Summary
В данной работе подробно описаны операционные процедуры и меры предосторожности, которые необходимо предпринять во время прижигания ду-оксисессора при лечении анкилозирующего спондилоартрита у подопытных мышей.
Abstract
Анкилозирующий спондилит (АС) – это прогрессирующая и инвалидизирующая форма артрита, которая в первую очередь поражает осевой скелет. Это заболевание в основном поражает позвоночник и крестцово-подвздошный сочленение. Сращение позвоночника и крестцово-подвздошного сочленения может произойти на поздней стадии заболевания, что приводит к тугоподвижности позвоночника и кифозу, а также затруднению ходьбы, что серьезно сказывается на качестве работы и повседневной деятельности и накладывает тяжелую нагрузку на пациента, семью и общество. Все большее внимание уделяется немедикаментозной терапии как альтернативной терапии АС. Прижигание – это древняя терапевтическая техника, используемая в традиционной китайской медицине (ТКМ). Дю-прижигательная терапия, уникальное и инновационное наружное лечение, разработанное на основе обычного прижигания, оказывает определенное терапевтическое воздействие на АС. Дю-прижигание умело сочетает в себе совместимые методы ТКМ для интеграции меридианов, акупунктурных точек, китайской фитотерапии и прижигания. В данной работе подробно описаны операционные процедуры и меры предосторожности, которые необходимо предпринять во время прижигания ду-коксесоса у подопытных мышей, чтобы обеспечить экспериментальную основу для изучения механизма прижигания ду-оксижига при лечении АС.
Introduction
Анкилозирующий спондилит (АС) – это прогрессирующая и инвалидизирующая форма артрита, которая в первую очередь поражает осевой скелет. Согласно последнему эпидемиологическому исследованию, ~0,01%-1,8% людей в мире страдаютэтим состоянием1, большинство из которых молодые мужчины (соотношение мужчин и женщин ~2-3:1)2. Заболеваемость АС в китайской популяции составляет 0,2%-0,4%. Это заболевание в основном поражает позвоночник и крестцово-подвздошный сочленение. Спондилодез позвоночника и крестцово-подвздошного сочленения может произойти на поздних стадиях заболевания, что приводит к тугоподвижности позвоночника и кифозу, а также затруднению ходьбы, что серьезно влияет на качество работы и повседневной деятельности и ложится тяжелым бременем на пациента, семью и общество1. В настоящее время не существует окончательного решения проблемы АС, и предлагаемые методы лечения, как фармакологические, так и нефармакологические, в первую очередь направлены на облегчение боли, замедление прогрессирования заболевания и улучшение качества жизни. В последние годы, в связи с тем, что фармакотерапевтические возможности былиочень ограничены, все большее внимание уделяется нефармакотерапии, которая стала альтернативной терапией АС. В Китае пациенты часто предпочитают наружное лечение, состоящее из традиционной китайской медицины (ТКМ), которое имеет незначительные побочные эффекты и большое удобство во время лечения.
Прижигание – это древняя терапевтическая техника, используемая в ТКМ. Дю-прижигание – это техника наружного лечения, состоящая из «лечебного прижигания с пеной» на сегменте позвоночника меридиана Дю. Он в основном используется при лечении АС и показал свою безопасность и эффективность. По сравнению с обычным прижиганием, Du-прижигание имеет характеристики широкой площади прижигания, большого конуса моксы, сильной огневой мощи и высокой температуры4. Систематический обзор и мета-анализ свидетельствуют о том, что прижигание является эффективным дополнительным лечением АС5. Недавнее исследование подтвердило, что клинические симптомы и некоторые воспалительные факторы у пациентов с синдромом Аспергера были улучшены с помощью прижигания6. Исследования показали, что Du-прижигание может увеличивать содержание в мозге β-эндорфина и оказывать центральное обезболивающее действие7, подавлять экспрессию гена HLA-B27 8 и задерживать частоту рецидивов АС. Дю-прижигание также оказывает улучшающее действие на прогрессирование АС, снижая воспалительный индекс СОЭ (СОЭ) и уровни С-реактивного белка (СРБ), С-концевого пептида коллагена I типа (CTX-I) и белка Dickkopf1 (DKK1)9,10.
Другое клиническое исследование показало, что Du-moxiburnion может дополнительно регулировать неупорядоченные субпопуляции Т-клеток, Ig и комплемент C3 для балансировки иммунногомеханизма. С точки зрения метаболизма костной ткани, прижигание может ингибировать повышение уровня щелочной фосфатазы (ЩФ) и фосфора в сыворотке крови (S-P), повышения уровня кальция в сыворотке крови (S-Ca), минеральной плотности костной ткани (МПК) и прочности костей12. Кроме того, Du-прижигание может восстанавливать функцию позвоночника в нескольких точках, чтобы облегчить симптомы усталости у пациентов с синдромом Аспергера13. Некоторые исследования на животных выявили потенциальный механизм прижигания при лечении АС. Исследование показало, что прижигание значительно улучшило общее состояние здоровья, уменьшило уровень толщины лапы и снизило уровни IL-1β, PGE2, IL-6 и TNF-α в образцах ткани связок позвоночника. Анализ метаболических путей связал идентифицированные метаболиты с циклом ТСА, а также с липидным, аминокислотным, кишечной флорой и пуриновым метаболизмом14. Другое исследование показало, что прижигание подавляет экспрессию провоспалительных цитокинов, IL-1β, TNF-α, IL-17 и IL-6; снижение уровней мРНК RANKL, RANK, ALP и OCN; и улучшили гистопатологические признаки у мышей с синдромом Аспергера15.
