C.エレガンス 生存アッセイ:短期毒性試験

Overview

このビデオでは、急性毒性の治療をテストしたり、毒性条件に対する耐性について遺伝的株をテストする短期生存アッセイを紹介します。 このプロトコルの例は、パラコート(PQ)によって誘導される酸化ストレスに抵抗する能力について、ワームが試験される生存アッセイの例を示す。

Protocol

このプロトコルは、ポシクとポーズからの抜粋であり、96ウェルマイクロタイタープレート、J.Vis.Exp.(2015)におけるカエノハブディティスエレガンスの酸化ストレス耐性を測定する。

1. 酸化ストレス抵抗アッセイの実行

1. ピペット40 μlの100 mM PQ溶液(フレッシュ)を96ウェルプレートの全ウェルに。すべての状態(治療、突然変異体など)の複製として少なくとも12のウェルを使用してください。プラチナワイヤーワームピックを使用して、開始時間と終了時間を示すすべての井戸に5-8 L4幼虫動物を転送します。
2. 別の条件を開始する場合は、開始時刻と終了時刻をメモします。ワームを移し、開始時刻から1時間後に死んだ動物を採点する間のインキュベーション時間にプレートを20°Cに置きます。
3. 解剖顕微鏡を使用して、生存時間をカウントします。カウントを開始する前に、プレートをそっと振ります。高強度の光を見つけた後でも、動かないワームを死んだ動物として示す。また、生きている動物の数を示す。
   注: 高倍率でワームの形、尾、頭の動きを見て、生きているから死んだワームを決定するのに役立ちます。
4. ほとんどのワームが死ぬまで、この手順を 1 時間ごとに繰り返します。

2. 各時点での生存率の決定

1. すべての井戸に移動した動物の総数を加算して、条件ごとの動物の総数を計算します。移動時に損傷を受けたり殺されたりした動物は無視してください。
2. 各時点について、条件ごとの死んだ動物の合計数(12の井戸の死んだ動物の合計)を計算します。各時点で、死亡率(死んだ動物の数を動物の総数で割り、100を掛けた)と生存率(100-死亡率)を計算します。
3. このアッセイを少なくとも3回独立した回数繰り返す。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Discovery v8 stereo zeiss microscope	Zeiss
96 well clear microtiter plate