Summary
इस वीडियो में प्रदर्शन कर रहे हैं फ़्लैश ठंड और सेक्शनिंग माउस से भ्रूण मस्तिष्क के ऊतकों के लिए तकनीकों. Cryostat का उपयोग करने के लिए उपयोगी सुझावों निवारण तरीकों कि इस्तेमाल किया जा सकता है, जबकि करने के लिए सुनिश्चित करें कि परिणामी ऊतकों वर्गों दरारें और अन्य विकृतियों के लिए स्वतंत्र हैं काटने सहित दिए गए हैं.
Protocol
- पीबीएस में वांछित समय के लिए 4% paraformaldehyde में ऊतक को ठीक करें.
- Sucrose ऊतक पानी में डालना (cryoprotection)
- पीबीएस w v / में 2059 ट्यूब में 30% sucrose के समाधान करें.
- पीबीएस में ऊतक 3x कुल्ला (~ कमाल के साथ 5 मिनट).
- 30% sucrose के समाधान में रखें ऊतक. ऊतक सिंक नहीं होगा.
- 4 में ऊतक प्लेस ° सी रातोंरात, या जब तक यह डूब गया है.
- उपयुक्त आकार लेबल जानकारी और ओरिएंटेशन के साथ cryomold.
- अक्टूबर साथ cryomold भरें (बुलबुले से बचने के लिए).
- अक्टूबर स्नान और यह अक्टूबर के साथ कोट के लिए ऊतक स्थानांतरण
- अक्टूबर cryomold में ऊतक स्थानांतरण.
- ओरिएंट खुर्दबीन के नीचे ऊतक.
- प्लास्टिक पेट्री डिश में तरल नाइट्रोजन डालो.
- जल्दी और सावधानी से cryomold में नाइट्रोजन में ऊतक कम. (Cryomold के शीर्ष डूब नहीं)
- जब अक्टूबर सफेद ठोस है, तो भंडारण के लिए -80 ° सी फ्रीजर में जमे हुए ऊतक जगह है.
- 20 ~ डिग्री कम से कम 30 मिनट के लिए सी ऊतक संतुलित करना. पहले सेक्शनिंग.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Tissue-Tek Cryomold | Ted Pella, Inc. | 27181 | |
O.C.T. | Ted Pella, Inc. | 27050 | |
Sucrose solution | 30% sucrose solution in PBS w/v | ||
paraformaldehyde | 4% paraformaldehyde in PBS |