수컷을 위한 풍요로움: 수컷 예쁜꼬마선충의 재고 유지

Abstract

출처: Singaravelu, G., et al. Caenorhabditis elegans 정자의 격리 및 체외 활성화. J. Vis. 특급 (2011).

선충은 실험실에서 쉽게 번식할 수 있습니다--부분적으로는 자웅동체가 자가 수정을 통해 번식할 수 있기 때문입니다. 그러나, 유전자 교배 및 기타 실험은 많은 수의 수컷을 필요로 할 수 있습니다. 이 비디오는 수컷 예쁜꼬마선충을 위해 풍부하게 하는 방법을 설명합니다.

Protocol

이 프로토콜은 Singaravelu et al, Caenorhabditis elegans Sperm의 격리 및 체외 활성화, J. Vis. Exp. (2011).

1. 남성 인구의 풍부화

1. 실험의 필요성에 따라 다음 전략 중 하나를 사용하여 많은 수의 수컷을 얻을 수 있습니다.
   1. NGM 플레이트의 중앙에 씨를 뿌린 OP50의 작은 잔디밭에서 5 마리의 야생형 수컷과 1 마리의 자웅동체를 교배하여 야생형 수컷의 많은 개체군을 얻을 수 있습니다. 다음 세대의 약 50%는 야생형 수컷이 될 것입니다.
   2. Him-5(E1490) 또는 Him-8(E1489) 자웅동체는 많은 수의 수컷을 던집니다. Him-5와 Him-8 수컷은 생식력이 있으며 정자의 형태와 기능에는 명백한 결함이 없습니다. 따라서 him-5 또는 him-8 수컷은 많은 실험에서 야생형 수컷 대신 사용할 수 있습니다.

2. 남성의 식별 및 격리

1. 지렁이의 꼬리 형태를 조사하십시오.수컷 지렁이의 꼬리는 둥글다.
2. L4 단계 수컷을 선택하여 E. coli OP50이 파종된 NGM 플레이트로 옮기고 하루나 이틀 동안 자라게 합니다. 자웅동체가 없는 상태에서 성장하는 독신 남성은 정자의 손실을 방지하므로 실험 과정에서 많은 수의 정자를 사용할 수 있습니다.