Обогащение для самцов: поддержание поголовья самцов C. elegans

Abstract

Источник: Singaravelu, G., et al. Выделение и активация in vitro сперматозоидов Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2011).

Нематоды могут быть легко размножены в лаборатории-- отчасти потому, что гермафродиты могут размножаться путем самооплодотворения. Однако, генетические скрещивания и другие эксперименты могут потребовать большого количества самцов. Это видео описывает метод обогащения для самцов C. elegans.

Protocol

Этот протокол является выдержкой из Singaravelu et al, Isolation and in vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm, J. Vis. Exp. (2011).

1. Обогащение мужского населения

1. В зависимости от экспериментальной необходимости, большое количество самцов может быть получено с помощью одной из следующих стратегий:
   1. большая популяция самцов дикого типа может быть получена путем скрещивания 5 самцов дикого типа и 1 гермафродита на небольшой лужайке OP50, засеянной в центре пластины NGM. Примерно 50% последующего поколения будут самцами дикого типа.
   2. HIM-5(E1490) или HIM-8(E1489) Гермафродиты выбрасывают большое количество самцов. Самцы HIM-5 и HIM-8 фертильны, и нет явных дефектов в морфологии и функции сперматозоидов. Таким образом, самцы him-5 или him-8 могут быть использованы вместо самцов дикого типа для многих экспериментов.

2. Идентификация и изоляция самцов

1. Изучите морфологию хвоста червей, хвост самца червя округлый.
2. Выберите самцов стадии L4 и перенесите их в тарелку NGM, засеянную E. coli OP50, и дайте им расти в течение дня или двух. Выращивание безбрачных самцов в отсутствие гермафродитов предотвращает потерю сперматозоидов, и, таким образом, большое количество сперматид будет доступно во время экспериментальной процедуры.