Summary
Трансплантации почки у мышей является технически сложной процедурой, которая требует тщательного послеоперационного ухода и лечения для достижения успеха.
Abstract
Почечная ортотопической трансплантации у мышей является технически сложной процедурой. Хотя первая пересадка почки у мышей были выполнены Рассел и др. Более 30 лет назад (1) и уточнена Чжан и др. лет спустя (2), мало кто в мире освоили данную процедуру. В нашей лаборатории мы успешно выступили 1200 ортотопической трансплантации почки с> 90% выживаемости. Ключевые моменты для успеха включают строгий контроль реперфузионного повреждения, кровотечением и тромбозом, как во время процедуры и после трансплантации, а также использование вместо 10-0 11-0 шва для анастомозов.
Послеоперационный уход и лечение получателя является чрезвычайно важным, чтобы пересадить успеха и оценки. Все реципиентов почечного трансплантата получают антибиотики в виде инъекций пенициллина сразу после трансплантации и sulfatrim в питьевой воде постоянно. Общее состояние животного оценивается ежедневно и весь анализ креатинина крови проводится регулярно с портативными I-СТАТ машины для оценки трансплантата функции.
Protocol
Доноров органов урожая (2):
- Обезболить доноров использованием 65mg/kg пентобарбитал ИС; анестезия поддерживается изофлюрана (2-3%).
- Сделать средней линии разрез от грудины до лобка, чтобы войти в донора живот и выставить левую почку путем перемещения кишечника сбоку от правой стороны.
- Изолировать левой почки путем лигирования и деления надпочечников и яичек судов 8-0 шелковые нити.
- Мобилизация аорты выше ее слияния с почечной артерии и вены.
- Мобилизация нижней полой вены (НПВ) выше и ниже ее слияния с почечной артерии и вены.
- Лигировать аорты ниже почечных артерий и вен с 8-0 шелковых шва, чтобы минимизировать кровотечение.
- Рассеките левого мочеточника от почечной воротах в мочевой пузырь.
- Expose ureterovesical узел использованием каудально опровержение на мочевой пузырь куполом.
- Акцизный небольшой, эллиптические участок мочевого пузыря содержащие левой ureterovesical соединения, используемые для реконструкции мочевого пузыря с помощью к мочевого пузыря анастомоза. Правого мочеточника не входит в мочевой пузырь.
- Лигировать IVC ниже почечных артерий и вен с 8-0 шелковые нити.
- Лигировать аорту выше почечной артерии и вены, и медленно заливать трансплантата на месте с 0.2-0,4 мл холодной, гепаринизированной лактата раствор Рингера через инфраренального аорты.
- Лигировать IVC выше почечной артерии и вены с 8-0 шелковые нити.
- Трансекта почечной вены на ее слияния с IVC.
- Разделите аорты наклонно, около 2 мм ниже почечных артерий.
- Удаление почки и его кровоснабжения с мочеточника придается пузыря патч целиком. Хранить в лактата раствор Рингера на льду.
- Эвтаназии доноров мыши цервикальным сдвигом под наркозом.
Получатель трансплантации (2):
- Обезболить получателя с 65 мг / кг фенобарбитала IP и поддерживать наркозом изофлюрана (2-3%).
- Сделать средней линии разрез, накрыть кишечника с мокрой марли и тщательно убирать с левой стороны.
- Лигировать правого мочеточника, почечная артерия и вена, и удалить правую почку.
- Тщательно изолировать и кросс-зажим инфраренального аорты и IVC с двумя 4-мм microvasular зажимы после лигирования поясничной ветви.
- Место 10-0 нейлона шов через всю толщину аорты и отказаться сделать эллиптической aortaotomy одним разрезом (примерно одну пятую диаметра сосуда).
- Сделайте продольные венотомия, прокалывая IVC с 30 иглы и расширить надлежащим использованием microscissors.
- Промывать оба аорты и IVC с гепарином солевой очистить внутрипросветный крови или сгустков.
- Удалить донорской почки от льда и поместите его внутри-абдоминально в правый фланг мыши. Донорской почки остается влажным холодным солевым пропитанной марлевым тампоном.
- Поместите два швов пребывания в проксимальных и дистальных вершине получателей aortaotomy с манжетой аорты доноров.
- Сделать из конца в сторону анастомоза между манжетой доноров аорты и передней стенки aortaotomy получателей, используя 2 ~ 3 непрерывного 10-0 нейлоновые нити во внешнем аорты.
- Включите трансплантата донорской почки на левый фланг получателя. повторить предыдущую процедуру между манжетой доноров аорты и задней стенки aortaotomy получателей
- Выполните конца в сторону анастомоза между донором почечной вены и задней стенки получателей IVC, используя 4 до 5 непрерывного 10-0 нейлоновые швы с внутренней IVC. , а затем передняя стенка IVC и доноров почечной вены закрыты 4 ~ 5 непрерывного швов снаружи IVC.
- Анастомоз как вены и артерии должен быть завершен в течение 20 минут.
- Промыть трансплантата с холодным солевым несколько раз в течение анастомоза.
- Разделите купол получателя мочевого пузыря, и остановить кровотечение с прижиганием.
- Сделайте небольшой надрез на купол.
- Поместите два пребывания швов 10-0 нейлона для anastomize доноров небольшой участок мочевого пузыря с купола мочевого пузыря получателей. Каждая сторона анастомоза зашивается с 8 ~ 10 непрерывной швов.
- Закрыть живота в два слоя с непрерывной 4-0 стерильные, синтетические рассасывающиеся Викрил шва.
