; &#xB4C0;&#xC758; &#xC774;&#xC6A9; mtDNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xC21C;&#xCC28; &#xD384;&#xC2A4;-&#xCCB4;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xC18D; &#xACC4;&#xB7C9; &#xB2A5;&#xB825; neuropathies &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC7A5;&#xC560;&#xC758; &#xBCD1; &#xC778;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xC5ED;&#xD559; &#xC870;&#xC0AC; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; DNA (mtDNA) &#xC18D;: &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xC640; &#xACB0;&#xD22C; BrdU &#xBC95;&#xC778; &#xBC0F;&#xC5D0; &#xB4C0;&#xB85C; &#xC0C8;&#xB85C; &#xD569;&#xC131; Mtdna&#xC5D0;&#xC11C; &#xCCB4; &#xC678;.

Las mitocondrias son los principales reguladores de la energ&#xED;a celular y son el centro de un gran n&#xFA;mero de estudios que examinan la regulaci&#xF3;n de la biog&#xE9;nesis mitocondrial y la din&#xE1;mica en condiciones sanas y enfermas. Un enfoque para el seguimiento de la biog&#xE9;nesis mitocondrial es medir la velocidad de ADN mitocondrial (ADNmt) de replicaci&#xF3;n. Hemos desarrollado una t&#xE9;cnica sensible para visualizar ADNmt reci&#xE9;n sintetizada en las c&#xE9;lulas individuales con el fin de estudiar la replicaci&#xF3;n del ADN mitocondrial dentro de los compartimentos subcelulares de las neuronas. La t&#xE9;cnica combina la incorporaci&#xF3;n de BrdU y / o EDU en ADNmt junto con un protocolo de amplificaci&#xF3;n de la se&#xF1;al tyramide. El empleo de esta t&#xE9;cnica, visualizar y medir la biog&#xE9;nesis de ADNmt en las c&#xE9;lulas individuales. El procedimiento de etiquetado para EDU permite obtener resultados m&#xE1;s amplios, al permitir la comparaci&#xF3;n de su incorporaci&#xF3;n con otros marcadores intracelulares, ya que no requieren &#xE1;cido &#xE1;spero o enzima digiere necesario recuperar el ep&#xED;topo BrdU. Adem&#xE1;s, la utilizaci&#xF3;n de ambos BrdU y Edu permite secuenciales persecuci&#xF3;n pulso-experimentos para seguir la localizaci&#xF3;n intracelular de la replicaci&#xF3;n del ADN mitocondrial. La capacidad de cuantificar la biog&#xE9;nesis mitocondrial ofrece una herramienta esencial para la investigaci&#xF3;n de las alteraciones en la din&#xE1;mica mitocondrial involucrados en la patog&#xE9;nesis de varios des&#xF3;rdenes celulares, incluyendo las neuropat&#xED;as y enfermedades neurodegenerativas.

El ADN mitocondrial (ADNmt) Biog&#xE9;nesis: Visualizaci&#xF3;n e incorporaci&#xF3;n de BrdU duelo y Edu En nueva s&#xED;ntesis de ADN mitocondrial in vitro

