المقايسة الكهربائية: طريقة لمراقبة الحركة في C. elegans

Overview

يمكن للباحثين تحريك الحركة عند الطلب في C. elegans من خلال تطبيق حقل كهربائي تشعر به الديدان وتستجيب له.  يقدم هذا الفيديو سلوكا كهربيا ويعرض بروتوكول عينة يتم إجراؤه في جهاز ميكروفلويديك.

Protocol

هذا البروتوكول هو مقتطف من تونغ وآخرون ، Microfluidic القائم Electrotaxis للتحليل الكمي عند الطلب من Caenorhabditis elegans'Locomotion، J. Vis. Exp. (2013).

1. تجربة الكتروتاكسيس

1. ضع القناة الصغيرة على المسرح (ويفضل أن تكون XY-movable) للمجهر مع كاميرا مثبتة متصلة بشاشة(الشكل 1).
2. قم بتوصيل أسلاك إنتاج التيار الكهربائي أو مكبر الصوت بأقطاب القناة الصغيرة. وإمدادات الطاقة DC بسيطة كافية إذا كان المطلوب فقط إشارة العاصمة، ولكن مكبر للصوت متصلة مولد وظيفة يسمح بتطبيق إشارات DC وAC نبضي كذلك.
3. قم بإرفاق أنبوب إخراج القناة الدقيقة بحقنة يمكن التخلص منها. غمر فم أنبوب المدخل في العازلة الفسيولوجية M9 وتطمح بلطف السائل في القناة عن طريق تطبيق ضغط سلبي داخل الحقنة (إما يدويا أو باستخدام مضخة حقنة). عندما يتم تعبئة مدخل ومنفذ أنابيب على حد سواء مع M9، وقطع الحقنة من الأنبوب. مستوى كلا الأنابيب إلى نفس الارتفاع لمنع تدفق يحركها هيدروستاتيكيا.
4. تطبيق التيار الكهربائي DC على القناة وضمان أن المقاومة (R = V / I) حوالي 0.6 MΩ (لمدة 50 ملم، 0.3 ملم واسعة و ~ 0.1 ملم القنوات الدقيقة العميقة).
5. إذا كنت راضيا عن سلامة القناة، اتبع الخطوات المذكورة أعلاه لتحميل الديدان من تعليق مخفف في القناة.
6. افصل الحقنة وتلاعب بالتدفق عن طريق ضبط الارتفاع النسبي للأنابيب. استخدم هذه الطريقة لوضع دودة في وسط القناة ثم وضع كلا الأنبوبين مسطحين في نفس الارتفاع.
7. تعيين إمدادات الطاقة إلى الجهد المناسب: 4-12 V/cm للحيوانات المرحلة L3، 4-10 V/cm لL4s، و 2-4 V/cm للبالغين الصغار. تنشيط الإشارة الكهربائية والسماح 1 دقيقة من التعرض المسبق للدودة للتأقلم مع الحقل. الدودة يجب أن تبدأ بالتحرك نحو الكاثود عند مرور الدقيقة، استخدم الكاميرا لبدء التسجيل.
8. بالنسبة لتجارب التيار المتردد و DC النبضي ، يمكن اعتماد المجال الكهربائي الأقصى المستجيب من الأعلى ويمكن تعديل دورة التردد والواجب للإشارة حسب الرغبة.
9. عند الانتهاء من التجربة، وإزالة جميع السائل (والديدان) من القناة، وشطفه مع DH₂0، وترك الجهاز على لوحة ساخنة في 125 درجة مئوية لتجف.
10. استخراج البيانات الحركية من أشرطة الفيديو المسجلة يدويا باستخدام NIH ImageJ (http://rsbweb.nih.gov/ij/) أو مخصص MATLAB القائم على برنامج تتبع دودة.

Representative Results

الشكل 1 - الأرقام 1- الأرقام التي يمكن أن تخطيطي لمنصة الفحص microfluidic لفحص الكتروتاكسيس النيماتودا.