Одной из особенностей болезни Альцгеймера является повышение Ар 1-42 Пептида. Здесь мы предлагаем протокол для подготовки синтетических Ар 1-42 Олигомеров, что снижает гиппокампа долговременной потенциации, сотовые коррелят памяти. Эта процедура полезна для исследования механизмов Ар-индуцированной скрининга патологии и наркотиков.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Подготовка Олигомерные β-амилоида 1-42 И индукция Synaptic Обесценение Пластичность на срезах гиппокампа
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Обесценение синаптических связей, скорее всего, лежат в основе тонких амнезии изменения, происходящие на ранних стадиях болезни Альцгеймера с (AD). β-амилоида (Ар), пептид, производимых в больших количествах в AD, как известно, уменьшает долговременной потенциации (LTP), сотовые коррелят обучения и памяти. В самом деле, LTP нарушения вызваны Ар является полезным экспериментальную парадигму для изучения синаптической дисфункции в нашей эры моделей и для скрининга препаратов способны смягчения или возврат таких синаптических нарушений. Исследования показали, что Ар производит LTP нарушения преимущественно через его олигомерные формы. Здесь мы предлагаем подробный протокол по нарушению LTP по перфузии олигомеризации синтетических Aβ1-42 пептида на острые срезах гиппокампа. В этом видео мы опишем шаг за шагом, порядок подготовки олигомерных Ар
Протокол
Ресуспендирования β-амилоида пептида
Прежде, чем начать есть готовые:
- Ар 1-42 (лиофилизированный порошок)
- 1,1,1,3,3,3-гексафтор-2-пропанол (HFIP)
- Низкий-связывающий полипропилена микроцентрифужных труб (1,5 мл)
- Газонепроницаемыми Гамильтон шприц с тефлоновым окунуться остановить (250 мкл)
- Диметилсульфоксид (ДМСО)
- Разрешить лиофилизированный Ар 1-42 до уравновешивания при комнатной температуре в течение 30 минут, чтобы избежать конденсации при открытии пептид флаконе.
- Под вытяжным шкафом, вновь приостановить Ар 1-42 пептида в ле....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Как описано выше, ряд проблем в подготовке олигомерных Ар может привести к незатронутым LTP. Один из способов оценить, насколько Ар деградации или отсутствие Ар олигомеризации, возможно, произошли является оценка Ар подготовки использованием ТРИС-Tricine СТРАНИЦА / Западная блоттинг анализа и аналитического ультрацентрифугирования (не описанных в данном протоколе). Когда западные Blotting образцы подготовлены под non-denaturing/non-reducing условиях успешной подготовки должна генерировать Вестерн-блоттинг подпись показы.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Эксперименты на животных были проведены в соответствии с руководящими принципами и правилами, установленными Колумбийского университета IACUC.
Благодарности
Эта работа была поддержана NIH Национального института неврологических расстройств и инсульта (NINDS) (NS049442).>
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Aβ 1-42 (лиофилизированный) | American Peptide | 62-0-80 | |
| 1,1,1,3,3,3-Гексафтор-2-пропанол (HFIP) | Fluka | 52517 | |
| Диметилсульфоксид (DMSO) | Biotium, Inc. | 90082 | |
| Полипропиленовые центрифужные пробирки объемом 50mL | Corning | 05-538-67 | |
| Микропробирки MaxyClear объемом 1.5ml с максимальным выходом продукта | Axygen Scientific | MCT-150-L-C | |
| Фосфатно-солевой буфер pH 7.4 | Invitrogen | 10010-023 | |
| Шприцы GASTIGHT объемом 250 μL | Hamilton Co | 1725 | |
| Ультразвуковая ванна | Branson | 3510 | |
| Система концентрирования Savant SpeedVac | Various | SC 110A |
Ссылки
- Stine, W. B. Jr, Dahlgren, K. N., Krafft, G. A., LaDu, M. J. In vitro characterization of conditions for amyloid-beta peptide oligomerization and fibrillogenesis. J Biol Chem. 278, 11612-11622 (2003).
- Vitolo, O. V.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