&#x65E5;&#x7CAE;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EF;&#x4EE5;&#x523A;&#x6FC0;&#x80F0;&#x817A;&#x589E;&#x957F;&#x7F3A;&#x5E2D; CCK &#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7ECF;&#x56FD;&#x5148;&#x751F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x751F;&#x957F;&#x8C03;&#x8282;&#x4E0A;&#x6709;&#x5C0F;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6807;&#x8BC6;&#x5373;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x523A;&#x6FC0;&#x80F0;&#x817A;&#x751F;&#x957F;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x7684; CCK &#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;C57BL/6 &#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x7ECF;&#x56FD; null &#x96C4;&#x6027;&#x5C0F;&#x9F20;&#x88AB;&#x5582;&#x98DF;&#x6B63;&#x5E38;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;14%&#x916A;&#x86CB;&#x767D;&#xFF09; &#x6216;&#x9AD8;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; (75%&#x916A;&#x86CB;&#x767D;&#xFF09; &#x5468;&#x6881;&#x6DD1;&#x6021;&#x8BAE;&#x5458; 7 &#x5929;&#x3002;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86; C57BL/6 &#x5C0F;&#x9F20; 32%&#x548C; 26%&#x7ECF;&#x56FD; null &#x5C0F;&#x9F20;&#x80F0;&#x817A;&#x7684;&#x91CD;&#x91CF;&#x5582;&#x9AD8;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5468;&#x6881;&#x6DD1;&#x6021;&#x8BAE;&#x5458;&#x3002;&#x63A7;&#x5236;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80F0;&#x817A;&#x91CD;&#x91CF;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80A5;&#x5927;&#x548C;&#x589E;&#x751F;&#x7531;&#x4E8E;&#x5728; DNA-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6BD4;&#x7387;&#x3001; &#x603B; DNA &#x5185;&#x5BB9;&#x548C; DNA &#x5408;&#x6210;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x7ECF;&#x56FD;&#x5148;&#x751F; null &#x5C0F;&#x9F20;&#x80F0;&#x817A;&#x589E;&#x957F;&#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x5168;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x80A5;&#x5927;&#x7684; DNA-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6BD4;&#x7387;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5927;&#x5C0F;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x6CA1;&#x6709; DNA &#x542B;&#x91CF;&#x6216; DNA &#x5408;&#x6210;&#x660E;&#x663E;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;ERK&#x3001; &#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x96F7;&#x5E15;&#x9709;&#x7D20;&#x590D;&#x6742; 1 (mTORC1) &#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x56FD;&#x5148;&#x751F;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x5DEE;&#x5F02;&#x4E2D; ERK &#x6216;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7981;&#x98DF;&#x548C;&#x7F8E;&#x8054;&#x50A8;&#x7ECF;&#x56FD; null &#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5582;&#x517B;&#x540E;&#x589E;&#x52A0; mTORC1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x6301;&#x7EED;&#x65F6;&#x95F4;&#x5EF6;&#x957F;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5582;&#x9AD8;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5468;&#x6881;&#x6DD1;&#x6021;&#x8BAE;&#x5458;&#x4E0E;&#x5468;&#x6881;&#x6DD1;&#x6021;&#x8BAE;&#x5458;&#x6B63;&#x5E38;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x88AB;&#x5B8C;&#x5168;&#x6291;&#x5236;&#x80F0;&#x817A;&#x7684;&#x91CD;&#x91CF;&#x548C; RNA &#x542B;&#x91CF;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x542B;&#x91CF;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x90E8;&#x5206;&#x7F13;&#x89E3;&#xFF0C;&#x5F53; mTORC1 &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x96F7;&#x5E15;&#x9709;&#x7D20;&#x5468;&#x6881;&#x6DD1;&#x6021;&#x8BAE;&#x5458;&#x9AD8;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5582;&#x517B;&#x671F;&#x95F4;&#x7BA1;&#x7406;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x9700;&#x8981;&#x81B3;&#x98DF;&#x86CB;&#x767D;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x80F0;&#x817A;&#x764C;&#x751F;&#x957F;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709;&#x7ECF;&#x56FD;&#x5148;&#x751F;&#x957F;&#x671F;&#x7684; mTORC1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;

&#x7ECF;&#x56FD;&#x5148;&#x751F;&#x72EC;&#x7ACB; mTORC1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x81B3;&#x98DF;&#x86CB;&#x767D;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x80F0;&#x817A;&#x5916;&#x5206;&#x6CCC;&#x751F;&#x957F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

