Overview
סרטון זה מציג מבחני הישרדות לטווח קצר המביאים טיפול לרעילות חריפה או בודקים זן גנטי להתנגדות למצב רעיל. פרוטוקול הדוגמה מראה דוגמה לבדיקת הישרדות שבה תולעים נבדקות על יכולתן להתנגד ללחץ חמצוני הנגרם על ידי paraquat (PQ).
Protocol
פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Possik ו הפסקה, מדידת התנגדות סטרס חמצוני של אלגנים Caenorhabditis ב 96-well Microtiter צלחות, J. Vis. Exp. (2015).
1. ביצוע מבחני עמידות ללחץ חמצוני
- פיפטה 40 μl של פתרון PQ 100 מ"מ (מוכן טרי) לכל באר של צלחת 96 היטב. השתמש לפחות 12 בארות כמו משכפלים של כל מצב (טיפול, מוטציה, וכו '). באמצעות בחירת תולעת תיל פלטינה, להעביר 5-8 L4 זחלים בעלי חיים לכל באר המציין את שעת ההתחלה ואת שעת הסיום.
- בעת הפעלת תנאי אחר, שים לב לזמן ההתחלה ולשעת הסיום. מניחים את הצלחת ב 20 מעלות צלזיוס בזמן הדגירה בין העברת התולעים וניקוד בעלי חיים מתים שעה מאוחר יותר משעת ההתחלה.
- באמצעות המיקרוסקופ הנתוח, לספור הישרדות בכל שעה. בעדינות לנער את הצלחת לפני שמתחילים לספור. ציין תולעים שאינן זזות, גם לאחר איתור אור בעוצמה גבוהה, כחיות מתות. כמו כן, ציין את מספר בעלי החיים בחיים.
שים לב: התבוננות בצורת תולעת, זנבות ותנועת ראש בהגדלה גבוהה, לעזור לקבוע תולעים מתות מחיים. - חזור על שלב זה כל שעה עד שרוב התולעים מתות.
2. קביעת אחוזי ההישרדות בכל נקודת זמן
- חשב את המספר הכולל של בעלי חיים לכל תנאי על-ידי הוספת המספר הכולל של בעלי החיים המועברים לכל באר. התעלם מבעלי החיים שניזוקו או נהרגו בעת ההעברה.
- עבור כל נקודת זמן, לחשב את המספר הכולל של בעלי חיים מתים לכל תנאי (סכום של בעלי חיים מתים ב 12 בארות). עבור כל נקודת זמן, לחשב את אחוז התמותה (מספר בעלי חיים מתים מחולק על ידי המספר הכולל של בעלי חיים מוכפל ב 100) ואחוז ההישרדות (100 מינוס אחוז מוות).
- חזור על בדיקה זו לפחות 3 פעמים עצמאיות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Discovery v8 stereo zeiss microscope | Zeiss | ||
| 96 well clear microtiter plate |