Хотя эти исследования показывают, что прижигание может быть эффективным при лечении АС, необходимы дополнительные исследования, чтобы подтвердить эти результаты и определить оптимальный протокол лечения прижигания у пациентов с АС. Наша команда создала и модифицировала прижигание, основанное на базовой теории и практическом действии традиционного китайского прижигания, которое широко проводится и применяется в китайской клинической практике уже более 35 лет. Несмотря на то, что существует мало высококачественных исследований по лечению АС с помощью Du-moxiburnion, его показания к лечению АС подтверждены доказательствами. Однако механизм лечения АС с помощью Du-прижигания заслуживает дальнейшего изучения. Исследование на животных является важным методом изучения механизма Du-прижигания при лечении АС. Клиническое действие Du-прижигания является относительно зрелым, но редко используется при изучении механизма в экспериментах на животных. В данной работе подробно описана операция и меры предосторожности, которые необходимо предпринять во время Du-прижигания при лечении экспериментальных мышей с АС.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике благополучия экспериментальных животных Шаньдунского университета традиционной китайской медицины (No. SDUTCM20230831301).
1. Подготовка животных
- Заранее определите экспериментальные группы и количество животных в группе.
- Выбирайте самцов мышей BALb/c, содержате их при постоянной температуре 22 ± 1 °C, постоянной влажности 60 ± 5% и световой среде в течение 12 часов.
2. Создание модели мыши AS
ПРИМЕЧАНИЕ: Модель AS была индуцирована хрящевым протеогликаном (PG), который является классическим методом моделирования 16,17,18,19,20,21. Мышей линии BALB/c неоднократно иммунизировали ПГ для индуцирования тендинита и спондилита. См. Таблицу материалов для получения подробной информации, связанной с материалами, реагентами и инструментами, используемыми в этом протоколе.
- С помощью пипетки на 200 мкл наберите 200 мкл PG и CFA (или IFA) в центрифужную пробирку объемом 1,5 мл. Аккуратно встряхивая, смешайте жидкость в центрифужной пробирке.
- Поместите центрифужную пробирку в измельчитель для гомогенизации, а затем инкубируйте на льду в течение 4 минут. Установите в шлифовальной машине следующие параметры: 60 Гц, шлифовка 30 с, интервал 10 с, всего 6 циклов.
- Извлеките 0,2 мл эмульгированного белка PG из центрифужной пробирки шприцем объемом 1 мл.
- Возьмитесь и зафиксируйте мышь левой рукой. Уложите мышь в положение лежа на спине, держа голову ниже хвоста, чтобы предотвратить повреждение органов брюшной полости при введении шприца.
- Простерилизовать живот спиртовыми тампонами правой рукой.
- Держа шприц в правой руке, введите иглу подкожно слегка влево или вправо от linea alba ventralis в нижней половине живота.
- Протолкните иглу на 3-5 мм подкожно параллельно средней линии живота, а затем введите иглу в брюшную полость под углом 45° к коже.
- Проникнуть в брюшину, извлечь игольную пробку и медленно ввести эмульгированный PG-белок.
3. Дю-прижигание
ПРИМЕЧАНИЕ: Заранее подготовьте три наиболее важных сырья для дюкоксижения (Рисунок 1).
- Подготовьте шишки моксы. Возьмите бархат в руку, двумя ладонями, обращенными в противоположные стороны, прилагая скручивающее усилие, чтобы втереть бархат в форму веретена (Рисунок 2)
- Нарежьте имбирь небольшими кусочками и пюрируйте его в соковыжималке (рисунок 3). Процеживаем имбирное пюре через ватную марлю. Отделите имбирный сок и имбирную грязь от имбирного пюре, чтобы подготовиться к следующему шагу.
- Приготовьте 10 г имбирной грязи и 20 мл имбирного сока и разложите их по бумажным стаканчикам для последующего использования.
- Взвесьте 0,1 г порошка ТКМ (смесь порошка корицы, порошка гвоздики, порошка нотоптеригума, порошка антаридина и искусственного мускуса)22 и измельчите его в ступке.
- Поместите мышей в индукционный бокс наркозного аппарата для животных и обезболивайте их смесью 2-3% изофлурана и кислорода со скоростью потока 2 л/мин.
- Оцените глубину анестезии, наблюдая за отсутствием рефлекса испуга на начальном этапе, и проверьте уровень хирургической анестезии, проверив отсутствие педального рефлекса в ответ на легкое защемление пальца ноги.
- После того, как мышь дойдет до анестезии хирургической плоскости, достаньте ее из коробки и зафиксируйте на операционном столе в положении лежа. Совместите рот и нос мыши с выходным отверстием анестетика.
- Анестезия проводится через маску, прикрепленную к наркозному аппарату, через которую изофлуран и кислород подаются по недышащему контуру. Поддерживайте анестезию и держите мышь на грелке с температурой 37 °C в течение всей операции. Нанесите смазку на глаза, чтобы предотвратить пересыхание.
- Найдите акупунктурные точки и определите область стимуляции (рис. 4).
- Сбрейте волосы на спине мыши до тех пор, пока не станет видна кожа телесного цвета на задней части мыши. Убедитесь, что ширина удаления волос ~1,5 см, а длина от седьмого шейного позвонка до хвостового позвонка (рис. 5А).
- Нанесите приготовленный имбирный сок ватной марлей на выбритый участок (рисунок 3).
- Равномерно посыпьте порошок TCM пишущей кистью по срединной линии задней части мыши и накройте ее тутовой бумагой (рисунок 5B-D).
- Сделайте трапециевидный имбирный столбик длиной 6 см, шириной 1,5 см и толщиной 3 мм из имбирной грязи. Закрепите имбирный столбик на тутовой бумаге (рисунок 5E).
- Сделайте канавку над средней линией имбирного столбика (Рисунок 3) и поместите конус моксы на имбирный столбик.