Dietary protein can stimulate pancreatic growth in the absence of CCK release, but there is little data on the regulation of CCK-independent growth. To identify mechanisms whereby protein stimulates pancreatic growth in the absence of CCK release, C57BL/6 control and CCK-null male mice were fed normal-protein (14% casein) or high-protein (75% casein) chow for 7 days. The weight of the pancreas increased by 32% in C57BL/6 mice and 26% in CCK-null mice fed high-protein chow. Changes in pancreatic weight in control mice were due to both cell hypertrophy and hyperplasia since there was an increase in protein-to-DNA ratio, total DNA content, and DNA synthesis. In CCK-null mice pancreatic growth was almost entirely due to hypertrophy with both protein-to-DNA ratio and cell size increasing without significant increases in DNA content or DNA synthesis. ERK, calcineurin, and mammalian target of rapamycin complex 1 (mTORC1) are activated in models of CCK-induced growth, but there were no differences in ERK or calcineurin activation between fasted and fed CCK-null mice. In contrast, mTORC1 activation was increased after feeding and the duration of activation was prolonged in mice fed high-protein chow compared with normal-protein chow. Changes in pancreatic weight and RNA content were completely inhibited, and changes in protein content were partially abated, when the mTORC1 inhibitor rapamycin was administered during high-protein chow feeding. Prolonged mTORC1 activation is thus required for dietary protein-induced pancreatic growth in the absence of CCK.

CCK-independent mTORC1 activation during dietary protein-induced exocrine pancreas growth.

Les prot&#xE9;ines alimentaires peuvent stimuler la croissance du pancr&#xE9;as en l&#x26;#39;absence de la lib&#xE9;ration de CCK, mais il ya peu de donn&#xE9;es sur la r&#xE9;glementation de la CCK-ind&#xE9;pendante de la croissance. Pour identifier les m&#xE9;canismes par lesquels la prot&#xE9;ine stimule la croissance du pancr&#xE9;as en l&#x26;#39;absence de la CCK communiqu&#xE9;, C57BL / 6 de contr&#xF4;le et de la CCK-nulles chez les souris m&#xE2;les ont &#xE9;t&#xE9; nourris normale en prot&#xE9;ines (14% de cas&#xE9;ine) ou haute teneur en prot&#xE9;ines (75% de cas&#xE9;ine) chow pendant 7 jours. Le poids du pancr&#xE9;as a augment&#xE9; de 32% en souris C57BL / 6 et 26% en CCK-nulles les souris nourries haute teneur en prot&#xE9;ines chow. Les changements de poids du pancr&#xE9;as chez les souris t&#xE9;moins &#xE9;taient dus &#xE0; l&#x26;#39;hypertrophie des cellules &#xE0; la fois et l&#x26;#39;hyperplasie depuis il ya eu une augmentation de la prot&#xE9;ine &#xE0; l&#x26;#39;ADN-ratio, la teneur en ADN total, et la synth&#xE8;se d&#x26;#39;ADN. Dans la CCK-souris nulles pour la croissance du pancr&#xE9;as est presque enti&#xE8;rement due &#xE0; l&#x26;#39;hypertrophie avec &#xE0; la fois des prot&#xE9;ines &#xE0; l&#x26;#39;ADN-ratio et la taille des cellules augmente sans augmentation significative de la teneur en ADN ou la synth&#xE8;se d&#x26;#39;ADN. ERK, la calcineurine, et la cible mammalienne de la rapamycine complexe 1 (mTORC1) sont activ&#xE9;s dans les mod&#xE8;les de la CCK induit la croissance, mais il y avait pas de diff&#xE9;rences dans ERK activation ou la calcineurine entre &#xE0; jeun et nourris CCK-souris nulles. En revanche, l&#x26;#39;activation a &#xE9;t&#xE9; augment&#xE9; mTORC1 apr&#xE8;s le repas et la dur&#xE9;e d&#x26;#39;activation a &#xE9;t&#xE9; prolong&#xE9;e chez les souris nourries haute teneur en prot&#xE9;ines par rapport &#xE0; la normale chow-chow de prot&#xE9;ines. Les changements de poids du pancr&#xE9;as et la teneur en ARN ont &#xE9;t&#xE9; compl&#xE8;tement inhib&#xE9;e, et les changements dans la teneur en prot&#xE9;ines ont &#xE9;t&#xE9; partiellement apais&#xE9;e, lorsque la rapamycine mTORC1 inhibiteur a &#xE9;t&#xE9; administr&#xE9; pendant la haute teneur en prot&#xE9;ines d&#x26;#39;alimentation chow. L&#x26;#39;activation prolong&#xE9;e mTORC1 est ainsi n&#xE9;cessaire pour la croissance du pancr&#xE9;as alimentaire prot&#xE9;ine induite en l&#x26;#39;absence de la CCK.

