Sıçan Kalp Engineered Doku implantasyonu

Summary

Burada, atriyoventriküler (AV) bir yetişkin Lewis sıçan oluk mühendislik doku implant kardiyak cerrahi işlem açıklar.

Abstract

Kemirgen cerrahi genellikle yardımcı programı mühendislik dokuların değerlendirilmesinde önemli bir bileşenidir. Çok çeşitli cerrahi işlemler yapılır ve ortak laboratuvar sıçan ve fareler, bu oldukça sık tezgah üstü deney ve büyük hayvanlar üzerinde test veya insan çalışmalar arasında bir ara adım olarak hizmet olabilir. Kemirgenler iskele malzeme ve hücrelerin roman kombinasyonları test etmek için kurulmuş, maliyet-etkin ve fizyolojik ile ilgili bir model sistem sağladığı göz önüne alındığında, özellikle kalp-damar doku mühendisliği çalışmaları için çok uygundur. Halen, biz, atriyoventriküler miyojenik progenitör hücreleri içeren mühendislik doku (AV) sıçan kalp oluk implant bir açık kalp cerrahi işlem açıklanmaktadır. Bu implantlar, pediatrik hastalarda tam kalp bloğu [1] ile geleneksel pacemaker alternatif bir tedavi sağlama nihai hedefi ile sağ atrium ve sağ karıncık arasında bir elektrik boru oluşturmak için tasarlanmıştır. AV-groove bir torakotomi yoluyla mühendislik doku yerleştirilir. Bizim amaçlarımız için, Lewis sıçanlar anestezi ve steril cerrahi işlem sırasında invaziv pozitif havayolu basıncı korumak için havalandırılmış. Kalp yaklaşım 5 ön-yan bir kesi ile sağ torakotomi ile yapılır

Protocol

Bölüm 1: Genel anestezi indüksiyonu

1. A 200-250 g Lewis sıçan, 50 mg / kg Ketamin ve intraperitoneal boşluğuna 30 G iğne ile enjekte 4 mg / kg Xylazine ile anestezi. Üst karın ve sağ göğüs, saç ve% 70 etanol ve sonra bir topikal povidon-iyot antiseptik solüsyon ile iyice temizlenmeli kesi sitesi kaldırmak için kırpılır.
2. Hayvan endotracheally küçük bir hayvan respiratör (Harvard Üniversitesi Aparatı) bağlı 16 G intravenöz kateter kullanılarak entübe. Solunum, genel anestezi korumak için% 100 oksijen ile karıştırılır İsofluranın% 1.0 (Baxter) 0.5 sağlamak için buharlaştırıcı bağlı. Solunum hızı ve tidal volüm sıçan vücut ağırlığına göre ayarlanır. Hayvan cerrahi işlem sırasında vücut ısısını korumak için bir ısıtma yastığı (Hood Thermo-Pad) yerleştirilir.
3. Pulsoximeter cihazı (Nellcor) cerrahi işlem boyunca kalp hızı ve oksijen doygunluğu izlemek için arka uzuvlar üzerine kırpılır.

Bölüm 2: Torakotomi ve mühendislik doku implantasyon

1. Steril cerrahi olmayan örtü havlu kelepçeler ile yapılan cerrahi sitesi hazırlanır.
2. ^5. interkostal alan üzerinde, ön-lateralden sağ göğüs lateral duvara bir kesi yapılır. ^5. interkostal uzayda göğüs iç erişilebilir ve küçük bir retraktörü (Roboz) görünümü en üst düzeye çıkarmak için konumlandırılmış.
3. Perikard sadece kalp zirvesine doğru tabanından sağ atrium ve sağ ventrikül ekinde yukarıda kesilir. Daha sonra, AV oluk tanımlanır ve aorto-atriyoventriküler üçgene bitişik epikardiyal tabakası hafifçe dışında alay.
4. 7-0 Prolen sütür (Ethicon) sağ ventrikül bazal omuz üzerinden yerleştirilir. A 2 x 2 x 2 mm parça mühendislik doku inşa disseke ve AV oluk içinde yerleştirilmiş ve yavaşça aşağı Prolen sütür ile bağlı.
5. Cerrahi alanında kanama kontrol edilir ve iki 4-0 vicryl sütür (Ethicon), göğüs kafesinin kapatılması için üst ve alt interkostal alanı arasına yerleştirilir.
6. Herhangi bir belirgin pnömotoraks, ventilatör yoluyla akciğerlere genişleyen tarafından kazılmış.
7. Göğüs duvarı daha sonra katmanlar halinde kapatılır.

Bölüm 3: Kurtarma

1. Hayvan ameliyat kurtarır, kesi 5 ml% 0.25 bupivakain ^[2] ile infiltre.
2. Hayvan solunum sütten aşağıdaki ekstübe ve tamamen uyanık ve sternal sonra taze yataklar ile bir kafes iade edilir. Sıçan 0.01 mg / kg Buprenorfin analjezi subkütan her 12 saatte bir, daha sonra 3 gün boyunca uygulanır.

Bölüm 4: Temsilcilik sonuç

Düzgün bir şekilde gerçekleştirildiği takdirde,,, hayvanların% 90 daha iyileşme (Şekil 1) kalp AV-groove sonuçlar mühendislik doku cerrahi implantasyon nitelendirdi.

Şekil 1 açık kalp mühendislik doku implantasyonu site gösteren bir fotoğraf.

Discussion

Olumlu bir sonuç için cerrahi işlem, düzgün entübe ve invaziv hayvan havalandırmak için kritik öneme sahiptir. Sıçan sadece sedasyon ve kendiliğinden nefes almaya izin verilirse toraks kemirgenlerde ortak plevra nedeniyle açılmış olmasına rağmen, her iki akciğerde kaçınılmaz olarak çökecek. Göğüs kapatmadan önce, herhangi bir pnömotoraks tamamen ortadan kaldırılması gerekiyor ve akciğerleri tam atelektazi azaltmak için genişletilmiş. Aksi takdirde, solunum ve kurtarma gelen sütten başarısız olacak ve hayvan hiperkapnik ve / veya hipoksik ^[3] olacak. AV oluk içinde epikardiyal doku çıkarılması potansiyel olarak tehlikeli ve sıçan atriyal duvar hassas doğası nedeniyle sağ atrium büyük venöz kanamaya neden olabilir. Adım 2.4 'te Prolen dikiş yerleştirerek, bunun farkında olmak ve epikardiyal koroner dalları önlemek için şarttır. Hayvan iyileşme dönemi veya vücut sıcaklığı aniden düşecek sırasında bir başlık pad üzerinde sıcak tutulmalıdır.

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
7x4 Thermo Pad 4/box	Equipment	Hood Thermo-Pad, Summerland, BC Canada	MODEL 704R
Inspira ASV Ventilator	Equipment	Harvard Apparatus
Handheld Pulse Oximeter	Equipment	Nellcor	N20PA
Retractor	Equipment	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-6514
Isoflurane (Forane)	Reagent	Baxter Internationl Inc.	1001936040
Ketamine HCl	Reagent	Hospira Inc.	RL-0065
Xylazine (AnaSed)	Reagent	Lloyd, Inc.	LB15705A
Buprenorphine HCL Inject	Reagent	Bedford Laboratories	Div-BUP-P00
Bupivacaine 0.25%	Reagent	Hospira Inc.