C. elegans Test de survie : un test de toxicité à court terme

Overview

Cette vidéo présente un test de survie à court terme qui teste un traitement pour la toxicité aiguë ou teste une souche génétique pour la résistance à une condition toxique.  Le protocole d’exemple montre un exemple d’analyse de survie dans lequel les vers sont testés pour leur capacité à résister au stress oxydatif induit par le paraquat (PQ).

Protocol

Ce protocole est un extrait de Possik et Pause, Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates, J. Vis. Exp. (2015).

1. Effectuer l’essai oxydatif de résistance au stress

1. Pipette 40 μl de la solution PQ de 100 mM (préparée fraîchement) à chaque puits d’une plaque de puits de 96. Utilisez au moins 12 puits comme répliques de chaque condition (traitement, mutant, etc.). À l’aide d’un pic de ver fil de platine, transférez 5-8 larves d’animaux larves L4 à chaque puits indiquant l’heure de début et l’heure de fin.
2. Lorsque vous démarrez une autre condition, notez l’heure de début et l’heure de fin. Placez la plaque à 20 °C dans le temps d’incubation entre le transfert des vers et la notation des animaux morts une heure plus tard à partir de l’heure de début.
3. À l’aide du microscope disséquant, comptez la survie toutes les heures. Agiter délicatement la plaque avant de commencer à compter. Indiquez les vers qui ne bougent pas, même après avoir vu une lumière de haute intensité, comme des animaux morts. Indiquez également le nombre d’animaux vivants.
   REMARQUE: En regardant la forme du ver, la queue et le mouvement de la tête à grossissement élevé, aider à déterminer les vers morts de vie.
4. Répétez cette étape toutes les heures jusqu’à ce que la plupart des vers soient morts.

2. Détermination du pourcentage de survie à chaque point de temps

1. Calculez le nombre total d’animaux par condition en ajoutant le nombre total d’animaux transférés à chaque puits. Ignorer les animaux qui sont endommagés ou tués lors du transfert.
2. Pour chaque point de temps, calculer le nombre total d’animaux morts par condition (somme d’animaux morts dans les 12 puits). Pour chaque point de temps, calculer le pourcentage de décès (nombre d’animaux morts divisé par le nombre total d’animaux et multiplié par 100) et le pourcentage de survie (100 moins pour cent de décès).
3. Répétez cet essai au moins 3 fois indépendante.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Discovery v8 stereo zeiss microscope	Zeiss
96 well clear microtiter plate