CCK-ind&#xE9;pendante mTORC1 activation Pendant prot&#xE9;ines alimentaires induite par la croissance du pancr&#xE9;as exocrine

Ern&auml;hrungseiwei&szlig; kann Wachstum Pankreas in Ermangelung der CCK-Version, aber sind nur wenige Daten &uuml;ber die Regulierung der CCK-unabh&auml;ngigen Wachstum. Um Mechanismen zu identifizieren, wobei Protein Pankreas Wachstum in Ermangelung der CCK-Version stimuliert, wurden C57BL/6-Kontrolle und CCK-Null m&auml;nnliche M&auml;use Normal-Protein (14 % Kasein) oder proteinreiche (75 % Kasein) Chow f&uuml;r 7 Tage gef&uuml;ttert. Das Gewicht der Bauchspeicheldr&uuml;se stieg um 32 % bei C57BL/6 M&auml;usen und 26 % bei CCK-Null-M&auml;usen gef&uuml;ttert proteinreiche Chow. &Auml;nderungen im Pankreas Gewicht im Steuerelement M&auml;use waren aufgrund der Zelle Hypertrophie und Hyperplasie, da gab es eine Steigerung in Protein-DNA-Verh&auml;ltnis, Gesamtgehalt von DNA und DNA-Synthese. CCK-Null M&auml;use Pankreas Wachstum wurde fast vollst&auml;ndig durch Hypertrophie mit Protein-DNA-Verh&auml;ltnis und Zelle ohne signifikanten Anstieg der DNA-Gehalt oder DNA-Synthese Gr&ouml;&szlig;e steigt. ERK, Calcineurin und S&auml;ugetier-Ziel von angiomiolipomas Komplex 1 (mTORC1) werden aktiviert, in Modellen der CCK-induzierte Wachstum, aber gab es keine Unterschiede in der ERK oder Calcineurin-Aktivierung zwischen fastete und CCK-Null-M&auml;usen gef&uuml;ttert. Im Gegensatz dazu mTORC1 Aktivierung erh&ouml;hte sich nach der F&uuml;tterung und die Dauer der Aktivierung wurde bei M&auml;usen gef&uuml;ttert proteinreiche Chow verglichen mit Normal-Protein Chow verl&auml;ngert. &Auml;nderungen im Pankreas Gewicht und RNA Inhalt waren v&ouml;llig gehemmt, und &Auml;nderungen im Proteingehalt wurden teilweise nachgelassen, wenn die mTORC1 Inhibitor angiomiolipomas w&auml;hrend Chow proteinreiche F&uuml;tterung verabreicht wurde. Verl&auml;ngerte mTORC1 Aktivierung ist somit f&uuml;r di&auml;tetische Protein-induzierte Pankreas Wachstum in Ermangelung der CCK.

CCK-unabh&auml;ngige mTORC1 Aktivierung w&auml;hrend di&auml;tetische Protein-induzierte exokrine Bauchspeicheldr&uuml;se Wachstum.

Proteine nella dieta possono stimolare la crescita del pancreas in assenza del rilascio di CCK, ma c&#39;&egrave; poco dati sulla regolazione della crescita CCK-indipendente. Per identificare i meccanismi con cui proteina stimola la crescita del pancreas in assenza del rilascio di CCK, C57BL/6 controllo e topi maschi CCK-null sono stati alimentati normale-proteina (14% caseina) o chow iperproteica (75% caseina) per 7 giorni. Il peso del pancreas aumentato del 32% nei topi C57BL/6 e 26% nei topi CCK-null alimentazione iperproteica chow. Cambiamenti nel peso del pancreas nei topi di controllo erano a causa sia delle cellule ipertrofia e iperplasia perch&eacute; c&#39;&egrave; stato un aumento nel rapporto proteina-DNA, contenuto di DNA totale e sintesi del DNA. In crescita del pancreas di topi CCK-null &egrave; stato quasi interamente dovuta a ipertrofia con rapporto proteina-DNA e cellula dimensione aumentando senza significativi aumenti nel contenuto di DNA o sintesi del DNA. ERK, calcineurina e mammiferi bersaglio della rapamicina complesso 1 (mTORC1) sono attivati nei modelli di crescita indotta da CCK, ma c&#39;erano differenze nel ERK o attivazione calcineurina tra digiuno e fed topi CCK-null. In contrasto, attivazione di mTORC1 &egrave; stato aumentato dopo la poppata e la durata dell&#39;attivazione &egrave; stata prolungata nei topi nutriti chow elevato apporto proteico rispetto al normale-proteina chow. Cambiamenti nel peso del pancreas e il contenuto di RNA sono stati completamente inibite, e cambiamenti nel contenuto di proteine sono state parzialmente diminuite, quando la rapamicina inibitore di mTORC1 &egrave; stato somministrato durante l&#39;alimentazione iperproteica chow. MTORC1 prolungata attivazione &egrave; cos&igrave; necessaria per alimentare indotta da proteine pancreatica crescita in assenza di CCK.

