Overview
शोधकर्ताओं ने एक बिजली के क्षेत्र है कि कीड़े भावना और जवाब लागू करने के द्वारा सी elegans में मांग आंदोलन को ट्रिगर कर सकते हैं । यह वीडियो इलेक्ट्रोटैक्टिक व्यवहार का परिचय देता है और एक नमूना प्रोटोकॉल दिखाता है जो माइक्रोफ्लुइडिक डिवाइस में किया जाता है।
Protocol
यह प्रोटोकॉल टोंग एट अल, माइक्रोफ्लुइडिक-आधारित इलेक्ट्रोटैक्सिस से कैनोरहैब्डिटिस एलिगेंसके लोकोमोशन,जे विस एक्सपी के ऑन-डिमांड मात्रात्मक विश्लेषण के लिए एक अंश है। (2013).
1. इलेक्ट्रोटैक्सिस प्रयोग
- एक मॉनिटर(चित्रा 1)से जुड़े एक घुड़सवार कैमरे के साथ एक माइक्रोस्कोप के मंच पर माइक्रोचैनल (अधिमानतः XY-जंग) रखें।
- बिजली की आपूर्ति या एम्पलीफायर के आउटपुट तारों को माइक्रोचैनल के इलेक्ट्रोड से जोड़ें। एक साधारण डीसी बिजली की आपूर्ति पर्याप्त है यदि केवल डीसी सिग्नल वांछित है, लेकिन एक फ़ंक्शन जनरेटर से जुड़ा एम्पलीफायर स्पंदित डीसी और एसी सिग्नल के आवेदन की अनुमति देता है।
- माइक्रोचैनल के आउटपुट ट्यूब को डिस्पोजेबल सिरिंज से अटैच करें। M9 शारीरिक बफर में इनलेट ट्यूब के मुंह को जलमग्न करें और धीरे से सिरिंज के अंदर एक नकारात्मक दबाव लागू करके चैनल में तरल की ख्वाहिश (या तो मैन्युअल रूप से या एक सिरिंज पंप का उपयोग कर) । जब इनलेट और आउटलेट ट्यूब दोनों M9 से भर रहे हैं, ट्यूब से सिरिंज डिस्कनेक्ट । हाइड्रोस्टैटिक रूप से संचालित प्रवाह को रोकने के लिए दोनों ट्यूबों को एक ही ऊंचाई तक स्तर दें।
- चैनल पर डीसी वोल्टेज लागू करें और यह सुनिश्चित करें कि प्रतिरोध (आर= V/I) लगभग 0.6 एमΩ (50 मिमी लंबी, 0.3 मिमी चौड़ी और ~ 0.1 मिमी गहरे माइक्रोचैनल के लिए) है।
- यदि चैनल की अखंडता से संतुष्ट हैं, तो चैनल में पतला निलंबन से कीड़े लोड करने के लिए उपरोक्त चरणों का पालन करें।
- सिरिंज डिस्कनेक्ट करें और ट्यूबों की सापेक्ष ऊंचाई को समायोजित करके प्रवाह में हेरफेर करें। चैनल के केंद्र में एक कीड़ा रखने के लिए इस विधि का उपयोग करें और फिर एक ही ऊंचाई पर दोनों ट्यूबों को फ्लैट रखें।
- उचित वोल्टेज के लिए बिजली की आपूर्ति सेट करें: L3 चरण जानवरों के लिए 4-12 V/सेमी, L4s के लिए 4-10 V/सेमी, और युवा वयस्कों के लिए 2-4 V/सेमी । इलेक्ट्रिक सिग्नल को सक्रिय करें और कीड़ा के लिए 1 मिनट पूर्व-एक्सपोजर की अनुमति दें ताकि खेत में अनुकूल हो सके। कीड़ा कैथोड की ओर बढ़ने लगा। जब मिनट बीत गया है, रिकॉर्डिंग शुरू करने के लिए कैमरे का उपयोग करें।
- एसी और स्पंदित डीसी प्रयोगों के लिए, अधिकतम उत्तरदायी इलेक्ट्रिक फील्ड को ऊपर से अपनाया जा सकता है और सिग्नल की आवृत्ति और शुल्क चक्र को वांछित के रूप में संग्राहक किया जा सकता है।
- प्रयोग समाप्त होने पर, चैनल से सभी तरल (और कीड़े) निकालें, इसे डीएच2 0से कुल्ला करें, और डिवाइस को सूखने के लिए 125 डिग्री सेल्सियस पर गर्म प्लेट पर छोड़ दें।
- एनआईएच इमेजजे(http://rsbweb.nih.gov/ij/)या कस्टम मैटलैब-आधारित कृमि ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग करके मैन्युअल रूप से रिकॉर्ड किए गए वीडियो से लोकोमोटरी डेटा निकालें।
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Representative Results
चित्रा 1. नेमाटोड इलेक्ट्रोटैक्सिस परख के लिए माइक्रोफ्लुइड स्क्रीनिंग प्लेटफॉर्म का योजनाबद्ध।
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