- Дайте получателя мышей 0,4 мл теплой солевой во время операции по прерывистой внутривенного введения.
Послеоперационный уход за Получатель
- После закрытия брюшной полости, однократной внутримышечной инъекции пенициллина (500U/10g) вводят (2).
- Кроме того, получатели получают 0,05 мг / кг внутримышечно бупренорфина на 0 день и 1-й день после операции боль. После операции реципиентов получать воду, содержащую sulfatrim (100mg/kg), пока эксперимент тэrminated.
- За первые 24 часа после операции мышей находятся в контролируемой температурой инкубатора.
- Мыши обычно выздоравливают от наркоза в течение 1 часа работы и даны обычную пищу и воду без ограничений объявление.
- Кожа Швы снимают через 2 недели после операции.
Получатель Нефрэктомия
- Обезболить получателя 4 ~ 7 дней после трансплантации почки с 65 мг / кг фенобарбитала ИС; анестезия поддерживается изофлюрана (2-3%).
- Открытый живот через срединный разрез.
- Обложка кишечника с солевым пропитанной марли и тщательно убирать с правой стороны.
- Удалить левой почки после лигирования левого мочеточника, вены почек и сердца.
- Закрыть живота в два слоя с непрерывной 4-0 синтетические рассасывающиеся Викрил шва.
Всего Измерения креатинина крови
- Еженедельно в две недели для сбора крови менее 0,2 см производится либо submandibularly без анестезии и ретро-орбитально под изофлюрана анестезии.
- Количественные целом уровень креатинина крови определяются с помощью I-Stat Портативный Клинические Analyzer (Heska корпорации, Форт-Коллинз, CO).
- Условных единицах (мг / дл) превращаются в единицы СИ в мкмоль / л путем умножения условных единиц на 88,4.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Мы провели около 1200 случаев трансплантации почки у мышей с технической скоростью успеха> 90%. По сравнению с пересадке сердца, вероятность успеха трансплантации почки, как правило, низка. Тем не менее, наша лаборатория сохраняет высокий уровень успеха (> 90%) трансплантации почки. Ключевые моменты для достижения успеха являются снижение реперфузия травмы обеих почек доноров и получателей, и свести к минимуму кровотечение и тромбоз в течение всей процедуры, и после операции. Следующие факторы могут быть наиболее важными: (а) уменьшить кровотечение у реципиента во время операции в максимально возможной степени на основе тщательного и нежного эксплуатации; (б) минимизировать теплой ишемических и пережатие раз во время подготовки донора и реципиента почки трансплантации; (с) использовать небольшой участок мочевого пузыря доноров, чтобы предотвратить некроз, недостаточного кровоснабжения и мочевого пузыря утечки после операции; (г) задержки нефрэктомия родного почки до 4 ~ 7 дней после трансплантации, чтобы пересаженной почки для восстановления функции после операции; (е ) выполнять анастомозы (между манжетой доноров аорты и передней стенки, а также между манжетой доноров аорты и задней стенки аорты получателя) вне аорты по сокращению числа случаев тромбоза; (е) вести получателя мышей теплая, по крайней мере для 24 часов после операции, (г) дают антибиотики, чтобы получатель мышей после операции, чтобы предотвратить возможные инфекции.
В этом протоколе, мы используем вместо 10-0 11-0 шов, не затрагивая выживаемость. Хотя 11-0 шов идеально подходит и используется во многих лабораториях трансплантации, мы чувствуем, что 10-0 шов является достаточным для использования в трансплантации почки до тех пор, как факторы, описанные выше, хорошо контролируются.
Удаление оставшейся родной почек необходимо, чтобы снижение почечной функции трансплантата можно контролировать с помощью сыворотки измерения креатинина. Все получатели почек трансплантата почки проходят левого родной почки от 4 до 7 дней после трансплантации почки. Нефрэктомия не выполняется во время трансплантации почки, поскольку получатели характерно страдать плохим здоровьем или не выжить, когда обе процедуры проводятся в то же время. С 4 по 7 день задержки между процедурами разрешения почек трансплантата, чтобы оправиться от травмы ишемии и реперфузии перед родной почка удалена. Функция почек трансплантата оценивают ежедневные осмотры общее состояние здоровья животного и уровня креатинина в крови. Для справки, без пересаженных, нормальные мыши уровня креатинина около 20 мкмоль / л Почечная отказ аллотрансплантата подозревается, когда получатель мыши показывает признаки болезни и уровень креатинина повышается почти до 100 мкмоль / л, при котором время трансплантаты собирают для гистопатологические анализа.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Эксперименты на животных были проведены в соответствии с руководящими принципами и правилами установленными Университета штата Огайо IACUC.
Acknowledgments
Эти исследования были частично поддержана финансирование NIH R01 AI36532 в Гах. Мы хотели бы отметить отличную поддержку в пересадке патологии при условии, доктор Тибор Nadasdy и бесценным руководством и дальновидность предоставляемые покойный д-р Чарльз Г. Орос в инициировании этого исследования усилий.
Materials
Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
i-STAT | Other | HESKA | Cat 5101 | |
i-STAT Cartridge | Other | HESKA | CAT 5110-CREA | |
Sulfatrim | Other | Actavis | R02109 | |
Isoflurane | Other | NOVAPLUS | CA-0474 | |
10-0 Suture | Surgery | Sharpoint | AK0100 |
References
- Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants. JExpMed. 147, 1449-1468 (1978).
- Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. Improved techniques for kidney transplantation in mice. Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).