MTORC1 CCK-indipendenti attivazione durante lo sviluppo del pancreas esocrino indotta da proteine alimentari.

&#x98DF;&#x4E8B;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;CCK&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x975E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x81B5;&#x81D3;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;CCK-&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;14&#xFF05;&#x30AB;&#x30BC;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF09;&#x3084;&#x9AD8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#xFF08;75&#xFF05;&#x30AB;&#x30BC;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF09;7&#x65E5;&#x9593;&#x306E;&#x990C;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x305F;CCK&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;C57BL / 6&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x3068;CCK-null&#x306E;&#x96C4;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x975E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x81B5;&#x81D3;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x81B5;&#x81D3;&#x306E;&#x91CD;&#x91CF;&#x306F;C57BL&#x306E;32&#xFF05;/ 6&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;CCK-&#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3001;&#x9AD8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x990C;&#x306E;26&#xFF05;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5BFE;DNA&#x306E;&#x6BD4;&#x306F;&#x3001;&#x7DCF;DNA&#x542B;&#x91CF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;DNA&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x81B5;&#x81D3;&#x91CD;&#x91CF;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x80A5;&#x5927;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x904E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; CCK-null&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x81B5;&#x81D3;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5BFE;DNA&#x6BD4;&#x3068;&#x30BB;&#x30EB;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;DNA&#x542B;&#x91CF;&#x3084;DNA&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x306A;&#x3057;&#x3067;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x307B;&#x307C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x80A5;&#x5927;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002; ERK&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E9;&#x30D1;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x932F;&#x4F53;1&#xFF08;mTORC1&#xFF09;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x6A19;&#x7684;&#x306F;&#x3001;CCK&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;ERK&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D76;&#x98DF;&#x3068;&#x98DF;CCK-null&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x306F;&#x5DEE;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;mTORC1&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x6388;&#x4E73;&#x5F8C;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x990C;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3001;&#x9AD8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x990C;&#x306B;&#x5EF6;&#x9577;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x81B5;&#x81D3;&#x91CD;&#x91CF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;RNA&#x542B;&#x91CF;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x3001;mTORC1&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30E9;&#x30D1;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x990C;&#x306E;&#x6442;&#x98DF;&#x4E2D;&#x306B;&#x6295;&#x4E0E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x542B;&#x6709;&#x91CF;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x6E1B;&#x6BBA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9577;&#x5F15;&#x304F;mTORC1&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;CCK&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x98DF;&#x4E8B;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8A98;&#x5C0E;&#x81B5;&#x81D3;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x98DF;&#x990C;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x81B5;&#x5916;&#x5206;&#x6CCC;&#x817A;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x4E2D;CCK-&#x72EC;&#x7ACB;MTORC1&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

