Summary
脐带是用来隔离平滑肌细胞，通过不同的方式。在这项工作中，我们使用的孤立的平滑肌细胞的酶处理。
Abstract
人类脐带（UC）是刚出生后可以很容易地获得一个生物样品。这是生物样品，大部分时间，丢弃收集并不意味着任何额外风险的新生儿或母亲小号的健康。而且没有提出的伦理问题。 UC是由一个静脉和动脉从两个内皮细胞（ECS）
Protocol
- 动脉获得3-7厘米UC件。
- 沃顿商学院的果冻周围动脉切割用剪刀小心取出。
- 从解剖动脉的一端插入一个钝针，外径0.6 - 1MM约7mm。
- 为了清除血管内的剩余血液，动脉垂直举行，约20至40毫升，生理盐水溶液（PSS）灌注，用20 mL注射器连接到一根针。如果有必要，这种洗涤步骤重复多次。
- RPMI 1640培养液含10％胎牛血清（FBS），重复使用相同的程序。
- 下肢血管之一被关闭。被连接到一个10毫升的注射器针和胶原酶I型（汉克的缓冲盐溶液（HBSS）800单位/毫升）与3毫升灌注。那么其他extremityof的船只也被关闭。
- 该船孵育，用磷酸盐缓冲生理盐水溶液（PBS），15 ° C与搅拌37分钟，。
- 后该船只的两端分别削减收集免费的校董会。动脉灌注辅以5％FBS和50 mL试管抗生素的DMEM - F12，约20至40毫升。
- 在室温（250克，8分钟）离心管，并辅以5％胎牛血清的DMEM - F12 5毫升悬浮细胞沉淀。
- 细胞悬液转移到胶原蛋白涂层T型瓶和培养在37℃，5％的CO 2饱和湿度下。
- 5月16日H，非贴壁细胞和细胞drebis被拆除后，加入5毫升培养基和细胞培养在37℃，5％的CO 2饱和湿度下。
- 细胞培养介质改为每2 3天，直到校董会达到汇合。
- 后细胞达到汇合，他们分别接种到两个或三个25 厘米2个 T -烧瓶。
净化
- 处置锐器容器针。
- 处置中的生物危害大容器的注射器。
- 所有组织放入一个小的生物危害袋。关闭袋，并冻结在-20摄氏度，直到焚烧。
- 至少10分钟，浸泡在virucide的所有仪器。
- 将未使用的媒体冰箱。
- 在生物危险废物手套处置。
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Discussion
校董会可以被用来作为未来大蟒药物检测模型，分离和结构表征L -型钙通道，血管功能的细胞和分子方面的研究，并在组织工程中使用。平滑肌细胞和内皮细胞是根本，为发展新的生物材料，可用于生产半合成的血液用于人类的船只。
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Acknowledgments
医院阿马托西洋，葡萄牙布朗库堡。
医院索萨马丁斯，瓜尔达葡萄牙。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM-F12 | Sigma-Aldrich | 095K8311 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Biochrom AG | 0117T | |
| RPMI 1640 | GIBCO, by Life Technologies | 3103806 | |
| Collagen | Sigma-Aldrich | 067K2302 | |
| Antibiotic | 10 μL/ 1 mL of medium | ||
| Scissors | Sterilized | ||
| Needle | Diameter of 0.6-1mm | ||
| Syringe | 10 - 20 mL | ||
| Physiological Saline Solution (PSS) | 20-40 mL per artery | ||
| Collagenase type I | Sigma-Aldrich | 047K1052 | 3 mL per artery |
| Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS) | Diluted collagenase | ||
| Phosphate buffered saline solution (PBS) | Warmed to 37°C |
References
- Van Rijen, H. Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins. The American journal of physiology. 272 (1 PT 1), C117-C117 (1997).
- Martín de Llano, J. Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels. Translational Research. 149 (1), 1-9 (2007).
- Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria. J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).
- Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., Verde, I. Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 45 (3), 175-184 (2009).