- Зажгите конус моксы, поместив новый конус моксы после того, как сгорит предыдущий. Проверьте прочность имбирного столбика, чтобы не обжечь мышь, сжигая в общей сложности три конуса (Рисунок 5F).
- После того, как шишки моксы сгорят, сотрите имбирь и порошок TCM и очистите заднюю часть мыши. На этом этапе прекратите анестезию.
- Позвольте мыши прийти в сознание в новой клетке с неограниченным доступом к еде и воде. Поместите клетку на грелку, чтобы помочь в процессе восстановления. Наблюдайте за животным до тех пор, пока оно не придет в сознание.
- Как только мышь полностью восстановится, убедитесь в наличии рефлекса выпрямления, прежде чем возвращать ее в обычное положение.
ПРИМЕЧАНИЕ: Во время операции необходимо следить за психическим состоянием мышей, чтобы избежать слабого дыхания. Предотвратите ожоги, но держите мышей в тепле и избегайте синяков на когтях и хвосте.
4. Оценка индекса артрита (ИИ)
- Оцените оценку ИИ три раза: до моделирования, после моделирования и после лечения. Критерии оценки следующие: 0, отсутствие покраснения или отека; 1, легкое покраснение или припухлость в нескольких пальцах ног; 2, покраснение и отек большинства суставов пальцев ног и пальцев ног; 3, сильное покраснение и отек стоп и ниже голеностопного сустава; и 4, покраснение и отек стоп и голеностопного сустава23.
- Подсчитайте количество очков ИИ всех четырех лап с максимальным значением 16.
5. Тест Ротарод
ПРИМЕЧАНИЕ: Тест rotarod используется для оценки координации движений и равновесия путем регистрации времени, которое мыши проводят на вращающемся барабане. Этот эксперимент состоял из трех испытаний, разделенных 20-минутными интервалами. Официальные данные испытаний были записаны в третьем испытании, причем первые два использовались в качестве тренировочных упражнений.
- Поместите мышей на вращающиеся барабаны, которые вращаются при непрерывном ускорении от 4 до 40 об/мин в течение 300 с24.
- Измерьте время задержки (время до того, как мышь упадет со стержня). Обеспечьте набивку, чтобы предотвратить травму при падении.
6. Испытание в открытом поле (OFT)
ПРИМЕЧАНИЕ: OFT используется для оценки состояния вегетативных движений с целью выявления патологического поведения. Четыре квадратные арены открытого поля (50 см х 50 см х 40 см) были размещены вместе, чтобы сформировать снаряд. Дно ящика было разделено на девять равных квадратов.
- Контролируйте уровень фонового шума в лаборатории до уровня ниже 65 дБ.
- Протирайте весь аппарат 75% этанолом перед каждым испытанием.
- Поместите всех мышей в комнату для тестирования за 1 час до теста, чтобы дать им возможность адаптироваться к окружающей среде.
- Поместите мышей на квадратные арены открытого поля и дайте им исследовать их в течение 10 минут.
- Записывайте общее расстояние и скорость движения в течение 10 минут.
7. Эвтаназия и сбор образцов
- Поместите мышь в индукционный бокс для анестезии и обезболивайте ее смесью 2-3% изофлурана и кислорода со скоростью потока 2 л/мин. Как только мышь войдет в состояние глубокой анестезии, подтвержденное отсутствием педального рефлекса, переложите ее на операционный стол для поддерживающей анестезии.
- Возьмите и зафиксируйте мышь недоминантной рукой.
- Слегка надавите на область вокруг глаз, чтобы глазные яблоки были заложены и выпячивались.
- Используйте ножницы, чтобы подстричь усы мыши, чтобы предотвратить гемолиз, вызванный волосками.
- Подтвердите глубину анестезии, проверив отсутствие педального рефлекса в ответ на защемление пальца ноги. Используйте щипцы, чтобы захватить глазное яблоко и быстро удалить его, позволяя крови течь в микроцентрифужную пробирку из глазницы.
ПРИМЕЧАНИЕ: Также могут быть использованы альтернативные методы забора крови, такие как пункция сердца. - Когда скорость капания крови замедлится, осторожно надавите на область сердца мыши, чтобы ускорить перекачку крови и получить больше крови. Затем усыпите мышь с помощью вывиха шейки матки.
- Держите ногу чуть выше голеностопного сустава с помощью щипцов в недоминантной руке. Затем отрежьте ножку чуть выше голеностопного сустава с помощью ножниц.
8. Гистологический анализ
- Погрузите образцы лодыжки в 4% параформальдегид более чем на 24 часа. Декальцинировать в 10% ЭДТА (рН = 7,4) в течение 1 месяца.
- Образцы замочить в 4% параформальдегиде на 2 ч.
- Затем замочите образцы в градиенте возрастающей концентрации этанола (70%, 80%, 90%, 100%, 100%, 100%). Замочите каждую концентрацию этанола на 1 час.
- Замочите образцы в ксилоле на 3 ч.
- Образцы лодыжки погрузить в парафин на 7 ч. Отложите парафиновые блоки в холодильник с температурой 4 °C.
- Нарежьте парафиновые блоки до толщины 6 мкм с помощью полуавтоматической машины для резки парафина.
- Замочите ломтики на 4 x 5 минут в ксилоле, чтобы завершить депарафинизацию.
- Замочите ломтики в градиенте убывающей концентрации этанола (100%, 100%, 95%, 75%) на 2 минуты каждый. Замочить в дистиллированной воде на 2 мин.
- Срезы окрашивают гематоксилином в течение 10 мин и промывают дистиллированной водой в течение 5 с.
- Замочите ломтики на 30 с в дифференцирующей жидкости и промойте дистиллированной водой в течение 5 с.
- Прокрасьте срезы эозином в течение 1 минуты и смойте дистиллированной водой в течение 3 минут.