&#xC2DD;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; CCK &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xCDCC; &#xC7A5;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; CCK &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC131;&#xC7A5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC5D0; &#xC791;&#xC740; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; CCK &#xC790;&#xB8CC;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xCDCC; &#xC7A5;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; C57BL/6 &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xBC0F; CCK null &#xB0A8;&#xC131; &#xC950; &#xB8E8; &#xD588;&#xB2E4; &#xC815;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (14% &#xCE74; &#xC81C;&#xC778;) &#xB610;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (75% &#xCE74; &#xC81C;&#xC778;) &#xC6B0; 7 &#xC77C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;. C57BL/6 &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; 32%, CCK null &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; 26%&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xCDCC; &#xC7A5;&#xC758; &#xBB34;&#xAC8C;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC6B0; &#xBA39;&#xC774;. &#xD1B5;&#xC81C; &#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xCDCC; &#xC7A5;&#xC758; &#xBB34;&#xAC8C;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654; &#xC99D;&#xAC00; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; DNA &#xBE44;&#xC728;, &#xCD1D; DNA &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xBC0F; DNA &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xC788;&#xC5C8;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC; &#xBE44; &#xB300;&#xC640; &#xC99D;&#xC2DD; &#xD588;&#xB2E4;. CCK null &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; DNA &#xBE44;&#xC728; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xBE44; &#xB300; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xAC70;&#xC758; &#xC804;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD06C;&#xAE30; &#xC99D;&#xAC00; DNA &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xB610;&#xB294; DNA &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0;. ERK, calcineurin, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; 1 (mTORC1) rapamycin&#xC758; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB300;&#xC0C1; &#xBAA8;&#xAE08; &#xD68C; &#xC720;&#xB3C4; &#xC131;&#xC7A5;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; ERK&#xC5D0; &#xCC28;&#xC774;&#xC810;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4; &#xB610;&#xB294; &#xC0AC;&#xC774; calcineurin &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAE08;&#xC2DD; &#xBC0F; CCK null &#xC950;&#xB97C; &#xBA39;&#xC774;. &#xBC18;&#xBA74;, mTORC1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xC218; &#xC720; &#xD6C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xAE30;&#xAC04; &#xB192;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCC28; &#xC6B0; &#xCC28; &#xC6B0; &#xC815;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xBA39;&#xC774; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5F0;&#xC7A5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCDCC; &#xC7A5;&#xC758; &#xBB34;&#xAC8C;&#xC640; RNA &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC800;&#xD574; &#xD588;&#xB2E4;, &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD568;&#xB7C9;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; abated mTORC1 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; rapamycin &#xB2E8;&#xBC31; &#xC6B0; &#xC218; &#xC720; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xAD00;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;. &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; mTORC1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xC2DD;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; CCK &#xD544;&#xC694; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2DD;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; exocrine &#xCDCC; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; CCK &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; mTORC1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;.

Las prote&#xED;nas diet&#xE9;ticas pueden estimular el crecimiento de p&#xE1;ncreas en la ausencia de la liberaci&#xF3;n de CCK, pero hay pocos datos sobre la regulaci&#xF3;n de la CCK crecimiento independiente. Para identificar mecanismos mediante los cuales la prote&#xED;na estimula el crecimiento de p&#xE1;ncreas en la ausencia de CCK liberaci&#xF3;n, C57BL / 6 de control y CCK-nulos ratones machos fueron alimentados normal de prote&#xED;nas (14% de case&#xED;na) o alto contenido de prote&#xED;nas (75% de case&#xED;na) Chow durante 7 d&#xED;as. El peso del p&#xE1;ncreas aument&#xF3; un 32% en ratones C57BL / 6 y el 26% en el CCK-null ratones alimentados con alto contenido de prote&#xED;nas chow. Cambios en el peso de p&#xE1;ncreas en ratones de control fueron debido a la hipertrofia e hiperplasia de c&#xE9;lulas tanto ya que no hab&#xED;a un aumento de la relaci&#xF3;n prote&#xED;na-ADN, el contenido total de ADN, y la s&#xED;ntesis de ADN. En CCK nulo ratones el crecimiento de p&#xE1;ncreas se debi&#xF3; casi exclusivamente a la hipertrofia tanto con prote&#xED;na-ADN y relaci&#xF3;n de tama&#xF1;o de las c&#xE9;lulas que crecen sin un aumento significativo en el contenido de ADN o la s&#xED;ntesis de ADN. ERK, la calcineurina, y mam&#xED;feros objetivo de rapamicina complejo 1 (mTORC1) se activan en los modelos de crecimiento inducido por CCK-, pero no hubo diferencias en la activaci&#xF3;n de ERK o de la calcineurina entre el ayuno y los ratones alimentados con CCK-nulos. En contraste, mTORC1 activaci&#xF3;n se increment&#xF3; despu&#xE9;s de la alimentaci&#xF3;n y la duraci&#xF3;n de la activaci&#xF3;n se prolong&#xF3; en ratones alimentados con comida rica en prote&#xED;nas en comparaci&#xF3;n con la prote&#xED;na normal Chow. Cambios en el peso del p&#xE1;ncreas y el contenido de ARN se inhibi&#xF3; por completo, y los cambios en el contenido de prote&#xED;na se hab&#xED;an retirado parcialmente, cuando la rapamicina inhibidor mTORC1 se administr&#xF3; durante la alimentaci&#xF3;n rica en prote&#xED;nas Chow. Activaci&#xF3;n mTORC1 prolongado tanto, se requiere para el crecimiento diet&#xE9;tica pancre&#xE1;tico prote&#xED;na inducida en la ausencia de CCK.

