यह प्रोटोकॉल पोसिक और ठहराव का एक अंश है, जो 96-वेल माइक्रोटिटर प्लेट्स, जे विस एक्सपी (2015) में कैनोरहैब्डिटिस एलिगेंस के ऑक्सीडेटिव तनाव प्रतिरोध को मापता है।
1. ऑक्सीडेटिव तनाव प्रतिरोध परख का प्रदर्शन
- एक 96 अच्छी तरह से प्लेट के हर कुएं के लिए 100 m M PQ समाधान (तैयार ताजा) के पिपेट 40 माइक्रोन। हर स्थिति (उपचार, उत्परिवर्ती, आदि) की प्रतिकृति के रूप में कम से कम 12 कुओं का उपयोग करें। प्लेटिनम वायर वर्म पिक का उपयोग करके, 5-8 लार्वा जानवरों को हर अच्छी तरह से स्थानांतरित करें जो शुरुआत के समय और अंत समय का संकेत देता है।
- एक और शर्त शुरू करते समय, प्रारंभ समय और अंत समय पर ध्यान दें। कीड़े को स्थानांतरित करने और शुरू समय से एक घंटे बाद मृत जानवरों स्कोरिंग के बीच इनक्यूबेशन समय में 20 डिग्री सेल्सियस पर थाली रखें ।
- विच्छेदन माइक्रोस्कोप का उपयोग करना, हर घंटे अस्तित्व गिनती। गिनती शुरू करने से पहले धीरे से थाली हिला। मृत जानवरों के रूप में, उच्च तीव्रता वाले प्रकाश को खोलना के बाद भी, ऐसे कीड़े इंगित करें जो आगे नहीं बढ़ते हैं। साथ ही यह भी बताया कि जीवित जानवरों की संख्या कितनी है।
नोट: उच्च आवर्धन पर कृमि के आकार, पूंछ और सिर आंदोलन को देखते हुए, जीवित से मृत कीड़े का निर्धारण करने में मदद करें।
- इस कदम को हर घंटे दोहराएं जब तक कि अधिकांश कीड़े मर न जाएं।
2. हर समय बिंदु पर अस्तित्व प्रतिशत का निर्धारण
- हर कुएं में स्थानांतरित जानवरों की कुल संख्या को जोड़कर प्रति शर्त जानवरों की कुल संख्या की गणना करें। उन जानवरों पर ध्यान न दें जो स्थानांतरण पर क्षतिग्रस्त या मारे जाते हैं।
- हर बार बिंदु के लिए, प्रति स्थिति मृत जानवरों की कुल संख्या की गणना करें (12 कुओं में मृत जानवरों की राशि)। हर बार बिंदु के लिए, मृत्यु के प्रतिशत की गणना करें (मृत जानवरों की संख्या जानवरों की कुल संख्या से विभाजित है और 100 से गुणा की गई है) और जीवित रहने का प्रतिशत (100 शून्य प्रतिशत मृत्यु)।
- इस परख को कम से कम 3 स्वतंत्र बार दोहराएं।