- Замочите ломтики в градиенте возрастающей концентрации этанола (80%, 95%, 100%, 100%) на 1 минуту каждый. Замочить в ксилоле на 3 x 3 мин и запечатать ломтики25.
9. Иммуноферментный анализ (ИФА)
- Измерьте концентрации IL-17 и TNF-α в плазме с помощью соответствующих наборов в соответствии с инструкциями производителя.
10. Статистический анализ
- Выразите данные в виде среднего значения ± стандартной ошибки среднего значения (SEM).
- Определяют значимость с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) или двустороннего повторного измерения ANOVA, а затем с помощью тестов Бонферрони или Тамхане Т2 post hoc.
- Считайте P < 0,05 статистически значимыми.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
У модельных мышей, индуцированных ПГ, развились симптомы периферического артрита, характеризующиеся покраснением и отеком конечностей и пальцев ног, и постепенно развился аксиальный артрит уже на 14-й неделе, который очень похож на проявление АС. Таким образом, мышиная модель АС считалась успешной, если индекс артрита (ИИ) был выше 3 баллов через 14 недель после последней инъекции22. Когда лапы мышей казались опухшими, обработку Du-прижиганием проводили один раз в неделю в общей сложности 3 раза. После лечения мышей усыпили вывихом шейки матки под глубоким наркозом изофлураном, собрали у них кровь и иссекли лодыжки.
Влияние Du-прижигания на моторную координацию и вегетативные движения
В качестве модели для наблюдения влияния Du-прижигания на меридиане Дю на координацию движений был принят АС, индуцированный ПГ крупного рогатого скота. Первоначально для оценки успешности модели использовалась оценка отека суставов, а координация движений и вегетативные движения оценивались с помощью ротародного теста и OFT.
Оценка ИИ определяла тяжесть периферического артрита. После моделирования двустороннее повторное измерение ANOVA показало, что показатели отека суставов в модельной группе и группе Du-прижигания значительно увеличились по сравнению с таковыми в контрольной группе до Du-прижигания (P < 0,01; Рисунок 6А). Лечение Du-прижиганием снижало баллы по поводу отека суставов по сравнению с модельной группой после Du-прижигания (P < 0,05; Рисунок 6А).
Для оценки координации движений и равновесия был использован тест rotarod. Двусторонние повторные измерения ANOVA выявили значимые различия во времени (F = 13,928, P = 0,000 < 0,05) и эффекты взаимодействия во времени и группе (F = 12,583, P = 0,000 < 0,05). После моделирования латентное время контрольной группы не отличалось от такового до моделирования. Однако после моделирования латентное время в модельной группе и группе Du-прижигания значительно уменьшилось по сравнению с контрольной группой (P < 0,01; Рисунок 6Б), и существенных различий между модельной группой и группой ду-прижигания не было (P > 0,05; Рисунок 6Б). После лечения латентное время в группе Du-прижигания достоверно увеличилось по сравнению с модельной группой (P < 0,05; Рисунок 6Б). Эти результаты показали, что Du-прижигание было эффективным в улучшении координации движений у мышей с синдромом Аспергера.
Для выявления вегетативных движений проводили ОФТ. Параметры собирались и анализировались автоматически с помощью программного обеспечения (рис. 6C-E); В этом исследовании в основном наблюдалась общая дистанция и средняя скорость. Достоверных различий в общей дистанции и средней скорости между группами до моделирования не выявлено (P > 0,05; Рисунок 6C,D). После моделирования общая дистанция и средняя скорость достоверно снизились по сравнению с контрольной группой (P < 0,05; Рисунок 6C,D). После обработки общее расстояние и средняя скорость в группе Du-прижигания достоверно увеличились по сравнению с модельной группой (P < 0,05; Рисунок 6C,D). Эти результаты показали, что Du-прижигание было эффективным в улучшении вегетативных движений у мышей с синдромом Аспергера.
Влияние прижигания дюмоксижения на патологию голеностопного сустава
Для наблюдения за патологическими изменениями в голеностопном суставе применяли окрашивание HE. В контрольной группе не было повреждений структуры синовиальной оболочки, застойных явлений в синовиальной оболочке, явной воспалительной клеточной инфильтрации и некроза. Однако в модельной группе в полости сустава наблюдались гиперплазия и инфильтрация синовиальной оболочки в дополнение к воспалительной клеточной инфильтрации и отеку тканей. В сочетании с оценкой ИИ было доказано, что модель AS была успешно создана. По сравнению с модельной группой, синовиальная оболочка мышей в группе Du-прижигания была более интактной, интерстициальный отек был уменьшен, а суставной хрящ был относительно интактным (рис. 7).
Влияние Du-прижигания на уровни IL-17 и TNF-α в плазме крови
ИФА проводили для определения IL-17 и TNF-α в плазме. Уровни IL-17 и TNF-α в плазме крови модельной группы были достоверно повышены по сравнению с контрольной группой (P < 0,01; Рисунок 6F,G). Дуприжигание снижало уровни IL-17 и TNF-α в плазме крови (P < 0,05; Рисунок 6F,G).