CCK-independiente mTORC1 activaci&#xF3;n durante la dieta la prote&#xED;na inducida por el crecimiento del p&#xE1;ncreas exocrino

Although oxidative stress is a hallmark of important vascular disorders such as diabetic retinopathy, it remains unclear why the retinal microvasculature is particularly vulnerable to this pathophysiological condition. We postulated that redox-sensitive ion channels may play a role. Using H(2)O(2) to cause oxidative stress in microvascular complexes freshly isolated from the adult rat retina, we assessed ionic currents, cell viability, intracellular oxidants, and cell calcium by using perforated-patch recordings, trypan blue dye exclusion, and fura-2 fluorescence, respectively. Supporting a role for the oxidant-sensitive ATP-sensitive K (K(ATP)) channels, we found that these channels are activated during exposure of retinal microvessels to H(2)O(2). Furthermore, their inhibition by glibenclamide significantly lessened H(2)O(2)-induced microvascular cell death. Additional experiments established that by increasing the influx of calcium into microvascular cells, the K(ATP) channel-mediated hyperpolarization boosted the vulnerability of these cells to oxidative stress. In addition to the K(ATP) channel-dependent mechanism for increasing the lethality of oxidative stress, we also found that the vulnerability of cells in the capillaries, but not in the arterioles, was further boosted by a K(ATP) channel-independent mechanism, which our experiments indicated involves the oxidant-induced activation of calcium-permeable nonspecific cation channels. Taken together, our findings support a working model in which both K(ATP) channel-independent and K(ATP) channel-dependent mechanisms render the capillaries of the retina particularly vulnerable to oxidative stress. Identification of these previously unappreciated mechanisms for boosting the lethality of oxidants may provide new targets for pharmacologically limiting damage to the retinal microvasculature during periods of oxidative stress.

Vulnerability of the retinal microvasculature to oxidative stress: ion channel-dependent mechanisms.

