富集雄性：维持秀丽隐杆线虫（C. elegans）雄性品系

Abstract

来源：Singaravelu, G.，等。 分离与 体外 激活 秀丽隐杆线虫 精子. 视频实验杂志 (2011).

线虫在实验室中易于繁殖——部分原因是其雌雄同体可通过自体受精进行繁殖。 然而，遗传杂交及其他实验可能需要大量雄性个体。 本视频介绍了一种富集雄性 C. elegans 的方法。

Protocol

本方案节选自 Singaravelu 等, 分离与 体外 激活 秀丽隐杆线虫 精子, J. Vis. Exp. (2011).

1. 雄性群体的富集

1. 根据实验需求，可通过以下策略之一获得大量雄性个体：
   1. 通过将5只野生型雄虫与1只雌雄同体虫在NGM平板中央接种的小片OP50菌苔上交配，可获得大量野生型雄虫。下一代中约有50%为野生型雄虫。
   2. him-5(e1490）或 him-8(e1489) 雌雄同体产生大量雄性个体。 him-5 和 him-8 雄性具有生育能力，且精子形态和功能无明显缺陷。因此， him-5 或 him-8 雄性可用于 取而代之 许多实验所需的野生型雄性个体。

2. 雄性的鉴定与分离

1. 检查蠕虫的尾部形态；雄性蠕虫的尾部呈圆形。
2. 挑选L4期雄虫，转移至接种有细菌的NGM平板 大肠杆菌 OP50 并培养一至两天。在无雌雄同体线虫的条件下培养雄虫，可防止精子丢失，从而在实验过程中获得较大量的精子细胞。