Рисунок 1: Сырье, необходимое для Du-образного прижигания. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 2: Изготовление конуса моксы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 3: Приготовьте имбирную воду и сделайте трапециевидный имбирный столбик. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 4: Расположение GV14 и GV2 у мыши. (А) GV14, расположенный в подостистом отростке седьмого шейного позвонка; GV2 расположен в сакральном проходе. (Б) Принципиальная схема прижигания Du на мыши. (C) Стимулированная область прижигания Du. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 5: Порядок работы Du-прижигания у мышей. (A) Сбрейте волосы и намажьте имбирный сок мышью в положении лежа. (В,В) Равномерно посыпьте порошок ТКМ. (D) Накройте порошок шелковичной бумагой. (E) Плотно закрепите имбирный столбик на шелковичной бумаге. (F) Положите конус моксы на имбирный столбик; Затем зажгите его. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 6: Влияние Du-прижигания на координацию движений, вегетативные движения и уровни IL-17 и TNF-α. (A) Оценка отека суставов у мышей. (B) Время задержки в тесте ротарод. (К-Э) Общее расстояние, средняя скорость и схема трассы ВПТ. (F) Уровни IL-17 в плазме. (G) Уровень ФНО-α в плазме. Значения выражаются в виде среднего ± SEM (n = 6). ##P < 0,01, #P < 0,05 по сравнению с контрольной группой; $$P < 0,01, $P < 0,05 по сравнению с модельной группой. Сокращения: IL = интерлейкин; TNF = фактор некроза опухоли; OFT = испытание в открытом поле. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 7: Окрашивание голеностопного сустава. (А) Полость сустава была гладкой, без воспалительной инфильтрации в контрольной группе. (Б) В модельной группе гиперплазия синовиальной оболочки и инфильтрация наблюдались в полости сустава. (В) В группе Du-прижигания суставная полость мышей была гладкой, а отек уменьшался. Масштабные линейки = 200 мкм. Аббревиатура: HE = гематоксилин-эозин. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Клинически АС проявляется в виде отека спины, поясницы и суставов, а в тяжелых случаях может возникать деформация позвоночника и ригидность суставов26. Ранняя диагностика и лечение могут улучшить качество жизни, снизить показатели инвалидности и улучшить прогнозы пациентов с АС. Согласно традиционной китайской медицине (ТКМ), считается, что АС вызывается дефицитом Ян в почках и меридиане Ду, а также накоплением холодного зла внутри. ТКМ придерживается мнения, что прижигание, основанное на концепции меридианов, может генерировать Ци, которая нагревает поверхность тела. Затем эта Ци движется вниз по меридианам и акупунктурным точкам. Во «Внутреннем каноне Хуан-ди » (очень классическом и важном шедевре ТКМ) записано, что «больной меридиан Ду лечится». Поскольку АС расположен в меридиане Дю, стимуляция меридиана Дю используется в качестве терапевтической точки. Меридиан Ду считается океаном каналов Ян, где Ян Ци достигает своего пика. Прижигание на меридиане Ду может дополнять Ян ци, активировать действие меридиана Ду и регулировать согревающий эффект Ян почек, то есть усиливать функцию иммунной регуляции западной медицины.
С точки зрения западной медицины, спинной мозг играет важную роль в передаче нервной информации. Прижигание, которое воздействует на вход и выход корешков спинномозговых нервов, может влиять на функцию и регуляторный механизм нервной системы через регуляцию нейротрансмиттеров. В 1990-х годах было показано, что Du-прижигание повышает содержание β-эндорфинов в гипоталамусе крыс, оказывая, таким образом, центральное обезболивающее действие7. Кроме того, энтезит является распространенным осложнением АС, характеризующимся постоянной болью и скованностью мышц, которые могут влиять на подвижность суставов и тела в тяжелых формах. Как клинически подтвержденный метод лечения ТКМ, Du-прижигание может эффективно облегчить воспаление, способствовать восстановлению тканей и улучшить состояние энтезита при лечении АС.
В частности, эффекты иглоукалывания и прижигания в основном отражаются в следующих аспектах. Во-первых, они способствуют кровообращению и абсорбции воспаления. Du-прижигание стимулирует кровообращение и обмен веществ в тканях, окружающих позвоночник, за счет согревающего эффекта и способствует рассасыванию воспаления и восстановлению тканей, тем самым уменьшая степень воспаления и боли при воспалении прикрепления сухожилия. Во-вторых, они улучшают мышечное и связочное напряжение. Стимулирующий эффект Du-прижигания может улучшить мышечное напряжение вокруг позвоночника, расслабить затвердевшие мягкие ткани, способствовать активности суставов позвоночника, а также уменьшить боль и скованность, вызванные мышечным напряжением и растяжением связок. Таким образом, Du-прижигание, как вспомогательная терапия, может комплексно регулировать деятельность нервной, иммунной и кровеносной систем организма, воздействуя на область позвоночника, делая организм более сбалансированным в целом.
Воспаление является основным проявлением АС27. TNF-α представляет собой мультиэффекторный цитокин-воспалительный фактор, продуцируемый при стимуляции мононуклеарных макрофагов28. Активность ЩФ и синтез коллагена могут быть ингибированы TNF-α, что приводит к потере костной массы и разрушению хряща29. В последние годы исследования показали, что IL-17 играет важную роль в патогенезе АС, что было полностью продемонстрировано в обзоре30. IL-17 может непосредственно воздействовать на остеобласты, способствовать экспрессии лиганда-активатора рецептора ядерного фактора транскрипции-κB (NF-κB) (RANKL) и способствовать устойчивой генерации остеокластов. В то же время IL-17 также влияет на мезенхимальные стволовые клетки (МСК), индуцируя их пролиферацию и способствуя их дифференцировке в остеобласты31. Kenna32 et al. обнаружили, что уровень IL-17 в периферической крови пациентов с АС увеличился почти в два раза по сравнению со здоровой контрольной группой. Исследование предполагает, что антагонисты IL-17 могут быть новым вариантом для пациентов с синдромом Аспергера, которые плохо реагируют на антагонисты TNF-α33. Клиническое исследование показало, что режим дозирования антагонистов IL-17 превосходил плацебо в отношении улучшения рентгенологических признаков и симптомов аксиального спондилоартрита у пациентов34. Результаты данного исследования показали, что уровни ФНО-α и ИЛ-17 в плазме крови в модельной группе были достоверно выше, чем в контрольной группе, а уровни ФНО-α и ИЛ-17 в плазме крови были значительно снижены после лечения прижиганием.
