Enrichissant pour les mâles : Maintien d’un stock de mâles C. elegans

Overview

Les nématodes peuvent se propager facilement en laboratoire, en partie parce que les hermaphrodites peuvent se reproduire par auto-fécondation.  Cependant, les croisements génétiques et d’autres expériences peuvent nécessiter un grand nombre de mâles.  Cette vidéo décrit une méthode à enrichir pour le mâle C. elegans.

Protocol

Ce protocole est un extrait de Singaravelu et coll., Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm, J. Vis. Exp. (2011).

1. Enrichissement de la population masculine

1. Selon les besoins expérimentaux, un grand nombre d’hommes peuvent être obtenus en utilisant l’une des stratégies suivantes :
   1. une grande population de mâles de type sauvage peut être obtenue en croisant 5 mâles de type sauvage et 1 hermaphrodite sur une petite pelouse d’OP50 ensemencée au centre de la plaque NGM. Environ 50 % de la génération suivante sera de type sauvage mâle.
   2. him-5(e1490) ou him-8(e1489) hermaphrodites jeter un grand nombre de mâles. lui-5 et lui-8 mâles sont fertiles et il n’y a aucun défaut évident dans la morphologie et la fonction de sperme. Ainsi, lui-5 ou lui-8 mâles peuvent être utilisés à la place des mâles sauvages de type pour de nombreuses expériences.

2. Identification et isolement des hommes

1. Examiner la morphologie de la queue des vers; la queue du ver mâle est arrondie.
2. Choisissez les mâles de stade L4 et transférez-les dans une plaque NGM ensemencée avec E. coli OP50 et laissez-les pousser pendant un jour ou deux. La croissance des mâles célibataires en l’absence d’hermaphrodites prévenir la perte de sperme et donc un grand nombre de spermatatidés seraient disponibles au cours de la procédure expérimentale.