C. 예인대 생존 분석: 단기 독성 검사

Overview

이 비디오는 급성 독성에 대한 치료를 테스트하거나 독성 상태에 대한 저항을위한 유전 적 변형을 테스트하는 단기 생존 분석서를 소개합니다.  예제 프로토콜은 벌레가 파라쿼트(PQ)에 의해 유도된 산화 스트레스에 저항하는 능력에 대해 시험되는 예생존 분석서를 나타낸다.

Protocol

이 프로토콜은 96웰 마이크로티터 플레이트, J. Vis. Exp. (2015)에서 Caenorhabditis elegans의 산화 스트레스 저항을 측정하는Possik 및 Pause에서 발췌한 것입니다.

1. 산화 스트레스 저항 분석 수행

1. 파이펫 40 μl 의 100 mM PQ 용액 (신선한 준비) 96 웰 플레이트의 모든 우물에. 모든 조건 (치료, 돌연변이 등)의복제로 적어도 12 개의 우물을 사용합니다. 플래티넘 와이어 웜 픽을 사용하여 5-8 L4 유충 동물을 시작 시간과 종료 시간을 나타내는 모든 우물로 옮습니다.
2. 다른 조건을 시작할 때 시작 시간과 종료 시간을 기록합니다. 벌레를 옮기고 죽은 동물을 채점하는 배양 시간에 플레이트를 20°C로 놓는다.
3. 해부 현미경을 사용하여, 모든 시간 생존을 계산합니다. 계산하기 전에 접시를 부드럽게 흔들어 주세요. 고강도 빛을 발견한 후에도 움직이지 않는 벌레를 죽은 동물로 나타낸다. 또한 살아있는 동물의 수를 나타냅니다.
   참고: 높은 배율에서 벌레 모양, 꼬리 및 머리 움직임을 보면 살아있는 죽은 벌레를 결정하는 데 도움이됩니다.
4. 대부분의 벌레가 죽을 때까지 매시간 이 단계를 반복하십시오.

2. 매시점 생존율 결정

1. 모든 우물에 전송 된 동물의 총 수를 추가하여 조건당 동물의 총 수를 계산합니다. 이송 시 손상되거나 죽은 동물을 무시하십시오.
2. 매 시간 지점에서 조건당 죽은 동물의 총 수를 계산합니다 (12 우물에서 죽은 동물의 합계). 매 시간 시점에서, 죽음의 비율을 계산 (동물의 총 수로 분할 죽은 동물의 수와 100곱), 생존의 비율 (100 마이너스 % 죽음).
3. 이 분석분석을 최소 3회 이상 반복합니다.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Discovery v8 stereo zeiss microscope	Zeiss
96 well clear microtiter plate