Дю-прижигательная терапия умело использует совместимые методы ТКМ для интеграции меридианов, акупунктурных точек, китайской фитотерапии и прижигания. Сырье для Du-прижигания в основном включало бархат мокса, имбирь и порошок ТКМ. С точки зрения ТКМ, бархат мокса, переработанный продукт полыни, обладает функцией активации коллатералей, рассеивания холода и облегчения боли. Имбирь играет роль в облегчении внешних симптомов и развеивании простуды. Современные исследования также показывают, что имбирь обладает противовоспалительными и обезболивающими свойствами35. Протирание кожи соком имбиря перед процедурой помогает открыть поры и способствовать трансдермальному проникновению36, а также помогает порошку ТКМ прилипнуть к коже. Трапециевидный имбирный столбик прочно закреплен на спине, чтобы обеспечить прочную основу для конуса моксы. После сжигания конуса моксы эффекты огневой мощи, имбиря и порошка ТКМ работают вместе на меридиане Дю. Учитывая патогенез дефицита Ян при этом заболевании, Ду-прижигание непосредственно воздействует на очаг заболевания, согревая меридианы, рассеивая холод, дополняя Ян Ци и эссенцию, способствуя кровообращению и уравновешивая Инь и Ян для лечения корня болезни.
При проведении Du-прижигания следует учитывать несколько деталей. Сначала фиксируется место операции Du-прижигания, от точки Дачжуй (GV14) до точки Яошу (GV2) (анатомически от7-го остистого отростка шейного отдела позвоночника до хвостового позвонка, включая весь позвоночник), что согласуется с местом возникновения АС (рис. 4). Во-вторых, важна влажность и толщина имбиря. Излишки имбирного сока должны быть отжаты после того, как имбирь будет переработан в имбирную грязь, чтобы имбирная грязь не имела зернистого ощущения, а ее толщина подходила для превращения в трапециевидный столб имбиря. Высокая влажность и влажность имбирной грязи могут легко затруднить проникновение огня прижигания и уменьшить количество стимуляции прижигания. Если имбирное сырье слишком сухое, а частицы слишком крупные, трудно сделать трапециевидный имбирный столбик, что приводит к быстрому проникновению тепла и ожогу кожи. В-третьих, следует учитывать размер и твердость конуса моксы. Шишки Moxa, используемые для прижигания у мышей, имеют длину ~4 см и диаметр 0,5 см и должны быть плотными на момент приготовления. Испытание на герметичность заключается в том, что конус не распутывается даже после падения на поверхность. Если конус моксы недостаточно компактен, это приведет к уменьшению количества бархата моксы, сокращению времени горения и снижению огневой мощи. В-четвертых, при розжиге конуса моксы голова, середина и хвост конуса моксы должны быть освещены тонким благовонием, чтобы конус моксы горел медленно и достигал питательного эффекта приливов и отливов. В-пятых, мускус является важным ингредиентом лекарственного порошка прижигания. На вторые сутки после прижигания на меридиане Дю должны появиться кристально чистые волдыри, похожие на маленькие жемчужины.
Большое количество клинических исследований подтвердило определенную эффективность Du-прижигания при лечении AS 4,5,6. Однако исследования механизма его действия в экспериментах на животных продвигаются медленно. Благодаря исследованиям и инновациям, многолетнему опыту в работе Du-прижигания мы изучили его использование в экспериментах на мышах. В данной работе подробно описаны операционные процедуры и меры предосторожности Du-прижигания при лечении АС у подопытных мышей. Кроме того, наблюдалось влияние прижигания на координацию движений и уровни ФНО-α и ИЛ-17 в плазме крови у мышей с АС. Данное исследование послужило основной экспериментальной базой для изучения механизма Du-прижигания при лечении АС. В этом исследовании все еще есть некоторые ограничения. Например, в будущих исследованиях мы будем уделять внимание оценке различных параметров, таких как прижигание плацебо, доза, диапазон и время лечения, чтобы получить наиболее эффективные комбинированные схемы. В более поздних исследованиях методы визуализации могут быть использованы для оценки результатов лечения более интуитивно понятным способом.
Перспектива применения Du-прижигания многообещающая. Меридиан Ду, известный как Сосуд Губернатора, играет решающую роль в регулировании потока Ци и крови по всему телу. Прижигание, традиционная китайская терапия, включает в себя сжигание полыни на определенных акупунктурных точках, чтобы стимулировать меридианы и способствовать механизму самовосстановления организма. По сравнению с иглоукалыванием, Du-прижигание представляет собой комбинацию различных техник, воздействующих на поверхность тела, которая обладает характеристиками комфорта и сильным и широким спектром действия. Кроме того, терапия Du-прижиганием фокусируется на спине и позвоночнике, воздействуя на путь меридиана Du. Он может укрепить иммунную систему организма, улучшить кровообращение и облегчить различные физические и психические состояния. Терапия продемонстрировала свою эффективность при лечении таких заболеваний, как заболевания опорно-двигательного аппарата, неврологические состояния, гинекологические расстройства и проблемы с психическим здоровьем. Ожидается, что с развитием исследований и технологий применение Du-прижигания будет расширяться и дальше. Будущие исследования могут изучить его потенциал в таких областях, как обезболивание, снижение стресса, расстройства пищеварения и респираторные заболевания. Сочетание традиционных знаний и современного научного понимания может привести к лучшей интеграции Du-прижигания в основную практику здравоохранения. В заключение, Du-прижигательная терапия имеет большие перспективы в своем применении и интеграции в различные области здравоохранения. Дальнейшие исследования, клинические испытания и сотрудничество между практиками традиционной китайской медицины и современными медицинскими работниками необходимы для полного раскрытия его потенциала.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
У авторов нет конфликта интересов, о котором можно было бы заявлять.
