Overview
Это видео вводит краткосрочный анализ выживания, что тесты лечения острой токсичности или тесты генетического штамма для устойчивости к токсичным состоянием. Пример протокола показывает пример анализа выживаемости, в котором черви проверяются на их способность противостоять окислительного стресса, вызванного паракватом (ПЗ).
Protocol
Этот протокол является выдержкой из Possik и паузы, измерение окислительного стрессоустойчивости Caenorhabditis elegans в 96-хорошо Microtiter плиты, J. Vis. Exp. (2015).
1. Выполнение анализа окислительного стрессоустойчивости
- Pipette 40 йл из 100 мМ ПЗ раствор (подготовлен свежий) для каждой колодец 96 пластины хорошо. Используйте по крайней мере 12 скважин в качестве репликации каждого состояния (лечение, мутант и т.д.). Используя платиновый провод червя забрать, передача 5-8 L4 личинок животных на каждый хорошо с указанием времени начала и времени окончания.
- При запуске другого условия обратите внимание на время начала и время окончания. Поместите пластину на 20 градусов по Цельсию во время инкубации между передачей червей и забил мертвых животных через час с самого начала.
- Используя рассечение микроскопа, подсчитайте выживаемость каждый час. Аккуратно встряхните тарелку, прежде чем начать считать. Укажите червей, которые не двигаются, даже после обнаружения высокоинтенсивного света, как мертвых животных. Также укажите количество животных живыми.
ПРИМЕЧАНИЕ: Глядя на форму червя, хвосты и движения головы при высоком увеличении, помочь определить мертвых червей из живых. - Повторяйте этот шаг каждый час, пока большинство червей мертвы.
2. Определение процент выживания в каждый момент времени
- Рассчитайте общее количество животных на состояние, добавив общее количество животных, переданных в каждую колодец. Игнорировать животных, которые повреждены или убиты при передаче.
- Для каждого времени точки, рассчитать общее количество мертвых животных на состояние (сумма мертвых животных в 12 скважин). За каждый раз, рассчитать процент смерти (количество мертвых животных делится на общее количество животных и умножается на 100) и процент выживания (100 минус процентов смерти).
- Повторите этот анализ по крайней мере 3 независимых раза.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Discovery v8 stereo zeiss microscope | Zeiss | ||
| 96 well clear microtiter plate |
