C. elegans Survival Assay: Ein kurzfristiger Toxizitätstest

Overview

Dieses Video stellt einen kurzfristigen Überlebenstest vor, der eine Behandlung auf akute Toxizität oder einen genetischen Stamm auf Resistenz gegen einen toxischen Zustand testet.  Das Beispielprotokoll zeigt einen Beispiel-Überlebenstest, bei dem Würmer auf ihre Fähigkeit getestet werden, oxidativem Stress zu widerstehen, der durch Paraquat (PQ) induziert wird.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Possik und Pause, Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates, J. Vis. Exp. (2015).

1. Durchführung des Oxidativen Stressresistenz-Assays

1. Pipette 40 l der 100 mM PQ-Lösung (frisch zubereitet) an jeden Brunnen einer 96-Well-Platte. Verwenden Sie mindestens 12 Brunnen als Repliken jeder Erkrankung (Behandlung, Mutant, etc.). Übertragen Sie mit einem Platindraht-Wurmpick 5-8 L4-Larventiere auf jeden Brunnen, der die Start- und Endzeit anzeigt.
2. Beachten Sie beim Starten einer anderen Bedingung die Startzeit und die Endzeit. Legen Sie die Platte bei 20 °C in der Inkubationszeit zwischen der Übertragung der Würmer und der Bewertung toter Tiere eine Stunde später ab der Startzeit.
3. Zählen Sie das Überleben mit dem Sezierendes Mikroskop pro Stunde. Schütteln Sie die Platte vorsichtig, bevor Sie anfangen zu zählen. Zeigen Sie Würmer, die sich nicht bewegen, auch nachdem sie ein hochintensives Licht entdeckt haben, als tote Tiere an. Geben Sie auch die Anzahl der lebenden Tiere an.
   HINWEIS: Wenn Sie die Form von Wurm, Schwänze und Kopfbewegungen bei hoher Vergrößerung betrachten, helfen Sie dabei, tote Würmer von lebend zu bestimmen.
4. Wiederholen Sie diesen Schritt stündlich, bis die meisten Würmer tot sind.

2. Bestimmung des Überlebensprozentsatzes zu jedem Zeitpunkt

1. Berechnen Sie die Gesamtzahl der Tiere pro Bedingung, indem Sie die Gesamtzahl der Tiere addieren, die auf jeden Brunnen übertragen werden. Ignorieren Sie die Tiere, die bei der Übertragung beschädigt oder getötet werden.
2. Berechnen Sie für jeden Zeitpunkt die Gesamtzahl der toten Tiere pro Zustand (Summe der toten Tiere in den 12 Brunnen). Berechnen Sie für jeden Zeitpunkt den Prozentsatz des Todes (Anzahl der toten Tiere dividiert durch die Gesamtzahl der Tiere und multipliziert mit 100) und den Prozentsatz des Überlebens (100 minus Prozent Tod).
3. Wiederholen Sie diesen Test mindestens 3 unabhängige Zeiten.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Discovery v8 stereo zeiss microscope	Zeiss
96 well clear microtiter plate