Acknowledgments
Эта работа была поддержана Общей программой Национального фонда естественных наук Китая (No 82174491) и Академической школой наследования Школы традиционной китайской медицины Цилу (No 82174491). Лу Вэйхань [2020]132). Спасибо Центру лабораторных животных Шаньдунского университета традиционной китайской медицины за предоставление нам экспериментальных условий.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10% EDTA | Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| alcohol pads | HYNAUT, Qingdao Hainuo Biological Engineering Co., LTD, Qingdao, China | ||
| anesthesia machine | Medical Supplies & Services INT. LTD, Keighley, UK | ||
| centrifuge tubes | Axygen, Corning, NewYork, UAS | ||
| complete Frech's adjuvant (CFA) | aladdin,Shanghai, China | F393378 | |
| cotton ball | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd.,Xinxiang, China | ||
| cotton gauze | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd.,Xinxiang, China | ||
| cutting board | self-preparation | ||
| decorin from bovine articular cartilage | Sigma-Aldrich, MO, USA | D8428 | |
| depilatory cream | Veet, Reckitt Benckiser (China) Investment Co. LTD, Shanghai, China | ||
| electronic scale | Shanghai Yajin Electronic Technology Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| Eppendorf tube | Axygen, Corning, NewYork, UAS | ||
| eye lubricant | Beijing Shuangji Pharmaceutical Co., LTD., Beijing, China | ||
| ginger | self-preparation | ||
| GraphPad Prism 7 software | GraphPad Software,Boston, USA | ||
| hair clipper | Super human Group CO LTD, Jinhua, China | ||
| heating pads | Shenzhen Leshuo Tech Co., Ltd.,Shenzhen, China | ||
| incomplete Freund’s adjuvant (IFA) | aladdin,Shanghai, China | F393371 | |
| injection syringe | Shandong Xinhua Ande Medical Supplies Co., LTD, Zibo, China | ||
| isoflurane | Shenzhen Rayward Life Technology Co., LTD, Shenzhen, China | R510-22-10 | |
| joss stick | Shijiazhuang Lidu Fragrant Industry Co., LTD.,Shijiazhuang, China | ||
| juicer | Braun (Shanghai) Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| knife | self-preparation | ||
| lighter | Zhejiang tiger-lighter Co. LTD | ||
| mortar | Luoyang Yinai Ceramic Technology Co., LTD.,Luoyang, China | ||
| Mouse IL-17 ELISA Kit | absin, Shanghai, China | abs520009-96T | |
| Mouse TNF-α ELISA Kit | Wuhan Sanying, Wuhan, China | KE10002 | |
| mulberry paper | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, China | ||
| OFT | Xinruan,Shanghai, China | XR-XZ301 | |
| paper cup | self-preparation | ||
| pipettes | OXFORD BIO INSTRUMENTS INC.,Oxford, UK | ||
| refined moxa velvet | self-preparation | ||
| rotarod | Xinruan,Shanghai, China | XR-6C | |
| scientz-48L cryogenic high throughput tissue grinder | Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., LTD | ||
| scissors | Shandong Jiaren Medical Supplies Co., Ltd., Zibo, China | ||
| semi-automatic paraffin sectioning machine | Leica Camera AG, Watznach, Germany | ||
| SPSS 25.0 software | International Business Machines Corporation, NewYork, UAS | ||
| TCM powder | self-preparation | ||
| tips | Biosharp, Labgic, Beijing, China | ||
| writing brush | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, China |
References
- Sieper, J., Poddubnyy, D.
- Lee, W., Reveille, J. D., Weisman, M. H. Women with ankylosing spondylitis: a review. Arthritis Rheum. 59 (3), 449-454 (2008).
- Sari, İ, Öztürk, M. A., Akkoç, N.
- Zhang, L., et al. Governor vessel moxibustion: Ancient Chinese medical technology with new vitality. Chin J Integr Med. 23 (5), 396-400 (2017).
- Hu, J., et al. Moxibustion for the treatment of ankylosing spondylitis: a systematic review and meta-analysis. Ann Palliat Med. 9 (3), 709-720 (2020).
- Liu, Y., Wang, P., Sun, Y. Y., Qu, J., Li, M. Efficacy of thunder-fire moxibustion in treating ankylosing spondylitis of kidney deficiency and governor meridian cold and its influence on TNF-α and RANKL: study protocol for a prospective, nonblinded, single-center, randomized controlled trial. Trials. 23 (1), 344 (2022).
- Chong, G. Q., Ma, Y., Sun, H. S., Zhang, T., Peng, W. Study on clinical and analgesic mechanism of moxibustion in the treatment of ankylosing spondylitis. J Clin Acupunct Moxib. (06), 48-49 (1999).
- Liu, W. Q., Lu, X. H. Clinical observation of Melilotus extract tablets combined with Dujiu for treating ankylosing spondylitis. Pharm Res. 35 (03), 182-184 (2016).
- Zhang, Y. L., Lin, J. H., Zhou, Y. Y., Zhao, G. Q., He, Y. T. Clinical observation of Bushen Qiangdu Zhilou decoction combined Du-moxibustion in treating ankylosing spondylitis. Chin J Exp Tradit Med Formulae. 21 (10), 190-194 (2015).
- Guo, L. J., et al. Clinical effect of moxibustion at governor vessel combined with Bushen Quhan Huashi prescription for ankylosing spondylitis and its effect on levels of CTX-I and DKK1 in serum. New Chin Med. 53 (10), 117-121 (2021).
