ج. ايليجانس اختبار البقاء على قيد الحياة: اختبار سمية قصير المدى

Abstract

المصدر: Possik ، E. and Pause ، A. قياس مقاومة الإجهاد التأكسدي ل Caenorhabditis elegans في 96 بئر من ألواح Microtiter Plates.J. Vis. إكسب. (2015).

يقدم هذا الفيديو مقايسة البقاء على قيد الحياة قصيرة المدى التي تختبر علاجا للسمية الحادة أو تختبر سلالة وراثية لمقاومة حالة سامة. يوضح بروتوكول المثال مثالا لاختبار البقاء على قيد الحياة حيث يتم اختبار الديدان لقدرتها على مقاومة الإجهاد التأكسدي الناجم عن الباراكوات (PQ).

Protocol

هذا البروتوكول هو مقتطف من Possik and Pause ، قياس مقاومة الإجهاد التأكسدي ل Caenorhabditis elegans في 96 بئر Microtiter Plates ، J. Vis. Exp.(2015).

1. إجراء فحص مقاومة الإجهاد التأكسدي

1. الماصة 40 ميكرولتر من محلول PQ 100 ملي (محضر طازجا) لكل بئر من صفيحة 96 بئر. استخدم ما لا يقل عن 12 بئرا كتكرار لكل حالة (علاج ، متحولة ، إلخ). باستخدام معول دودة الأسلاك البلاتينية ، انقل 5-8 يرقات L4 إلى كل بئر تشير إلى وقت البدء ووقت الانتهاء.
2. عند بدء حالة أخرى، لاحظ وقت البدء ووقت الانتهاء. ضع اللوحة عند 20 درجة مئوية في وقت الحضانة بين نقل الديدان وتسجيل النافقة بعد ساعة من وقت البدء.
3. باستخدام مجهر التشريح ، عد البقاء على قيد الحياة كل ساعة. رج الطبق برفق قبل البدء في العد. أشر إلى الديدان التي لا تتحرك ، حتى بعد اكتشاف ضوء عالي الكثافة ، كحيوانات ميتة. حدد أيضا عدد على قيد الحياة.
   <فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: يساعد النظر إلى شكل الدودة وذيولها وحركة الرأس بتكبير عال في تحديد الديدان الميتة من الأحياء.
4. كرر هذه الخطوة كل ساعة حتى تموت معظم الديدان.

2. تحديد نسبة البقاء على قيد الحياة في كل نقطة زمنية

1. احسب العدد الإجمالي للحيوانات لكل حالة عن طريق إضافة العدد الإجمالي للحيوانات المنقولة إلى كل بئر. تجاهل التي تضررت أو تقتل عند النقل.
2. لكل نقطة زمنية ، احسب العدد الإجمالي للحيوانات النافقة لكل حالة (مجموع النافقة في 12 بئرا). لكل نقطة زمنية ، احسب النسبة المئوية للوفاة (عدد النافقة مقسوما على العدد الإجمالي للحيوانات ومضروبا في 100) والنسبة المئوية للبقاء على قيد الحياة (100 ناقص النسبة المئوية للوفاة).
3. كرر هذا الاختبار 3 مرات مستقلة على الأقل.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments ديسكفري v8 مجهر زايس ستيريو زييس 96 لوحة ميكروتيتر واضحة جيدا