Bien que le stress oxydatif est une marque d&#39;importants troubles vasculaires telles que la r&eacute;tinopathie diab&eacute;tique, on ne sait pourquoi la microcirculation r&eacute;tinienne est particuli&egrave;rement vuln&eacute;rable &agrave; cette condition physiopathologique. Nous avons postul&eacute; que les canaux ioniques oxydo-r&eacute;duction sensible peut jouer un r&ocirc;le. Utilisez H(2)O(2) pour causer du stress oxydatif dans les complexes microvasculaires fra&icirc;chement isol&eacute;es de la r&eacute;tine de rat adulte, nous avons &eacute;valu&eacute; des courants ioniques, viabilit&eacute; cellulaire, oxydants intracellulaires et le calcium de la cellule en utilisant les enregistrements perfor&eacute;s-patch, exclusion de colorant bleu trypan et fluorescence fura-2, respectivement. Un r&ocirc;le de soutien pour l&#39;oxydant sensibles sensibles &agrave; l&#39;ATP K (canaux K(ATP)), nous avons constat&eacute; que ces canaux sont activ&eacute;s pendant l&#39;exposition des microvaisseaux r&eacute;tiniennes &agrave; H(2)O(2). En outre, leur inhibition par glibenclamide significativement r&eacute;duite H (2) O (2)-induit la mort des cellules microvasculaire. Des exp&eacute;riences additionnelles &eacute;tablies qu&#39;en augmentant l&#39;afflux de calcium dans les cellules microvasculaires, l&#39;hyperpolarisation induite par le canal K(ATP) boost&eacute; la vuln&eacute;rabilit&eacute; de ces cellules au stress oxydatif. Outre le m&eacute;canisme d&eacute;pendant du canal K(ATP) pour augmenter la l&eacute;talit&eacute; du stress oxydatif, nous avons &eacute;galement constat&eacute; que la vuln&eacute;rabilit&eacute; des cellules dans les capillaires, mais pas dans les art&eacute;rioles, a &eacute;t&eacute; encore renforc&eacute;e par un m&eacute;canisme ind&eacute;pendant du canal K(ATP), qui nos exp&eacute;riences indiquent implique l&#39;activation induite par l&#39;oxydant des canaux cationiques non sp&eacute;cifique perm&eacute;able au calcium. Pris ensemble, nos r&eacute;sultats confirment un mod&egrave;le dans lequel les deux K(ATP) canal ind&eacute;pendant et m&eacute;canismes d&eacute;pendants du canal K(ATP) restituent les capillaires de la r&eacute;tine particuli&egrave;rement vuln&eacute;rables au stress oxydatif. Identification de ces m&eacute;canismes pr&eacute;c&eacute;demment incompris pour renforcer la d&eacute;termination de la l&eacute;talit&eacute; d&#39;oxydants peut-&ecirc;tre pr&eacute;voir des nouvelles cibles pour limiter les d&eacute;g&acirc;ts de la microcirculation r&eacute;tinienne pharmacologiquement pendant les p&eacute;riodes de stress oxydatif.

Vuln&eacute;rabilit&eacute; de la microcirculation r&eacute;tinienne au stress oxydatif : m&eacute;canismes d&eacute;pendant de canal ionique.

Anche se lo stress ossidativo &egrave; un segno distintivo di importanti patologie vascolari quali la retinopatia diabetica, non &egrave; chiaro perch&eacute; il microvasculature della retina &egrave; particolarmente vulnerabile a questa condizione fisiopatologica. Abbiamo postulato che i canali ionici redox-sensibili possono giocare un ruolo. Utilizza H(2)O(2) per causare stress ossidativo nei complessi microvascolare appena isolati dalla retina di ratto adulto, abbiamo valutato correnti ioniche, vitalit&agrave; cellulare, ossidanti intracellulare e calcio cella utilizzando registrazioni perforata-patch, esclusione di colorante trypan blu e fluorescenza fura-2, rispettivamente. Un ruolo di supporto per il K ATP-sensibili ossidante-sensibili (K(ATP)) canali, abbiamo trovato che questi canali vengono attivati durante l&#39;esposizione della retina Talengectasia a H(2)O(2). Inoltre, la loro inibizione di glibenclamide significativamente diminuito H (2) O (2)-indotta la morte cellulare microvascolare. Ulteriori esperimenti stabilito che aumentando l&#39;afflusso di calcio nelle cellule microvascolare, il K(ATP) canale-mediata hyperpolarization incrementato la vulnerabilit&agrave; di queste cellule allo stress ossidativo. Oltre al meccanismo di canale-dipendente K(ATP) per aumentare la letalit&agrave; dello stress ossidativo, abbiamo anche trovato che la vulnerabilit&agrave; delle cellule nei capillari, ma non nelle arteriole, &egrave; stato ulteriormente rafforzata da un meccanismo indipendente dal canale K(ATP), che nostri esperimenti indicati comporta l&#39;attivazione dei canali del calcio-permeabile cationico aspecifico ossidante-indotta. Presi insieme, i nostri risultati supportano un modello di lavoro nella quale sia K(ATP) canale indipendente e meccanismi dipendenti dal canale di K(ATP) rendono i capillari della retina particolarmente vulnerabili allo stress ossidativo. Identificazione di questi meccanismi precedentemente incompreso per incrementare la letalit&agrave; di ossidanti possa fornire nuovi bersagli per limitare farmacologicamente danneggiare la retina microvasculature durante i periodi di stress ossidativo.

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Stephen I. Lentz

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