- Deng, Y. X. Governor moxibustion treatment of ankylosing spondylitis the adjustment of the T-cell subsets observed. J Practical Tradi Chin Inter Med. 26 (18), 77-78 (2012).
- Wang, Y. Q. Mechanism of exercise combined with moxibustion in the treatment of osteoporosis in castrated rats. Chin J Gerontol. 37 (04), 839-840 (2017).
- Ren, J. Y., Li, F., Yan, J., Wan, C., Cai, L. Clinical study of Du-moxibustion combined with needling Huatuo Jiaji acupoint in the treatment of AS of kidney-Yang deficiency. J Clin Acupunct Moxib. 35 (06), 41-44 (2019).
- Xu, X., et al. Metabolomic analysis of biochemical changes in the tissue and urine of proteoglycan-induced spondylitis in mice after treatment with moxibustion. Integr Med Res. 10 (1), 100428 (2021).
- Xu, X., et al. Moxibustion attenuates inflammation and alleviates axial spondyloarthritis in mice: Possible role of APOE in the inhibition of the Wnt pathway. J Tradit Complement Med. 12 (5), 518-528 (2022).
- Li, X., et al. Inflammation intensity-dependent expression of osteoinductive wnt proteins is critical for ectopic new bone formation in ankylosing spondylitis. Arthritis Rheum. 70, 1056-1070 (2018).
- Cui, H., et al. CXCL12/CXCR4-Rac1-mediated migration of osteogenic precursor cells contributes to pathological new bone formation in ankylosing spondylitis. Sci Adv. 8 (14), eabl8054 (2022).
- Braem, K., Lories, R. J. Insights into the pathophysiology of ankylosing spondylitis: contributions from animal models. Joint Bone Spine. 79 (3), 243-248 (2012).
- Mikecz, K., Glant, T. T., Poole, A. R. Immunity to cartilage proteoglycans in BALB/c mice with progressive polyarthritis and ankylosing spondylitis induced by injection of human cartilage proteoglycan. Arthritis Rheum. 30, 306-318 (1987).
- Li, Z., et al. Tenascin-C-mediated suppression of extracellular matrix adhesion force promotes entheseal new bone formation through activation of Hippo signalling in ankylosing spondylitis. Ann Rheum Dis. 80 (7), 891-902 (2021).
- Glant, T. T., Cs-Szabo´, G., Nagase, H., Jacobs, J. J., Mikecz, K. Progressive polyarthritis induced in BALB/c mice by aggrecan from human osteoarthritis cartilage. Arthritis Rheum. 41, 1007-1018 (1998).
- Hu, B., Li, Y., Tan, J. Research progress of moxibustion in the treatment of ankylosing spondylitis. Rheum & Arthritis. 11 (05), 77-80 (2022).
- Yang, Y., Dong, Q., Li, R. Matrine induces the apoptosis of fibroblast-like synoviocytes derived from rats with collagen-induced arthritis by suppressing the activation of the JAK/STAT signaling pathway. Int J Mol Med. 39 (2), 307-316 (2017).
- Shiotsuki, H., et al. A rotarod test for evaluation of motor skill learning. J Neurosci Methods. 189 (2), 180-185 (2010).
- Liu, P., et al. A mouse model of ankle-subtalar joint complex instability induced post-traumatic osteoarthritis. J Orthop Surg Res. 16 (1), 541 (2021).
- Taurog, J. D., Chhabra, A., Colbert, R. A. Ankylosing spondylitis and axial spondyloarthritis. N. Engl. J. Med. 374, 2563-2574 (2016).
- Schett, G., et al. Enthesitis: From pathophysiology to treatment. Nat. Rev. Rheumatol. 13, 731-741 (2017).
- Duan, W. X., et al. Effect of different concentrations of Moxa-smoke on lung function and TNF-α and IL-1 β levels in serum and lung tissues in normal rats. Zhen Ci Yan Jiu [Acupuncture Research]. 43 (2), 98-103 (2018).
- Callhoff, J., Sieper, J., Weiß, A., Zink, A., Listing, J. Efficacy of TNFα blockers in patients with ankylosing spondylitis and non-radiographic axial spondyloarthritis: a meta-analysis. Ann Rheum Dis. 74 (6), 1241-1248 (2015).
- Schinocca, C., et al. Role of the IL-23/IL-17 pathway in rheumatic diseases: an overview. Front Immunol. 12, 637829 (2021).
- Gravallese, E. M., Schett, G. Effects of the IL-23-IL-17 pathway on bone in spondyloarthritis. Nat Rev Rheumatol. 14 (11), 631-640 (2018).
- Kenna, T. J., et al. Enrichment of circulating interleukin-17-secreting interleukin-23 receptor-positive γ/δ T cells in patients with active ankylosing spondylitis. Arthritis Rheum. 64 (5), 1420-1429 (2012).
- Poddubnyy, D., Sieper, J. Treatment of axial spondyloarthritis: what does the future hold. Curr Rheumatol Rep. 22 (9), 47 (2020).
- van der, H. D., et al. COAST-V study group. Ixekizumab, an interleukin-17A antagonist in the treatment of ankylosing spondylitis or radiographic axial spondyloarthritis in patients previously untreated with biological disease-modifying anti-rheumatic drugs (COAST-V): 16 week results of a phase 3 randomised, double-blind, active-controlled and placebo-controlled. Lancet. 392 (10163), 2441-2451 (2018).
- Fu, Y. S., et al. Pharmacological properties and underlying mechanisms of curcumin and prospects in medicinal potential. Biomed Pharmacother. 141, 111888 (2021).
- Hassan, A. S., Hofni, A., Abourehab, M. A. S., Abdel-Rahman, I. A. M. Ginger extract-loaded transethosomes for effective transdermal permeation and anti-inflammation in rat model. Int J Nanomedicine. 18, 1259-1280 (2023).
