C. elegans Overlevingstest: een toxiciteitstest op korte termijn

Overview

Deze video introduceert een overlevingstest op korte termijn die een behandeling op acute toxiciteit test of een genetische stam test op resistentie tegen een toxische aandoening.  Het voorbeeldprotocol toont een voorbeeld overlevingstest waarbij wormen worden getest op hun vermogen om oxidatieve stress veroorzaakt door paraquat (PQ) te weerstaan.

Protocol

Dit protocol is een fragment uit Possik and Pause, Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates, J. Vis. Exp. (2015).

1. Het uitvoeren van de oxidatieve stressbestendigheidstest

1. Pipet 40 μl van de 100 mM PQ-oplossing (vers bereid) op elke put van een 96-putplaat. Gebruik ten minste 12 putten als replica's van elke aandoening (behandeling, mutant, enz.). Breng met behulp van een platinadraadwormpriem 5-8 L4-larven over naar elke put die de begin- en eindtijd aangeeft.
2. Let bij het starten van een andere voorwaarde op de begin- en eindtijd. Plaats de plaat op 20 °C in de incubatietijd tussen het overbrengen van de wormen en het scoren van dode dieren een uur later vanaf de starttijd.
3. Tel met behulp van de ontleedmicroscoop de overleving elke uur. Schud de plaat voorzichtig voordat u begint te tellen. Geef wormen aan die niet bewegen, zelfs niet na het spotten van een licht met hoge intensiteit, als dode dieren. Geef ook het aantal levende dieren aan.
   OPMERKING: Kijkend naar wormvorm, staarten en hoofdbeweging bij hoge vergroting, helpen dode wormen levend te bepalen.
4. Herhaal deze stap elk uur totdat de meeste wormen dood zijn.

2. Bepaling van het overlevingspercentage op elk moment

1. Bereken het totale aantal dieren per toestand door het totale aantal dieren dat naar elke put is overgebracht, op te tellen. Negeer de dieren die beschadigd of gedood worden bij overdracht.
2. Bereken voor elk tijdspunt het totale aantal dode dieren per toestand (som van dode dieren in de 12 putten). Bereken voor elk tijdstip het percentage van de dood (aantal dode dieren gedeeld door het totale aantal dieren en vermenigvuldigd met 100) en het percentage overleving (100 min procent sterfte).
3. Herhaal deze test ten minste 3 onafhankelijke keren.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Discovery v8 stereo zeiss microscope	Zeiss
96 well clear microtiter plate