Summary
פרוטוקול זה מדגים שיטות להפקת הזרע מן האשכים של זכרים ואז כשזרעו נקבות עכברים. הליך זה שימושי כאשר זמן מדויק יש צורך במחקרים התפתחותיים כמו גם עבודה מהונדס.
Abstract
מכרסמים של Peromyscus הסוג (עכברים צבי) הם היונקים הנפוצים ביותר ילידי צפון אמריקה. מינים Peromyscus משמשים מגוון רחב של מחקר כולל טוקסיקולוגיה, אפידמיולוגיה, אקולוגיה, התנהגות, מחקרים גנטיים. הנה הם לספק מודל שימושי עבור הפגנות של הזרעה מלאכותית.
שיטות דומות לאלה המוצגות כאן בעבר שימוש במחקרים העכבר כמה צבאים, עדיין אין פרוטוקול מפורט פורסמו. כאן אנו מדגימים את השיטה הבסיסית של הזרעה מלאכותית. שיטה זו כרוכה לחילוץ האשכים של מכרסם, ואז לבודד את הזרע מן האשך ואת הזרע הזרע. הזרע בשלה, עכשיו בתערובת החלב, ממוקמים מערכת הרבייה של הנקבה בזמן הביוץ. הפריה נחשבת 0 יום התזמון של התפתחות העובר. עוברים לאחר מכן, ניתן לאחזר את נקודת הזמן הרצוי מניפולציות.
הזרעה מלאכותית ניתן להשתמש במגוון של מינים מכרסם בו העובר העיתוי המדויק הוא קריטי או קשה להשיג. טכניקה זו היא חיונית עבור מינים או זנים (כולל רוב Peromyscus) אשר לא יכול להזדווג באופן מיידי ו / או שם ההזדווגות קשה להעריך. בנוסף, הזרעה מלאכותית מספק התזמון המדויק להתפתחות העובר או מיפוי התקדמות התפתחותית ו / או עבודה מהונדס. מספר מופחת של בעלי חיים יכול לשמש מאז ההפריה מובטחת. שיטה זו הייתה חיונית לקידום מערכת Peromyscus, ויהיה בתקווה להפיק תועלת גם לאחרים.
Protocol
הזרעה מלאכותית
הזרעה מלאכותית משמש במקום הזדווגויות טבעי כדי להגדיל את הסיכוי שכל הנקבות יש רצון להיכנס להריון. 2 זכר שימש כל 1 הנקבות superovulated או נקבה ידוע להיות הייחום. Epididymides caudae מעכברים זכרים בוגרים הוצבו השעיה חלב 9% ופרוסים לפתוח עם 18 מחטים מד. הזרע היה מותר לשחות בחופשיות במשך כמה דקות ואז epididymides נלקחו מתוך התערובת. המתלים הוערך באמצעות מיקרוסקופ עבור מפגש והזרע ניעתי. מד בוטה 22 ½ 1 אינטש מחט ארוכה שימש לנהל את הזרע. לכופף 120 ° הוצב על ה 3 / 4 לאורך המחט. המחט המוחדרת לנרתיק עד לעיקול ו .025 - 0.05mls מוזרק. אם עוזר משמש להחזיק את הנקבה בעמדה המתאימה, שימוש בהרדמה אינו נחוץ.
הכנה
- השתמש 4 זכרים ונקבות עבור 6
- להרדים את הזכרים ביבר
- הכן כ 5 מ"ל של חלב 9% לעומת אבקת חלב
- מכניסים 1.5 מ"ל בצלחת פטרי קטן
- חותכים את epididymus ואת הזרע הזרע
- מכניסים 1.5ml חלב 9%
- השימוש בשתי 18 מחטים מד, באמצעות תנועה חיתוך ארוך עם מחטים, פרוסה לפתוח את epididymus ואת הזרע הזרע לשחרר את הזרע
- קח את שאריות רקמת ולבדוק הזרע במיקרוסקופ
הזרקה
- שימוש במחט קהה זווית 120 °
- החזק העכבר ביד להזריק תערובת. אם לא נוח עם אדם אחד מחזיק והזרקת, שני אנשים יכולים לשמש. הרדמה לא אמור לשמש, כמו על אחד יודע איך זה יכול להשפיע על ההליך.
- השתמש 0.05ml של תערובת הזרע / חלב לכל נקבה
נמען נקבות
- האם למרוח בנרתיק על הנקבות הנמען (בזמן הזה הנקבות הנמען צריך להיות proestrus / ייחום)
- נקבות שלא הגיעו ייחום על ידי יום 5 צריכה כנראה לא בשימוש
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
אני רוצה להודות מייק דיואי ממרכז במלאי Peromyscus הגנטי של תובנה חשובה שלו, סבלנות וידע על רבייה מכרסמים.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Petri Dish | Tool | Fisher Scientific | 08-772-30 | |
| 18 G needle | Tool | BD Biosciences | 305195 | |
| Powdered milk | Reagent | Any Supplier | ||
| 1 mL syringe | Tool | National Scientific Company | S7510-1 | |
| Forceps | Tool | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5060 | |
| Scissors | Tool | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5882 | |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 14200-075 | |
| 22 G blunt needle | Tool | Give to me |
